Тройные радиофармацевтические комплексы

1 Перекрестная ссылка на родственную заявку Настоящая заявка является частичным продолжением нашей находящейся в процессе одновременного рассмотрения заявки на патент США, рег.08/218861, которая является частичным продолжением заявки на патент США,рег.08/040336, зарегистрированной 30 марта 1993 г., описания которых включены здесь в качестве ссылок. Область техники Данное изобретение относится к новым радиофармацевтическим препаратам, которые могут использоваться в качестве визуализирующих средств при диагностике сердечнососудистых заболеваний, инфекционного заболевания и злокачественной опухоли, и к наборам, которые могут использоваться при их получении. Радиофармацевтические препараты содержат меченные технецием-99m, связанные с фосфином или арсином, гидразино- или диазиномодифицированные биологически активные молекулы, которые селективно локализуются в местах локализации заболевания и, таким образом, позволяют получить изображения локусов с использованием гамма-сцинтиграфии. Предпосылки создания изобретения В настоящее время существует потребность в новых методах неинвазивной диагностики различных заболеваний, таких как тромбоэмболическая болезнь, атеросклероз, инфекция и злокачественная опухоль. Радиофармацевтические препараты, содержащие меченные испускающими гамма-лучи радионуклидами биологически активные молекулы, могут удовлетворять этой потребности. Биологически активные молекулы служат для локализации радионуклидов в местах локализации заболевания и, таким образом, создают возможность визуализации указанных мест с помощью гаммасцинтиграфии. Молекулы могут представлять собой либо белки, антитела, фрагменты антител,пептиды или полипептиды, либо пептидомиметики. Молекулы взаимодействуют с рецептором или с сайтом связывания, экспрессированными в местах локализации заболевания, или с рецептором или с сайтом связывания на эндогенном компоненте крови, таком как тромбоциты и лейкоциты, которые накапливаются в указанных местах. Это взаимодействие дает, в результате,локализацию части инъецированного радиофармацевтического препарата, в то время как остальная часть выводится либо через почки,либо через гепатобилиарную систему. Затем получают наружное отображение локализованного радиофармацевтического препарата с помощью гамма-сцинтиграфии. Относительные скорости секвестрации, выведения и распада радионуклидов определяют легкость осуществления визуализации, часто выражаемой в виде соотношения между мишенью и фоном. Зачастую с рецепторами связываются только определенные части биологически активных молекул; 2 такие части называют распознающими последовательностями или звеньями. Многие радиофармацевтические препараты, состоящие из меченных радионуклидами белков, антител или фрагментов антител, находятся в стадии разработки, однако, на сегодняшний день только один препарат одобрен Управлением по продовольствию и лекарственным препаратам. Такой редкий случай регистрации является результатом сочетания факторов, которые затрудняют разработку таких радиофармацевтических препаратов, включая проблемы производства и контроля качества,неоптимальные скорости секвестрации и выведения и проявление антигенных или аллергических реакций на радиофармацевтические препараты. Эти проблемы появляются, главным образом, вследствие макромолекулярной природы белков, антител и фрагментов антител. Их высокая молекулярная масса делает практически нецелесообразным их прямой химический синтез, поэтому их следует синтезировать рекомбинантными методами или методами клонирования, которые, как правило, дают низкие выходы и требуют дорогостоящих процедур выделения и очистки. Их молекулярная масса может снизить скорость локализации и препятствовать их выведению с помощью механизма активного очищения через почки или печень, приводя, в результате, к длительному пребыванию в системе кровообращения, что является причиной высокого уровня фона при получении изображения. Также иммунная система организма имеет склонность эффективнее узнавать более крупные экзогенные факторы. Использование в качестве биологически активных молекул пептидов, полипептидов или пептидомиметиков с меньшей молекулярной массой устраняет многие из этих проблем. Такие молекулы можно синтезировать непосредственно, используя классическую химию растворов, или с помощью автоматического синтезатора пептидов. Они могут быть получены с высоким выходом, и для них требуются менее сложные процедуры очистки. Они имеют тенденцию быстрее выводиться из системы кровообращения каскадом реакций активного очищения, что дает в результате более низкий фон в изображениях. Они также обычно не являются иммуногенными. Недавно Управлением по продовольствию и лекарственным препаратам одобрен первый меченный радионуклидом полипептидный радиофармацевтический препарат. Существуют два основных способа мечения биологически активных молекул радионуклидами в целях применения в качестве радиофармацевтических препаратов, называемые прямым и косвенным мечением. Прямое мечение включает присоединение радионуклида к атомам биологически активной молекулы; в то время как косвенный способ предполагает присоединение радионуклида через хелатор. Хела 3 тор может присоединяться к биологически активной молекуле или до взаимодействия с радионуклидом, или к биологически активной молекуле может присоединяться меченный радионуклидом хелатор. Эти способы мечения описываются в нескольких опубликованных недавно обзорах, включенных в настоящее описание в качестве ссылок. См. S. Jurisson et al.,Chem. Rev., 1993, 93, 1137; A. Verbruggen, Eur. J.Nuc. Med., 1990, 20, 5. Недавно описано применение гидразинов и гидразидов в качестве хелаторов для модификации белков для мечения радионуклидами; см.Schwartz et al., патент США 5206370. Для мечения технецием-99m модифицированный гидразином белок подвергают взаимодействию с технецием в восстановленной форме, образовавшимся при взаимодействии пертехнетата с восстановителем в присутствии хелатирующего дикислородного лиганда. Технеций становится связанным с белком через, как полагают, гидразидо- или диазенидомостики с координационной сферой, завершенной вспомогательными дикислородными лигандами. Примерами вспомогательных дикислородных лигандов являются глюкогептонат,глюконат,2-гидроксиизобутират и лактат. Недавно появились сообщения, что для мечения гидразиномодифицированных белков технецием-99m особенно удобными являются некоторые дикислородные лиганды. В заявке на европейский патент 93302712.0 Bridger и др. описывают ряд аминокарбоксилатов с функциональными группами, применение которых, как сообщается, улучшает процесс мечения модифицированных гидразином макромолекул, таких как моноклональные антитела. Улучшения проявляются в сокращении времени реакции и в повышении специфической активности. Примеры таких улучшенных дикислородных лигандов являются гидроксиалкилзамещенные производные глицина, такие как трицин. В одновременно рассматриваемой заявке на патент США, рег.08/218861 (эквивалентWO 94/22494), поданной 28 марта 1993 г., описывается синтез новых меченных радиоизотопами антагонистов рецептора тромбоцитовIIb/IIIa в качестве средств для получения изображений в случае тромбоэмболических нарушений. Эти реагенты содержат меченные радионуклеидами хелаторные модифицированные циклические соединения. Предпочтительным хелатором для модификации циклических соединений является гидразино- или диазенидогруппа. Настоящее изобретение относится к новым биологически активным молекулам, модифицированным гидразино- или диазиногруппой и меченным технецием-99m, которые образуются при минимальном числе изомеров, соотношение которых не изменяется со временем. Такие со 000636 4 единения являются более простыми для разработки, требующими менее сложных процессов контроля производства и мечения. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к радиофармацевтическим препаратам, которые могут использоваться в качестве средств визуализации для диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, таких как тромбоэмболическая болезнь или атеросклероз, инфекционного заболевания и рака. Радиофармацевтические препараты содержат лигированные фосфином или арсином меченные технецием-99m модифицированные гидразином или диазенидом биологически активные молекулы, которые селективно локализуются в местах локализации заболевания и, таким образом, позволяют получить изображения локуса с использованием гаммасцинтиграфии. Настоящее изобретение также относится к способам применения указанных радиофармацевтических препаратов в качестве средств визуализации для диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, таких как тромбоэмболическая болезнь или атеросклероз, инфекционного заболевания и рака. Оно также относится к наборам для получения указанных радиофармацевтических препаратов. Краткое описание чертежей Фиг. 1 - ВЭЖХ-хроматограммы, с использованием обоих способов 1 и 2, конечного продукта, полученного в примере 1 настоящего изобретения; фиг. 2 - результаты, полученные на модели глубокого тромбофлебита у собак, для радиофармацевтических препаратов примеров 1 и 2 настоящего изобретения и Тс-альбумина (негативный контроль); соотношения тромб/кровь и тромб/мышца; фиг. 3 - кривые клиренса крови в случае модели артериовенозного анастамоза для радиофармацевтических препаратов примеров 1 и 2 настоящего изобретения и Тс-альбумина (негативный контроль). Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к новым радиофармацевтическим препаратам для диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, таких как тромбоэмболическая болезнь и атеросклероз, инфекционного заболевания или рака, к способам применения указанных радиофармацевтических препаратов при диагностике заболеваний и наборам, которые могут использоваться для получения указанных радиофармацевтических препаратов.[1] Одним воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат, содержащий радионуклид переходного металла, хелатор для переходного металла, биологически активную группу, связанную с указанным хелатором, первый вспомогательный лиганд, второй вспомогательный лиганд, способный стабилизировать радиофармацевтиче 5 ский препарат, содержащий, необязательно, связывающую группу между указанным хелатором и указанной биологически активной группой.[2] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [1], содержащий связывающую группу между указанным хелатором и указанной биологически активной группой.[3] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [2] формулы(1),где Q представляет собой биологически активную молекулу;Ln представляет связывающую группу формулы М 1- [Y1(CR55R56)f(Z1)fY2]f'-M2,1 где М представляет собойZ1, независимо в каждом случае, выбраны из: (С 6-С 14)-карбоциклической кольцевой системы, насыщенной, частично насыщенной или ароматической, замещенной 0-4 R57; и гетероциклической кольцевой системы, необязательно замещенной 0-4 R57;R55 и R56 выбраны, независимо в каждом случае, из: водорода; C1-С 10-алкила, замещенного 0-5 R57; алкарила, в котором арил замещен 05 R57;R57 выбран, независимо в каждом случае,из группы, включающей: водород, ОН, NHR58,C(=O)R58, OC(=O)R58, OC(=O)OR58, C(=O)OR58,C(=O)NR58-, CN, SR58, SOR58, SO2R58,NHC(=O)R58, NHC(=O)NHR58, NHC(=S)NHR58; или, альтернативно, когда он присоединен к дополнительной молекуле Q, R57 выбран, независимо в каждом случае, из группы: О, NR58,С=O, С(=O)O, ОС(=O)O, C(=O)N-, C=NR58, S,SO, SO2, SО 3, NHC(=O), (NН)2 С(=O), (NH)2C=S; иMt представляет собой радиоизотоп переходного металла, выбранный из группы: 99mTc,186Ch' является хелатором для радиоизотопа металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Mt, и выбран, независимо в каждом случае, из группы:AL1 является первым вспомогательным лигандом, представляющим собой функционализированный аминокарбоксилат; АL2 является вспомогательным лигандом,способным стабилизировать радиофармацевтический препарат, выбранный из группы: А 9 и А 10-W-А 11,А 9 выбран, независимо в каждом случае, из группы: PR61R62R63 и AsR61R62R63; А 10 и А 11 выбраны, независимо в каждом случае, из группы: PR61R62 и AsR61R62;R71 и R71a выбраны, в каждом случае независимо, из группы: водород и C1-C6-алкил; и и их фармацевтически приемлемые соли.[4] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], гдеQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa, лиганды рецептораMt представляет собой 99mТc; Сh' является хелатором радиоизотопа металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Mt, и выбран, независимо в каждом случае, из группы:[5] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [4], гдеQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa и хемотактические пептиды;Ch' является хелатором для радиоизотопа металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Мt, и выбран, независимо в каждом случае, из группы:R52 представляет собой связь с Ln; АL1 представляет собой трицин; АL2 представляет собой PR61R62R63,где[6] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где[7] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где[8] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где[9] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], гдеR и R63, каждый, представляют собой п-(2 фенилэтил)фенил, где фенилэтил несет группу[10] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где и присоединен к Ln у атома углерода, отмеченного ; Мt представляет собой 99mТс; АL1 представляет собой трицин; АL2 представляет собой PR61R62R63,где R61, R62 и R63, каждый, представляют собой п-(2-фенилпропил)фенил, где фенилпропил несет группу SO3 Н или SO3- в пара-положении; и х, у и z равны 1.[11] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где[12] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], где[13] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], гдеAL2 представляет собой PR61R62R63,где R61, R62 и R63, каждый, представляет собой СН 2 СН 2 СООН; и х, у и z равны 1.[14] Другим воплощением настоящего изобретения является радиофармацевтический препарат по воплощению [3], гдеMt представляет собой 99mТc; АL1 представляет собой койевую кислоту; АL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,62[15] Другим воплощением настоящего изобретения представляет способ радиовизуализации млекопитающего, включающий (I) введение указанному млекопитающему эффективного количества радиофармацевтического препарата по любому из воплощений [1]-[14], и (II) сканирование млекопитающего с использованием радиовизуализирующего устройства.[16] Другим воплощением настоящего изобретения представляет способ визуализации мест отложения тромбоцитов у млекопитающего путем радиовизуализации, включающий (I) введение указанному млекопитающему эффективного количества радиофармацевтического препарата по любому из воплощений [6]-[14], и[17] Другим воплощением настоящего изобретения является способ определения отложения тромбоцитов у млекопитающего,включающий введение указанному млекопи 000636 14 тающему радиофармацевтической композиции по любому из воплощений [6]-[14], и визуализация указанного млекопитающего.[18] Другим воплощением настоящего изобретения является способ диагностики заболевания, связанного с отложением тромбоцитов у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему радиофармацевтической композиции по любому из воплощений [6][14], и визуализация указанного млекопитающего.[19] Другим воплощением настоящего изобретения является набор для получения радиофармацевтического препарата, включающий а) определенное количество стерильного фармацевтически приемлемого реагента формулы(Q)d'Ln-Ch; б) определенное количество стерильного фармацевтически приемлемого первого вспомогательного лиганда АL1, представляющего собой функционализированный аминокарбоксилат; и в) определенное количество стерильного фармацевтически приемлемого второго вспомогательного лиганда АL2, выбранного из группы: А 9 и A10-W-A11; где Q представляет собой биологически активную молекулу;Ln представляет собой связывающую группу формулы М 1-[Y1(CR55R56)f(Z1)fY2]f'-M2,где М 1 представляет собойZ1, независимо в каждом случае, выбраны из (C6-C14)-карбоциклической кольцевой системы, насыщенной, частично насыщенной или ароматической, замещенной 0-4 R57; и гетероциклической кольцевой системы, необязательно замещенной 0-4 R57;R55 и R56 выбраны, независимо в каждом случае, из: водорода; C1-С 10-алкила, замещенного 0-5 R57; алкарила, в котором арил замещен 05 R57; 15 или, альтернативно, когда он присоединен к дополнительной молекуле Q, R57 выбран, независимо в каждом случае, из группы: O, NR58,С=O, С(=O)O, ОС(=O)O, C(=O)N-, C=NR58, S,SO, SO2, SО 3, NHC(=O), (NH)2C(=O), (NH)2C=S; иR58 выбран, независимо в каждом случае,из группы: водород; C1-C6-алкил; бензил и фенил; Сh является хелатором для радиоизотопа металла, выбранным, независимо в каждом случае, из группы: R40R41N-N=C(C1-С 3)-алкил)2, и[20] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощениюQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa, лиганды рецептора[21] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощениюQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa и хемотактические пептиды;[22] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощению[23] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощению[24] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощению[25] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощениюAL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R62 и R63, каждый, представляет собой п-(2 фенилэтил)фенил, где фенилэтил несет группу[26] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощениюR и R63, каждый, представляет собой п-(2 фенилпропил)фенил, где фенилпропил несет группу SO3 Н или SO3- в пара-положении.[27] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощению[28] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощению[29] Другим воплощением настоящего изобретения является набор по воплощениюAL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R62 и R63 представляют собой СН 2 СН 2 СООН.[30] Другим воплощением настоящего изобретения представляет набор по воплощению [20], гдеAL1 представляет собой койевую кислоту;[31] Другим воплощением настоящего изобретения являются наборы по любому из воплощений [19]-[30], где также присутствует восстановитель.[32] Предпочтительным воплощением настоящего изобретения являются наборы воплощения [31], где восстановитель представляет собой хлорид олова (2). Когда любая переменная в любом составе или в любой формуле встречается более одного раза, ее определение в каждом случае не зависит от ее определений в каждом другом случае. Так,например, если указано, что группа замещена 02 R52, тогда указанная группа может быть необязательно замещена максимум двумя R52, и R52 в каждом случае выбран независимо из указанных возможных значений R52. Также, например, для группы -N(R53)2, каждый из двух заместителейR53 у N выбран из указанных возможных значений R53. Сочетания заместителей и/или переменных допускаются только в том случае, если такие сочетания дают, в результате, устойчивые соединения. Под "устойчивым соединением" или "устойчивой структурой" здесь подразумевается соединение, которое достаточно устойчиво,чтобы сохраниться при выделении из реакционной смеси до используемой степени чистоты и введении в состав эффективного диагностического средства. Термин "способный стабилизировать", использованный здесь при описании второго вспомогательного лиганда AL2, означает, что лиганд способен к образованию координационной связи с радионуклидом переходного металла в присутствии первого вспомогательного лиганда и хелатора для переходного металла в специфических при этом условиях, результатом чего являются радиофармацевтический препарат формулы 1, имеющий минимальное число 21 изомерных форм, соотношение которых существенно не изменяется со временем, и которое при разведении остается, по существу, неизменным. Использованный здесь термин "замещенный" означает, что один или несколько атомов водорода на обозначенном атоме или группе заменены выбранными из указанной группы,при условии, что нормальная валентность обозначенных атомов или групп не превышена, и что в результате замещения образуется устойчивое соединение. Когда заместителем является кетогруппа (т.е., =O), тогда замещаются 2 атома водорода на этом атоме. Термин "связь", который используется здесь, означает либо простую, либо двойную связь. Используемый здесь термин "соль" применяется в соответствии с определением, данным в CRC Handbook of Chemistry and Physics, 65thEdition, CRC Press, Boca Raton, Fla, 1984, для любого вещества, которое дает ионы иные, чем водородные или гидроксильные ионы. Использованный здесь термин "алкил" распространяется как на разветвленные, так и на линейные насыщенные алифатические углеводородные группы с определенным числом атомов углерода; "циклоалкил" предназначен для обозначения насыщенных кольцевых групп,включая моно-, би- или полициклические ядерные системы, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил,циклооктил и адамантил; и "бициклоалкил" обозначает насыщенные бициклические кольцевые группы,такие как[3,3,0]бициклооктан,[4,3,0]бициклононан, [4,4,0]бициклодекан (декалин), [2,2,2]бициклооктан, и т.п. Использованный здесь термин "арил" или"ароматический остаток" предназначен для обозначения фенила или нафтила, которые, если они замещены, могут быть замещены в любом положении. Использованный здесь термин "гетероцикл" или "гетероциклическая ядерная система" предназначен для обозначения устойчивого 5-7 членного моноциклического или бициклического или 7-10-членного бициклического гетероциклического кольца, которое может быть насыщенным, частично насыщенным или ароматическим, и которое состоит из атомов углерода и 1-4 гетероатомов, выбранных независимо из группы, включающей N, О и S, и где гетероатомы азота и серы могут быть, необязательно,окислены, а атом азота, необязательно, может быть кватернизирован, и, в том числе, любой бициклической группы, в которой любое из вышеуказанных гетероциклических колец конденсировано с бензольным кольцом. Гетероциклическое кольцо может присоединяться к его боковой группе по любому гетероатому или атому углерода, если это приводит к образованию устойчивой структуры. Описанные здесь 22 гетероциклические кольца могут быть замещены по атому углерода или атому азота, если получающееся в результате соединение является устойчивым. Примерами таких гетероциклов являются, но не ограничиваются перечисленным, бензопиранил, тиадиазин, тетразолил, бензофуранил, бензотиофенил, индолен, хинолин,изохинолил или бензимидазолил, пиперидинил,4-пиперидон, 2-пирролидон, тетрагидрофуран,тетрагидрохинолин,тетрагидроизохинолин,декагидрохинолин, октагидроизохинолин, азоцин, триазин (в том числе, 1,2,3-, 1,2,4- и 1,3,5 триазин), 6H-1,2,5-тиадиазин, 2 Н, 6H-1,5,2 дитиазин, тиофен, тетрагидротиофен, тиантрен,фуран, пиран, изобензофуран, хромен, ксантен,феноксатиин, 2H-пиррол, пиррол, имидазол,пиразол, тиазол, изотиазол, оксазол (включая 1,2,4- и 1,3,4-оксазол), изоксазол, триазол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, 3H-индол, индол, 1H-индазол,пурин, 4H-хинолизин, изохинолин, хинолин,фталазин, нафтиридин, хиноксалин, хиназолин,циннолин, птеридин, 4 аH-карбазол, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, перимидин,фенантролин, феназин, фенарсазин, фенотиазин,фуразан, феноксазин, изохроман, хроман, пирролидин, пирролин, имидазолидин, имидазолин,пиразолидин, пиразолин, пиперазин, индолин,изоиндолин, хинуклидин или морфолин. Сюда также относятся соединения с конденсированными ядрами и спиросоединения, содержащие,например, вышеперечисленные гетероциклы. Использованный здесь термин "алкарил" означает арильную группу, несущую алкильную группу с 1-10 атомами углерода; термин "аралкил" относится к алкильной группе с 1-10 атомами углерода, несущей арильную группу; термин "арилалкарил" обозначает арильную группу, несущую алкильную группу с 1-10 атомами углерода, несущую арильную группу; и термин"гетероциклоалкил" относится к алкильной группе с 1-10 атомами углерода, несущей гетероцикл. Биологически активная молекула Q может представлять собой белок, антитело, фрагмент антитела, пептид или полипептид, или пептидомиметик, содержащий последовательность или элемент узнавания для рецептора или сайта связывания, выраженных в месте локализации заболевания, или для рецептора или сайта связывания, выраженных на тромбоцитах или лейкоцитах. Точный химический состав Q выбран,основываясь на статусе заболевания, которое диагностируют, механизме локализации, который используют, и обеспечении оптимального сочетания скоростей локализации, выведения и распада радионуклидов. Для целей настоящего изобретения термин"тромбоэмболическая болезнь" принят для обозначения как венозных и артериальных поражений, так и для эмболии легких, являющихся результатом образования сгустков крови. 23 Для диагностики тромбоэмболических поражений или атеросклероза Q выбирают из группы, включающей циклические соединенияантагонисты рецептора IIb/IIIa, описанные в находящейся в процессе одновременного рассмотрения заявке на патент США, рег.08/218861 (эквивалент WO 94/22494); RGDсодержащие пептиды, описанные в патентах США 4578079, 4792525, заявках РСТ US 88/04403, РСТ US 89/01742, РСТ US 90/03788,РСТ US 91/02356, и в Ojima et al., 204th Meetingof the Amer. Chem. Soc., 1992, реферат 44; пептиды, которые являются антагонистами фибриногенного рецептора, описанные в заявках на европейский патент 90202015.5, 90202030.4,9020232.2, 90202032.0, 90311148.2, 90311151.6,90311537.6, специфические связывающие пептиды и полипептиды, описанные в PCT WO 93/23085 как лиганды рецептора IIb/IIIa, лиганды для сайта полимеризации фибрина, производные ламинина, лиганды для фибриногена или тромбиновые лиганды (исключая группы,связывающие технеций); олигопептиды, которые соответствуют белку IIIa, описанные в РСТWO 90/00178; пептиды на основе гирудина,описанные в РСТ WO 90/03391; лиганды рецептора IIb/IIIa, описанные в РСТ WO 90/15818; пептиды, связывающие тромбы, тромбоциты или атеросклеротические бляшки, описанные в РСТ WO 92/13572 (за исключением группы,связывающей технеций) или в GB 9313965.7; фибринсвязывающие пептиды, описанные в патентах США 4427646 и 5270030; пептиды на основе гирудина, описанные в патенте США 5279812; или фибринсвязывающие белки, описанные в патенте США 5217705; производные гуанина, которые связываются с рецепторомIIb/IIIa, описанные в патенте США 5086069; или производные тирозина, описанные в заявке на европейский патент 0478328 A1 и в Hartman etal., J. Med. Chem., 1992, 35, 4640; или окисленный липопротеин низкой плотности (LDL). В случае диагностики инфекции, воспаления или отторжения трансплантата Q выбран из группы, включающей лейкоцитсвязывающие пептиды, описанные в РСТ WO 93/17719 (за исключением группы, связывающей технеций),РСТ WO 92/13572 (за исключением группы,связывающей технеций) или в заявке на патент США, рег.08-140000; хемотактические пептиды, описанные в заявке на европейский патент 90108734.6, или в А. Fischman et al., Semin.Nuc. Med., 1994, 24, 154; или лейкостимуляторные средства, описанные в патенте США 5277892. В случае диагностики рака Q выбран из группы аналогов соматостатина, описанных в заявке на патент Великобритании 8927255.3 или в РСТ WO 94/00489, селектинсвязывающих пептидов, описанных в РСТ WO 94/05269, биологически функциональных доменов, описанных в РСТ WO 93/12819, тромбоцитного факто 000636 24 ра 4 или факторов роста (PDGF, EGF, FGF,ФНО, MCSF или ИЛ 1-8).Q также может представлять белки, антитела, фрагменты антител, пептиды, полипептиды или пептидомиметики, которые связываются с рецепторами или сайтами связывания на других тканях, органах, ферментах или жидкостях. Примерами являются -амилоидные белки, которые, как показано, накапливаются у пациентов с болезнью Альцгеймера, пептиды предсердного природного фактора, которые связываются с рецепторами сердечной мышцы и почечными рецепторами, антимиозинные антитела, которые связываются с участками инфарктных тканей, или производные нитроимидазола,которые локализуются в участках с кислородной недостаточностью in vivo. Вспомогательные дикислородные лиганды включают лиганды, которые образуют координационную связь с ионом металла через, по меньшей мере, два кислородных донорных атома. Примерами являются, но не ограничиваются перечисленным, глюкогептонат, глюконат, 2 гидроксиизобутират, лактат, тартрат, маннит,глюкарат, мальтол, койевая кислота, 2,2 бис(гидроксиметил)пропионовая кислота, 4,5 дигидрокси-1,3-бензолдисульфонат, или замещенные или незамещенные 1,2- или 3,4 гидроксипиридиноны. (Названия лигандов в этих примерах относятся либо к протонированным, либо к непротонированным формам лигандов.) Функционализированные аминокарбоксилаты включают лиганды, в которых сочетаются донорные атомы азота и кислорода. Примерами являются, но не ограничиваются перечисленным, иминодиуксусная кислота, 2,3-диаминопропионовая кислота, нитрилотриуксусная кислота, N,N'-этилендиаминдиуксусная кислота,N,N,N'-этилендиаминтриуксусная кислота, гидроксиэтилэтилендиаминтриуксусная кислота,N,N'-этилендиамин-бис-гидроксифенилглицин,или лиганды, описанные в заявке на европейский патент 93302712.0. (Названия лигандов в этих примерах относятся либо к протонированным, либо к непротонированным формам лигандов). Радиофармацевтические препараты настоящего изобретения для диагностики тромбоэмболической болезни можно легко получить путем смешивания соли радионуклида, реагента формулы 2, вспомогательного лиганда АL1,вспомогательного лиганда АL2 и, необязательно,восстановителя в водном растворе при температуре от комнатной до 100 С. Реагент формулы 2(2) и его фармацевтически приемлемые соли, где Q,d', Ln имеют установленные выше значения, а Сh представляет хелатор для радионуклида металла, выбранный, в каждом случае независимо, из группы: R40R41N-N=C(C1-С 3-алкил)2 и R40NNH2-, 25 где R40 и R41 таковы, как описано выше, и их фармацевтически приемлемые соли. Альтернативно, радиофармацевтические препараты по настоящему изобретению могут быть получены путем смешивания сначала соли радионуклида, вспомогательного лиганда АL1 и восстановителя в водном растворе при температуре от комнатной до 100 С с образованием промежуточного радионуклидного комплекса с вспомогательным лигандом АL1, добавления затем реагента формулы 2 и вспомогательного лиганда AL2 и их последующего взаимодействия при температуре от комнатной до 100 С. Альтернативно, радиофармацевтические препараты по настоящему изобретению могут быть получены путем смешивания сначала соли радионуклида, вспомогательного лиганда АL1,реагента формулы 2 и восстановителя в водном растворе при температуре от комнатной до 100 С с образованием промежуточного радионуклидного комплекса, как описано в одновременно рассматриваемой заявке на патент США,рег.08/218861 (эквивалент WO 94/22494),добавления затем вспомогательного лиганда АL2 и их последующего взаимодействия при температуре от комнатной до 100 С. Общее время получения будет меняться в зависимости от особенностей радионуклида,особенностей и количества реагентов и способа,применямого для получения. Получение может завершиться за 1 минуту с выходом радиофармацевтического препарата 80%, или может потребоваться большее время. Если требуется или желательна более высокая чистота радиофармацевтических препаратов, продукты реакции можно очистить многими способами, хорошо известными специалистам в этой области техники, такими как жидкостная хроматография, твердофазная экстракция, экстракция растворителем, диализ или ультрафильтрация. Радионуклиды для настоящего изобретения выбраны из группы 99mТc, 186Re или 188Re. Для целей диагностики предпочтительным изотопом является 99mТc. Его период полураспада в 6 ч и энергия гамма-эмиссии в 140 кэВ являются почти идеальными для гамма-сцинтиграфии,использующей оборудование и методики, хорошо известные специалистам в этой области техники. Изотопы рения также имеют энергию эмиссию гамма-лучей, которая совместима с гамма-сцинтиграфией, однако, они также испускают бета-частицы высокой энергии, которые более опасны для живых тканей. Эту эмиссию бета-частиц можно использовать для терапевтических целей, например, для противораковой радиотерапии. Соль 99mТc, предпочтительно, находится в форме пертехнетата и фармацевтически приемлемого катиона. Форма пертехнетата представляет собой, предпочтительно, пертехнетат натрия, какой получают из промышленных генераторов Тс-99m. Количество применяемого пер 000636 26 технетата для получения радиофармацевтических препаратов настоящего изобретения может находиться в интервале от 0,1 мКи до 1 Ки или предпочтительнее от 1 до 200 мКи. Реагенты формулы 2 могут быть синтезированы так, как описано в одновременно рассматриваемой заявке на патент США, рег.08/218861 (эквивалент WO 94/22494). Количество реагентов, применяемых для получения радиофармацевтических препаратов настоящего изобретения, может находиться в интервале от 0,1 мкг до 10 мг или предпочтительнее - от 0,5 до 100 мкг. Используемое количество будет определяться количеством других реагентов и особенностями радиофармацевтических препаратов формулы 1, которые получают. Вспомогательные лиганды АL1, применяемые для синтеза радиофармацевтических препаратов по настоящему изобретению, либо можно синтезировать, либо получить из коммерческих источников, и к ним относятся галогениды, дикислородные лиганды и функционализированные аминокарбоксилаты. Дикислородные лиганды являются лигандами, которые образуют координационную связь с радионуклидом, по меньшей мере, через два донорных атома кислорода. Примерами являются, но не ограничиваются перечисленным, глюкогептонат, глюконат, 2-гидроксиизобутират, лактат, тартрат,маннит, глюкарат, мальтол, койевая кислота,2,2-бис(гидроксиметил)пропионовая кислота,4,5-дигидрокси-1,3-бензолдисульфонат,или замещенные или незамещенные 1,2- или 3,4 гидроксипиридиноны, или их фармацевтически приемлемые соли. Функционализированные аминокарбоксилаты включают лиганды, которые образуют координационную связь с радионуклидом через сочетание донорных атомов азота и кислорода. Примерами являются, но не ограничиваются перечисленным, иминодиуксусная кислота, 2,3 диаминопропионовая кислота, нитрилотриуксусная кислота, N,N'-этилендиаминдиуксусная кислота, N,N,N'-этилендиаминтриуксусная кислота, гидроксиэтилэтилендиаминтриуксусная кислота,N,N'-этилендиамин-бис-гидроксифенилглицин или лиганды, описанные в заявке на европейский патент 93302712.0, или их фармацевтически приемлемые соли. Галогениды могут представлять собой фториды, хлориды, бромиды или йодиды. Выбор вспомогательного лиганда АL1 определяется несколькими факторами, в том числе, химическими и физическими свойствами вспомогательного лиганда, скоростью образования, выходом и числом изомерных форм получающихся в результате радиофармацевтических препаратов, и совместимостью лиганда с составом лиофилизованного набора. Заряд и липофильность вспомогательного лиганда будут воздействовать на заряд и липофильность радиофармацевтических препаратов. Например, 27 применение 4,5-дигидрокси-1,3-бензолдисульфоната дает, в результате, радиофармацевтические препараты с двумя дополнительными анионными группами, поскольку сульфонатные группы в физиологических условиях будут анионными. Использование N-алкилзамещенных 3,4-гидроксипиридинонов приводит к радиофармацевтическим препаратам с различной степенью липофильности, зависящей от размера алкильных заместителей. Ряд функционализированных аминокарбоксилатов, которые улучшают скорость образования меченных технецием модифицированных гидразином белков, описан Briger et al. Авторы настоящего изобретения установили, что некоторые из этих аминокарбоксилатов улучшают выход и дают минимальное количество изомерных форм радиофармацевтических препаратов настоящего изобретения. Предпочтительными вспомогательными лигандами АL1 являются дикислородные лиганды, пироны или пиридиноны, и функционализированные аминокарбоксилаты, которые являются производными глицина; наиболее предпочтительным является трицин (трис(гидроксиметил)-метилглицин). Количество используемого вспомогательного лиганда АL1 может составлять от 0,1 мг до 1 г или предпочтительнее от 1 до 100 мг. Точное количество в случае конкретного радиофармацевтического препарата является функцией применяемого метода и количества и особенностей других реагентов. Слишком большое количество АL1 приведет к образованию побочных продуктов без биологически активной молекулы, содержащих меченный технецием АL1, или побочных продуктов, содержащих меченные технецием биологически активные молекулы с вспомогательным лигандом АL1, но без вспомогательного лиганда АL2. Слишком маленькое количество АL1 приведет к образованию других побочных продуктов, таких как восстановленный гидролизованный технеций или коллоид технеция. Предпочтительными вспомогательными лигандами АL2 являются тризамещенные фосфины или тризамещенные арсины. Заместителями могут быть алкилы, арилы, алкоксигруппы, гетероциклы, аралкилы, алкарилы и арилалкарилы, и могут или не могут нести функциональные группы, содержащие гетероатомы, такие как атомы кислорода, азота, фосфора или серы. Примерами таких функциональных групп являются, но не ограничиваются перечисленным, гидроксил, карбоксил, карбоксамид, простая эфирная группа, кетон, амино, аммоний,сульфонатная группа, сульфонамидная, фосфонатная и фосфонамидная группа. Эти фосфиновые или арсиновые лиганды можно получить либо из коммерческих источников, либо синтезировать различными способами, известными специалистам в этой области техники. Ряд методов можно найти в книге Kosolapoff andIntersience: New York, 1972; Vol. 1. Выбор вспомогательного лиганда AL2 определяется рядом факторов, включая химические и физические свойства вспомогательного лиганда, скорость образования, выход и число изомерных форм получающихся в результате радиофармацевтических препаратов и пригодностью лиганда для состава лиофилизованного набора. Предпочтительными вспомогательными лигандами для настоящего изобретения являются лиганды, которые несут, по меньшей мере,одну функциональную группу. Присутствие функциональной группы влияет на химические и физические свойства вспомогательных лигандов, такие как основность, заряд, лиофильность,размер, устойчивость к окислению, растворимость в воде и физическое состояние при комнатной температуре. Предпочтительные вспомогательные лиганды имеют растворимость в воде, по меньшей мере, 0,001 мг/мл. Такая растворимость позволяет применять лиганды для синтеза радиофармацевтических препаратов настоящего изобретения без добавления солюбилизатора или сорастворителя. Более предпочтительными вспомогательными лигандами АL2 являются тризамещенные фосфины и тризамещенные арсины, которые содержат, по меньшей мере, одну функциональную группу, содержащую гетероатомы кислорода, серы или азота. Такие лиганды можно либо закупить, либо синтезировать. Источниками сведений о синтезе определенных более предпочтительных лигандов могут быть упомянутые ниже ссылки. Натриевую соль трис(3 сульфонатофенил)фосфина (TPPTS) синтезируют так, как описано в Bartik et al., Inorg. Chem.,1992, 31, 2667. Натриевую соль бис(3 сульфонатофенил)фенилфосфина (TPPDS) и натриевую соль(TPPPTS) получают как описано в Bartik et al.,Organometallics, 1993, 12, 164. Натриевую соль 1,2-бис[бис(3-сульфонатофенил)фосфино]этана Синтез других более предпочтительных вспомогательных лигандов АL2 описан Kuntz, E. В патенте Великобритании 1540242 и в работахSinou, D., et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun.,1986, 202; Ahrland, S., et al., J. Chem. Soc., 1950,264, 276. Более предпочтительные вспомогательные лиганды АL2 имеют, по меньшей мере, одну функциональную группу, содержащую гетероатомы, которые не связываются с технецием при конкуренции с донорными атомами вспомогательного лиганда АL1 или гидразино- или диазино-группы реагентов формулы 2. Лиганды присоединяются только через доноры фосфора или мышьяка. Это обстоятельство гарантирует, что образующиеся в результате радиофармацевтические препараты формулы 1 образуются в виде смеси минимального числа изомерных форм. Лиганды также являются гидрофильными, что доказывается их растворимостью в воде не менее 0,01 мг/мл. Это дает возможность использовать их достаточную концентрацию для синтеза радиофармацевтических препаратов с высоким выходом. Для применения в настоящем изобретении верхнего предела растворимости не существует. Следовательно, гидрофильность более предпочтительных вспомогательных лигандов АL2 может перекрывать широкую область. Заряд и гидрофильность вспомогательного лиганда будут влиять на заряд и гидрофильность радиофармацевтических препаратов. Как можно видеть из таблицы, гидрофильность ряда радиофармацевтических препаратов формулы 1,которые отличаются только по вспомогательному лиганду АL2, систематически изменяется, что 30 определяется по времени удерживания при ВЭЖХ с обращенной фазой. Количество вспомогательных лигандов АL2 может находиться в интервале от 0,001 мг до 1 г или предпочтительнее от 0,01 до 10 мг. Точное количество в случае конкретного радиофармацевтического препарата является функцией используемого способа и количества и особенностей других реагентов. Слишком большое количество АL2 приведет к образованию побочных продуктов без биологически активной молекулы, содержащих меченный технецием АL2, или побочных продуктов, содержащих меченные технецием биологически активные молекулы с вспомогательным лигандом АL2, но без вспомогательного лиганда АL1. Для синтеза радиофармацевтических препаратов формулы 1 можно использовать, необязательно, восстановитель. Подходящими восстановителями являются соли олова (2), дитионитовые или бисульфитные соли, соли борогидрида и формамидинсульфиновая кислота, при этом соли имеют любую фармацевтически приемлемую форму. Предпочтительным восстановителем является соль олова (2). Применение восстановителя необязательно, поскольку вспомогательный лиганд АL2 может также служить для восстановления пертехнетата Тс-99m. Количество используемого восстановителя может находиться в интервале от 0,001 до 10 мг или предпочтительнее от 0,005 до 1 мг. Наборы по настоящему изобретению включают стерильную, апирогенную смесь реагента формулы 2, вспомогательного лиганда АL1, вспомогательного лиганда АL2 и, необязательно, восстановителя. Предпочтительно такие наборы состоят из лиофилизованной смеси предварительно определенного количества реагента формулы 2, предварительно установленного количества вспомогательного лиганда АL1,предварительно установленного количества вспомогательного лиганда АL2 и, необязательно,предварительно установленного количества восстановителя. Наборы также могут включать,необязательно, наполнитель или лиофилизующую добавку, или буфер. Перечень приемлемых наполнителей или лиофилизующих добавок и перечень приемлемых буферов можно найти в фармакопее США. Конкретное строение радиофармацевтического препарата по настоящему изобретению будет зависеть от особенностей биологически активной молекулы Q, числа d', особенностей вспомогательного лиганда АL1, особенностей вспомогательного лиганда АL2 и особенностей радионуклида Мt. Особенности Q, Ln и Сh' и число d' определяются выбором реагента формулы 2. В случае данного реагента формулы 2 количество реагента, количество и особенности вспомогательных лигандов АL1 и АL2, особенности радионуклида Mt и применяемые условия 31 синтеза будут определять строение радиофармацевтического препарата формулы 1. Радиофармацевтические препараты, синтезированные с применением концентраций реагентов формулы 2 100 мкг/мл будут содержать одну гидразидо- или диазенидогруппу Сh'; величина х будет составлять 1. Радиофармацевтические препараты, синтезированные с применением концентрации 1 мг/мл будут содержать две гидразидо- или диазенидогруппы; величина х будет составлять 2. Две группы Сh' могут быть одинаковыми или различными. В большинстве случаев применения можно инъецировать только ограниченное количество биологически активной молекулы, и нежелательны, как результат, побочные эффекты, такие как химическая токсичность, воздействие на биологический процесс или изменение биораспределения радиофармацевтического препарата. Поэтому радиофармацевтические препараты с х, равным 2,которые требуют более высокой концентрации реагентов формулы 2, входящих в часть биологически активной молекулы, необходимо разбавлять или очищать после синтеза, чтобы избежать побочного действия. Особенности и количества используемых вспомогательных лигандов АL1 и AL2 будут определять величину переменных у и z. Величина у может быть целым числом от 0 до 3, величинаz может быть целым числом от 1 до 4. В сочетании, величины у и z будут определять координационную сферу технеция, которая создается,по меньшей мере, пятью, но не более чем семью донорными атомами, предпочтительно - шестью донорными атомами. В случае монодентатных фосфинов или арсинов формулы A9 z может являться целым числом от 1 до 4; в случае бидентатных фосфинов или арсинов формулы А 10 А 11 z может быть равен либо 1, либо 2. Предпочтительной комбинацией для монодентатных фосфинов или арсинов является случай, когда у равен 1 или 2, а z равен 1. Предпочтительной комбинацией для бидентатных фосфинов или арсинов является случай, когда у равен 0 или 1,а z равен 1 или 2. Радиофармацевтические препараты вводят внутривенной инъекцией, обычно, в физиологическом растворе, при дозе от 1 до 100 мКи на массу тела 70 кг или предпочтительно при дозе от 5 до 50 мКи. Получение изображения осуществляют с помощью известных методов. Экспериментальная часть Материалы, применяемые при синтезах радиофармацевтических препаратов, описанных в приведенных ниже примерах, получают следующим образом. Реагенты формулы 2 синтезируют так, как описано в одновременно рассматриваемой заявке на патент США, рег.08/218861 (эквивалент WO 94/22494). Вспомогательные лиганды трицин и койевую кислоту получают от Research Organic Inc. и AldrichLimited,и трис(карбоксиэтил)фосфина, который получают от Aldrich Chemical Co. Деионизованную воду получают в системе Milli-Q с качеством 18 М. Пертехнетат технеция-99m (99mTcО 4-) получают в генераторе 99 Мо/99mTc DuPont Pharma. Дигидрат хлорида олова (2) получают от AldrichTPPPTS - трис(3-(п-сульфонатофенил)пропил)фосфин, натриевая соль ТНРР - трис(3-гидроксипропил)фосфин ТСЕР - трис(2-карбоксиэтил)фосфинDPPETS - 1,2-бис[бис(3-сульфонатофенил)фосфино]этан, натриевая соль Пример 1. Синтез 99mТс(трицин) (TPPTS)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. В чистый 10-см 3 сосуд помещают 40 мг трицина, растворенного в 0,7 мл деионизованной Н 2 О, 5 мкг цикло(D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb(гидразиноникотинил-5-Аса, растворенного в H2O, 20 мКи 99mТсO4- в физиологическом растворе, 1 мг TPPTS, растворенной в Н 2 О, и 20 мкг SnCl22H2O, растворенного в 0,1 н HCl. Общий объем реакционной смеси составляет 1-1,5 мл. Доводят рН раствора до 4 с помощью 1 нHCl. Раствор нагревают при 50 С в течение 30 мин, и затем анализируют методом ВЭЖХ, способ 1, и методом ИТСХ (ITLC), способ 1. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 2. Синтез 99mТc(трицин) (TPPDS)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. Синтез осуществляют так, как описано в примере 1, используя TPPDS как фосфиновый колиганд, и осуществляя нагревание при 80 С в течение 30 мин. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 3. Синтез 99mТc(трицин) (TPPMS)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. Синтез осуществляют так, как описано в примере 1, используя TPPMS как фосфиновый колиганд. Результаты анализа и выход показаны в таблице.TPEPTS в 0,2 мл Н 2 О и 20 мкг SnCl22H2O, растворенного в 0,1 н HCl. Общий объем составляет 1,4 мл. Доводят рН раствора до 7 с помощью 1 н NaOH. Раствор греют при 80 С в течение 30 мин и затем анализируют ВЭЖХ, способ 1, и ИТСХ, способ 1. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 5. Синтез 99mТс(трицин) (TPPPTS)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. Синтез осуществляют так, как описано в примере 4, используя TPPPTS как фосфиновый колиганд. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 6. Синтез 99mTс(трицин) (DPPETS)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. В чистый 10-см 3 сосуд загружают 40 мг трицина, растворенного в 0,7 мл деионизованной Н 2 О, 5 мкг цикло(D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb(гидразиноникотинил-5-Аса, растворенного в Н 2 О, 20 мКи 99mTсО 4- в физиологическом растворе и 20 мкг SnCl22H2O, растворенного в 0,1 н НСl. Общий объем реакционной смеси составляет 1-1,5 мл. Раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 5 мин, и затем добавляют 1 мг DPPETS, растворенной в H2O. Доводят рН раствора до 4 и затем греют раствор при 80 С в течение 20 мин. Полученный в результате раствор анализируют методом ВЭЖХ,способ 1, и методом ИТСХ, способ 1. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 7. Синтез 99mТc(трицин) (ТНРР)-цикло(D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. Реагент синтезируют в две стадии, получая 99m сначала Тc(трицин)-цикло(D-Val-NMeArgGly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса, и затем вводя его во взаимодействие с ТНРР. Стадия 1. Синтез 99mТс(трицин)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. В 10-мл сосуд загружают 0,3 мл 99mTсО 4(100 мКи/мл) в физиологическом растворе,затем 10 мкг цикло(D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb(гидразиноникотинил-5-Аса, растворенного в физиологическом растворе, 20 мг трицина, растворенного в воде при рН 7 и 20 мкгSnСl22 Н 2 О, растворенного в 1 н НСl. Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 15-20 мин и затем анализируют методом 34 ВЭЖХ, способ 1, и методом ИТСХ, способ 1. Получают комплекс с выходом 90-95%. Стадия 2. Реакция с ТНРР. К полученному выше реакционному раствору добавляют 5 мг ТНРР, растворенного в физиологическом растворе. Смесь нагревают при 50 С в течение 15-20 мин. Полученный в результате раствор анализируют методом ВЭЖХ, способ 1, и методом ИТСХ, способ 1. Результаты анализа и выход показаны в таблице. Пример 8. Синтез 99mТc(трицин) (ТСЕР)-цикло(D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5 Аса. Реагент синтезируют в две стадии, получая 99m сначала Тc(трицин)-цикло(D-Val-NMeArgGly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса, и затем вводя его во взаимодействие с ТСЕР. Стадия 1. Синтез 99mTc(трицин)-цикло(DVal-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. В 10-мл сосуд помещают 40 мг трицина,растворенного в 0,5 мл Н 20, 5 мкг цикло(D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5 Аса, растворенного в 100 мкл воды, 0,5 мл 99mTcO4- (100 мКи/мл) в физиологическом растворе, и 20 мкг SnCl22H2O, растворенного в 1 н НСl. Общий объем реакционной смеси составляет 1-1,5 мл. Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 15-20 мин, и затем анализируют методом ВЭЖХ, способ 1, и методом ИТСХ, способ 1. Получают комплекс с выходом 90-95%. Стадия 2. Реакция с ТСЕР. К полученному выше реакционному раствору добавляют 1,0 мг ТСЕР, растворенного в 0,2 мл воды. Доводят рН до 4 с помощью 1 н НСl. Смесь греют при 50 С в течение 15-20 мин. Полученный в результате раствор анализируют методом ВЭЖХ, способ 1, и методом ИТСХ,способ 1. Результаты анализа и выход показаны в таблице. (Продукт существует в виде двух расщепляющихся изомерных форм). Пример 9. Синтез 99mTc(койевая кислота) (TPPTS)цикло(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса. Синтез осуществляют так, как описано в примере 1, заменяя трицин на койевую кислоту(гидразиноникотинил-D-Phe (ОМе. Стадия 1. Синтез 2-гидразиноникотинилD-Рhе (ОМе). Синтез осуществляют так, как описано в одновременно рассматриваемой заявке на патент США, рег.08/218861, пример 3, заменяя на D-Phe (OMe) цикло(D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb(5-Аса.(TPPTS)(гидразиноникотинил-D-Phe (ОМе. Синтез осуществляют так, как описано в примере 1, заменяя цикло(D-Val-NMeArg-GlyAsp-Mamb(гидразиноникотинил-5-Аса на 2 гидразиноникотинил-D-Рhе (ОМе). Продукт характеризуется временами удерживания 17,6 и 18,0 мин (ВЭЖХ, способ 1) и образуется с выходом 85%. Очистка Обычно, как правило, соединения, полученные описанными здесь способами, являются чистыми, как показывают аналитические методы, непосредственно описанные ниже. Однако если желательна большая степень чистоты, соединения, полученные здесь, можно дополнительно очистить ВЭЖХ, собирая соединение в виде элюатов из колонки для ВЭЖХ, при использовании способа 1, описанного ниже. Затем летучие компоненты испаряют, а остаток снова растворяют в 2% растворе трицина в физиологическом растворе. Аналитические методы: ВЭЖХ, способ 1. Колонка: Vydac, C18, 250 мм 4,6 мм, размер пор 300 А. Скорость потока 1,0 мл/мин. Растворитель А: 10 мМ раствор монофосфата натрия, рН=6,0. Растворитель Б: 100% ацетонитрил. Градиент: 0% Б 30% Б 75% Б 0% Б 0 мин 15 мин 25 мин 30 мин Определение с помощью NaJ пробы. ВЭЖХ, способ 2. Колонка: Zorbax-Rx, C18, 250 мм 4,6 мм. Скорость потока 1,0 мл/мин. Растворитель А: 5 мМ иона тетрабутиламмония, 30 мМ монофосфата натрия, рН = 3,7; 5% ацетонитрила. Растворитель Б: 20% растворителя А в ацетонитриле. Градиент: 0% Б 10% Б 40% Б 60% Б 100% Б 0 мин 20 мин 30 мин 35 мин 40 мин Определение с помощью NaJ. ИТСХ, способ 1. Полоски для ITLC-SG, Gelman, 1,5 см 7,5 см, проявляются в смеси ацетона с солевым раствором (0,9%), 1:1. Таблица Результаты анализа и выход для реагентов 99mТс ВЭЖХ,время удерживания,Выход, % способ 1 (мин) Пример 1 10,4 95 Пример 2 12,8 93 Пример 3 15,9 93 Пример 4 10,0 70 Пример 5 12,6 83 Пример 6 9,6 88 Пример 7 12,3 92 Величины, приведенные в таблице, получают при применении ВЭЖХ, способ 1. В этих примерах в большинстве случаев одно время удерживания. Два изомера, которые содержатся в этих образцах радиофармацевтических препаратов, этим способом ВЭЖХ обычно расщепляются не полностью. Как правило, на главном записанном пике имеется плечо. Полезность Полученные здесь радиофармацевтические препараты могут использоваться в качестве средств визуализации при диагностике сердечно-сосудистых заболеваний, таких как тромбоэмболическая болезнь или атеросклероз, инфекционных заболеваний и злокачественной опухоли. Радиофармацевтические препараты содержат фосфино- или арсинолигированные меченные технецием-99m модифицированные гидразином или диазенидом биологически активные молекулы, которые селективно локализуются в местах локализации болезни, и, таким образом,позволяют получить отображения локуса с использованием гамма-сцинтиграфии. Комплексы,описанные в примерах 1-3, оценены на предмет возможного клинического использования в качестве радиофармацевтических препаратов для диагностики тромбоэмболической болезни путем исследования изображений на модели глубокого тромбофлебита у собак. Скорости клиренса крови для комплексов определяют на модели артериовенозного анастомоза. Указанные исследования изображений показали, что радиофармацевтические препараты, описанные здесь, пригодны при визуализации картины тромбоза. Модель глубокого тромбофлебита у собак Эта модель включает триаду событий (состояние гиперкоагуляции, период стаза, окружающая среда со слабым сдвигом), существенных для образования венозного обогащенного фибрином активно растущего тромба. Процедура следующая. Взрослым беспородным собакам любого пола (9-13 кг) дают наркоз натрийпентобарбиталом (35 мг/кг, в.в.), и вентилируют легкие комнатным воздухом через интубационную трубку (12 движений/мин, 25 мл/кг). Для определения артериального давления канюлируют правую бедренную артерию наполненным физиологическим раствором полиэтиленовым катетером (РЕ-240) и присоединяют к датчику давления Statham (P23ID; Oxnard, CA). Среднее артериальное кровяное давление определяют через затухание пульсирующего сигнала давления. Частоту сердечных сокращений контролируют, используя кардиотахометр (Biotach, GrassQuincy, MA), запускаемый от электрокардиограммы, отведение II, генерированного отведениями с конечностей. Правую бедренную вену канюлируют (РЕ-240) для введения лекарствен 37 ного средства. Выделяют сегмент в 5 см на обеих яремных венах, свободный от фасции, и очерчивают шелковым шовным материалом. Датчик с микротермистором помещают на сосуде, который служит для косвенного измерения венозного тока. Катетер-баллон для эмболектомии используют для индуцирования 15-мин периода стаза, по ходу которого затем индуцируют состояние гиперкоагуляции, используя 5 Е тромбина (American Diagnosticia, GreenwichCT), который вводят в закрытый сегмент. Спустя 15 мин, ток восстанавливают, спуская баллон. Радиофармацевтический препарат вливают в течение первых 5 мин обратного течения, и степень включения контролируют, используя гамма-сцинтиграфию. Модель артериовенозного анастомоза Взрослым беспородным собакам любого пола (9-13 кг) дают наркоз натрийпентобарбиталом (35 мг/кг, в.в.) и вентилируют легкие комнатным воздухом через интубационную трубку (12 движений/мин, 25 мл/кг). Для определения артериального давления канюлируют левую сонную артерию наполненным физиологическим раствором полиэтиленовым катетеромStatham (P23ID; Oxnard, CA). Среднее артериальное кровяное давление определяют через затухание пульсирующего сигнала давления. Частоту сердечных сокращений контролируют,используя кардиотахометр (Biotach, GrassQuincy, MA), запускаемый от электрокардиограммы, отведение II, генерированного отведениями с конечностей. Яремную вену канюлируют (РЕ-240) для введения лекарственного средства. Обе бедренные артерии и бедренные вены канюлируют обработанной силиконом(Sigmacote, Sigma Chemical Co. St Louis, МО),наполненной физиологическим раствором полиэтиленовой трубкой (РЕ-200), и соединяют с 5 см куском обработанной силиконом трубки (РЕ 240) для образования экстракорпоральных артериовенозных анастомозов (A-V). Раскрытое состояние шунта контролируют с применением системы допплеровского потока (модель VF-1,Cristal Biotech Inc, Hopkinton, MA) и датчика тока (2-2,3 мм, Titronics Med. Inst., Iowa City,IA), размещенного проксимально к локусу шунта. Все параметры контролируют непрерывно на многоканальном регистрирующем приборе (модель 7D Grass) при скорости ленты 10 мм/мин или 25 мм/с. По прошествии 15-мин периода послеоперационной стабилизации формируют закрывающий тромб путем введения тромбогенной поверхности (4-0 скрученная шелковая нить, 5 см длиной, Ethicon Inc., Somerville, NJ) в один шунт с другим, служащим в качестве контроля. Применяют два последовательных 1-часовых периода шунтирования с испытываемым средством, вводимым в виде вливания в течение 5 мин, начиная за 5 мин до введения тромбоген 000636 38 ной поверхности. В конце каждого 1-часового периода шунтирования шелк тщательно удаляют и взвешивают и определяют % включения путем тщательного вычисления. Массу тромба вычисляют путем вычитания массы шелка до размещения из общей массы шелка по удалении из шунта. Артериальную кровь отбирают до первого шунтирования и затем каждые 30 мин для определения клиренса крови, индуцированной коллагеном агрегации тромбоцитов цельной крови, индуцированной тромбином дегрануляции тромбоцитов (тромбоцит-АТФ выделение),протромбинового времени и числа тромбоцитов. Время кровотечения у модели также определяют с интервалами в 30 мин. Результаты Результаты исследования изображений,полученных с радиоактивными медицинскими препаратами примеров 1 и 2 и Тс-99mальбумином как негативным контролем, показаны на фиг. 2. Верхний график показывает соотношение тромб/кровь, нижний график показывает соотношение тромб/мышца, полученные на изображениях при прорисовывании соответствующих, представляющих интерес областей, и при сравнении числа щелчков в каждой области. Приведенные величины соответствуют отображениям, полученным через 15, 60 и 120 мин после окончания инфузии соединений. Даже в самый первый отсчет - через 15 мин - три радиофармацевтических препарата имеют более высокие соотношения, чем негативный контроль; различие резко выражено при 60-120 мин. Комплексы, в которых биологически активные молекулы Q являются хемотактическими пептидами, можно оценить на потенциальную клиническую полезность как радиофармацевтических препаратов для диагностики инфекционного заболевания путем осуществления исследований изображений на кроличьей модели очаговой инфекции. Кроличья модель очаговой инфекции С использованием асептической техники взрослым кроликам любого пола (2-3 кг) дают наркоз кетамином с ксилазином (15/1,5 мг/кг,в.в.) через маргинальную ушную вену. Каждому животному вводят 1 мл суспензии 2109 ЕE.coli в заднюю бедренную мышцу. В соответствующий момент времени, спустя 18-48 ч, каждому животному дают наркоз натрийпентобарбиталом (35 мг/кг, в.в.). Затем осуществляют трахеотомию, и легкие животного вентилируют комнатным воздухом, применяя аппарат искусственного дыхания для грызунов. Для определения артериального давления канюлируют левую сонную артерию наполненным физиологическим раствором полиэтиленовым катетером и присоединяют к датчику давления. Среднее артериальное кровяное давление определяют через затухание пульсирующего сигнала давления. Частоту сердечных сокращений контролируют, 39 используя кардиотахометр, запускаемый от электрокардиограммы, отведение II, генерированного отведениями с конечностей. Яремную вену канюлируют для введения лекарственного средства. Все параметры контролируют непрерывно на многоканальном регистрирующем приборе. По прошествии 15-минутного постоперационного периода стабилизации в течение 1-5 мин вливают вещество (1-20 мКи). Оценку степени включения в участок воспаления осуществляют с использованием ряда сцинтиграмм, полученных в период 0-3 и 18-24 ч после обработки. Изображения получают в течение заданного времени - 5 мин на проекцию. Для описания местонахождения пептида осуществляют анализ представляющей интерес области, сравнивая инфицированное бедро с контралатеральной здоровой мышцей в соответствующие моменты времени. Артериальную кровь отбирают перед введением и каждые 30 мин после введения,чтобы определить клиренс крови, гематологический профиль и функцию лейкоцитов. По завершении схемы эксперимента к животным применяют эйтаназию, и определяют биораспределение соединения путем тщательного подсчета гамма-частиц. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Радиофармацевтический препарат, содержащий радионуклид переходного металла,хелатор для переходного металла, биологически активную группу, соединенную с указанным хелатором, первый вспомогательный лиганд,второй вспомогательный лиганд, способный стабилизировать радиофармацевтический препарат, содержащий, необязательно, связывающую группу между указанным хелатором и указанной биологически активной группой. 2. Радиофармацевтический препарат по п.1, отличающийся тем, что содержит связывающую группу между указанным хелатором и указанной биологически активной группой. 3. Радиофармацевтический препарат по п.2 формулы(1),где Q представляет собой биологически активную молекулу;Ln представляет связывающую группу формулыZ1, независимо в каждом случае, выбраны из (С 6-C14)-карбоциклической системы, насыщенной, частично насыщенной или ароматической, замещенной 0-4 R57; и гетероциклической ядерной системы, необязательно замещенной 04 R57;R55 и R56 выбраны, независимо в каждом случае, из водорода; C1-С 10-алкила, замещенного 0-5 R57; алкарила, в котором арил замещен 05 R57;Mt представляет собой радиоизотоп переходного металла, выбранный из группы: 99mТс,186Re и 188Re; Сh' является хелатором для радионуклида металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Mt, и выбран, независимо, в каждом случае из группы:R53, R53a и R54, каждый, независимо в каждом случае, выбран из группы: водород, C1-C6 алкил и связь с Ln; АL1 является первым вспомогательным лигандом, представляющим собой функционализированный аминокарбоксилат; АL2 является вспомогательным лигандом,способным стабилизировать радиофармацевтический препарат, выбранным из группы: А 9 иR71 и R71a выбраны, в каждом случае независимо, из группы: водород и C1-С 6-алкил; и их фармацевтически приемлемые соли. 4. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa, лиганды рецептораMt представляет собой 99mТc; Сh' является хелатором для радиоизотопа металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Мt, и выбран, независимо в каждом случае, из группы:R71 представляет собой водород. 5. Радиофармацевтический препарат по п.4, отличающийся тем, чтоQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa и хемотактические пептиды;Ch' является хелатором для радиоизотопа металла, образующим координационную связь с радионуклидом переходного металла Mt, и вы 43R52 представляет собой связь с Ln; АL1 представляет собой трицин; АL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R62 и R63 выбраны, в каждом случае независимо,из группы: C1-С 3-алкил, замещенный 0-3 R70,арил, замещенный 0-3 R70; R70 выбран, в каждом случае независимо, из группы: -СО 2 Н, -ОН,SО 3 Н, SО 3-. 6. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоSО 3 Н или SО 3- в мета-положении; и х, y и z равны 1. 8. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоR и R63, каждый, представляет собой фенил,несущий группу SО 3 Н или SО 3- в метаположении; и х, у и z равны 1. 7. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоSО 3- в мета-положении; и х, у и z равны 1. 9. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоR и R63, каждый, представляют собой п-(2 фенилэтил)фенил, где фенилэтил несет группуSО 3 Н или SО 3- в пара-положении; и х, у и z равны 1. 10. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоSO3- в мета-положении; и х, у и z равны 1. 12. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоR и R63, каждый, представляют собой п-(2 фенилпропил)фенил, где фенилпропил несет группу SО 3 Н или SO3- в пара-положении; и х, у и z равны 1. 11. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоR и R63 представляют собой С 3-алкил, замещенный 1 ОН-группой; и х, у и z равны 1. 13. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоR и R63, каждый, представляет собой СН 2 СН 2 СООН; и х, у и z равны 1. 14. Радиофармацевтический препарат по п.3, отличающийся тем, чтоMt представляет собой 99mТc; АL1 представляет собой койевую кислоту; АL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,62R и R63, каждый, представляет собой фенил,несущий группу SО 3 Н или SО 3- в метаположении; х и z равны 1; и у равен 2. 15. Способ радиовизуализации млекопитающего или визуализации мест отложения тромбоцитов у млекопитающего путем радиовизуализации, включающий (I) введение указанному млекопитающему эффективного количества радиофармацевтического препарата по любому из пп.1-14, и (II) сканирование млекопитающего с использованием радиовизуализирующего устройства. 16. Способ визуализации мест отложения тромбоцитов у млекопитающего путем радиовизуализации по п.15, отличающийся тем, что радиофармацевтическим препаратом является радиофармацевтический препарат по любому из пп.6-14. 17. Способ определения отложения тромбоцитов у млекопитающего или диагностики у млекопитающего нарушения, связанного с отложением тромбоцитов, включающий введение указанному млекопитающему композиции радиофармацевтического препарата по любому из пп.6-14 и получение изображения указанного млекопитающего. 48 18. Набор для получения радиофармацевтического препарата, включающий(а) предварительно установленное количество стерильного фармацевтически приемлемого реагента формулы(б) предварительно установленное количество стерильного фармацевтически приемлемого первого вспомогательного лиганда АL1, представляющего собой функционализированный аминокарбоксилат; и(в) предварительно установленное количество стерильного фармацевтически приемлемого второго вспомогательного лиганда АL2, выбранного из группы: А 9 и A10-W-A11; где Q представляет собой биологически активную молекулу;Ln представляет собой связывающую группу формулы М 1-[Y1(CR55R56)f(Z1)fY2]f'-M2,1 где М представляет собойZ1, независимо в каждом случае, выбраны из (С 6-С 14)-карбоциклической кольцевой системы, насыщенной, частично насыщенной или ароматической, замещенной 0-4 R57; и гетероциклической кольцевой системы, необязательно замещенной 0-4 R57;R55 и R56 выбраны, независимо в каждом случае, из водорода; С 1-С 10-алкила, замещенного 0-5 R57; алкарила, в котором арил замещен 05 R57;R58 выбран, независимо в каждом случае,из группы: водород; C1-С 6-алкил; бензил и фенил; Сh является хелатором для радиоизотопа металла, выбранным, независимо в каждом слу 49 чае, из группы: R40R41N-N=CC1-С 3)-алкил)2, иQ представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa, лиганды рецептора IIb/IIIa, 000636Q представляет собой биологически активную молекулу, выбранную из группы: антагонисты рецептора IIb/IIIa и хемотактические пептиды;AL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R62 и R63, каждый, представляет собой п-(2 фенилэтил)фенил, где фенилэтил несет группуAL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R62 и R63, каждый, представляет собой п-(2 фенилпропил)фенил, где фенилпропил несет группу SО 3 Н или SО 3- в пара-положении. 26. Набор по п.20, отличающийся тем, чтоAL2 представляет собой PR61R62R63, где R61,R и R63 представляют собой СН 2 СН 2 СООН. 29. Набор по п.19, отличающийся тем, чтоAL1 представляет собой койевую кислоту;R и R63, каждый, представляет собой фенил,несущий группу SO3H или SO3- в метаположении. 30. Наборы по любому из пп.18-29, в которых также присутствует восстановитель. 31. Наборы по п.30, отличающиеся тем,что восстановитель представляет собой хлорид олова (2).