Бензимидазолоновые соединения, обладающие агонистической активностью в отношении 5-нт4 рецепторов

009457 Область техники Это изобретение относится к новым бензимидазолоновым соединениям. Эти соединения обладают селективной агонистической активностью в отношении 5-НТ 4 рецепторов. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, способу лечения и применению, включающим упомянутые выше соединения для лечения болезненных состояний, опосредованных активностью 5-НТ 4 рецепторов. Предшествующий уровень техники В общем, установлено, что агонисты 5-НТ 4 рецепторов являются полезными для лечения множества заболеваний, таких как гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, желудочно-кишечное заболевание,расстройство двигательной функции желудка, неязвенная диспепсия, функциональная диспепсия, синдром раздраженной толстой кишки (IBS), запор, диспепсия, эзофагит, гастроэзофагеальная болезнь, тошнота, заболевание центральной нервной системы, болезнь Альцгеймера, когнитивное расстройство, рвота, мигрень, неврологическое заболевание, боль, сердечно-сосудистые расстройства, сердечная недостаточность, аритмия сердца, диабет и синдром апноэ (TiPs, 1992, 13, 141; Ford A. P. D. W. et al., Med. Res.Res., 1993, 43, 913). Также известно, что мосаприд является полезным для лечения диабета. Было бы желательно, если бы были предоставлены агонисты 5-НТ 4 рецепторов, которые обладали бы большими агонистическими активностями в отношении 5-НТ 4 рецепторов. В качестве антагонистов 5-НТ 4 рецепторов описаны бензимидазольные соединения (US 5223511). В частности, раскрыты соединения, представленные следующей формулой: В качестве антагонистов 5-НТ 4 рецепторов описаны бензимидазолоновые соединения (WO 93/18027). В частности, раскрыты соединения, представленные следующей формулой: Бензимидазолоновые соединения описаны в качестве агонистов и/или антагонистов 5-НТ 4 рецепторов (WO 99/17772). В частности, раскрыты соединения, представленные следующей формулой: Бензимидазолоновые соединения описаны в качестве агонистов или антагонистов 5-НТ 4 рецепторов и/или антагонистов 5-НТ 3 рецепторов (WO 94/00449). В частности, раскрыты соединения, представленные следующей формулой:-1 009457 Существует необходимость в предоставлении новых 5-НТ 4 агонистов, которые являются хорошими потенциальными лекарственными средствами. В частности, предпочтительные соединения должны крепко связываться с 5-НТ 4 рецептором, в то же время демонстрируя незначительную аффинность в отношении других рецепторов, и проявлять функциональную активность в качестве агонистов. Они должны хорошо всасываться из желудочно-кишечного тракта, быть метаболически стабильными и обладать благоприятными фармакокинетическими свойствами. Если их мишенью являются рецепторы в центральной нервной системе, то они должны свободно пересекать гематоэнцефалический барьер, а если они селективно нацелены в отношении рецепторов в периферической нервной системе, то они не должны пересекать гематоэнцефалический барьер. Они должны быть нетоксичными и проявлять небольшое количество побочных эффектов. Кроме того, идеальный кандидат в отношении лекарственного средства будет существовать в физической форме, которая является стабильной, негигроскопичной и легко поддающейся обработке. Краткое описание изобретения В настоящее время неожиданно обнаружено, что соединения по этому изобретению обладают сильной селективной 5-НТ 4 агонистической активностью, и, таким образом, являются полезными для лечения болезненных состояний, опосредованных 5-НТ 4 активностью, таких как гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, желудочно-кишечное заболевание, расстройство двигательной функции желудка,неязвенная диспепсия, функциональная диспепсия, синдром раздраженной толстой кишки (IBS), запор,диспепсия, эзофагит, гастроэзофагеальная болезнь, тошнота, заболевание центральной нервной системы,болезнь Альцгеймера, когнитивное расстройство, рвота, мигрень, неврологическое заболевание, боль,сердечно-сосудистые расстройства, сердечная недостаточность, аритмия сердца, диабет и синдром апноэ(особенно вызванный введением опиоидов). Более того, соединения по настоящему изобретению посредством введения полярной группы в R3 формулы (I) демонстрируют пониженное удлинение интервала QT. Известно, что удлинение QT обладает потенциальной склонностью к созданию фатальных сердечных аритмий трепетания-мерцания желудочков (Torsades de Pointes, TdS). Способность пролонгирования потенциальной продолжительности действия на сердце была идентифицирована как являющаяся вследствие действия на HERG калиевый канал. Например, известно, что лекарственные средства, отозванные с рынка вследствие удлинения QT,такие как цизаприд и терфенадин, являются мощными блокаторами HERG калиевого канала (ExpertOpinion of Pharmacotherapy; 2, pp 947-973, 2000). Ингибиторную активность в отношении HERG канала оценивали из аффинности для калиевого канала HERG типа, сопоставляя [3 Н]дофетилид-связывание,которое может прогнозировать ингибиторную активность относительно HERG канала (Eur. J. Pharmacol.,430, рр 147-148, 2001). Соединения по настоящему изобретению могут демонстрировать меньшую токсичность, хорошую всасываемость, распределение, хорошую растворимость, низкую аффинность связывания с белками,меньшее взаимодействие лекарственных средств и хорошую метаболическую стабильность. Согласно настоящему изобретению предложено соединение следующей формулы (I) или его фармацевтически приемлемая сольHet представляет собой гетероциклическую группу, имеющую один атом азота, с которым непосредственно связан В, и от 4 до 7 атомов углерода, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 1; А представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; В представляет собой ковалентную связь или алкиленовую группу, имеющую от 1 до 5 атомов углерода, и указанная алкиленовая группа является незамещенной или замещена оксогруппой, когда R3 представляет собой гетероциклическую группу;R1 представляет собой изопропильную группу или циклопентильную группу;R2 независимо представляет собой атом галогена или алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; m означает 0, 1, 2, 3 или 4; и(1) циклоалкильную группу, имеющую от 3 до 8 атомов углерода, и указанная циклоалкильная группа замещена 1-5 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 2,-2 009457 или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 3 до 8 атомов, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-5 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей ,указанные заместители 1 независимо выбраны из гидроксигруппы и аминогруппы; указанные заместители 2 независимо выбраны из гидроксигруппы, аминогруппы, гидроксизамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, карбоксильной группы и алкоксигруппы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода; и указанные заместителинезависимо выбраны из гидроксигруппы, гидроксизамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, карбоксильной группы, аминогруппы, алкильной группы,имеющей от 1 до 4 атомов углерода, аминозамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, и карбамоильной группы. Также согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция для лечения болезненных состояний, опосредованных 5-НТ 4 рецептором, у субъекта-млекопитающего, включающая введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Кроме того, согласно настоящему изобретению также предложена фармацевтическая композиция для лечения заболеваний, выбранных из гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, желудочнокишечного заболевания, расстройства двигательной функции желудка, неязвенной диспепсии, функциональной диспепсии, синдрома раздраженной толстой кишки (IBS), запора, диспепсии, эзофагита, гастроэзофагеальной болезни, тошноты, заболевания центральной нервной системы, болезни Альцгеймера,когнитивного расстройства, рвоты, мигрени, неврологического заболевания, боли, сердечно-сосудистых расстройств, сердечной недостаточности, аритмии сердца, диабета и синдрома апноэ или тому подобного, которая содержит терапевтически эффективное количество бензимидазолонового соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Также согласно настоящему изобретению предложен способ лечения болезненных состояний, опосредованных 5-НТ 4 рецептором, у субъекта-млекопитающего, в том числе человека, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен способ лечения болезненных состояний, упомянутых выше. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей в производстве лекарственного средства для лечения болезненных состояний, опосредованных активностью 5 НТ 4 рецепторов, у субъекта-млекопитающего. Состояния, опосредованные активностью 5-НТ 4 рецепторов, включают такие заболевания или расстройства, как описано выше. Также согласно настоящему изобретению предложено соединение следующей формулы (2-А') или его сольRa представляет собой атом водорода или N-защитную группу;Het представляет собой гетероциклическую группу, имеющую один атом азота, с которым непосредственно связан В, и от 4 до 7 атомов углерода, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 1; А представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; В представляет собой ковалентную связь или алкиленовую группу, имеющую от 1 до 5 атомов углерода, и указанная алкиленовая группа является незамещенной или замещена оксогруппой, когда R3 представляет собой гетероциклическую группу;(1) циклоалкильную группу, имеющую от 3 до 8 атомов углерода, и указанная циклоалкильная группа замещена 1-5 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 2,или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 3 до 8 атомов, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-5 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей ,указанные заместители 1 независимо выбраны из гидроксигруппы и аминогруппы; указанные заместители 2 независимо выбраны из гидроксигруппы, аминогруппы, гидроксизамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, карбоксильной группы и алкокси-3 009457 группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода; и указанные заместителинезависимо выбраны из гидроксигруппы, гидроксизамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, карбоксильной группы, аминогруппы, алкильной группы,имеющей от 1 до 4 атомов углерода, аминозамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, и карбамоильной группы. Подробное описание изобретения Термин "гетероциклическая", используемый в этом документе в "Her", означает гетероциклическую группу, имеющую один атом азота и от 4 до 7 атомов углерода, такую как Термин "алкилен", используемый в этом документе в "А", означает насыщенные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие от 1 до 4 атомов углерода, включая метилен, этилен, нпропилен, изопропилен, н-бутилен, изобутилен, втор-бутилен, трет-бутилен, но не ограничиваясь ими. Термин "алкилен" в "А" предпочтительно представляет собой метиленовую группу, этиленовую группу или пропиленовую группу; более предпочтительно, метиленовую группу или этиленовую группу; наиболее предпочтительно, метиленовую группу. Термин "алкилен", используемый в этом документе в "В", означает насыщенные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие от 1 до 5 атомов углерода, включая метилен, этилен, нпропилен, изопропилен, н-бутилен, изобутилен, втор-бутилен, трет-бутилен, н-пентилен, изопентилен,втор-пентилен, трет-пентилен, но не ограничиваясь ими. Термин "алкилен" в "В" предпочтительно представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; более предпочтительно алкиленовую группу, имеющую от 1 до 3 атомов углерода; еще более предпочтительно метиленовую группу или этиленовую группу; еще более предпочтительно метиленовую группу. Термин "галоген", используемый в этом документе в "R2", означает фторо, хлоро, бромо и йодо,предпочтительно фторо или хлоро. Термин "алкил" в "R2"; "алкил" "гидроксизамещенной алкильной группы" и "алкоксигруппы,имеющей от 1 до 4 атомов углерода" в "заместителях 2"; "алкил" в "заместителях "; и "алкил" "гидроксизамещенной алкильной группы" и "аминозамещенной алкильной группы" в "заместителях ", используемый в этом документе, означает насыщенные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью,имеющие от 1 до 4 атомов углерода, включая метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, вторбутил, трет-бутил, но не ограничиваясь ими. Термин "циклоалкильная", используемый в этом документе в "R3", означает циклическую алкильную группу, имеющую от 3 до 8 атомов углерода, такую как циклопропильная, циклобутильная, циклопентильная, циклогексильная, циклогептильная, циклооктильная и так далее. Термин "гетероциклическая", используемый в этом документе в "R3", означает гетероциклическое кольцо, которое имеет один или более чем один гетероатом в кольце, предпочтительно имеет от 2 до 6 атомов углерода и от 1 до 3 гетероатомов, в том числе азиридинил, азетидинил, пиперидинил, морфолинил (включая морфолино), пирролидинил, пиразолидинил, пиперазинил, тетрагидропиразолил, пиразолинил, тетрагидропиранил и так далее. Термин "лечение", используемый в этом документе, относится к реверсированию, облегчению, ингибированию прогрессирования или предупреждению расстройства или состояния, по отношению к которым такой термин употребляется или к одному или более чем одному симптому такого расстройства или состояния. Термин "лечить", используемый в этом документе, относится к акту лечения, как оно определено непосредственно выше. Предпочтительньм соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение, гдеHet представляет собой гетероциклическую группу, выбранную из причем указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 1; и А представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 3 атомов углерода. Более предпочтительным соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение, гдеHet представляет собой группу формулы и эта группа является незамещенной или замещена одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из заместителей 1; А представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 2 атомов углерода; В представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, и указанная алкиленовая группа является незамещенной или замещена оксогрутшой, когда R3 представляет собой гетероциклическую группу;R2 независимо представляет собой атом галогена или алкильную группу, имеющую от 1 до 2 атомов углерода; m означает 0, 1 или 2; и(1) циклоалкильную группу, имеющую от 4 до 7 атомов углерода, и указанная циклоалкильная группа замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 2,или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 4 до 7 атомов, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей . Также другим предпочтительным соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, гдеHet представляет собой группу формулы и эта группа является незамещенной или замещена одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из заместителей 1; А представляет собой метиленовую группу; В представляет собой алкиленовую группу, имеющую от 1 до 2 атомов углерода;R1 представляет собой изопропильную группу;R2 независимо представляет собой атом фтора, атом хлора или метил; и(1) циклоалкильную группу, имеющую от 5 до 7 атомов углерода, и указанная циклоалкильная группа замещена 1-2 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 2,или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 5 до 7 атомов, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-2 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей ,указанные заместители 2 независимо выбраны из гидроксигруппы, аминогруппы и алкоксигруппы,имеющей от 1 до 2 атомов углерода; и указанные заместители р независимо выбраны из гидроксигруппы, гидрокси-замещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 2 атомов углерода, карбоксильной группы, аминогруппы, аминозамещенной алкильной группы, имеющей от 1 до 2 атомов углерода, и карбамоильной группы. Еще одним предпочтительным соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, гдеHet представляет собой группу формулы А представляет собой метиленовую группу; В представляет собой метиленовую группу;R1 представляет собой изопропильную группу;R2 представляет собой атом фтора; m означает 0 или 1; и(1) циклоалкильную группу, имеющую от 5 до 6 атомов углерода, и указанная циклоалкильная группа замещена 1-2 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей 2,или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 5 до 6 атомов, и указанная гетероциклическая группа является незамещенной или замещена 1-2 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из заместителей ,указанные заместители 2 независимо выбраны из гидроксигруппы и аминогруппы; и указанные заместителинезависимо выбраны из гидроксигруппы и аминогруппы.-5 009457 Другим предпочтительным соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, гдеHet представляет собой группу формулы А представляет собой метиленовую группу; В представляет собой метиленовую группу; R1 представляет собой изопропильную группу; R2 представляет собой атом фтора; m означает 0; и R3 представляет собой(1) циклогексильную группу, замещенную 1-2 заместителями, независимо выбранными из гидроксигруппы или аминогруппы, или(2) гетероциклическую группу, имеющую от 6 атомов, и указанная гетероциклическая группа замещена гидроксигруппой или аминогруппой. Наиболее предпочтительным соединением формулы (I) по этому изобретению является соединение или его фармацевтически приемлемая соль, гдеHet представляет собой группу формулы А представляет собой метиленовую группу; В представляет собой метиленовую группу; R1 представляет собой изопропильную группу;R2 представляет собой атом фтора; m означает 0; и R3 представляет собой(2) тетрагидропиранильную группу, замещенную 1 или 2 гидроксигруппами (в частности гидрокситетрагидропиранильную). В соединениях формулы (I) или фармацевтически приемлемой соли R2 предпочтительно представляет собой атом фтора, атом хлора, метильную группу или этиленовую группу; более предпочтительно атом фтора, атом хлора, метильную группу; наиболее предпочтительно атом фтора. В соединениях формулы (I) или фармацевтически приемлемой соли m предпочтительно означает 0,1 или 2; более предпочтительно 0 или 1; наиболее предпочтительно 0. Предпочтительным индивидуальным соединением по этому изобретению является:N-(1-[(цис-1,4-дигидроксигексил)метил]пиперидин-4-илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро 1H-бензимидазол-1-карбоксамид и 6-фтор-N-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4-илметил)-3-изопропил-2 оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамид,или его фармацевтически приемлемая соль. Предпочтительным соединением формулы (2-А') по этому изобретению является соединение, где Ra представляет собой атом водорода или трет-бутоксикарбонильную группу;Het представляет собой группу формулы А представляет собой метиленовую группу; В представляет собой метиленовую группу; иR3 представляет собой гидрокситетрагидропиранил или дигидроксициклогексил. Общий синтез Соединения по настоящему изобретению могут быть получены множеством способов, хорошо известных для получения соединений этого типа, например как показано на следующих ниже схемах реакций. Если не указано особо, R1 - R3 и m в следующих схемах реакций и обсуждении являются такими,как определено выше. Термин "защитная группа", используемый ниже, означает гидрокси- или аминозащитную группу, выбранную из типичных гидрокси- или аминозащитных групп, описанных в литературе(Protective Groups in Organic Synthesis edited by T. W. Greene et al. (John WileySons, 1991. Все исходные вещества в следующих ниже общих синтезах имеются в продаже или могут быть получены традиционными способами, известными специалистам в данной области техники. Соединение формулы (I), где Het представляет собой получают следующим ниже методом синтеза. Соединение формулы (I), где Het является отличным от может быть получено аналогичным образом или способом, известным специалисту в данной области техники. На стадиях 1 а, 1 б, 1 г, 2 а, 2 в, 2 д, 3 а, 3 в, 3 г следующих ниже схем каждую реакцию предпочтительно проводят в присутствии основания. Нет конкретного ограничения относительно природы используемых оснований, и любое основание, обычно используемое в реакциях этого типа, может в равной степени использоваться здесь. Используемое основание включает, например, гидроксиды щелочных металлов,такие как гидроксид лития, гидроксид натрия и гидроксид калия; карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат натрия и карбонат калия; гидриды щелочных металлов, такие как гидрид натрия, гидрид калия и гидрид лития; алкоголяты щелочных металлов, такие как метилат натрия, этилат натрия, третбутилат калия и метилат лития; алкиллитиевые соединения, такие как бутиллитий и метиллитий; амиды лития, такие как диэтиламиды лития, диизопропиламид лития и бис(триметилсилил)амид лития; гидрокарбонаты щелочных металлов, такие как гидрокарбонат натрия и гидрокарбонат калия; и третичные органические амины, такие как триэтиламин, диметиланилин, пиридин, 4-диметиламинопиридин, 1,5 диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен и N,N-диизопропилэтиламин. Синтез бензимидазолона (1-А): Следующие схемы реакций иллюстрируют получение бензимидазолоновых соединений формулы 1-А. Схема 1 а: В вышеупомянутых формулах Z представляет собой "галогено", такой как атом хлора, брома или йода. Стадия 1 а. На стадии 1 а аминное соединение формулы 1-3 может быть получено восстановительным аминированием алканонового соединения (имеющего от 1 до 4 атомов углерода) аминным соединением формулы 1-1 в присутствии или в отсутствие восстановителя или металлического реагента в инертном растворителе. Реакцию обычно и предпочтительно осуществляют в присутствии растворителя. Нет конкретного ограничения относительно природы используемого растворителя, при условии, что он не оказывает неблагоприятного воздействия на реакцию или на вовлеченные в реакцию реагенты, и может растворять реагенты по меньшей мере до некоторой степени. Примеры подходящих водных или неводных органических растворителей включают: спирты, такие как метанол, этанол или изопропанол; эфиры, такие как тетрагидрофуран (ТГФ), диметоксиэтан или диоксан; ацетонитрил; N,N'-диметилформамид; диметил-7 009457 сульфоксид; уксусная кислота; и галогенированный углеводород, такой как дихлорметан, дихлорэтан или хлороформ. Реакция может происходить в широком диапазоне температур, и точная температура реакции не является критической для изобретения. Предпочтительная температура реакции будет зависеть от таких факторов, как природа растворителя и используемые исходные вещество или реагент. Однако, в общем,удобным является проведение реакции с восстановителями при температуре от -78 до 100 С, более предпочтительно от приблизительно -20 до 60 С. Время, требуемое для проведения реакции, также может широко варьироваться в зависимости от многих факторов, в особенности от температуры реакции и природы используемых реагентов и растворителя. Однако при условии, что реакцию осуществляют в предпочтительных условиях, в общих чертах описанных выше, обычно будет достаточно периода времени от 5 мин до 1 недели, более предпочтительно от 30 мин до 24 ч. В случае реакции с металлическими реагентами удобным является проведение реакции при температуре от 20 до 100 С, предпочтительно от приблизительно 20 до 60 С в течение от 10 мин до 48 ч, предпочтительно от 30 мин до 24 ч. Подходящими восстановителями являются такие, которые типично используются при восстановлении, включая, например, борогидрид натрия, цианоборогидрид натрия или триацетоксиборогидрид натрия. Также в качестве восстановителя можно использовать комбинацию металлических реагентов и газообразного водорода. Примеры подходящих металлических реагентов включают палладий - углерод,гидроксид палладия - углерод, оксид платины, платина - углерод, рутений - углерод, родий - оксид алюминия и хлорид трис[трифенилфосфин]родия. Восстановление с использованием металлических реагентов можно проводить в атмосфере водорода при давлении, изменяющемся от 1 до 100 атм (101,32510132,5 кПа), предпочтительно от 1 до 10 атм (101,325-1013,25 кПа). Это восстановление можно проводить после образования соответствующего енамина алканонового соединения или имина алканонового соединения в растворителе, инертном для реакции, таком как бензол, толуол или ксилол, при температуре в пределах от 20 до 130 С в течение от 1 ч до 1 недели. Альтернативно, соединение формулы 1-3 может быть получено алкилированием соединения формулы 1-1 алкилгалогенидом формулы Z-R1, где Z представляет собой галогено (галогено представляет собой хлоро, бромо или йодо), по существу при тех же самых условиях, которые описаны ниже (стадия 1 г), предпочтительно в присутствии основания. Стадия 1 б. На этой стадии соединение формулы 1-3 может быть получено алкилированием соединения формулы 1-2 соединением формулы R1-NH2. Реакция может происходить в широком диапазоне температур, и точная температура реакции не является критической для изобретения. Предпочтительная температура реакции будет зависеть от таких факторов, как природа растворителя и используемые исходное вещество или реагент. Однако, в общем,удобным является проведение реакции при температуре от 0 до 150 С, более предпочтительно от 20 до 120 С. Время, требуемое для проведения реакции, также может широко варьироваться в зависимости от многих факторов, в особенности от температуры реакции и природы используемых реагентов и растворителя. Однако при условии, что реакцию осуществляют в предпочтительных условиях, в общих чертах описанных выше, обычно будет достаточно периода времени от 5 мин до 48 ч, более предпочтительно от 30 мин до 24 ч. Стадия 1 в. Соединение формулы 1-4 может быть получено восстановлением соединения формулы 1-3 подходящим восстановителем, таким как борогидрид натрия (NaBH4), алюмогидрид лития (LAH), диборан,водород и металлический катализатор, железо и соляная кислота, тетрахлорид олова и соляная кислота,цинк и соляная кислота, муравьиная кислота, комплекс боран-диметилсульфид, боран-ТГФ, (предпочтительно водород и металлический катализатор), обычно в избытке, в растворителе, инертном для реакции,таком как метанол, этанол, пропанол, бутанол, тетрагидрофуран (ТГФ) (предпочтительно метанол или этанол), обычно при температуре от -78 до 60 С, предпочтительно от приблизительно 0 до 45 С, в течение от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 60 мин до 12 ч. Стадия 1 г. На стадии 1 г аминное соединение формулы 1-4 может быть получено восстановительным аминированием алканонового соединения аминным соединением формулы 1-5 в условиях, подобных условиям стадии 1 а. Альтернативно, соединение формулы 1-4 может быть получено алкилированием соединения формулы 1-5 соединением формулы Z-R1. Реакция может происходить в широком диапазоне температур, и точная температура реакции не является критической для изобретения. Предпочтительная температура реакции будет зависеть от таких факторов, как природа растворителя и используемые исходное вещество или реагент. Однако, в общем,удобным является проведение реакции при температуре от 0 до 120 С, более предпочтительно от 0 до 70 С. Время, требуемое для проведения реакции, также может широко варьироваться в зависимости от многих факторов, в особенности от температуры реакции и природы используемых реагентов и раство-8 009457 рителя. Однако при условии, что реакцию можно осуществить в предпочтительных условиях, в общих чертах описанных выше, обычно будет достаточно периода времени от 5 мин до 48 ч, более предпочтительно от 30 мин до 24 ч. Стадия 1 д. Соединение формулы 1-А может быть получено циклизацией соединения формулы 1-4 при помощи подходящего карбонилирующего реагента, такого как карбонилдиимидазол, трихлорметилхлорформиат,трифосген и мочевина (предпочтительно карбонилдиимидазол), обычно в избытке, в растворителе,инертном для реакции, таком как диметоксиэтан, диоксан, ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, диметилсульфоксид, дихлорметан, дихлорэтан, хлороформ или тетрагидрофуран (ТГФ) (предпочтительно ТГФ), обычно при температуре от -78 до 120 С, предпочтительно от приблизительно 20 до 100 С, в течение от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 60 мин до 12 ч. Альтернативно, соединение 1-А (где R1 представляет собой изопропил, как показано на схеме 1 б) может быть получено из алкенил-бензимидазолонового соединения формулы 1-6 в соответствии со следующей схемой 1 б в условиях реакции, которые известны специалисту в данной области техники. Схема 1 б: Синтез аминной группировки (2-А): Следующие схемы реакций иллюстрируют получение пиперидиновых соединений формулы (2-А). Схема 2 а: В упомянутых выше формулах PG представляет собой защитную группу. Термин "защитная группа", используемый в этом документе, означает аминозащитную группу, выбранную из типичных аминозащитных групп, описанных в литературе (Protective Groups in Organic Synthesis edited by T. W. Greene etal. (John WileySons, 1991. Типичные аминозащитные группы включают бензил, С 2 Н 5 О(С=О)-,СН 3(С=О)-, трет-бутилдиметилсилил (ТБС), трет-бутилдифенилсилил, бензилоксикарбонил в виде Z, и трет-бутоксикарбонил, изображенный в виде t-Boc или Вос. Соединение формулы 2-2 может быть получено алкилированием или восстановительным аминированием соединения формулы 2-1 соединением формулы алкил-R3, галогено-R3 или H(C=O)-R3 в условиях, подобных условиям стадии 1 а. Если -B-R3 представляет собой 4-гидрокситетрагидропиранилметил,то это алкилирование можно осуществлять с использованием 1,6-диоксаспиро[2.5]октанового соединения. Далее, для получения соединения формулы 1-А за этой реакцией следует реакция снятия защиты. Эту реакцию снятия защиты с образованием соединения формулы 2-А можно проводить по методикам,известным специалистам в данной области. Альтернативно, соединение формулы (2-А) может быть получено из пиперидинового соединения формулы 2-3 в соответствии со следующей схемой 2 б в условиях реакции, которые известны специалисту в данной области. Схема 2 б:(А 1 представляет собой ковалентную связь или C1-3 алкилен) Например, на стадии 2 в соединение 2-4 может быть получено алкилированием или восстановительным аминированием по существу при тех же самых условиях, которые описаны на стадии 2 а схемы 2 а. Далее, восстановление на стадии 2 г можно проводить в присутствии восстановителя, такого как LiAlH4,в растворителе, инертном для реакции, таком как ТГФ. Подходящая температура реакции находится в-9 009457 пределах от приблизительно -78 до приблизительно 100 С, предпочтительно от приблизительно -30 до приблизительно 40 С. Соединение формулы (1-А) может быть получено из пиперидинового соединения формулы 2-5 в соответствии со следующей схемой 2 в в условиях реакции, которые известны специалисту в данной области. Схема 2 в:(А 1 представляет собой ковалентную связь или C1-3 алкилен) Например, на стадии 2 д соединения 2-6 могут быть получены алкилированием или восстановительным аминированием в условиях, подобных условиям, описанным на стадии 2 а схемы 2 а. Далее, восстановление на стадии 2 е можно проводить в присутствии Н 2 и катализатора гидрирования, такого как PtO2,в растворителе, инертном для реакции, таком как ТГФ. Подходящая температура реакции находится в пределах от приблизительно -78 С до приблизительно 100 С, предпочтительно от приблизительно -30 до приблизительно 40 С. Синтез соединения формулы (I): Следующие схемы реакций иллюстрируют получение бензимидазолоновых соединений формулы I. Схема 3 а: Стадия 3 а: Соединение формулы 3-1 может быть получено карбонилированием соединения формулы 1-А соединением формулы 2-А в присутствии подходящего карбонилирующего реагента, такого как карбонилдиимидазол, трихлорметилхлорформиат, трифосген, 4-нитрофенилхлорформиат или мочевина (предпочтительно трифосген), обычно в избытке, в растворителе, инертном для реакции, таком как диметоксиэтан, диоксан, ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, диметилсульфоксид, дихлорметан, дихлорэтан, тетрагидрофуран (ТГФ), бензол, толуол или хлороформ (предпочтительно ТГФ), обычно при температуре от -78 С до 120 С, предпочтительно от приблизительно 0 до 90 С, в течение от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 60 мин до 12 ч. Стадия 3 б: Соединение формулы 3-2 получают путем снятия защиты с соединения формулы 3-1 кислотой, такой как соляная. Стадия 3 б: Соединение формулы (Iа) может быть получено алкилированием или восстановительным аминированием в условиях, подобных условиям, описанным на стадии 2 а схемы 2 а. Альтернативно, соединение формулы (Iа) может быть получено из алкилбензимидазолоновых соединений в соответствии со следующей схемой 3 б в условиях реакции, которые известны специалисту в данной области. Например, на стадии 3 г соединение формулы 1-А может быть подвергнуто взаимодействию с соединением формулы 2-А в присутствии карбонилирующего реагента, такого как карбонилдиимидазол,трихлорметилхлорформиат, трифосген, 4-нитрофенилхлорформиат или мочевина (предпочтительно трифосген), обычно в избытке, в растворителе, инертном для реакции, таком как диметоксиэтан, диоксан,ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, диметилсульфоксид, дихлорметан, дихлорэтан, тетрагидрофуран(ТГФ), бензол, толуол или хлороформ (предпочтительно ТГФ), обычно при температуре от -78 до 120 С,предпочтительно от приблизительно 0 до 90 С, в течение от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 60 мин до 12 ч. Соединение формулы 7 может быть получено с использованием реакции, известной специалисту в данной области. Например, соединение формулы 7 может быть получено из соединения формулы 3 в соответствии со следующей схемой 3 в в условиях реакции, которые известны специалисту в данной области. Схема 3 в: В упомянутых выше схемах 1 а-3 в примеры подходящих растворителей включают смесь любых двух или более чем двух растворителей, описанных на каждой стадии. Соединения формулы (I) и промежуточные соединения в вышеупомянутых способах получения могут быть выделены и очищены по традиционным методикам, таким как перегонка, перекристаллизация или хроматографическая очистка. Оптически активные соединения по этому изобретению могут быть получены несколькими способами. Например, оптически активные соединения по этому изобретению могут быть получены хроматографическим разделением, ферментативным разделением или фракционированной кристаллизацией конечных соединений. Отдельные соединения по этому изобретению имеют асимметрический центр. Поэтому эти соединения могут существовать в разделенных (+) и (-)-оптически активных формах, а также в рацемических формах. Все такие формы включены в объем настоящего изобретения. Индивидуальные изомеры могут быть получены известными способами, такими как оптически селективная реакция или хроматографическое разделение при получении конечного продукта или его промежуточного соединения. Объект изобретения также включает соединения, меченные изотопами, которые идентичны соединениям формулы (I), за исключением того, что один или более чем один атом заменен атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа, обычно встре- 11009457 чающихся в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения по изобретению,включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как 2 Н, 3 Н, 13 С,14 С, 15N, 18 О, 17 О, 31 Р, 32 Р, 35S, 18F и 36Cl, соответственно. Соединения по настоящему изобретению, их пролекарства, фармацевтически приемлемые сложные эфиры указанных соединений и фармацевтические приемлемые соли указанных соединений, указанных сложных эфиров или указанных пролекарств,которые содержат вышеупомянутые изотопы и/или другие изотопы других атомов входят в объем этого изобретения. Некоторые соединения по настоящему изобретению, меченные изотопами, например, соединения, в которые включены такие радиоактивные изотопы, как 3 Н и 14 С, являются полезными при исследовании распределения в тканях лекарства и/или субстрата. Тритиевые, то есть 3 Н, и углерод-14, то есть 14 С, изотопы являются особенно предпочтительными вследствие простоты их представления и обнаружения. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, то есть Н, может предоставить терапевтическое преимущество, являющееся следствием более высокой метаболической стабильности, например, увеличенный период полувыведения in vivo или потребность в уменьшенной дозе, и поэтому в некоторых обстоятельствах может быть предпочтительным. В общем, соединения формулы (I) по этому изобретению, меченные изотопами, и их пролекарства могут быть получены по методике, раскрытой в раскрытых выше схемах и/или примерах и подготовительных примерах, приведенных ниже, с использованием легкодоступного реагента, меченного изотопом, вместо реагента, немеченого изотопом. Настоящее изобретение включает солевые формы полученных соединений (I). Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают их соли присоединения кислоты и соли присоединения основания (в том числе бисоли). Фармацевтически приемлемые нетоксичные соли соединений формулы (I) могут быть получены по традиционным методикам, например, контактированием указанного соединения со стехиометрическим количеством подходящего гидроксида или алкоголята щелочного или щелочноземельного металла (натрия, калия, кальция и магния) в воде или в подходящем органическом растворителе, таком как этанол,изопропанол, их смеси или тому подобное. Основания, которые используют для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения основания кислотных соединений по этому изобретению формулы (I), представляют собой такие основания, которые образуют нетоксичные соли присоединения основания, то есть соли, содержащие фармацевтически приемлемые катионы, такие как аденин, аргинин, цитозин, лизин, бенетамин (то естьN-бензил-2-фенилэтиламин), бензатин (то есть N,N-дибензилэтилендиамин), холин, диоламин (то есть диэтаноламин), этилендиамин, глюкозамин, глицин, гуанидин, гуанин, меглумин (то есть Nметилглюкамин), никотинамид, оламин (то есть этаноламин), орнитин, прокаин, пролин, пиридоксин,серин, тирозин, валин и трометамин (то есть трис или трис(гидроксиметил)аминометан). Соли присоединения основания могут быть получены по традиционным методикам. Поскольку некоторые соединения по этому изобретению являются основными соединениями, то они способны к образованию большого множества различных солей с разнообразными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые используют для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты основных соединений по этому изобретению формулы (I), представляют собой такие кислоты,которые образуют нетоксичные соли присоединения кислоты, то есть соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы, такие как хлорид, бромид, йодид, нитрат, сульфат или бисульфат, фосфат или кислый фосфат, ацетат, лактат, цитрат или кислый цитрат, тартрат или битартрат, сукцинат, малат, фумарат, глюконат, сахарат, бензоат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, птолуолсульфонат, адипат, аспартат камсилат, эдисилат (то есть 1,2-этандисульфонат), эстолат (то есть лаурилсульфат), глюцептат (то есть глюкогептонат), глюконат, 3-гидрокси-2-нафтоат, ксионофоат (то есть 1-гидрокси-2-нафтоат), изотионат (то есть 2-гидроксиэтансульфонат), мукат (то есть галактарат), 2 нафсилат (то есть нафталинсульфонат), стеарат, холат, глюкуронат, глутамат, гиппурат, лактобионат,лизинат, малеат, манделат, нападисилат, никатинат, полигалактуронат, салицилат, сульфосалицилат,таннат, триптофанат, борат, карбонат, олеат, фталат и памоат (то есть 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3 нафтоат. Из этих солей предпочтительными для авторов изобретения являются эдисилат (в том числе геми-эдисилат) и гидрохлорид. Соли присоединения кислоты могут быть получены по традиционным методикам. Подходящие соли рассмотрены в обзоре Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19, 1977. Настоящее изобретение включает солевые формы полученных соединений формулы (2-А'). Соединения формулы (2-А') могут быть способны к образованию катионов. Катионы соединений формулы (2-А') могут быть получены по традиционным методикам, например, контактированием указанного соединения со стехиометрическим количеством подходящего гидроксида или алкоголята щелочного или щелочно-земельного металла (натрия, калия, кальция и магния) в воде или в подходящем органическом растворителе, таком как этанол, изопропанол, их смеси или тому подобное. Основания, используемые для получения солей присоединения основания кислотных соединений формулы (2-А'), представляют собой основания, которые образуют соли присоединения основания. Та- 12009457 кие соли присоединения основания включают фармацевтически приемлемые соли присоединения основания, как описано выше, и соли, содержащие катионы, такие как триэтиламин, пиридин и аммиак. Соединения формулы (2-А') способны к образованию большого множества различных солей с разнообразными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, используемые для получения солей присоединения кислоты соединения формулы (2-А'),представляют собой кислоты, которые образуют соли присоединения кислоты. Такие соли присоединения кислоты включают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, как описано выше,и соли, содержащие анионы, такие как цианид. Также в объем этого изобретения включены биопредшественники (также называемые пролекарствами) соединений формулы (I). Биопредшественник соединения формулы (I) представляет собой его химическое производное, которое в биологических системах легко превращается обратно в исходное соединение формулы (I). В частности, биопредшественник соединения формулы (I) превращается обратно в исходное соединение формулы (I) после того, как биопредшественник вводят субъекту млекопитающему, например, человеку, и он всасывается в нем. Например, является возможным создание биопредшественника соединений формулы (I), в которой один или оба из L и W включают гидроксигруппы, путем получения сложного эфира гидроксигруппы. Если только один из L и W включает гидроксигруппу,то возможен только сложный моноэфир. Если оба из L и W включают гидрокси, то могут быть получены сложные моно- и диэфиры (которые могут быть одинаковыми или различными). Типичные сложные эфиры представляют собой простые алканоатные эфиры, такие как ацетат, пропионат, бутират и так далее. Кроме того, если L или W включает гидроксигруппу, то биопредшественники могут быть получены путем превращения гидроксигруппы в ацилоксиметильное производное (например, пивалоилоксиметильное производное) путем взаимодействия с ацилоксиметилгалогенидом (например, пивалоилоксиметилхлоридом). В тех случаях, когда соединения формулы (I) по этому изобретению могут образовывать сольваты,такие как гидраты, такие сольваты включены в объем этого изобретения. Соединения формулы (I), содержащие один или более чем один асимметрический атом углерода,могут существовать в виде двух или более чем двух стереоизомеров. В тех случаях, когда соединение формулы (I) содержит алкенильную или алкениленовую группу, возможны геометрические цис/транс(или Z/E) изомеры. В тех случаях, когда соединение содержит, например, кето- или оксимгруппу или ароматическую группировку, может иметь место таутомерная изомерия ("таутомерия"). Из этого следует, что у одиночного соединения может быть обнаружено более одного типа изомерии. В объем настоящего изобретения включены все стереоизомеры, геометрические изомеры и таутомерные формы соединений формулы (I), в том числе соединения, проявляющие более одного типа изомерии, и смеси одного или более чем одного из них. Также включены соли присоединения кислоты или основания, где противоион является оптически активным, например, D-лактат или L-лизин, или рацемическим, например, DL-тартрат или DL-аргинин. Цис/транс изомеры могут быть разделены по традиционным методикам, хорошо известным специалистам в данной области, например, хроматографией и фракционированной кристаллизацией. Традиционные методики для получения/выделения индивидуальных энантиомеров включают хиральный синтез из подходящего оптически чистого предшественника или разделение рацемата (или рацемата соли или производного) с использованием, например, хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Альтернативно, рацемат (или рацемический предшественник) может быть подвергнут взаимодействию с подходящим оптически активным соединением, например, спиртом, или, в случае, когда соединение формулы (I) содержит кислотную или основную группировку, с кислотой или основанием, такими как винная кислота или 1-фенилэтиламин. Образовавшаяся диастереомерная смесь может быть разделена хроматографией и/или фракционированной кристаллизацией, и один или оба диастереоизомера превращены в соответствующий(е) чистый(е) энантиомер(ы) способами, хорошо известными специалисту в данной области. Стереоизомерные конгломераты могут быть разделены по традиционным методикам, известным специалистам в данной области (см., например, "Stereochemistry of Organic Compounds" by E. L. Eliel(Wiley, New York, 1994. Соединения по изобретению, предназначенные для фармацевтического применения, можно вводить в виде кристаллических или аморфных продуктов. Они могут быть получены, например, в виде твердых"пробок" (plugs), порошков или пленок, такими способами, как осаждение, кристаллизация, сублимационная сушка, распылительная сушка или сушка выпариванием. С этой целью можно использовать сушку в условиях микроволнового или радиочастотного излучения. Их можно вводить отдельно или в комбинации с одним или более чем одним другим соединением по изобретению или в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством (или в виде любой их комбинации). Обычно их будут вводить в виде препарата вместе с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. Термин "эксципиент" используют в этом документе для описания любого ингредиента, отличного от соединения(й) по изобретению. Выбор эксципиента бу- 13009457 дет в большой степени зависеть от таких факторов, как конкретный путь введения, влияние эксципиента на растворимость и стабильность и природа лекарственной формы. Фармацевтические композиции, подходящие для доставки соединений по настоящему изобретению, и способы их приготовления будут очевидны специалистам в данной области. Такие композиции и способы их приготовления можно найти в литературе (например, в "Remington's Pharmaceutical Sciences",19th Edition (Mack Publishing Company, 1995. Пероральное введение Соединения по изобретению можно вводить перорально. Пероральное введение может включать глотание, так что соединение поступает в желудочно-кишечный тракт, или можно использовать трансбуккальное или подъязычное введение, посредством которого соединение поступает в ток крови непосредственно изо рта. Препараты, подходящие для перорального введения, включают твердые препараты, такие как таблетки, капсулы, содержащие частицы, жидкости или порошки, лепешки (в том числе заполненные жидкостью), жевательные резинки, мульти- и наночастицы, гели, твердый раствор, липосому, пленки (в том числе мукоадгезивные), овули, спреи и жидкие препараты. Жидкие препараты включают суспензии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие препараты можно использовать в виде наполнителей мягких или твердых капсул и типично включают носитель, например,воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или более чем один эмульгатор и/или суспендирующий агент. Жидкие препараты также могут быть приготовлены путем разведения твердого вещества, например из саше. Соединения по изобретению также можно использовать в быстро растворимых, быстро распадающихся лекарственных формах, таких как формы, описанные в литературе (Expert Opinion in TherapeuticPatents, 11 (6), 981-986, Liang and Chen (2001. Для лекарственных форм в виде таблеток лекарственное средство, в зависимости от дозы, может составлять от 1 до 80 мас.% лекарственной формы, более типично от 5 до 60 мас.% лекарственной формы. Кроме лекарственного средства таблетки обычно содержат разрыхлитель. Примеры разрыхлителей включают крахмал-гликолят натрия,натрий-карбоксиметилцеллюлозу,кальцийкарбоксиметилцеллюлозу, натрий-кроскармелозу, кросповидон, поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, низший алкил-замещенную гидроксипропилцеллюлозу, крахмал,пептизированный крахмал и альгинат натрия. Обычно разрыхлитель будет составлять от 1 до 25 мас.%,предпочтительно от 5 до 20 мас.% лекарственной формы. Для придания таблетированному препарату когезионных свойств обычно используют связывающие вещества. Подходящие связывающие вещества включают микрокристаллическую целлюлозу, желатин,сахара, полиэтиленгликоль, природные и синтетические смолы, поливинилпирролидон, пептизированный крахмал, гидроксипропилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу. Также таблетки могут содержать разбавители, такие как лактоза (моногидрат, моногидрат после сушки распылением, безводный и тому подобное), маннит, ксилит, декстроза, сахароза, сорбит, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал и дигидрат гидрофосфата кальция. Также таблетки, возможно, могут включать поверхностно-активные вещества, такие как лаурилсульфат натрия и полисорбат 80, и скользящие вещества, такие как диоксид кремния и тальк. В случае присутствия поверхностно-активного вещества могут составлять от 0,2 до 5 мас.% таблетки, и скользящие вещества могут составлять от 0,2 до 1 мас.% таблетки. Также таблетки обычно содержат смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеарат кальция, стеарат цинка, стеарилфумарат натрия и смеси стеарата магния с лаурилсульфатом натрия. Смазывающие вещества обычно составляют от 0,25 до 10 мас.%, предпочтительно от 0,5 до 3 мас.% таблетки. Другие возможные ингредиенты включают антиоксиданты, красители, корригенты, консерванты и вещества, исправляющие вкус. Типичные таблетки содержат до приблизительно 80% лекарственного средства, от приблизительно 10 до приблизительно 90 мас.% связывающего вещества, от приблизительно 0 до приблизительно 85 мас.% разбавителя, от приблизительно 2 до приблизительно 10 мас.% разрыхлителя и от приблизительно 0,25 до приблизительно 10 мас.% смазывающего вещества. Таблеточные смеси могут быть спрессованы непосредственно или с помощью валика с образованием таблеток. Альтернативно, таблеточные смеси или части смесей могут быть подвергнуты сухому,влажному гранулированию или гранулированию плавлением, могут быть в форме застывшего расплава или экструдированы перед таблетированием. Конечный препарат может содержать один или более чем один слой и может быть с покрытием или без покрытия; он даже может быть инкапсулирован. Состав таблеток рассмотрен в литературе ("Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1", by H. Lieberman and L. Lachman, Marcel Dekker, N. Y., N. Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X. Твердые препараты для перорального введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное, непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое и программируемое высвобождение. Подходящие препараты с модифицированным высвобождением для целей изобретения описаны в- 14009457 патенте США 6106864. Подробности других подходящих технологий высвобождения, таких как высокоэнергетические дисперсии и осмотические и покрытые частицы, можно найти в Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line, 25 (2), 1-14 (2001). Применение жевательной резинки для достижения регулируемого высвобождения описано в WO 00/35298. Парентеральное введение Соединения по изобретению также можно вводить непосредственно в ток крови, в мышцу или во внутренний орган. Подходящие способы парентерального введения включают внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, интратекальное, внутрижелудочковое, интрауретральное, интрастернальное, внутричерепное, внутримышечное и подкожное. Подходящие устройства для парентерального введения включают игольчатые (в том числе микроигольчатые) инъекторы (шприцы), инъекторы без игл и оборудование для инфузии. Парентеральные препараты типично представляют собой водные растворы, которые могут содержать эксципиенты, такие как соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно до рН от 3 до 9), но для некоторых применений они могут быть приготовлены более подходящим образом: в виде стерильного неводного раствора или в высушенной форме, которую следует использовать вместе с подходящим наполнителем, таким как стерильная апирогенная вода. Получение парентеральных препаратов в стерильных условиях, например, путем лиофилизации,можно легко выполнять с использованием стандартных фармацевтических методик, хорошо известных специалистам в данной области. Растворимость соединений формулы (I), используемых в приготовлении парентеральных растворов,может быть увеличена путем использования подходящих методик приготовления, таких как включение агентов, повышающих растворимость. Препараты для парентерального введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное, непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое и программируемое высвобождение. Так,соединения по изобретению могут быть приготовлены в виде твердого вещества, полутвердого вещества или тиксотропной жидкости для введения в виде имплантируемого депо, обеспечивающего модифицированное высвобождение активного соединения. Примеры таких препаратов включают стенты, покрытые лекарственными средствами, и PGLA микросферы. Местное введение Соединения по изобретению также можно вводить местно: на кожу или слизистую оболочку, то есть дермально или трансдермально. Типичные препараты для этой цели включают гели, гидрогели,лосьоны, растворы, кремы, мази, присыпки, перевязочные материалы, пены, пленки, кожные пластыри,пластины, имплантаты, губки, волокна, повязки и микроэмульсии. Также можно использовать липосомы. Типичные носители включают спирт, воду, минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, глицерин, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль. Могут быть включены усилители проникновения (см., например, J. Pharm Sci, 88 (10), 955-958, by Finnin and Morgan (October 1999. Другие способы местного введения включают доставку посредством электропорации, ионтофореза,фонофореза, сонофореза и инъекции с использованием микроиглы или без иглы (например, Powderject,Bioject и так далее). Препараты для местного введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное,непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое и программируемое высвобождение. Ингаляция/интразальное введение Соединения по изобретению также можно вводить интраназально или путем ингаляции, типично в форме сухого порошка (или отдельно, в виде смеси, например сухой смеси с лактозой, или в виде частиц из смешанных компонентов, например смешанных с фосфолипидами, такими как фосфатидилхолин) из сухого порошкового ингалятора или в форме аэрозольных брызг из герметичного контейнера, насоса,разбрызгивателя, пульверизатора (предпочтительно пульверизатора с использованием электрогидродинамики для получения мелкодисперсного тумана) или небулайзера, с использованием или без использования подходящего пропеллента, такого как 1,1,1,2-тетрафторэтан или 1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан. Для интраназального применения порошок может включать биоадгезивный агент, например хитозан или циклодекстрин. Герметичный контейнер, насос, разбрызгиватель, пульверизатор или небулайзер содержит раствор или суспензию соединения(й) по изобретению, включающий(ю), например, этанол, водный этанол или подходящий альтернативный агент для диспергирования, солюбилизации или пролонгированного высвобождения активного вещества, пропеллент(ы) в качестве растворителя и возможное поверхностноактивное вещество, такое как сорбитантриолеат, олеиновая кислота или олигомолочная кислота. Перед использованием препарата в форме сухого порошка или в форме суспензии лекарственный продукт мелко измельчают до размера, подходящего для доставки путем ингаляции (типично менее чем 5 мкм). Этого можно достичь любым подходящим способом измельчения, таким как размол на спираль- 15009457 ный струйной мельнице, размол на струйной мельнице с псевдоожиженным слоем, обработка с использованием сверхкритической подвижной фазы с образованием наночастиц, гомогенизация при высоком давлении или распылительная сушка. Капсулы (изготовленные, например, из желатина или НРМС (гидроксипропилметилцеллюлозы,блистеры и картриджи для применения в ингаляторе или инсуффляторе могут быть приготовлены так,чтобы содержать порошковую смесь соединения по изобретению, подходящую порошковую основу, такую как лактоза или крахмал, и модификатор характеристик, такой как l-лейцин, маннит или стеарат магния. Лактоза может быть безводной или в форме моногидрата, предпочтительно в последней форме. Другие подходящие эксципиенты включают декстран, глюкозу, мальтозу, сорбит, ксилит, фруктозу, сахарозу и трегалозу. Подходящий препарат в форме раствора для применения в пульверизаторе с использованием электрогидродинамики для получения мелкодисперсного тумана может содержать от 1 мкг до 20 мг соединения по изобретению на одно действие, и объем при приведении в действие пульверизатора может изменяться от 1 до 100 мкл. Типичный препарат может включать соединение формулы (I), пропиленгликоль,стерильную воду, этанол и хлорид натрия. Альтернативные растворители, которые можно применять вместо пропиленгликоля, включают глицерин и полиэтиленгликоль. К этим препаратам по изобретению, предназначенным для ингаляции/интраназального введения,могут быть добавлены подходящие корригенты, такие как ментол и левоментол, или подсластители, такие как сахарин или сахарин натрия. Препараты для ингаляции/интраназального введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения с использованием, например, поли(DL-молочнойсогликолевой кислоты (PGLA. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное, непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое и программируемое высвобождение. В случае сухих порошковых ингаляторов и аэрозолей единицу дозировки определяют посредством клапана, который поставляет отмеренное количество. Единицы по изобретению типично регулируют для введения отмеренной дозы или "пшик", содержащих от 1 до 100 мкг соединения формулы (I). Суммарная суточная доза типично будет в пределах от 50 мкг до 20 мг, которую можно вводить в однократной дозе или, более обычно, в разделенных дозах в течение дня. Ректальное/интравагинальное введение Соединения по изобретению можно вводить ректально или вагинально, например, в форме суппозитория, пессария или клизмы. Масло какао является традиционной суппозиторной основой, но в подходящих случаях можно применять различные альтернативные варианты. Препараты для ректального/вагинального введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное, непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое и программируемое высвобождение. Глазное/ушное введение Соединения по изобретению также можно вводить непосредственно в глаз или ухо, типично в форме капель тонкодисперсной суспензии или раствора в изотоническом, стерильном солевом растворе с отрегулированным значением рН. Другие препараты, подходящие для глазного и ушного введения включают мази, подверженные биологическому разложению (например, рассасывающиеся гелевые губки, коллагеновые) и неподверженные биологическому разложению (например, силиконовые) имплантаты, пластины, линзы и системы частиц или везикулярные системы, такие как ниосомы или липосомы. Может быть включен полимер, такой как поперечно-сшитая полиакриловая кислота, поливиниловый спирт, гиалуроновая кислота, целлюлозный полимер, например, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза или метилцеллюлоза, или гетерополисахаридный полимер, например, гелановая камедь (gelan gum), вместе с консервантом, таким как хлорид бензалкония. Такие препараты также можно доставлять посредством ионтофореза. Препараты для глазного/ушного введения могут быть приготовлены для немедленного и/или модифицированного высвобождения. Препараты с модифицированным высвобождением включают замедленное, непрерывное, пульсирующее, регулируемое, целевое или программируемое высвобождение. Другие методы Для улучшения растворимости, скорости растворения, вкуса, биодоступности и/или стабильности при применении любым из вышеупомянутых способов введения соединения по изобретению можно объединять с растворимыми макромолекулярными структурами, такими как циклодекстрин и его подходящие производные, или полиэтиленгликоль-содержащими полимерами. Например, установлено, что комплексы лекарственное средство-циклодекстрин обычно являются полезными для большинства лекарственных форм и путей введения. Можно применять как клатраты, так и "неклатраты". В качестве альтернативы прямому комплексообразованию с лекарственным средством циклодекстрин можно применять в виде вспомогательной добавки, то есть как носитель, разбавитель или солюбилизатор. Наиболее общеупотребительными для этих целей являются альфа-, бета- и гаммациклодекстрины, примеры которых можно найти в международных заявках на патентWO 91/11172,- 16009457WO 94/02518 и WO 98/55148. Набор частей Ввиду того, что может быть желательным введение комбинации активных соединений, например, с целью лечения конкретного заболевания или состояния, то две или более чем две фармацевтические композиции, по меньшей мере одна из которых содержит соединение по изобретению, могут быть удобно объединены в форме набора, подходящего для совместного введения композиций, что включено в объем настоящего изобретения. Таким образом, набор по изобретению включает две или более чем две отдельные фармацевтические композиции, по меньшей мере одна из которых содержит соединение формулы (I) по изобретению,и средство для раздельного хранения указанных композиций, такое как контейнер, разделенный на части флакон или разделенный на части пакет из фольги. Примером такого набора является хорошо знакомая блистерная упаковка, используемая для упаковки таблеток, капсул и тому подобного. Набор по изобретению является особенно подходящим для введения разных лекарственных форм,например, пероральной и парентеральной, для введения отдельных фармацевтических композиций с разными интервалами дозирования, или для титрования отдельных композиций друг от друга. С целью оказания помощи в соблюдении правил применения набор типично включает инструкцию для введения и может предусматривать так называемое "вспомогательное средство для памяти". Дозировка Для введения пациентам-людям суммарная суточная доза соединений по изобретению типично находится в пределах от 0,05 до 100 мг в зависимости, конечно, от пути введения, предпочтительно в пределах от 0,1 до 50 мг, и более предпочтительно в пределах от 0,5 до 20 мг. Например, при пероральном введении может требоваться суммарная суточная доза от 1 до 20 мг, в то время как для внутривенной дозы может требоваться только от 0,5 до 10 мг. Суммарную суточную дозу можно вводить в однократной или разделенных дозах. Эти дозы обоснованы для среднего человека, имеющего массу приблизительно от 65 до 70 кг. Врач легко сможет определить дозы для субъектов, масса которых выпадает из этого интервала, таких как дети и пожилые люди. Во избежание сомнений ссылки, используемые в этом документе на "лечение" включают ссылки на целительное, паллиативное и профилактическое лечение. Агонист 5-НТ 4 по настоящему изобретению можно успешно объединять с другим фармакологически активным соединением или с двумя или более чем двумя фармакологически активными соединениями, в частности при лечении гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Например, агонист 5-НТ 4, в частности соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соль или сольват, такие как определено выше, можно вводить одновременно, последовательно или раздельно в комбинации с одним или более чем одним агентом, выбранным из:(20) селективных ингибиторов обратного захвата серотонина, например сертралина, эсциталопрама,флуоксетина, нефазодона, флувоксамина, циталопрама, милнаципрана, пароксетина, венлафаксина, трамадола, сибутрамина, дулоксетина, десвенлафаксина и депоксетина;(МK-869), ланепитанта, дапитанта и 3-2-метокси-5-(трифторметокси)фенил]метиламино]-2-фенилпиперидина(2S,3S). Метод оценки биологических активностей: Аффинности связывания рецептора 5-НТ 4 соединениями по настоящему изобретению определяют по следующим методикам. Приготовление мембран Головы свиней поставляли со скотобойни. Стриарные ткани иссекали, взвешивали и гомогенизировали в 15 объемах охлажденного льдом 50 мМ HEPES (N-2-гидроксиэтил-пиперазин-N-2 этансульфоновая кислота) (рН 7,5) в гомогенизаторе Polytron (30 с на полной скорости). Суспензию центрифугировали при 48000 g и 4 С в течение 15 мин. Образовавшийся осадок ресуспендировали в подходящем объеме охлажденного льдом 50 мМ HEPES, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. Головы коров также поставляли со скотобойни. Стриарные ткани иссекали, взвешивали и гомогенизировали в 20 объемах охлажденного льдом 50 мМ Tris-HCl (рН 7,4) в гомогенизаторе Polytron (30 с на полной скорости). Суспензию центрифугировали при 20000 g и 4 С в течение 30 мин. Образовавшийся осадок ресуспендировали в 15 объемах охлажденного льдом 50 мМ Tris-HCl, и гомогенизировали и центрифугировали снова таким же образом. Окончательный осадок ресуспендировали в подходящем объеме 50 мМ Tris-HCl, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. У самцов крыс Sprague-Dawley (SD) (Japan SLC) удаляли кортикальные ткани мозга, взвешивали и помещали в 10 объемов охлажденного льдом 50 мМ Tris-HCl (рН 7,5). Гомогенизировали в гомогенизаторе Polytron (30 с на полной скорости) и затем центрифугировали при 48000 g и 4 С в течение 15 мин. Образовавшийся осадок ресуспендировали в охлажденном льдом 50 мМ Tris-HCl, гомогенизировали и центрифугировали снова таким же образом. Окончательный осадок ресуспендировали в подходящем объеме 50 мМ Tris-HCl, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. Концентрации белка в гомогенатах определяли методом Бредфорда или методом анализа белка с реактивом ВСА (Pierce), используя BSA (бычий сывороточный альбумин) в качестве стандарта. Исследования связывания Аффинность соединений в отношении 5-НТ 4 рецепторов свиньи или коровы и 5-НТ 3 рецепторов крысы оценивали с использованием специфических лигандов, меченных радиоактивным изотопом, GR 113808 (1-[2-(метилсульфонил)этил]-4-пиперидинил[метил-3 Н]-1H-индол-3-карбоксилат) и BRL 43694(1-метил-N-(9-[метил-3 Н]-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил)-1H-индазол-3-карбоксамид). Соединения инкубировали с 25-100 пМ [3H]-GR 113808 (Amersham) и 0,6-1 мг белка стриарных мембран свиньи или коровы, суспендированных в конечном объеме 0,8-1 мл 50 мМ Tris-HCl (рН 7,5). Неспецифическое связывание определяли с 10-50 мкМ 5-НТ (серотонин). Связывание 0,3 нМ [3H]-BRL 43694 (NEN) измеряли, ис- 18009457 пользуя 400 мкг белка кортикальных мембран крысы, суспендированных в конечном объеме 500 мкл 50 мМ Tris-HCl (рН 7,5). Неспецифическое связывание определяли с 10 мкМ 5-НТ. Планшеты инкубировали при комнатной температуре на планшетном шейкере в течение 30 мин. Анализы останавливали быстрым фильтрованием через фильтры Wallac-B, предварительно пропитанные 0,2% поли(этиленимином) при 4 С в течение 60-90 мин, с использованием харвестера клеток Brandell. Фильтры промывали три раза 1 мл охлажденного льдом 50 мМ HEPES, и сушили в микроволновой печи или при комнатной температуре. Их помещали в пакеты и нагревали с сцинтиллятором meltilex (Wallac) или смачивали в BetaplateScint (Wallac). Радиоактивность, связанную с рецептором, количественно определяли с использованием счетчика Big-spot, счетчика Betaplate (Wallac) или счетчика LS (Packard). Связывание 5-НТ 4 человека (1) Клетки НЕK293, трансфицированные 5-HT4(d) человека, получали и выращивали в лабораторных условиях. Собранные клетки суспендировали в 50 мМ HEPES (рН 7,4 при 4 С) с добавлением коктейля ингибитора протеаз (Boehringer, разведение 1:1000) и гомогенизировали, используя ручной дезинтегратор Polytron PT 1200, установленный на полную мощность, в течение 30 с на льду. Гомогенаты центрифугировали при 40000g при 4 С в течение 30 мин. Затем осадки ресуспендировали в 50 мМ HEPES(рН 7,4 при 4 С) и еще раз центрифугировали таким же образом. Окончательные осадки ресуспендировали в подходящем объеме 50 мМ HEPES (рН 7,4 при 25 С), гомогенизировали, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. Для определения концентрации белка использовали аликвоту мембранных фракций и набор для анализа белка с реактивом ВСА (PIERCE) и планшет-ридерARVOsx (Wallac). Для экспериментов по связыванию 25 мкл анализируемых соединений инкубировали с 25 мкл [3H]GR113808 (Amersham, конечная концентрация 0,2 нМ) и 150 мкл гомогената мембран и суспензионными растворами гранул WGA-SPA (Amersham) (10 мкг белка и 1 мг SPA гранул на лунку) в течение 60 мин при комнатной температуре. Неспецифическое связывание определяли с использованием GR113808(Tocris) в конечной концентрации 1 мкМ. Инкубирование прекращали центрифугированием при 1000 об./мин. Радиоактивность, связанную с рецептором, количественно определяли с использованием планшетного счетчика MicroBeta (Wallac). Этим методом анализировали все соединения, полученные в рабочих примерах, описанных ниже, и в отношении ингибирования связывания рецептора 5-НТ 4 они показали значения Ki от 0,3 до 30 нМ. Связывание 5-НТ 4 человека (2) Клетки НЕК 293, трансфицированные 5-HT4(d) человека, получали и выращивали в лабораторных условиях. Собранные клетки суспендировали в 50 мМ буфере Tris (pH 7,4 при 4 С) с добавлением коктейля ингибитора протеаз (Boehringer, разведение 1:1000) и гомогенизировали, используя ручной дезинтегратор Polytron PT 1200, установленный на полную мощность, в течение 30 с на льду. Гомогенаты центрифугировали при 40000 х g при 4 С в течение 10 мин. Затем осадки ресуспендировали в 50 мМ буфереTris (pH 7,4 при 4 С) и еще раз центрифугировали таким же образом. Окончательные осадки ресуспендировали в подходящем объеме 50 мМ буфера Tris (pH 7,4 при 25 С), содержащего 10 мМ MgCl2, гомогенизировали, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. Для определения концентрации белка использовали аликвоту мембранных фракций и набор для анализа белка с реактивом ВСА (PIERCE) и планшет-ридер ARVOsx (Wallac). Для экспериментов по связыванию, 50 мкл анализируемых соединений инкубировали с 50 мкл [3 Н] 5-НТ (Amersham, конечная концентрация 8,0 нМ) и 400 мкл гомогената мембран (300 мкг белка в пробирке) в течение 60 мин при комнатной температуре. Неспецифическое связывание определяли, используя GR113808 (Tocris) в конечной концентрации 50 мкМ. Все инкубирования прекращали быстрым вакуумным фильтрованием через стекловолоконную фильтровальную бумагу, смоченную 0,2% PEI (поли(этиленимином, с использованием харвестера BRANDEL, с последующей трехкратной промывкой 50 мМ буфером Tris (pH 7,4 при 25 С). Радиоактивность, связанную с рецептором, количественно определяли с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика Packard LS. Все соединения из примеров показали аффинность в отношении рецептора 5-НТ 4. Функциональный анализ Присутствие рецепторов 5-НТ 4 в пищеводе крысы и способность проявлять частичный агонизм в препарате ТММ описаны в литературе (см. G.S. Baxter et al. Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol (1991) 343: 439-446; M. Yukiko et al. JPET (1997) 283: 1000-1008; и J.J. Reeves et al. Br. J. Pharmacol. (1991) 103: 1067-1072). Более подробно, частичная агонистическая активность может быть измерена по следующим методикам. Самцов крыс SD (Charles River) массой 250-350 г оглушали и затем умерщвляли смещением шейных позвонков. Пищевод иссекали непосредственно рядом с желудком (включая кусочек желудка, чтобы отметить дистальный конец) до уровня трахеи и затем помещали в свежий раствор Кребса. Наружный слой скелетной мышцы удаляли одной попыткой путем его отслаивания от лежащего ниже слоя гладкой мышцы с использованием щипцов (в направлении от желудка к трахее). Оставшаяся внутренняя трубка гладкой мышцы известна как ТММ. Ее подрезали до 2 см от исходного "конца желудка" и остаток выбрасывали.- 19009457 ТММ приготавливали как цельные "открытые" трубки в продольной ориентации в 5 мл ванночки для органов, заполненные теплым (32 С) аэрированным раствором Кребса. Ткани помещали под начальную нагрузку 750 мг и оставляли уравновешиваться в течение 60 мин. Во время установления равновесия ткани дважды повторно "напрягали" в 15-минутные интервалы. В течение этого времени устанавливали скорость потока насоса до 2 мл/мин. После уравновешивания насос выключали. Ткани подвергали воздействию 1 мкМ карбахола, сокращали и достигали устойчивой сократительной стадии в пределах 1:5 мин. Затем ткани подвергали воздействию 1 мкМ 5-НТ (это делали для нагрузки тканей). В ответ на действие 5-НТ ткани достаточно быстро релаксировали - в пределах 1 мин. Как только происходила максимальная релаксация и производили измерение, ткани промывали с максимальной скоростью (66 мл/мин) в течение по меньшей мере 1 мин и до возвращения исходной базовой линии (до карбахола и 5-НТ) (обычно базовая линия опускается ниже исходной линии после первоначального уравновешивания). Скорость потока насоса уменьшали до 2 мл/мин, и ткани оставляли на 60 мин. Кривую зависимости эффекта от кумулятивной концентрации (СЕС) 5-НТ строили в интервале от 0,1 нМ до 1 мкМ, с полулогарифмическими шагами приращения (кривая 1 5-НТ для анализа данных). Время контакта между дозами составляло 3 мин или до тех пор, пока не устанавливался пологий участок кривой. Ткани реагировали быстрее при увеличении концентрации 5-НТ в ванночке. В конце кривой ткани промывали (на максимальной скорости) как можно быстрее, чтобы избежать десенсибилизации рецепторов. Скорость насоса уменьшали до 2 мл/мин, и ткани оставляли на 60 мин. Вторую СЕС осуществляли или в отношении 5-НТ (для временного контроля тканей), другого агониста 5-НТ 4 (стандарт) или анализируемого соединения (кривая 2 для анализа данных). Для других агонистов 5-НТ 4 и анализируемых соединений изменяли время контакта, и его подгоняли в соответствии с индивидуальными ответами тканей на каждый конкретный агент. В тканях, подверженных воздействию анализируемого соединения, после последней концентрации анализируемого соединения, в ванночку добавляли высокую концентрацию (1 мкМ) антагониста 5-HT4 (SB 203,186: 2-(1-пиперидинил)этиловый эфир 1H-индол-3-карбоновой кислоты, Tocris). Это делали для того, чтобы увидеть, может ли быть реверсирована какая-либо релаксация, индуцированная агонистом, в случае, если она присутствует. SB 203,186 реверсировал релаксацию, индуцированную 5-НТ, восстанавливая исходную степень тонуса ткани, индуцированного карбахолом. Агонистическую активность анализируемых соединений подтверждали предварительным инкубированием тканей с 100 нМ стандартным антагонистом 5 НТ 4, таким как SB 203,186. SB 203,186 добавляли в ванночку за 5 мин перед добавлением карбахола до кривой 2. Для анализа данных ткани должны быть'парными', то есть анализируемое соединение в отсутствие SB 203,186 в одной ткани сравнивали с анализируемым соединением в присутствии SB 203,186 в другой ткани. Кривую 3, то есть, кривую 1 5-НТ, с последующей кривой 2 анализируемого соединения (- SB 203,186), с последующей кривой 3 анализируемого соединения (+ SB 203,186) построить было невозможно. Увеличение индуцированного агонистом сАМР (циклического аденозинмонофосфата) в клетках НЕK293, трансфицированных 5-HT4(d) человека Клетки НЕK293, трансфицированные 5-HT4(d) человека, приготавливали в лабораторных условиях. Клетки выращивали при 37 С и 5% CO2 в среде DMEM (модифицированной по способу Дульбекко среде Игла) с добавлением 10% FCS (фетальной телячьей сыворотки), 20 мМ HEPES (рН 7,4), 200 мкг/мл гигромицина В (Gibco), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки выращивали до 60-80% конфлюэнтности. В день, предшествующий дню обработки соединениями, нормальную FCS (Gibco) заменяли диализированной и клетки инкубировали в течение ночи. Соединения приготавливали в 96-луночных планшетах (12,5 мкл/лунка). Клетки собирали с PBS(фосфатно-солевой буферный раствор)/1 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), центрифугировали и промывали PBS. В начале анализа осадок клеток ресуспендировали в среде DMEM с добавлением 20 мМ HEPES, 10 мкМ паргилина (Sigma) и 1 мМ 3-изобутил-1-метилксантина (Sigma) в концентрации 1,6105 клеток/мл и оставляли на 15 мин при комнатной температуре. Реакцию инициировали добавлением клеток в планшеты (12,5 мкл/лунка). После инкубирования в течение 15 мин при комнатной температуре добавляли 1% Triton Х-100 (25 мкл/лунку) для остановки реакции и планшеты оставляли на 30 мин при комнатной температуре. Гомогенное, основанное на флуоресценции с временным разрешением определение cAMP (Schering) проводили в соответствии с инструкцией производителя. Для измерения HTRF использовали ARVOsx счетчик с множеством меток (multilabel) (Wallac) (возбуждение 320 нм, эмиссия 665 нм/620 нм, время задержки 50 мкс, время окна 400 мкс). Данные анализировали на основании отношения интенсивности флуоресценции каждой лунки при 620 и 665 нм с последующим определением количества сАМР с использованием стандартной кривой сАМР. Увеличение продукции сАМР, вызванное каждым соединением, нормализовали к количеству сАМР, продуцированному 1000 нМ серотонина (Sigma). Все соединения из примеров показали агонистическую активность в отношении рецептора 5 НТ 4. Связывание дофетилида у человека Клетки HEK293S, трансфицированные HERG человека, получали и выращивали в лабораторных- 20009457 условиях. Собранные клетки суспендировали в 50 мМ Tris-HCl (рН 7,4 при 4 С) и гомогенизировали,используя ручной дезинтегратор Polytron PT 1200, установленный на полную мощность, в течение 20 с на льду. Гомогенаты центрифугировали при 48000g при 4 С в течение 20 мин. Затем осадки ресуспендировали, гомогенизировали и еще раз центрифугировали таким же образом. Окончательные осадки ресуспендировали в подходящем объеме 50 мМ Tris-HCl, 10 мМ KCl, 1 мМMgCl2 (pH 7,4 при 4 С), гомогенизировали, распределяли по аликвотам и хранили при -80 С до момента использования. Для определения концентрации белка использовали аликвоту мембранных фракций и набор для анализа белка с реактивом ВСА (PIERCE) и планшет-ридер ARVOsx (Wallac). Исследования связывания проводили в общем объеме 200 мкл в 96-луночных планшетах. Двадцать мкл анализируемых соединений инкубировали с 20 мкл [3 Н]-дофетилида (Amersham, конечная концентрация 5 нМ) и 160 мкл мембранного гомогената (25 мкг белка) в течение 60 мин при комнатной температуре. Неспецифическое связывание определяли, используя дофетилид в конечной концентрации 10 мкМ. Инкубирование прекращали быстрым вакуумным фильтрованием через 0,5% предварительно смоченный GF/B фильтр Betaplate с использованием харвестера клеток Skatron с 50 мМ Tris-HCl, 10 мМ KCl,1 мМ MgCl2, рН 7,4 при 4 С. Фильтры сушили, помещали в пакеты для образцов и заполняли сцинтиллятором Betaplate. Радиоактивность, связанную с фильтром, подсчитывали с использованием счетчика Betaplate Wallac. Исследование IHERG Для электрофизиологического исследования использовали клетки НЕK 293, стабильно экспрессирующие HERG калиевый канал. Методологию стабильной трансфекции этого канала в клетки НЕK можно найти в другой литературе (Z.Zhou et al., 1998, Biophysical journal, 74, стр. 230-241). За один день до эксперимента клетки собирали из колб для культивирования и наносили на покровные стекла в стандартной среде MEM (минимальной поддерживающей среде) с 10% FCS. Нанесенные клетки хранили в инкубаторе при 37 С, поддерживая атмосферу 95% О 2/5% СО 2. Клетки анализировали в интервале 15-28 ч после их сбора.HERG токи изучали с использованием стандартных пэтч-кламп методик в режиме "целая клетка". Во время эксперимента клетки заливали стандартным внешним раствором следующего состава (мМ);NaCl, 130; KCl, 4; CaCl2, 2; MgCl2, 1; глюкоза, 10; HEPES, 5; рН 7,4 (NaOH). Регистрации на целых клетках осуществляли с использованием пэтч-кламп усилителя и пэтч-пипеток, которые имеют сопротивление 1-3 МОм, когда заполнены стандартным внутренним раствором следующего состава (мМ): KCl, 130;MgATP (ATP - аденозинтрифосфат), 5; MgCl2, 1,0; HEPES, 10; EGTA (этиленгликольтетрауксусная кислота), 5, рН 7,2 (KOH). Только клетки с сопротивлениями доступа (access resistance) ниже 15 МОм и сопротивлениями пломбы (seal resistance)1 ГОм были доступными для дальнейшего экспериментирования. Компенсацию последовательного (series) сопротивления использовали до максимального значения 80%. Никакой субтракции не было сделано. Однако приемлемое сопротивление доступа зависело от величины регистрируемых токов и уровня компенсации последовательного сопротивления, который можно безопасно использовать. После достижения конфигурации "целая клетка" и достаточной для диализа клеток пипеточным раствором ( 5 мин),к клетке, чтобы вызвать мембранные токи, применяли стандартный протокол напряжения. Протокол напряжения был следующим. Мембраны подвергали деполяризации от исходного потенциала -80 мВ до+20 мВ в течение 1000 мс. После этого следовало быстрое уменьшение напряжения по линейному закону(скорость 0,5 мВ мс-1) обратно до исходного потенциала. Протокол напряжения применяли к клетке постоянно, на всем протяжении эксперимента, каждые 4 с (0,25 Гц). Измеряли амплитуду максимального тока, вызванную около -40 мВ во время быстрого изменения по линейному закону. Когда во внешнем растворе получали стабильные ответы, вызываемые током, то с помощью перистальтического насоса, в течение 10-20 мин, использовали наполнитель (0,5% ДМСО (диметилсульфоксид в стандартном внешнем растворе). Если существовали минимальные изменения амплитуды вызываемого током ответа в контрольных условиях с наполнителем, то в течение 10-минутного периода использовали анализируемое соединение в концентрации 0,3, 1, 3, 10 мкМ. 10-минутный период включал время, в течение которого подаваемый посредством насоса раствор проходил сквозь трубку от емкости с раствором до регистрационной камеры. Время подвергания клеток раствору соединения составляло более 5 мин после того, как концентрация лекарственного средства в лунке камеры достигала желаемой концентрации. Существует обратимость процесса. Окончательно для оценки нечувствительного эндогенного тока клетки подвергали высокой дозе (5 мкМ) дофетилида, специфического IKr блокатора. Все эксперименты проводили при комнатной температуре (231 С). Вызываемые мембранные токи регистрировали в режиме "онлайн" на компьютере, фильтровали при 500-1 кГц (Bessel-3dB) и анализировали при 1-2 кГц, используя пэтч-кламп усилитель и специальную программу анализа данных. Амплитуду максимального тока, которая имело место при приблизительно -40 мВ, измеряли на компьютере в автономном режиме. Среднее арифметическое десяти значений амплитуды рассчитывали в контрольных условиях и в присутствии лекарственного средства. Уменьшение IN (в %) в каждом эксперименте получали с помощью- 21009457 нормированного значения тока с использованием следующей формулы: IN= (1- ID/IC)100, где ID означает среднее значение тока в присутствии лекарственного средства, и IC означает среднее значение тока в контрольных условиях. Для каждой концентрации лекарственного средства или контроля согласования во времени проводили индивидуальные эксперименты, и в качестве результата исследования определяли среднее арифметическое значение в каждом эксперименте. Период полувыведения в микросомах печени человека (HLM) Анализируемые соединения (1 мкМ) инкубировали с 3,3 мМ MgCl2 и 0,78 мг/мл HLM (HL101) в 100 мМ калий-фосфатном буфере (рН 7,4) при 37 С в 96-луночных планшетах с глубокими лунками. Реакционную смесь разделяли на две группы: группу "не-Р 450" и группу "Р 450". NADPH (никотинамидадениндинуклеотидфосфат) добавляли только в реакционную смесь группы Р 450. Аликвоту образцов группы Р 450 собирали в момент времени 0, 10, 30 и 60 мин, где момент времени 0 мин указывал на время, когда в реакционную смесь группы Р 450 добавляли NADPH. Аликвоту образцов группы не-Р 450 собирали в момент времени -10 и 65 мин. Собранные аликвоты экстрагировали ацетонитрильным раствором, содержащим внутренний стандарт. Осажденный белок откручивали на центрифуге (2000 об./мин, 15 мин). Концентрацию соединения в супернатанте измеряли системой ЖХ/МС/МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) анализа. Значение периода полувыведения получали построением графика зависимости натурального логарифма соотношения площадей пиков соединений/внутреннего стандарта от времени. Наклон линии, наилучшим образом проходящей через точки, дает скорость метаболизма (k). Ее переводили в значение периода полувыведения с использованием следующих уравнений: Период полувыведения = In 2 /k Модельный метод опорожнения желудка у крыс (method of gastric emptying model in rats) Влияние соединений на опорожнение желудка у крыс анализировали по модифицированному методу D. A. Droppleman et al. (J. Pharmacol. Methods 4, 227-230 (1980. Исследуемую пищу, нежирную калорийную пищу, получали по методу S. Ueki et al. (Arzneim.-Forsch./Drug Res. 49 (II), 618-625 (1999. КрысIGS-SD (самцы, 7 недель, 230-270 г) покупали у Charles River Japan (Atsugi). Этих крыс использовали в экспериментах после недельной акклиматизации. В экспериментах крыс вынуждали голодать в течение 15 ч перед экспериментами, но предоставляли свободный доступ к воде. За сорок пять минут до начала эксперимента для предотвращения приема воды крысами удаляли воду из клетки. За пять минут до введения анализируемой пищи крысам соответствующим путем вводили анализируемые соединения, цизаприд или наполнитель (n = 8-10) в объеме 0,1 мл на 100 г массы тела. Цизаприд (3 мг/кг) использовали в качестве положительного контроля для эксперимента. Через желудочный зонд крысам давали 3 мл анализируемой пищи и возвращали в клетки. Через тридцать минут после введения пищи крыс отбирали под воздействием CO2. После срединной лапаротомии желудок лигируют в области нижнего эзофагеального сфинктера (LES) и привратника. Затем желудок удаляли и взвешивали (А). После того, как желудок вскрывали и промывали 0,9%-ным солевым раствором, его поверхность промакивали тканью для удаления какого-либо избытка жидкости и снова взвешивали (Б). После исключения крыс, которые съели экскременты, или полученных неестественных несовпадений скорость опорожнения желудка для индивидуальных животных рассчитывали по формуле: Скорость GE (опорожнения желудка) (%) = (А - Б)/масса анализируемой пищи. Двигательная функция желудка собак, находящихся в сознании Хирургическую операцию у собак проводили по модифицированному методу Z. Itoh et al. (Gastroenterol. Jpn., 12, 275-283 (1977. Влияние анализируемых соединений на двигательную функцию желудка собак исследовали по модифицированному методу N. Toshida et al. (J.Pharmacol.Exp/Ther., 257, 7811787 (1991. Оценка в голодном состоянии Животным на тело желудка постоянным образом имплантировали тензометрический датчик силы и не давали пищи в течение ночи перед экспериментом. Двигательную функцию желудка непрерывно регистрировали телеметрической системой в течение 8 ч после введения соединения. Для количественного измерения изменения двигательной функции желудочно-кишечного тракта определяли показатель моторики как площадь под кривыми сокращения в течение каждого двухчасового периода, разделенную на высоту пика интердигестивного мигрирующего сокращения. Оценка в постпрандиальном состоянии Животным на тело желудка постоянным образом имплантировали тензометрический датчик силы и не давали пищи в течение ночи перед экспериментом. Постпрандиальную двигательную функцию индуцировали кормлением твердой пищей (100 г), и через 2 ч вводили соединение. Двигательную функцию желудка непрерывно регистрировали телеметрической системой в течение 8 ч после введения соединения. Для количественного измерения изменения двигательной функции желудочно-кишечного тракта определяли показатель моторики как площадь под кривыми сокращения в течение каждого часового периода, разделенную на площадь под кривыми сокращения за 1 ч до введения соединения. Соединения формулы (I) по этому изобретению можно вводить млекопитающим или пероральным,или парентеральным, или местным путями. Вообще, эти соединения наиболее желательно вводить лю- 22009457 дям в дозах от 0,3 до 750 мг в сутки, предпочтительно от 10 до 500 мг в сутки, хотя в зависимости от массы и состояния субъекта, которого следует лечить, болезненного состояния, которое следует лечить,и конкретного выбранного пути введения, обязательно будут происходить изменения. Тем не менее, например, для лечения воспаления наиболее желательным является применение уровня доз, находящегося в пределах от 0,06 до 2 мг на кг массы тела в сутки. Соединения по настоящему изобретению можно вводить по отдельности или в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями любым из путей, указанных выше, и такое введение можно осуществлять в однократных или многократных дозах. Более конкретно, новые терапевтические агенты по изобретению можно вводить в широком множестве разных лекарственных форм, то есть они могут быть объединены с различными фармацевтически приемлемыми инертными носителями в форме таблеток, капсул, пастилок, лепешек, твердых леденцов, порошков, спреев, кремов, бальзамов,суппозиториев, желе, гелей, паст, лосьонов, мазей, водных суспензий, растворов для инъекций, эликсиров, сиропов и тому подобного. Такие носители включают твердые разбавители или наполнители, стерильные водные среды и различные нетоксичные органические растворители и так далее. Кроме того,пероральные фармацевтические композиции могут быть приготовлены с подходящими подсластителями и/или корригентами. Вообще, терапевтически эффективные соединения по этому изобретению в таких лекарственных формах присутствуют в концентрации, уровни которой находятся в пределах от 5 до 70 мас.%, предпочтительно от 10 до 50 мас.%. Для перорального введения таблетки, содержащие различные эксципиенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза, цитрат натрия, карбонат кальция, гидрофосфат калия и глицин, можно применять вместе с различными разрыхлителями, такими как крахмал, предпочтительно кукурузный крахмал,картофельный крахмал или маниоковый крахмал, альгиновая кислота и некоторые комплексные силикаты, вместе со связывающими веществами, используемыми при гранулировании, подобными поливинилпирролидону, сахарозе, желатину и аравийскую камедь. Кроме того, для целей таблетирования часто очень полезными являются смазывающие вещества, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. Твердые композиции подобного типа также можно применять в качестве наполнителей в желатиновых капсулах; при этом предпочтительные вещества также включают лактозу или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Если для перорального введения являются желательными водные суспензии и/или эликсиры, то активный ингредиент может быть объединен с различными подсластителями или корригентами, красителем или красками, а если потребуется, то с эмульгаторами и/или суспендирующими агентами, а также вместе с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и их различные комбинации. Для парентерального введения можно применять растворы соединения по настоящему изобретению или в кунжутном, или в арахисовом масле, или в водном пропиленгликоле. Если необходимо, водные растворы должны быть подходящим образом забуферены (предпочтительно рН 8) и жидкий разбавитель приведен в изотоническое состояние. Эти водные растворы являются подходящими для целей внутривенной инъекции. Масляные растворы являются подходящими для целей внутрисуставной, внутримышечной и подкожной инъекции. Получение всех этих растворов в стерильных условиях легко выполняется с использованием стандартных фармацевтических методик, хорошо известных специалистам в данной области. Кроме того, при лечении воспалительных состояний кожи также является возможным местное введение соединений по настоящему изобретению, и предпочтительно их можно приготавливать в виде кремов, желе, гелей, паст, мазей и тому подобного в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Примеры Изобретение иллюстрируют следующие нелимитирующие примеры, в которых, если не оговорено особо: все операции выполняли при комнатной температуре или при температуре окружающей среды, то есть в пределах 18-25 С; выпаривание растворителя проводили с использованием роторного испарителя при пониженном давлении и при температуре бани до 60 С; протекание реакций контролировали тонкослойной хроматографией (тсх) и время реакций указано только для иллюстрации; приведенные температуры плавления (т.пл.) не корректировали (полиморфизм может приводить к разным значениям температуры плавления); структура и чистота всех выделенных соединений были обеспечены по меньшей мере одним из следующих методов: тсх (ТСХ пластины, покрытые силикагелем Merck 60 F254, или пластины ВЭТСХ (высокоэффективной тонкослойной хроматографии), покрытые Merck NH2 F254s), массспектрометрией, ядерным магнитным резонансом (ЯМР), спектрами поглощения в инфракрасном диапазоне (ИК), микроанализом или картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке (PXRD). Выходы приведены только для иллюстративных целей. Колоночную флэш-хроматографию проводили с использованием силикагеля Merck 60 (230-400 меш ASTM) или Fuji Silysia Chromatorex DU 3050 (Amino Type,30-50 мкм). Данные масс-спектрального анализа низкого разрешения (ЭУ (EI получали на массспектрометре Integrity (Waters) или масс-спектрометре Automass 120 (JEOL). Данные масс-спектрального анализа низкого разрешения (ИЭР (ESI получали на масс-спектрометре ZMD2 (Waters) или массспектрометре Quattro II (Micromass). Результаты ЯМР определяли при 270 МГц (спектрометре JEOLJNM-LA 270) или 300 МГц (JEOL JNM-LA300) с использованием дейтерированного хлороформа (99,8%D) или диметилсульфоксида (99,9% D) в качестве растворителя (если не указано особо) относительно тетраметилсилана (ТМС) в качестве внутреннего стандарта в частях на миллион (млн-1); общепринятые используемые сокращения: s = синглет, d = дублет, t = триплет, q = квартет, m = мультиплет, br. = широкий и так далее. ИК спектры измеряли при помощи инфракрасного спектрометра Shimazu (IR-470). Вращения плоскости поляризации света измеряли с использованием цифрового поляриметра JASCO DIP-370(Japan Spectroscopic CO, Ltd.). Картину дифракции рентгеновских лучей на порошке определяли с использованием порошкового рентгеновского дифрактометра Rigaku RINT-TTR, снабженного устройством автоматической смены образцов, 2 тета-тета гониометром, щелями для расходимости пучка, вторичным монохроматором и сцинтилляционным счетчиком. Для анализа образец приготавливали путем набивки порошка в алюминиевый держатель образца. Образец вращали при 60,00 об./мин. и сканировали при 4/мин. Химические символы имеют свои обычные значения; т.кип. (температура кипения), т.пл. (температура плавления), л (литр(ы, мл (миллилитр(ы, г (грамм(ы, мг (миллиграмм(ы, моль (моли),ммоль (миллимоли), экв. (эквивалент(ы. Пример 1. Гидрохлорид(22,3 г, 104 ммоль) в метаноле при температуре окружающей среды добавляли 1,6-диоксаспиро[2.5]октан(14,2 г, 124 ммоль, Satyamurthy, Nagichettiar et al., Phosphorus Sulfur, 1984, 19, 113). Затем смесь нагревали при 60 С в течение 4 ч. Летучие компоненты удаляли выпариванием, и в смеси гексана и диэтилового эфира проводили осаждение образовавшегося вязкого масла. Осадок собирали фильтрованием и перекристаллизовывали из смеси гексана и 2-пропанола с образованием 14,2 г К раствору трет-бутилового эфира (1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)карбаминовой кислоты (50,28 г, 153 ммоль) в метаноле при комнатной температуре добавляли 4 н. раствор HCl в диоксане (200 мл, 800 ммоль). Через 4 ч летучие вещества удаляли выпариванием. Образовавшееся аморфное вещество осаждали из смеси диэтилового эфира и метанола (5:1). Осадок собирали и постепенно добавляли к охлажденному льдом водному 6 н. NaOH (200 мл). Смесь 4 раза экстрагировали смесью дихлорметан/метанол (10:1). Объединенную органическую фазу промывали рассолом,сушили над MgSO4 и концентрировали, получая 24,90 г (99%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого аморфного вещества. МС (ИЭР) m/z: 229 (М+Н+). 1 Н-ЯМР (CDCl3): 1,19-1,28 (2 Н, m), 1,44-1,63 (8 Н, m), 1,65-1,71 (2 Н, m), 2,32 (2 Н, s), 2,35 (2 Н, t,J = 11,0 Гц), 2,57 (2 Н, d, J = 5,7 Гц), 2,85-2,90 (2 Н, m), 3,70-3,81 (4 Н, m). К перемешанной смеси 1-изопропил-1,3-дигидро-2H-бензимидазол-2-она (J. Med. Chem. 1999, 42,2870-2880) (23,0 г, 130 ммоль) и триэтиламина (54,6 мл, 392 ммоль) в тетрагидрофуране (300 мл) постепенно при комнатной температуре добавляли трифосген (38,8 г, 130 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл). Затем смесь нагревали при 80 С в течение 4 ч. После охлаждения к смеси добавляли раствор 4-[4(аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро-2H-пиран-4-ола (стадия 2 примера 1) (24,9 г, 109 ммоль) и триэтиламина (45 мл, 109 ммоль) в тетрагидрофуране (500 мл). Затем смесь нагревали при 80 С в течение 6 ч. После охлаждения к смеси добавляли насыщенный водный NaHCO3. Смесь экстрагировали этилацетатом (500 мл х 4). Экстракты промывали рассолом, сушили над MgSO4 и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на колонке с аминопропил-силикагелем, элюируя смесью гексан/этилацетат (3:1) и получая 31,3 г (67%) указанного в заголовке соединения в виде белого вещества. 1 Н ЯМР (ДМСО-d6)8,80 (1 Н, br t, J= 6,0 Гц), 8,06 (1 Н, m), 7,41 (1 Н, m), 7,19 (1 Н, dt, J= 1,5, 7,7 Гц),7,12 (1 Н, dt, J= 1,3, 7,7 Гц), 4,64 (1 Н, септет, J= 7,0 Гц), 4,08 (1 Н, br s), 3,68-3,44 (4 Н, m), 3,19 (2 Н, t, J= 6,0 Гц), 2,89 (2 Н, m), 2,20 (2 Н, br s), 2,09 (2 Н, m), 1,68-1,10 (9 Н, m), 1,47 (6 Н, d, J= 7,0 Гц). МС (ИЭР) m/z: 431 (М+Н+). Химический состав, рассчитанный для C23H34N4O4: С, 64.16; Н, 7.96; N, 13.01. Найдено: С, 64.13; Н,7.97; N, 12.99. Стадия 4. ГидрохлоридN-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида К перемешанному раствору N-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида (27,0 г, 62 ммоль) в метаноле (150 мл) при температуре окружающей среды добавляли 10% HCl-метанол (100 мл). Через 30 мин летучие вещества удаляли выпариванием. Образовавшееся аморфное вещество осаждали при помощи смеси этанол/диэтиловый эфир. Осадок перекристаллизовывали из смеси этанол/диэтиловый эфир (1:1) с образованием 26,5 г (90%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного порошка. 1 Н-ЯМР (ДМСО-d6) : 1,49 (6 Н, d, J = 6,9 Гц), 1,50-1,70 (4 Н, m), 1,76-1,91 (5 Н, m), 3,00-3,12 (3 Н, m),3,15-3,45 (3 Н, m), 3,60-3,70 (6 Н, m), 4,61-4,69 (1 Н, m), 5,46-5,49 (1 Н, m), 7,13 (1 Н, t, J = 7,8 Гц), 7,20 (1 Н, t,J = 7,8 Гц), 7,42 (1 Н, d, J = 7,9 Гц), 8,07 (1 Н, d, J = 8,0 Гц), 8,86 (1 Н, m), 9,61-9,81 (1 Н, m).MC(ИЭР) m/z: 431(M+H+). Химический состав, рассчитанный для C23H35N4O4Cl: С, 59,15; Н, 7,55; N, 2,00. Найдено: С, 58,81; Н, 7,57; N, 11,85. Альтернативный путь синтеза 4-[4-(аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро-2H-пиран-4 ола описан ниже: Стадия 1. Бензиловый эфир (1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)карбаминовой кислоты Смесь бензилового эфира (пиперидин-4-илметил)карбаминовой кислоты (7,77 г, 31,3 ммоль, Bose,D. Subhas et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 6903) и 1,6-диоксаспиро[2.5]октана (4,29 г, 37,6 ммоль, Satyamurthy, Nagichettiar et al., Phosphorus Sulfur, 1984, 19, 113) в метаноле (93 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Затем смесь нагревали с обратным холодильником в течение 8 ч. После охлаждения до комнатной температуры удаляли растворитель под вакуумом. Остаток подвергали хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя смесью метанол/дихлорметан (1:20) и получая 5,60 г (49%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. Стадия 2. 4-([4-(Аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро-2H-пиран-4-ол(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)карбаминовой кислоты (5,60 г, 15,5 ммоль, стадия 1) и палладия на активированном угле (10- 25009457 мас.%, 1,20 г) в метаноле (250 мл) гидрировали при комнатной температуре в течение 20 ч. Затем смесь фильтровали через набивку из целита и под вакуумом концентрировали фильтрат, получая 3,30 г (94%) указанного в заголовке соединения в виде слегка желтого масла. Ниже представлен еще один путь синтеза 4-[4-(аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро 2H-пиран-4-ола. Стадия 1. 1-[(4-Гидрокситетрагидро-2 Н-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4-карбоксамид Смесь йодида триметилсульфоксония (0,791 г, 3,52 ммоль) и 2 н. водного NaOH (1,76 мл, 3,52 ммоль) в ацетонитриле (1,62 мл) перемешивали при 50 С в течение 30 мин. Затем к смеси добавляли тетрагидро-4 Н-пиран-4-он (0,324 г, 3,20 ммоль) и образовавшуюся смесь перемешивали при 50 С в течение 3 ч. К реакционной смеси при комнатной температуре добавляли насыщенный водный NaCl (10 мл) и органический слой экстрагировали CH2Cl2 (20 мл), сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. После удаления растворителя к остатку добавляли МеОН (1,62 мл) и изонипекотамид (0,381 г, 2,88 ммоль) и смесь перемешивали при 75 С в течение 14 ч в атмосфере N2. Реакционную смесь концентрировали и остаток перекристаллизовывали из МеОН-ацетонитрила с образованием 0,484 г (2,00 ммоль) указанного в заголовке соединения в виде белого вещества. 1 Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6)7,19 (br s, 1 Н), 6,69 (br s, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,70-3.50 (m, 4 Н), 2,952,85 (m, 2 Н), 2,20 (s, 2 Н), 2,15-1,85 (m, 3 Н), 1,65-1,50 (m, 6 Н), 1,40-1,25 (m, 2 Н). Стадия 2. Тозилат 4-[4-(аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро-2H-пиран-4-ола К перемешанной суспензии NaBH4 (0,505 г, 13,2 г) в диметиловом эфире триэтиленгликоля (12,8 мл) по каплям при 80 С в атмосфере N2 добавляли раствор 1-[(4-гидрокситетрагидро-2 Н-пиран-4 ил)метил]пиперидин-4-карбоксамида (0,640 г, 2,64 ммоль) и АсОН (0,765 мл, 13,2 ммоль) в диметиловом эфире триэтиленгликоля (3,2 мл). Реакционную смесь гасили 2 н. водным HCl до тех пор, пока значение рН не стало 3, затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. К смеси добавляли CH2Cl2 (30 мл) и 2 н. водный NaOH до тех пор, пока значение рН водного слоя не стало 10. Органический слой три раза экстрагировали CH2Cl2 и объединенный органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. К остаточному раствору (указанного в заголовке соединения в диметиловом эфире триэтиленгликоля) при 60 С добавляли раствор моногидрата п-толуолсульфокислоты (0,408 г, 2,11 ммоль) в МеОН (1,28 мл), затем смесь охлаждали до комнатной температуры. Образовавшиеся твердые частицы собирали "отсасыванием" и промывали гексаном, получая указанное в заголовке соединение (0,340 г, 0,849 ммоль) в виде белого твердого вещества. 1 Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6)7,61 (br s, 2 Н), 7,55-7,40 (m, 2 Н), 7,15-7,05 (m, 2 Н), 4,11 (br s, 1 Н),3,70-3,45 (m, 4 Н), 2,95-2,85 (m, 2 Н), 2,68 (d, J = 7,0, 2 Н), 2,29 (s, 3 Н), 2,22 (s, 2 Н), 2,07 (t, J = 11,0, 2 Н),1,65-1,45 (m, 4 Н), 1,55-1,35 (m, 1 Н), 1,40-1,25 (m, 2 Н), 1,30-1,10 (m, 2 Н). Пример 2. Гемиэдисилат N-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида К перемешанному раствору N-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида (1,51 г, 3,51 ммоль) в этилацетате (10 мл) и метаноле (10 мл) добавляли раствор дигидрата 1,2-этандисульфоновой кислоты(397 мг, 1,75 ммоль) в метаноле (5,0 мл) и образовавшуюся суспензию перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали и первую порцию сушили под вакуумом при 100 С в течение 5 ч, получая 1,78 г сырого продукта. 1,61 г сырого продукта растворяли в метаноле (20 мл) и к раствору добавляли этилацетат (20 мл). Образовавшуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь фильтровали и порцию продукта сушили под вакуумом при 100 С в течение 4 ч, получая указанное в заголовке соединение (1,13 г, 61%) в виде бесцветных кристаллов. МС (ИЭР) m/z: 431 (М+Н)+. Т.пл.: 233 С. ИК (KBr) : 2866, 1738, 1683, 1558, 1373, 1217, 1028, 756 см-1. 1 Н ЯМР (ДМСО-d4)8,96 (0,25 Н, br s), 8,85 (1 Н, br t, J = 6,0 Гц), 8,61 (0,75H, br s), 8,06 (1H, m), 7,43- 26009457 Найдено: С, 54,50; Н, 7,24; N, 10,60; S, 6,08. Картина дифракции рентгеновских лучей на порошке: угол (2-Тета): 10,2, 11,9, 16,3, 17,3, 17,6,21,8, 24,2. Пример 3. Монооксалат 3-изопропил-N-[1-(2-морфолин-4-ил-2-оксоэтил)пиперидин-4-ил]метил 2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, указанному на стадии 3 подготовительного примера 1, с использованием 4-(хлорацетил)морфолина (В. G. Hazra; V. S. Pore; К смеси 3-изопропил-2-оксо-N-(пиперидин-4-илметил)-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1 карбоксамида (150 мг, 0,474 ммоль) и 4-(3-хлорпропаноил)морфолина (G. Mattalia; D. Serafini; U. Bucciarelli, Farmaco, Ed. Sci., 1976, 31, 457-67) (300 мг, 1,185 ммоль) в 4,7 мл N,N-диметилформамида добавляли триэтиламин (0,23 мл, 1,659 ммоль) и йодид натрия (178 мл, 1,185 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90 С в течение 6 дней. Затем реакционную смесь концентрировали упариванием. Остаток разбавляли водным NaHCO3 (10 мл), экстрагировали дихлорметаном (30 мл, 3 раза). Объединенный экстракт сушили над MgSO4 и концентрировали. Препаративная ТСХ (элюент: CH2Cl2/метанол = 10/1) привела к коричневому аморфному маслу (130 мг, 60%). Аморфное вещество (130 мг) растворяли в 3 мл метанола и обрабатывали раствором 24 мг щавелевой кислоты в 2 мл МеОН. Смесь концентрировали. Кристаллизация образовавшегося остатка из AcOEt-EtOH привела к указанному в заголовке соединению(107 мг) в виде белого аморфного вещества. МС (ИЭР) m/z: 458 (М+Н)+. ИК (KBr) v: 3443, 2941, 1732, 1697, 1686, 1647, 1638, 1558 см-1. 1 Н-ЯМР (CDCl3) (свободное основание) : 9,06-8,94 (1 Н, br), 8,24-8,19 (1H, m), 7,26-7,10 (3 Н, m),4,76-4,64 (1 Н, m), 3,75-2,80 (10 Н, m), 2,60-1,30 (13 Н, m), 1,56 (6 Н, d, J = 7,0 Гц). 1 Н-ЯМР (CDCl3) (форма соли): 9,10-9,00 (1 Н, m), 8,27-8,17 (1 Н, m), 7,33-7,12 (3 Н, m), 4,87-4,62- 27009457 Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, указанному в примере 4, с использованием 4-(4-хлор-бутирил)морфолина (Schlesinger; Prill; В. G. Hazra; J. Amer. Chem. Soc,1956, 78, 6123-6124). К перемешанной суспензии гидрида натрия (60% в минеральном масле, 441 мг, 11,0 ммоль) в ДМСО (7 мл) при комнатной температуре добавляли йодид триметилсульфоксония (2,53 г, 11,5 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К этой смеси по каплям при комнатной температуре добавляли раствор 4-[трет-бутил(дифенил)силил]оксициклогексанона (Okamura, William H. et al., J. Org. Chem., 1993, 58, 600-610, 3,53 г, 10,0 ммоль) в ДМСО (35 мл), смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь разбавляли водой (600 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (200 мл 4). Объединенный органический слой сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Остаток подвергали хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя смесью н-гексан/этилацетат (1:10), а затем очищали PTLC (препаративной ТСХ), элюируя смесью нгексан/этилацетат (1:15) и получая 459 мг (13%, транс) и 390 мг (11%, цис) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла, соответственно. Смесь трет-бутил[(3R,6R)-1-оксаспиро[2.5]окт-6-илокси]дифенилсилана (стадия 1, транс-изомер,283,0 мг, 0,772 ммоль) и 3-изопропил-2-оксо-N-(пиперидин-4-илметил)-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1 карбоксамида (подготовительный пример 1, стадия 2, 2,48 г, 0,0194 моль) в МеОН (4 мл) нагревали при 50 С и перемешивании в течение 2 дней. После охлаждения упаривали смесь для удаления растворителя,и остаток подвергали хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя смесью этилацетат/н-гексан Смесь трет-бутил-N-[1-(транс-4-[трет-бутил(дифенил)силил]окси-1-гидроксициклогексилметил)пиперидин-4-ил]метил-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида (234 мг,0,343 моль) и раствора HCl в МеОН (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем под вакуумом удаляли растворитель. Остаток подщелачивали насыщенным водным NaHCO3 (30 мл), экстрагировали CH2Cl2 (30 мл х 3 раза) и объединенный органический слой сушили над Na2SO4. Удаление растворителя привело к остатку, который подвергали хроматографии на колонке с NHсиликагелем, элюируя смесью этилацетат/н-гексан (1:1-2:1) и получая 140,1 мг (92%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного сиропа. МС (ИЭР) m/z: 445 (М+Н)+. 1 Н-ЯМР (CDCl3): 8,93 (1 Н, br t, J = 5,87 Гц), 8,32-8,20 (1 Н, m), 7,25-7,03 (3 Н, m), 4,80-4,62 (1 Н, m),3,94 (1 Н, m), 3,31 (2 Н, t, J = 6,10 Гц), 2,89 (2 Н, br d, J = 11,53 Гц), 2,36 (2 Н, s), 2,34 (2 Н, t, J = 11,86 Гц),2,00-1,85 (2 Н, m), 1,82-1,25 (18 Н, m, включая 6 Н, d, J = 7,09 Гц при 1,56 млн-1). 140,1 мг этого сиропа растворяли в растворе HCl в МеОН (4 мл), концентрировали и сушили под вакуумом при 50 С в течение 5 ч с образованием 139,2 мг указанного в заголовке соединения в виде желтого аморфного твердого вещества. МС (ИЭР) m/z: 445 (М+Н)+. 1 Н-ЯМР (ДМСО-d6): 9,35-8,75 (1 Н, m), 8,86 (1 Н, t, J = 6,59 Гц), 8,07 (1 Н, d, J = 7,74 Гц), 7,44 (1 Н,d, J = 7,58 Гц), 7,22 (1 Н, dt, J = 1,15 Гц, 7,42 Гц), 7,14 (1 Н, dt, J = 1,32 Гц, 7,74 Гц), 5,04 (1 Н, br s), 4,75-4,45(1 Н, m), 3,70 (1 Н, br s), 3,59 (2 Н, d, J = 11,70 Гц), 3,50-2,90 (8 Н, m), 1,90-1,57 (8 Н, m), 1,57-1,30 (10 Н, m,включая 6 Н, d, J = 6,92 Гц при 1,49 млн-1). ИК (KBr): 3285, 2936, 2677, 1728, 1686, 1611, 1549, 1481, 1375, 1298, 1204, 1157, 1101, 1018, 762 см-1. Химический состав, рассчитанный для C24H36N4O4HCl2H2O: С, 57,76; Н, 7,88; N, 11,23. Найдено: С, 57,54; Н, 7,90; N, 11,21. Картина дифракции рентгеновских лучей на порошке: угол (2-Тета): 8,3, 14,5, 17,7, 18,3, 19,1, 26,4,27,5. Пример 7. Гидрохлорид N-(1-[цис-1,4-дигидроксигексил)метил]пиперидин-4-илметил)-3 изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с методикой, описанной на стадии 2 примера 6, с использованием трет-бутил[(3S,6S)-1-оксаспиро[2,5]окт-6-илокси]дифенилсилана (пример 6, стадия 1, цис-изомер, 311,0 мг, 0,848 ммоль) вместо трет-бутил[(3R,6R)-1-оксаспиро[2,5]окт-6 илокси]дифенилсилана. МС (ИЭР) m/z: 683 (М+Н)+. Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с методикой, описанной на стадии 3 примера 6,с использованиемN-[1-(цис-4-[трет-бутил(дифенил)силил]окси-1-гидроксициклогексилметил)пиперидин-4-ил]метил-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол-1-карбоксамида (295,0 мг, 0,432 ммоль) вместо N-[1-(транс-4-[дифенил(триметилсилил)метокси]-1 гидроксициклогексилметил)пиперидин-4-ил]метил-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензимидазол 1-карбоксамида. МС (ИЭР) m/z: 445 (М+Н)+. 1 Н ЯМР (CDCl3) : 8,93 (1 Н, br t, J = 5,60 Гц), 8,31-8,22 (1 Н, m), 7,25-7,10 (3 Н, m), 4,80-4,62 (1 Н, m),3,63-3,49 (1 Н, m), 3,31 (2 Н, t, J = 6,10 Гц), 2,89 (2 Н, br d, J = 11,54 Гц), 2,33 (2 Н, dt, J = 1,81 Гц, 11,70 Гц),1,85-1,60 (16 Н, m, включая 6 Н, d, J = 7,09 Гц при 1,57 млн-1), 1,45-1,18 (4 Н, m). 165,7 мг этого сиропа растворяли в растворе HCl в МеОН (4 мл), концентрировали и сушили под вакуумом при 50 С в течение 5 ч с образованием 164,7 мг указанного в заголовке соединения в виде желтого аморфного твердого вещества. МС (ИЭР) m/z: 445 (М+Н)+. 1 Н ЯМР (ДМСО-d6) : 9,30-8,90 (1 Н, m), 8,86 (1 Н, t, J = 5,93 Гц), 8,07 (1 Н, d, J = 7,58 Гц), 7,44 (1 Н, d,J = 7,58 Гц), 7,22 (1 Н, dt, J = 1,48 Гц, 7,75 Гц), 7,15 (1 Н, dt, J = 1,15 Гц, 7,74 Гц), 4,75-4,58 (1 Н, m), 3,702,90 (11 Н, m), 1,90-1,67 (6 Н, m), 1,67-1,20 (12 Н, m, включая 6 Н, d, J = 6,92 Гц при 1,49 млн-1). ИК (KBr): 3294, 2936, 2673, 1728, 1686, 1611, 1545, 1479, 1375, 1298, 1203, 1158, 1134, 1101, 1051,762 см-1. Химический состав, рассчитанный для C24H36N4O4HCl5H2O: С, 54,79; Н, 8,05; N, 10,65. Найдено: С, 54,75; Н, 7,88; N, 10,56. Пример 8. Гидрохлорид 6-фтор-N-(1-[(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил]пиперидин-4 илметил)-3-изопропил-2-оксо-2,3-дигидро-1H-бензидазол-1-карбоксамида Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с методикой, описанной на стадии 3 примера 1, из 5-фтор-1-изопропил-1,3-дигидро-2H-бензимидазол-2-она (I. Tapia et al., J. Med. Chem.,1999, 42, 2880) и 4-[4-(аминометил)пиперидин-1-ил]метилтетрагидро-2H-пиран-4-ола (стадия 2 примера 1).