Peg – илированный паратиреоидный гормон в качестве модулятора рецептора паратиреоидного гормона и его применение

ПЭГИЛИРОВАННЫЙ ПАРАТИРЕОИДНЫЙ ГОРМОН В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРА РЕЦЕПТОРА ПАРАТИРЕОИДНОГО ГОРМОНА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Браун-Аугсбургер Патриция Ли, Кон Вэйн Дэвид (US) Предусмотрены фармацевтические композиции и способы для лечения и предотвращения у млекопитающего заболеваний, связанных с потерей кости, включающих остеопороз.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US) 014696 Настоящая заявка на патент испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США 60/829383, поданной 13 октября 2006 г. Область изобретения Настоящее изобретение относится к соединениям-модуляторам рецептора паратиреоидного гормона (РТН) и способам их получения и применения. Предпосылки создания изобретения Дегенеративные заболевания кости, такие как остеопороз, распространены среди людей пожилого возраста. Остеопороз включает гетерогенную группу нарушений, с которыми связан высокий риск переломов кости и с которыми связана существенная часть расходов на систему медицинского обслуживания. На лечение остеопороза ежегодно тратят миллиарды долларов. Клинические характеристики остеопороза заключаются в уменьшении массы кости, уменьшении минеральной плотности кости (МПК) и минерального содержания кости (МСК) и в потере структуры кости, приводящей к уменьшению прочности кости и к повышению риска ее перелома. Хотя многие средства, препятствующие резорбции кости, в том числе кальцитонин, бифосфонаты,эстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM), предотвращают дальнейшее разрежение кости, они не обеспечивают восстановление утраченной костной массы. Первый одобренный Федеральным управлением по лекарственным средствам (FDA) анаболический агент, обеспечивающий образование костной массы, предназначен для лечения остеопороза РТН (1-34), также известный как терипаратид, реализуемый под фирменным названием FORTEO (Eli Lilly and Company, Indianapolis, IN). Считается, что РТН или РТН (1-34) действует через опосредованную рецептором активацию двух внутриклеточных сигнальных путей (1) через аденилатциклазу и протеинкиназу А и (2) через фосфолипазу С и протеинкиназу С. РТН (1-34) обеспечивает образование костной массы, восстановление структуры кости и уменьшение риска перелома позвоночника и других костей у пациентов, страдающих остеопорозом,имеющих высокую степень риска перелома (R. Neer, NEJM, 344:1434, 2001). Поскольку РТН (1-34) представляет собой пептидный продукт, его необходимо вводить ежедневно путем подкожных инъекций. В международной публикации WO 2004/060386 описана большая группа модуляторов РТН/PTHrP, включающих наполнитель и вызывающих более значительный гиперкальциемический ответ, чем РТН (1-34). Сохраняется потребность в новых терапевтических аналогах РТН, которые обладают эффективностью в отношении образования костной массы, что проявляется в форме увеличения минерального содержания кости и/или прочности кости, при этом предпочтительно проявляют гиперкальциемическое действие, аналогичное или менее выраженное, чем у РТН (1-34), и которые требуют менее частого введения, чем РТН (1-34). Соединения согласно настоящему изобретению удовлетворяют этим требованиям и обеспечивают соответствующие преимущества. Краткое описание изобретения Пегилированные соединения согласно настоящему изобретению представляют собой соединения,имеющие последовательность, выбранную из группы, включающей где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или их фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к соединению, имеющему последовательность где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к соединению, имеющему последовательность где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте осуществления изобретение относится к соединению, имеющему последовательностьmPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли.-2 014696 В одном варианте осуществления изобретение относится к соединению, имеющему последовательность, выбранную из группы, состоящей из или его амидную С-концевую форму. Изобретение относится к способу индукции образования кости у млекопитающего, включающему введение млекопитающему, нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединенияSEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. Изобретение относится к способу лечения заболевания или патологического состояния, при котором образование новой костной массы и/или увеличение костной массы и биомеханической прочности кости оказывает благоприятный терапевтический эффект на млекопитающего, при этом указанное заболевание или состояние включает остеопороз, остеопению, перелом кости, спондилодез, имплантацию кости, имплантацию сустава, имплантацию зуба и парадонтоз, включающий введение млекопитающему,нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. Изобретение относится к способу лечения остеопороза или остеопении у пациента, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединенияSEQ ID NO: l, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. Настоящее изобретение также относится к способу профилактики остеопороза или остеопении у млекопитающего, включающему введение млекопитающему, нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. Изобретение относится к способу лечения перелома кости у пациента, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4,5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да,более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или эксципиентом. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2,3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения в терапии.-3 014696 В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2,3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения для индукции образования кости у млекопитающего, предпочтительно человека. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2,3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения для лечения заболевания или патологического состояния, при котором образование новой костной массы и/или увеличение костной массы и биомеханической прочности кости оказывает благоприятный терапевтический эффект на млекопитающего,при этом указанное заболевание или состояние включает остеопороз, остеопению, срастание перелома кости, спондилодез, имплантацию кости, имплантацию сустава, имплантацию зуба и парадонтоз. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2,3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения для лечения остеопороза у млекопитающего,предпочтительно человека. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2,3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения в целях предотвращения остеопороза у млекопитающего, предпочтительно человека. В одном варианте осуществления изобретение относится к соединению SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для применения для лечения перелома кости у млекопитающего,предпочтительно человека. Изобретение относится к применению соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да,предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения заболевания или патологического состояния, способного улучшать или предотвращать индукцию образования кости. Изобретение относится к применению соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да,предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения патологического состояния,при котором образование новой костной массы и/или увеличение костной массы и биомеханической прочности кости оказывает благоприятный терапевтический эффект на млекопитающего, предпочтительно человека, при этом указанное заболевание или состояние включает остеопороз, остеопению, перелом кости, спондилодез, имплантацию кости, имплантацию сустава, имплантацию зуба и парадонтоз. Изобретение также относится к применению соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения остеопороза у млекопитающего, предпочтительно человека. Изобретение также относится к применению соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, гдеmPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для предотвращения остеопороза или остеопении у млекопитающего, предпочтительно человека. Изобретение также относится к применению соединения SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6, гдеmPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000 Да; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для применения в лечении перелома кости у млекопитающего, предпочтительно человека.-4 014696 Подробное описание изобретения Образование кости происходит в процессе развития плода и постнатального роста, а также у взрослых организмов с низкой интенсивностью в ходе ремоделирования кости в норме или с высокой интенсивностью в ответ на повреждение или потерю костной массы при патологическом состоянии. Образование кости включает множество процессов, в том числе пролиферацию клеток-предшественников остеобластов, дифференцировку остеобластов из клеток-предшественников и минерализацию матрикса, синтезированного остеокластами. Термин "индукция образования кости" или "индукция образования новой кости" употребляют для обозначения суммарного увеличения костной массы (например, о котором судят по увеличению минерального содержания кости ("МСК") и/или биомеханической прочности кости, определяемого с помощью способа, описанного в примере 4 В ниже. Термин "эффективное количество" при использовании в данном описании обозначает дозу соединения по настоящему изобретению, необходимую для достижения желаемого фармакологического эффекта. Термин "активность in vitro" относится к активности соединения по настоящему изобретению в одном или более соответствующем способе анализа in vitro, включающем, например, способность активировать рецептор РТН в клеточной системе. Активность может быть представлена в виде значения "ЭК 50",обозначающего эффективную концентрацию соединения, вызывающую 50% максимальной степени активации в выбранном способе анализа. Для оценки связывания и активации рецептора РТН можно применять любой подходящий способ анализа, в том числе включающий активацию аденилатциклазы, приводящую к повышению уровня циклического АМФ (цАМФ) (см. пример 3). Соединения по настоящему изобретению демонстрируют различную антагонистическую активность, обуславливающую увеличение внутриклеточного содержания цАМФ. В типичной форме mPEG (монометоксиполиэтиленгликоль) представляет собой линейный полимер с терминальными гидроксильными группами, имеющий формулу CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH, где n равно от примерно 8 до примерно 4000. mPEG, применяемый в настоящем изобретении, имеет среднюю молекулярную массу от 1500 до 5500 Да, более предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно около 2000-2300, еще более предпочтительно около 2000 Да. Коммерчески доступные реагентыmPEG (например, NOF SUNBRIGHT ME-020AS) обычно характеризуются некоторой степенью полидисперсности, что означает, что "n" варьирует в пределах некоего диапазона согласно распределению Гаусса, предпочтительно в пределах узкого диапазона. Концевой водород в целом можно заменить терминирующей группой, такой как алкил или ароматическая группа. Хотя в молекуле mPEG концевой водород заменен метоксигруппой, настоящее изобретение также предусматривает замену концевого водорода углеродной цепью различной длины, содержащей, например, до 10 атомов углерода, линейной или разветвленной. Соединение, имеющее последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8-12, можно применять как промежуточное соединение в синтезе пегилированного соединения согласно изобретению. Предпочтительно соединение, имеющее последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8-12, находится в форме амида по карбоксиконцу соединения. Термины "линкер", "линкерная группа" и "спейсер/разделитель" используются в данном описании для обозначения атома или совокупности атомов, которые можно применять для соединения взаимосвязанных групп, таких как концевая группа участка полимера и пептид. Линкерная группа является частью общего полимера и содержит реакционную группу, обеспечивающую ковалентное присоединение к соответствующей реакционной группе пептида. Термин "конъюгированный" (или равнозначный ему термин "конъюгированный пептид") при использовании в данном описании обозначает гетерогенную молекулу, образованную путем ковалентного присоединения пептида к молекуле ПЭГ. Термин "ковалентное присоединение" означает, что пептид и молекула полиэтиленгликоля либо напрямую ковалентно соединены друг с другом, либо соединены друг с другом ковалентно через промежуточную группу или группы, например линкер, линкерную группу или спейсер. Пегилированные соединения по настоящему изобретению могут взаимодействовать с любыми из множества неорганических и органических кислот или оснований с образованием фармацевтически приемлемых солей. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли, образованные с уксусной, лимонной и соляной кислотами. Особенно предпочтительны соли уксусной кислоты соединений SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 или 5, где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да, предпочтительно около 2000-5000 Да, более предпочтительно 2000 Да. Способы получения фармацевтически приемлемых солей соединений настоящего изобретения хорошо известны специалисту в данной области (см. Stahl et al., "Handbook of Pharmaceutical-5 014696 Дегенеративные заболевания кости, такие как остеопороз, характеризуются уменьшением костной массы, уменьшением МПК и потерей структуры кости, приводящей к уменьшению прочности кости и увеличению риска перелома кости. Пегилированные соединения по настоящему изобретению могут обеспечить построение массы кости, увеличение биомеханической прочности кости, восстановление структуры кости и уменьшение риска перелома позвоночника и других костей у пациентов, страдающих остеопорозом, имеющих высокий риск перелома. Таким образом, пегилированные соединения по настоящему изобретению можно применять в качестве агентов, обеспечивающих построение кости, для лечения или предотвращения дегенеративных заболеваний кости, таких как остеопороз. Более того, пегилированные соединения по настоящему изобретению можно применять в качестве агентов, обеспечивающих построение кости, для более эффективного срастания перелома, или стимулирования роста кости в области костных имплантатов, имплантатов сустава или зуба, или для лечения парадонтоза. Пациенты, для которых лечение по настоящему изобретению может быть эффективно, включают мужчин, женщин и детей, страдающих заболеванием, связанным с потерей кости, или имеющих травму кости, например перелом кости, при которых образование новой кости, увеличение костной массы и/или увеличение биомеханической прочности кости оказывают благоприятное терапевтическое действие. Например, соединение по настоящему изобретению можно вводить в качестве средства, индуцирующего образование кости и/или костной массы и увеличивающего прочность кости, таким образом уменьшающего риск перелома позвоночника и костей другого типа у пациента, имеющего риск такого перелома, в том числе у пациентов, страдающих остеопорозом или остеопенией, например пациентов с возрастным остеопорозом, индуцированным стероидами остеопорозом, постклимактерическим остеопорозом, идиопатическим остеопорозом и первичным или вторичным остеопорозом. Области, помимо позвоночника,включают, например, тазобедренный сустав, предплечье, плечевую кость, большую берцовую кость, лучевую кость, лодыжку, ребро, ступню, таз и бедренную кость. Пегилированные соединения по настоящему изобретению можно также вводить пациенту для повышения или ускорения срастания перелома позвоночника и/или другой кости, например пациенту, перенесшему травму, вызвавшую перелом кости, например, вследствие аварии или спортивной травмы,или имеющему патологический перелом, связанный с низкой костной массой, включая тазобедренный сустав, предплечье, плечевую кость, большую берцовую кость, лучевую кость, лодыжку, ребро, ступню,таз и бедренную кость. Синтез соединений. Соединения по настоящему изобретению могут быть получены, как описано в следующей схеме,приведенной для синтеза соединения с SEQ ID NO: 1. Н 2N-амидная полистирольная смола Ринка-6 014696 Пептидную цепочку соединения по настоящему изобретению можно синтезировать с применением стандартных ручных или автоматизированных способов твердофазного синтеза. Автоматизированные синтезаторы пептидов коммерчески доступны, например, у AppliedBiosystems (Foster City, CA) и Protein Technologies Inc. (Tucson, AZ). Реагенты для твердофазного синтеза коммерчески доступны. Твердофазные синтезаторы можно применять согласно инструкциям изготовителя по блокировке интерферирующих групп, защите аминокислоты в ходе реакции, сочетания, снятия защитных групп и блокирования не участвующих в реакции аминокислот. Как правило, реакцию сочетания N-карбамоилзащищенной аминокислоты и N-концевой аминокислоты наращиваемой пептидной цепи, присоединенной к смоле, проводят при комнатной температуре в инертном растворителе, таком как диметилформамид, N-метилпирролидон или метиленхлорид, в присутствии связывающего агента, такого как диизопропилкарбодиимид (DIC) и 1-гидроксибензотриазол(HOBt). N-карбамоильную защитную группу удаляют из образующегося пептида с использованием такого реагента, как трифторуксусная кислота (ТФК) или пиперидин, и реакцию сочетания повторяют со следующей N-защищенной аминокислотой, которую необходимо присоединить к пептидной цепи. Подходящие защитные группы для аминов хорошо известны в данной области и описаны, например, в работе Green and Wuts "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 1991. Наиболее распространенные примеры включают tBoc и флуоренилметоксикарбонил (Fmoc). После завершения синтеза,пептиды отщепляют от твердой подложки с одновременным снятием защиты с боковых цепей с применением стандартных способов обработки при кислых условиях. Как понятно специалисту в данной области, пептидная цепь соединения по настоящему изобретению может быть синтезирована либо со свободной кислотой, либо с карбоксамидом на С-конце. Тип дериватизированной полистирольной смолы, применяемой для синтеза, определяет тип группы на С-конце после отсоединения пептида. В данной области известно и используется множество линкеров. Для синтеза пептидов с С-концевым амидом при синтезе с Fmoc, как правило, применяют смолы, включающие линкеры амид МВНА Ринка или амид AM Ринка, тогда как при синтезе с tBoc, как правило, применяют смолу МВНА. Для создания пептидов с кислотой на С-конце при синтезе с Fmoc, как правило, применяют 2-хлортритил или смолу Ванга, тогда как при синтезе с tBoc, как правило, применяют смолу РАМ. Способы присоединения первой аминокислоты к смоле хорошо известны в данной области. Неочищенные пептиды обычно очищают путем обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (оф-ВЭЖХ) на С 8 или С 18 колонках с применением градиента вода-ацетонитрил в 0,05-0,1% ТФК. Степень чистоты можно проверить с помощью аналитической оф-ВЭЖХ. Идентичность пептидов можно проверить путем масс-спектрометрии. Пептиды могут быть солюбилизированы в водных буферных растворах с широким диапазоном рН. Конъюгирование mPEG с пептидом можно осуществить с применением хорошо известных реакций химического синтеза (см. Roberts et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 54: 459-476 (2002) и Veronese, F.M.,Biomaterials, 22:405-417 (2001) или согласно рекомендациям изготовителя. Предпочтительно применяют молярный избыток полимера относительно пептида, чтобы реакция проходила до конца. Избыток реагента mPEG отделяют из конъюгированных пептидных продуктов стандартными способами разделения,такими как оф-ВЭЖХ. По химической природе конъюгирование, применяемое при получении пегилированных соединений настоящего изобретения, представляет собой образование амидной связи междуmPEG-карбоксилатом, активированным, например, в виде NHS-(N-гидроксисукцинимидного)эфира, и аминогруппой пептида. Линкер между mPEG и пептидом представляет собой СО-СН 2 (карбоксиметил). Последовательность пептида настоящего изобретения предусмотрена таким образом, что содержит единственную боковую цепь Lys, что обеспечивает селективную реакцию с вступающим эфиром mPEG-NHS. Обычно также предусмотрена дериватизация аминоконца с помощью защитной группы, например Fmoc или трифторацетил, которую впоследствии удаляют. В качестве альтернативы аминоконец может быть оставлен незащищенным и при оптимальном рН и в условиях раствора может осуществляться частичное селективное ацилирование боковой цепи Lys (см. патент США 5646242). Амидное конъюгирование предпочтительно проводят с производным mPEG-NHS эфира и Fmoc-защищенным по N-концу пептидом, содержащим единственный Lys (или другую содержащую амин аминокислоту), в водной смеси при рН 9-10 и при комнатной температуре в течение 20-60 мин. После реакции конъюгирования необходимый конъюгированный пептид восстанавливают и очищают стандартными способами разделения, например путем оф-ВЭЖХ.-7 014696 Композиция. Пегилированное соединение по настоящему изобретению может быть включено в фармацевтическую композицию, подходящую для введения объекту, в частности человеку. Пегилированные соединения согласно настоящему изобретению можно вводить в отдельности или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем и/или эксципиентом. В частности, пэгилированнное соединение по настоящему изобретению можно вводить в наполнителе 20 мМ NaH2PO4 в 0,9% NaCl, 3 мг/мл маннит, рН 5. Композиции для введения разработаны в соответствии с выбранным способом введения и в них применяют соответствующие фармацевтически приемлемые растворители, носители и/или эксципиенты, такие как диспергирующие агенты, буферы, сурфактанты, консерванты, солюбилизирующие агенты, агенты для поддержания изотоничности, стабилизирующие агенты и т.п. Указанные композиции разработаны в соответствии со стандартными способами, например, изложенными в руководствеRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton,PA 1995, в котором описаны способы приготовления препаратов, известные специалисту-практику. Композицию, содержащую пегилированное соединение по настоящему изобретению, можно вводить объекту, имеющему риск развития патологии или демонстрирующему патологию, как описано в данном изобретении, с применением стандартных способов введения, включая внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное, легочное, трансдермальное, внутримышечное, интраназальное, буккальное,подъязычное введение или введение с помощью суппозиториев. Способ введения пегилированного соединения по настоящему изобретению может быть парентеральным, пероральным или может представлять собой введение путем ингаляции или трансдермальное введение. Предпочтительно пегилированные соединения по настоящему изобретению могут быть включены в фармацевтическую композицию, подходящую для парентерального введения. Термин "парентеральный" при использовании в данном описании включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное или внутрибрюшинное введение. Предпочтительна доставка в периферическую систему путем внутривенной, или внутрибрюшинной, или подкожной инъекции. Пегилированные соединения по настоящему изобретению можно вводить в виде аэрозоля для терапевтических целей, который вводят с помощью устройства для ингаляций и который содержит соединение по настоящему изобретению. Аэрозоли и способы их получения описаны в данной области. Пегилированные соединения по настоящему изобретению можно вводить систематически, например ежедневно или еженедельно. Кроме того, пегилированные соединения по настоящему изобретению можно вводить, например, 2 раза в неделю или 3 раза в неделю. Кроме того, соединения по настоящему изобретению можно вводить циклами (например, регулярное введение в течение дней-недель с последующим периодом без введения). Предпочтительно пегилированные соединения по настоящему изобретению вводят еженедельно в течение периода от 3 месяцев до 3 лет. Композиция в большинстве случаев должна быть стерильной и стабильной при условиях производства и хранения в предусмотренном контейнере, включающем, например, герметизированный флакон или шприц. Следовательно, композиции можно стерилизовать посредством фильтрации после получения композиции или иным способом сделать их микробиологически приемлемым. Для парентерального введения типичный диапазон дозы соединения по настоящему изобретению составляет от примерно 1 мкг в неделю до примерно 10 мг в неделю. Предпочтительно доза для человека находится в диапазоне от 5 до примерно 1000 мкг в неделю. Более предпочтительно доза находится в диапазоне от 10 до 1000 мкг в неделю, включая введение 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 г, 75, 80, 85,90, 95 или 100, 150, 200, 250, 300, 500, 750 или 1000 мкг один раз в неделю. Хотя данные диапазоны дозы представлены в единицах, соответствующих введению один раз в неделю, предусмотрено применение и других временных интервалов. Предложенные количества соединения подвергаются тщательному рассмотрению врачом. Ключевой фактор при выборе подходящей дозы и графика лечения - достигаемый клинический результат. Факторы, рассматриваемые в таком контексте, включают конкретное нарушение, подвергаемое лечению,конкретное млекопитающее, подвергаемое лечению, клиническое состояние конкретного пациента, причину нарушения, область доставки соединения, способ введения, график введения и другие факторы,известные врачу-практику. Терапевтические средства по настоящему изобретению могут быть заморожены или лиофилизированы для хранения и восстановлены в подходящем стерильном носителе перед применением. Лиофилизация и восстановление могут вызывать потерю активности соединения различной степени. Для ее компенсации дозировки могут быть скорректированы. Как правило, предпочтительным является рН препарата от 4 до 8. Соединение по настоящему изобретению можно вводить в отдельности или в комбинации с другими агентами, например агентами, препятствующими резорбции кости, включающими кальцитонин, бифосфонаты, SERM (например, ралоксифен), гормонозаместительную терапию (ГЗТ), кальций, витаминD1, витамин D2, витамин D3, витамин D4 и эстроген. Соединение по настоящему изобретению можно вводить совместно с другим агентом. Кроме того, соединение по настоящему изобретению и дополни-8 014696 тельный агент можно вводить последовательно; например соединение по настоящему изобретению вводят в отдельности в течение периода от 1 недели до 1 года, после чего вводят другой агент либо вместе с указанным соединением, либо без него. Изделия. Согласно другому варианту осуществления изобретение относится к изделию, содержащему вещества, подходящие для лечения или предотвращения заболеваний или патологических состояний, описанных выше. Изделие включает контейнер и этикетку. Подходящие контейнеры включают, например, бутыли, флаконы, шприцы, шприцы-ручки, ингаляторы, пластыри и пробирки. Контейнер может быть изготовлен из различных материалов, таких как стекло, металл или пластмасса. Контейнер содержит композицию настоящего изобретения, которая эффективна для предотвращения или лечения заболевания или патологического состояния и может иметь отверстие, обеспечивающее сохранение стерильности(например, контейнер может представлять собой мешок с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции). Активный агент в контейнере представляет собой композицию согласно настоящему изобретению. Этикетка, прикрепленная к контейнеру или прилагаемая к нему, указывает, что композицию применяют для лечения выбранного заболевания. Изделие может также включать второй контейнер, включающий фармацевтически приемлемый буфер, например фосфатно-солевой буфер, раствор Рингера и раствор декстрозы. Изделие может также включать другие вещества, желательные с точки зрения производителя и потребителя, в том числе другие буферы, растворители, фильтры, иглы, шприцы и листовку-вкладыш с инструкцией по применению. Следующие примеры представлены лишь в качестве иллюстрации и никоим образом не ограничивают область настоящего изобретения. Пример 1. Синтез пептида. Синтез пептидов осуществляют на Rapp AM RAM Fmoc-амидной полистирольной смоле (RappPolymere Tubingen, Germany) (замещение 0,6-0,7 ммоль/г). Синтез осуществляют с помощью стратегии с применением Fmoc защитной группы основной цепи. Кроме того, реакционноспособной может быть любая боковая цепь аминокислоты, которая является ароматической, кислотной, основной или высокополярной. Боковые цепи должны быть также защищены для предотвращения образования нежелательных боковых цепей. Для этой цели применяют четыре основные группы:Trt (трифенилметильная группа) для Gln, His и Asn. Применяют производные боковой цепи аминокислоты: Arg(Pbf), Asn(Trt), Asp(OtBu), Cys(Trt),Gln(Trt), Glu(OtBu), His(Trt), Lys(Boc), Ser(OtBu), Trp(Boc). Реакцию сочетания проводят примерно с 10 экв. аминокислоты, активированной диизопропилкарбодиимидом (DIC) и гидроксибензотриазолом(HOBt) (молярное соотношение 1:1:1) в диметилформамиде (DMF). Защитную группу Fmoc аминокислоты в положении 1 сохраняют, что позволяет осуществить селективное конъюгирование боковой цепи лизина (см. пример 2 ниже). Сопутствующее отщепление от смолы и удаление защитных групп боковых цепей проводят в растворе, содержащем трифторуксусную кислоту:триизопропилсилан:метанол:анизол в соотношении 90:5:2,5:2,5 в течение 1,5-2 ч при комнатной температуре. В результате отсоединения пептида от амидной смолы образуется пептид с С-концевым карбоксамидом. Пептиды осаждают с диэтиловым эфиром,затем растворяют в 30-40 мл 10% ацетонитрила и очищают на С 18-колонке путем обращенно-фазовой ВЭЖХ при скорости потока 12-15 мл/мин с линейным градиентом АВ, где А=0,05% ТФК/вода и В=0,05% ТФК/ацетонитрил. Используют либо колонки Waters SymmetryPrep 7 мкм, 19300 мм, либо колонки Kromasil 10 мкм, 22250 мм. Степень чистоты пептида и молекулярную массу подтверждают с помощью системы ЖХ-МС Agilent 1100 Series с одиночным квадрупольным МС-детектором. Разделение путем аналитической ВЭЖХ осуществляют с помощью Zorbax Eclipse XDB-C8, 5 мкм, 4,6 мм в.д.15 см колонки с линейным градиентом АВ 10-100% В в течение 15 мин, где А=0,05% ТФК/H2O и В=0,05% ТФК в 60:40 CH3CN:H2O и скоростью потока 1 мл/мин. Все пептиды очищают до степени чистоты 95%,и проверяют соответствие их молекулярной массы рассчитанному значению в пределах 1 а.е.м. Пример 2. Конъюгирование пептида. Неконъюгированный пептид с N-концевой группой Fmoc растворяют в 1 мл смеси вода/ацетонитрил 50/50 (36,8 мг, 4272,9 г/моль, 0,0086 ммоль). Берут 1,5-2 кратный молярный избытокmPEG-2 кДа NHS-эфира (NOF Sunbright ME-020AS) (39,7 мг, ср. MW 2280, 0,017 ммоль). Раствор пептида разбавляют 2 мл 40 мМ бората натрия, буфер рН 9,8 и 2 мл ацетонитрила и затем добавляют к раствору mPEG. Образующуюся смесь встряхивают на вортексе, затем перемешивают при комнатной температуре. Реакционную смесь проверяют путем аналитической обращенно-фазовой ВЭЖХ (способ описан в примере 1), и обычно через 20-30 мин после начала реакции анализ реакционной смеси показывает полное исчезновение пика, соответствующего пептиду (приблизительно около 14,5 мин), и возникновение-9 014696 пика, соответствующего конъюгату пептид-ПЭГ (примерно около 15,7 мин). Смесь охлаждают на сухом льду, добавляют 2 мл пиперидина для удаления N-концевой группы Fmoc. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем охлаждают на сухом льду и нейтрализуют 2 мл ледяной уксусной кислоты (конечный рН примерно 6-7). Аналитическая ВЭЖХ демонстрирует пик примерно около 13,2 мин, обусловленный аддуктом пиперидин-флуорен, и пик около 14,25 мин, обусловленный конъюгатом пептид-mPEG с удаленными защитными группами. Смесь разбавляют примерно до 40 мл водой и очищают либо с помощью Waters SymmetryPrep 7 мкм, 19300 мм, либо Kromasil 10 мкм,22250 мм при скорости 12 мл/мин с 2-ступенчатым линейным градиентом АВ от 0 до 30% В в течение 20 мин, затем 30-80% В в течение 100 мин, где А=0,05% ТФК/вода и В=0,05% ТФК/ацетонитрил. Объединенные фракции, содержащие продукт, лиофилизируют с получением пептида в виде трифторацетатной соли. Продукт можно впоследствии преобразовать в другую необходимую соль согласно способам, известным в данной области. Количество очищенного пептида измеряют при оптической плотности УФ при 280 нм с использованием коэффициента молярной экстинкции, рассчитанного на основании последовательности пептида. Среднее значение MW конъюгата (ср. PEG-NHS MW+Fmocпептид MW-Fmoc MW-NHS MW)=2280+4273-115-222=6216. Для примера, при наличии 36,8 мг неконъюгированного пептида можно получить 34,8 мг пегилированного пептида. Конъюгирование других пептидов, описанных в настоящем изобретении, с использованием mPEG-NHS-эфира выполняют, по существу, как описано выше. Все данные в примерах, представленных ниже, относятся к соединениям настоящего изобретения,представляющим собой пептиды с амидной группой на С-конце, которые конъюгированы с mPEG по остатку Lys в положении 26 пептидного остова согласно изобретению, и представляют собой трифторацетатные соли (см., например, SEQ ID NO: 1-5). Пример 3. Анализ индукции цАМФ in vitro. Клетки SaOS-2 ресуспендируют при плотности 5105 клеток/мл в стимулирующем буфере [1 МHEPES/10% БСА/250 мкМ IBMX (3-изобутил-1-метилксантин, MP Biomedicals)/HBSS]. В лунки 96-луночного планшета с непрозрачными черными стенками (Costar) добавляли по 20 мкл/лунку суспензии клеток с получением 1104 клеток/лунку. Затем к клеткам сразу же добавляют 20 мкл разбавленного тестируемого соединения (например, аналога РТН настоящего изобретения, n=2). Готовят 1/2log-разведения тестируемого соединения и выполняют анализ в диапазоне концентрации 3 мкМ-0,1 нМ. Планшеты инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Отдельный 96-луночный планшет также используют для получения стандартной кривой цАМФ. Готовят 1/2 log-разведения стандарта цАМФ в стимулирующем буфере в диапазоне концентраций 400-0,0012 пмоль/лунку (40 мкл/лунку) (n=6). После инкубации в течение 1 ч анализировали содержание цАМФ с использованием набора HTRF (гомогенная флуоресценция с разрешением во времени) для анализа динамики цАМФ 2 (Cisbio) согласно инструкциям изготовителя. При тестировании следующих соединений, по существу, как описано выше, было показано, что они индуцируют производство цАМФ, как указано в табл. 1. Эти данные демонстрируют, что такие соединения обладают высокой способностью активировать рецептор РТН (PTHR1) способом, в значительной степени схожим с РТН. Таблица 1 Пример 4. Оценка конъюгированных соединений in vivo. А. Молодые крысы с остеопеническим синдромом, претерпевшие овариэктомию. Самкам крыс Sprague-Dawley в возрасте около 3 месяцев удаляли яичники, за исключением контрольных особей с имитацией операции (sham) и содержали их при 12-часовом цикле день/ночь при в 22 С без ограничения доступа к пище (TD 89222 с 0,5% Са и 0,4% Р, Teklad, Madison, WI) и воде. Крыс,претерпевших овариэктомию (Ovx), оставляли для потери костной массы в течение 25 дней, затем взвешивали и случайным образом распределяли по тестируемым группам. Обработку осуществляли путем подкожной инъекции соединения по настоящему изобретению в различных дозах (как указано в табл. 2) в течение 1 месяца в наполнителе 20 мМ NaH2PO4 в 0,9% NaCl, 3 мг/мл маннит, рН 5. Крысам вводили соединения каждый 3- или 4-й день, чтобы аппроксимировать еженедельную инъекцию человеку.- 10014696 Контрольным особям sham и Ovx вводили только наполнитель ("sham-контроли, получающие наполнитель" и "ovx-контроли, получающие наполнитель"). Сыворотку собирали путем сердечной пункции примерно через 24 ч после заключительной инъекции под анестезией с помощью изофлурана при аутопсии (примерно через 24 ч после заключительной инъекции) и анализировали ее с помощью клинического химического анализатора (Hitachi 917, Tokyo, Japan). При аутопсии извлекали левое бедро, отделяли от мягких тканей и помещали в 50% этанол/солевой раствор при 4 С. При комнатной температуре бедро в 50% EtOH/солевом растворе обворачивали парафильмом и выравнивали по центру относительно гентри для количественной компьютерной томографии(ККТ) (Research M, Stratec). Перед 3D-анализом сначала получали 2D фронтальную первичную сканограмму дистального метафиза бедренной кости. Анализировали параметры ККТ, включающие минеральную плотность кости (МПК, мг/мл гидроксилапатита), минеральное содержание кости (МСК, мг гидроксилапатита) и площадь поперечного сечения (мм 2), как описано подробно ранее (Sato, et al., JPET,272:1252-1259, 1995). В настоящем изобретении гиперкальцемию определяют как верхнее значение 97,5 перцентиля кальция в сыворотке у контрольных особей, претерпевших овариэктомию, получающих наполнитель, с использованием данных клинической химии и сыворотки, взятой посредством пункции сердцаedition, Burtis CA and Ashwood ER, editors, 2001, p. 251-261). Значение, соответствующее 97,5 перцентилю, составляет 11,2 мг кальция на 1 дл сыворотки для ovx-контролей, получающих наполнитель. "Гиперкальцемическую дозу", т.е. дозу, при которой гиперкальцемия наблюдается через 24 ч после инъекции тестируемого соединения, на основании данных клинической химии и сыворотки, взятой посредством пункции сердца, определяют путем интерполяции с использованием регрессионного анализа для определения зависимости доза-ответ, наблюдаемой через 24 ч после введения тестируемого соединения крысам, претерпевшим овариэктомию. Овариэктомия приводит к значительному снижению МПК у крыс, по сравнению с контрольными особями с симулированной операцией (sham), получающими только наполнитель, в течение периода 7,5 недель (период 3,5 недели перед обработкой/введением и 4 недели периода обработки/введения) (Satoet al. J. Med. Chem. 42:1-24, 1999). Пегилированные соединения по настоящему изобретению способны восстанавливать МПК до уровня, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель к концу 4-недельного периода обработки/введения. Для предпочтительных пегилированных соединений настоящего изобретения, протестированных в данной системе анализа, доза, необходимая для значения МПК до уровня sham-контролей, получающих наполнитель ("доза МПК"), не превышает гиперкальцемическую дозу. При проведении анализа, по существу, как описано выше, соединения, указанные в табл. 2,способны восстановить МПК у ovx-крыс до уровня sham-контролей, получающих наполнитель, после 4 недель обработки с использованием конкретной дозы; но для индукции гиперкальцемической дозы необходима аналогичная или более высокая доза соединения. Факторы, влияющие на соотношение гиперкальцемическая доза/доза МПК, включают, но не ограничены перечисленными, последовательность аминокислот пептидного остова и положение аминокислоты, к которой присоединен ПЭГ. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению, протестированные в данной системе анализа, характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза МПК, равным или превышающим примерно 1,0,как показано в табл. 2. Таблица 2 Доза, необходимая для восстановления МПК до уровня sham-контролей в данной системе анализа (определенная путем интерполяции с использованием регрессионного анализа).+ Доза, при которой через 24 ч после введения тестируемого соединения наблюдается гиперкальцемия в данной системе анализа (определенная путем интерполяции с использованием регрессионного анализа). Означает, что указанная доза представляет собой наиболее высокую протестированную дозу и что гиперкальцемия в соответствии с определением в данном описании не была достигнута при указанной дозе.- 11014696 В. Взрослые крысы с остеопеническим синдромом, претерпевшие овариэктомию. В этом примере оценивали способность пегилированных соединений увеличивать биомеханическую прочность кости, МПК и МСК у крысы, претерпевших овариэктомию (Ovx) до уровня, характерного для контрольных особей с симулированной операцией (sham), получающих наполнитель. Предполагается, что эффект соединения на биомеханическую прочность кости является лучшим показателем клинической эффективности по сравнению с МПК. МПК является лишь косвенным показателем клинической эффективности терапии остеопороза для снижения риска перелома позвоночника (Cummings, et al. Am.Journal of Medicine, 112:281-289, 2002; Sarkar et al. J. BoneMineral Research, 17:1-20, 2002). Поскольку РТН (1-34) снижает риск перелома позвоночника и других типов костей (Neer et al. NEJM, 344:1434-1441,2001), эффективность соединений настоящего изобретения тестировали на способность увеличивать биомеханическую прочность кости в поясничном позвонке и в двух областях костей другого типа, а именно промежуточной области бедренной кости и шейки бедра. Самкам крыс Sprague-Dawley в возрасте около 6 месяцев удаляли яичники, за исключением контрольных особей с симулированной операцией (sham), и содержали их при 12-часовом цикле день/ночь при в 22 С без ограничения доступа к пище (TD 89222 с 0,5% Са и 0,4% Р, Teklad, Madison, WI) и воде. Крыс, претерпевших овариэктомию, оставляли для потери костной массы в течение 1 месяца перед обработкой соединениями настоящего изобретения в течение 2 дополнительных месяцев. Тестируемые соединения вводили подкожно в различных дозах (как указано в табл. 3) в наполнителе 20 мМ NaH2PO4 в 0,9% NaCl, 3 мг/мл маннит, рН 5 каждые 6 или 7 дней в течение 2 месяцев. Контрольным особям sham иOvx вводили только наполнитель ("sham-контроли, получающие наполнитель" и "ovx-контроли, получающие наполнитель"). Сыворотку собирали путем сердечной пункции под анестезией с помощью изофлурана при аутопсии и анализировали с использованием клинического химического анализатора. Поясничный позвонок L4-6 и левую бедренную кость удаляли, отделяли от мягких тканей и помещали в 50% этанол/солевой раствор при 4 С. При комнатной температуре, L-5 в 50% EtOH/солевом растворе обворачивали парафильмом и выравнивали по центру относительно гентри для ККТ (Research M, Stratec). Перед 3D-анализом получали фронтальную первичную сканограмму позвонка L-5 в 2D. Анализируемые параметры ККТ включали МПК (мг/сс), ВМС (мг) и площадь поперечного сечения (мм 2). Затем готовили препараты поясничного позвонка L-5 промежуточной области бедренной кости и проксимальной бедренной кости для биомеханического исследования. Прочность (N) оценивали путем увеличения нагрузки на образец до перелома, как описано ранее (Sato, et al., Endocrinology, 10:4330-4337, 1997). Пегилированные соединения по настоящему изобретению тестировали в данном анализе относительно положительного контроля 3-5 мкг/кг/д РТН (1-38). Было показано, что РТН (1-34) и РТН (1-38) демонстрируют аналогичную эффективность по отношению к костям скелета или кальцемический эффект у крыс с остеопеническим синдромом, претерпевших овариэктомию. Ранее было показано, что крысы, которым вводили 5 мкг/кг/д (1 нмоль/кг/д) РТН (1-34), демонстрируют системный ответ, примерно в 3 раза превышающий таковой для РТН (1-34) (т.е. FORTEO) у человека (Tashjian and Chabner, J. BoneMiner Res, 17:1151-1161, 2002; Tashjian and Gagel, J. Bone Miner Res, 21:354-365, 2006). Ранее также было показано, что введение 5 мкг/кг/д РТН (1-34) восстанавливало МПК позвоночника у Ovx крыс до уровня,характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, на модели взрослых крыс с остеопеническим синдромом, претерпевших овариэктомию (Kishi et al. Bone 22:515-522, 1998; Kimmel et al.Endocrinology 132:1577-1584, 1993). В данной модели это было подтверждено для дозы РТН (1-38) 3-5 мкг/кг/д. Удаление яичников вызывало значительное снижение МПК, МСК и прочности кости по сравнению с sham-контролями, получающими наполнитель, в течение 3 месяцев у взрослых крыс. Соединения,представленные в табл. 3, проанализированные, по существу, как описано выше, вызывали восстановление МСК у Ovx-крыс до уровня, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, при введении в течение 8 недель при дозе, указанной в табл. 3. Кроме того, соединения, указанные в табл. 3,проанализированные, по существу, как описано выше, вызывали восстановление биомеханической прочности кости у Ovx-крыс до уровня, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, в одной, двух или трех проанализированных областях позвоночника, промежуточной области бедра или шейки бедра. Для некоторых предпочтительных соединений настоящего изобретения, протестированных в данной системе анализа, гиперкальцемию не наблюдали при увеличении дозы до максимального протестированного значения примерно 110 нмоль/кг. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению, протестированные в данной системе анализа, способны восстанавливать МПК и МСК до уровня,характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, и при этом также демонстрируют соотношение гиперкальцемическая доза/доза МПК, равное или превышающее примерно 1,0, 2,0, 3,0 или 4,0,или даже более предпочтительно превышающее примерно 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0 или более. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению, протестированные в данной системе анализа, способны восстанавливать МПК и МСК до уровня, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, при этом также восстанавливают биомеханическую прочность кости в одной или более области позвоночника, промежуточной области бедра и шейки бедра до уровня sham-контролей, получающих- 12014696 наполнитель. Еще более предпочтительно соединения по настоящему изобретению, протестированные в данной системе анализа, способны восстанавливать МСК и биомеханическую прочность кости в одной или более области позвоночника, промежуточной области бедра и шейки бедра до уровня shamконтролей, получающих наполнитель, при этом также демонстрируют соотношение гиперкальцемическая доза/доза МПК, равное или превышающее примерно 1,0, 2,0, 3,0 или 4,0 или даже более предпочтительно равное или более примерно 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0 или более. Соединения с SEQ ID NO: 4 с 2 кДа mPEG (средн. мол. масса) обеспечивают достижение уровня прочности, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, при дозе 11 нмоль/кг для позвоночника, промежуточной области бедра и шейки бедра, при отсутствии гиперкальцемического эффекта при наиболее высоких протестированных дозах. Таким образом, данные соединения характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза биомеханической прочности 10 для всех трех областей. Аналогично, соединение с SEQ ID NO: 1 с 2 кДа mPEG обеспечивает восстановление прочности позвоночника и шейки бедра до уровня, характерного для sham-контролей, получающих наполнитель, при дозе 11 нмоль/кг, при отсутствии гиперкальцемического эффекта при наиболее высоких протестированных дозах и, таким образом, характеризуется соотношением гиперкальцемическая доза/доза биохимической прочности 10 для этих двух областей. Эти данные свидетельствуют, что последовательность пептидного остова соединения по настоящему изобретению, а также размер mPEG, конъюгированного с пептидным остовом соединения, определяют эффективность по отношению к костям скелета (о чем свидетельствуют МПК, МСК и показатели прочности) соединения. Таблица 3+ Доза, при которой гиперкальцемия наблюдается в сыворотке через 24 ч после введения тестируемого соединения в системе анализа настоящего изобретения (определенная путем интерполяции с использованием регрессионного анализа). Означает, что указанная доза представляет собой наиболее высокую протестированную дозу и что гиперкальцемия в соответствии с определением в данном описании не была достигнута при указанной дозе.Доза, при которой достигается уровень минеральной плотности кости (МПК) позвоночника sham-контролей в используемой системе анализа.Доза, при которой достигается уровень минерального содержания кости (МСК) позвоночника shamконтролей в используемой системе анализа.Доза, при которой достигается прочность позвоночника, сравнимая со значением прочности позвоночника уsham-контроля и положительного контроля (3-5 мкг/кг/д РТН (1-38 (в контролях используемой системы анализа).Доза, при которой достигается прочность промежуточной области бедра, сравнимая со значением прочности у sham-контролей, получающих наполнитель, и положительного контроля 3-5 мкг/кг/д РТН (1-38).Доза, при которой достигается прочность шейки бедра, сравнимая со значением прочности у shamконтролей, получающих наполнитель, и положительного контроля 3-5 мкг/кг/д РТН (1-34). В табл. 4 указаны соотношения, рассчитанные на основе значений, представленных в табл. 3. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/МПК позвоночника в данной системе анализа около 1,0 или более, более предпочтительно равным или более 3, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза МСК позвоночника в используемой сис- 13014696 теме анализа около 3,0 или более, более предпочтительно более 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза прочности позвоночника в используемой системе анализа около 1,0 или более, более предпочтительно 3,5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза прочности промежуточной области в используемой системе анализа около 1,0 или более, более предпочтительно более 3, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Предпочтительные соединения изобретения характеризуются соотношением гиперкальцемическая доза/доза прочности шейки бедра в используемой системе анализа около 3,0 или более, более предпочтительно около 5, 6, 7,8, 9 или 10 или более. Таблица 4 Пример 5. Соединение по настоящему изобретению с последовательностью SEQ ID NO: 1, где mPEG, с которым он конъюгирован, представляет собой 2 кДа mPEG, непосредственно сравнивают с соединением настоящего изобретения с SEQ ID NO: 1, в котором mPEG, с которым он конъюгирован, представляет собой 5 кДа mPEG. Взрослых крыс с остеопеническим синдромом, претерпевших овариэктомию, оставляли для потери кости в течение 1 месяца перед введением (нмоль/кг в табл. 5 и 6) каждые 6 дней только наполнителя, или 2 кДа-пегилированного соединения SEQ ID NO: 1, или 5 кДа-пегилированного соединения SEQ ID NO: 1 в течение 8 недель. В табл. 5 указано среднее содержание кальция в сыворотке(мг/дл) через 24 после введения. В табл. 6 указано среднее значение МПК (мг/сс). При введении любого из соединений через 24 ч после введения в сыворотке животных наблюдали нормальный уровень кальция. Однако соединение с 2 кДа mPEG оказывало меньший эффект на уровень кальция в сыворотке, при этом оказывало больший эффект на МПК костей скелета при низких, средних и высоких дозах по сравнению с соединением с 5 кДа mPEG. Эти данные демонстрируют, что 2 кДа-пегилированное соединение подобно 5 кДа-пегилированному соединению в его действии на кости скелета и при этом оказывает меньший эффект на содержание кальция в сыворотке. Таблица 5 Содержание кальция в сыворотке (мг/дл) Пример 6. РТН (1-34) у взрослых крыс с остеопеническим синдромом, претерпевших овариэктомию. Крыс Sprague-Dawley в возрасте 6 месяцев, претерпевших овариэктомию, содержали при цикле 12 ч день/ночь при 22 С без ограничения доступа к пище (TD 89222 с 0,5% Са и 0,4%Р, Teklad, Madison, WI) и воде. Крыс, претерпевших овариэктомию, оставляли для потери кости на 1 месяц, после чего вводили им rhPTH (1-34) в течение последующих 3 месяцев. Взрослым крысам с остеопеническим синдромом,претерпевшим овариэктомию, инъецировали подкожно 0, 10 или 30 мкг/кг РТН (1-34) человека еженедельно в течение 12 недель. sham- и ovx-контрольным особям вводили только наполнитель. Поясничный позвонок удаляли при аутопсии и анализировали путем микро-КТ (Stratec) и затем готовили к биомеханическому исследованию. Значение прочности в ньютонах (Н) оценивали путем увеличения нагрузки на образец до перелома. Статистическая значимость различий по сравнению с ovx-контролями, получающими только наполнитель, обозначенав табл. 7 (Fishers PLSD, Р 0,05). Данные моделирования приведены в табл. 7. По сравнению с Ovx-контролями, получающими наполнитель, РТН (1-34) при дозе до 30 мкг/кг(7 нмоль/кг) не оказывал значимого эффекта на МПК позвоночника или биомеханическую прочность позвоночника у крыс с остеопеническим синдромом после 12 недель обработки. Содержание кальция соответствовало норме при измерении через 24 ч вскоре после введения последней дозы. По сравнению с данными, представленными в данном описании выше, соединения по настоящему изобретению демонстрировали наивысшие показатели МПК позвоночника и биомеханической прочности позвоночника в сравнении с еженедельным введением РТН (1-34). Таблица 7 Эффективность по отношению к скелету при еженедельном введении РТН (1-34) Пример 7. Интернализация рецептора РТН. Кинетику интернализации PTHR1 (рецептора РТН 1) для соединений настоящего изобретения определяли после связывания лиганда с мембранным рецептором. Клетки HEK 293 трансфицировали плазмидой PTHR-emGFP (Invitrogen). Клетки рассевали при плотности 7000 клеток/лунка по 100 мкл/лунка в 96-луночный планшет с непрозрачными черными стенками и с прозрачным дном, покрытый поли-D-лизином. Через 24 ч после рассева клеток в 96-луночный планшет к клеткам добавляли по 10 мкл тестируемого соединения в конечной концентрации 100 нМ на различных временных интервалах - от 0 мин до 3 ч. Среду аспирировали на конечной стадии добавления соединения. Клетки фиксировали с помощью 100 мкл Prefer (Anatech, BattleCreek, MI) в течение 30 мин. Prefer аспирировали из клеток, клетки промывали 3 раза 100 мкл 1 ХФСБ. Клетки окрашивали 100 мкл разбавленного окрашивающего ядра красителя Хехста (разбавленный в 1 ХФСБ) в течение 30 мин. Краситель Хехста аспирировали и заменяли 1 ХФСБ. Планшеты хранили в- 15014696 темноте при 4 С перед сканированием. Сканирование клеток осуществляли в пределах 48 ч с использованием Cellomics ArrayScan. Репрезентативные данные, полученные для различных временных интервалов, выраженные в процентах относительно контрольных образцов, к которым добавляли только наполнитель (базовая линия = 100%), представлены в табл. 8. Таблица 8 Эти данные свидетельствуют о том, что соединения по настоящему изобретению характеризуются кинетикой интернализации, значительно отличающейся от таковой для РТН (1-38), в зависимости от последовательности остова пептида, наличия или отсутствия пегилирования и размера ПЭГ. Следует отметить, что непегилированные молекулы имеют указанную последовательность остова, за исключением того, что содержат остаток лизина в положении 26. Более медленная кинетика интернализации свидетельствует об уменьшении скорости интернализации рецептора PTHR1 при формировании комплекса лиганд-PTHR1 рецептор с использованием соединений настоящего изобретения, что приводит к более высокой интенсивности сигнального каскада в клетке после связывания лиганда. Вероятно, это отчасти объясняет повышение эффективности по отношению к скелету, наблюдаемое для форм соединений согласно изобретению с 2 кДа-ПЭГ при еженедельном введении, по сравнению с еженедельным введением РТН. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение, имеющее последовательностьmPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да; или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, имеющее последовательность аминокислот где mPEG представляет собой монометоксиполиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 1500 до 5500 Да; или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Промежуточное соединение, имеющее последовательность, выбранную из группы, включающейSEQ ID NO: 8-12. 6. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, отличающееся тем,что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000-5000 Да. 7. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, отличающееся тем,что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 Да. 8. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или эксципиентом. 9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000-5000 Да. 10. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 Да. 11. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. 12. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в индукции образования кости у млекопитающего. 13. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения заболевания или патологического состояния, при котором образование новой кости и/или увеличение массы кости и биомеханической прочности кости оказывает благоприятное терапевтическое действие на млекопитающее, включающего остеопороз, остеопению, перелом кости, спондилодез, имплантацию кости, имплантацию сустава, имплантацию зуба и пародонтоз. 14. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения остеопороза у млекопитающего. 15. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для предотвращения остеопороза или остеопении у млекопитающего.- 17014696 16. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения для лечения перелома кости у млекопитающего. 17. Соединение по любому из пп.11-16, отличающееся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000-5000 Да. 18. Соединение по любому из пп.11-16, отличающееся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 Да. 19. Соединение по любому из пп.11-16, отличающееся тем, что млекопитающее представляет собой человека. 20. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения заболевания или патологического состояния, которое можно улучшить или предотвратить путем индукции образования кости. 21. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения патологического состояния, при котором образование новой кости и увеличение массы кости и биомеханической прочности кости оказывают благоприятное терапевтическое действие на млекопитающее, включающего остеопороз, остеопению, перелом кости,спондилодез, имплантацию кости, имплантацию сустава, имплантацию зуба и пародонтоз. 22. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения остеопороза или остеопении у млекопитающего. 23. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для предотвращения остеопороза или остеопении у млекопитающего. 24. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для применения для лечения перелома кости у млекопитающего. 25. Применение по любому из пп.20-24, отличающееся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000-5000 Да. 26. Применение по любому из пп.20-24, отличающееся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 Да. 27. Применение по любому из пп.20-24, отличающееся тем, что млекопитающее представляет собой человека. 28. Способ лечения заболевания или состояния, которое улучшается или предотвращается при индукции образования новой кости, включающий введение человеку эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли. 29. Способ лечения состояний, при котором образование новой кости и/или увеличение костной массы и биомеханической прочности кости оказывает благоприятное действие у млекопитающего, при этом указанное заболевание или состояние включает остеопороз, остеопению, перелом кости, спондилодез, имплантацию кости, имплантацию суставов, имплантацию зуба и парадонтоз, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли. 30. Способ лечения остеопороза или остеопении у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли. 31. Способ профилактики остеопороза или остеопении у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком воздействии, эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли. 32. Способ лечения перелома кости у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли. 33. Способ по любому из пп.28-32, отличающийся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000-5000 Да. 34. Способ по любому из пп.28-32, отличающийся тем, что mPEG имеет среднюю молекулярную массу примерно 2000 Да. 35. Способ по любому из пп.28-32, где млекопитающим является человек.