Ингибиторы γ-секретазы

Настоящее изобретение относится к соединению, которое обладает превосходным действием,направленным на ингибирование -секретазы и специфическое ингибирование продуцированияA. Настоящее изобретение относится к соединению формулы (1) или к его фармацевтически приемлемой соли где R1 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, или фенильную группу; R2 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена одной или несколькими фенильными или галогенфенильными группами; R3 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая содержит одну или несколько гидроксильных групп; R4 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; и символозначает хиральный центр.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: КАБУСИКИ КАЙСЯ ЯКУЛТ ХОНСА 017495 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к соединению, ингибирующему -секретазу, т.е. протеиназу, которая действует на амилоидные белки-предшественники, в результате чего продуцируются амилоидные белки, или к его фармацевтически приемлемой соли и к фармацевтическому средству, содержащему указанное соединение. Уровень техники За последние годы в связи с прогрессированием старения населения число пациентов, страдающих деменцией типа Альцгеймера, заметно возросло и стало социальной проблемой. Считается, что развитие деменции типа Альцгеймера тесно связано с процессом агрегации и аккумуляции, сопровождающимся повышением уровня продуцирования или снижением уровня разложения амилоидных -белков (далее обозначаемых А), которые являются основными составляющими старческих бляшек, образующихся в головном мозге у пациентов. Белки А состоят из 40-42/43 аминокислот, преимущественно гидрофобных аминокислот, и продуцируются из их амилоидного белка-предшественника (далее обозначаемого АРР) в результате гидролитического расщепления. Кроме того, АРР существует в трех изоформах: АРР, состоящего из 695 аминокислот (далее обозначаемого АРР 695), АРР, состоящего из 751 аминокислот (далее обозначаемого АРР 751), и АРР, состоящего из 770 аминокислот (далее обозначаемого АРР 770). Продуцирование А из АРР осуществляется посредством двухстадийной реакции, первой стадией которой является расщепление -секретазой у N-конца внеклеточного домена и второй стадией которой является расщепление -секретазой у С-конца трансмембранной области. Полученные ранее данные дают основание предположить, что расщепление на второй стадии происходит у С-конца -сайта А. Однако данные, полученные совсем недавно, показали, что расщепление-секретазой происходит возле цитоплазмы, т.е. в 5-10 аминокислотных остатках -сайта (для АРР 770,Thr719-Leu720 или Leu720-Val721), которые расположены ниже (в направлении С-конца) от -сайта. Известными в настоящее время ингибиторами -секретазы являются, например, пептидомиметикDFK-167, полученный на основе -сайта субстрата АРР для данного фермента (непатентный документ 1); соединение L-685458, идентифицированное среди известных ингибиторов (непатентный документ 2); JLK6 (непатентный документ 3) и пептидомиметик, полученный на основе -сайта (патентный документ 1). Однако DFK-167 представляет собой ингибитор, предназначенный для воздействия на -сайт. Поэтому мишень, на которую он направлен, и его структура полностью отличаются от мишени и структуры, идентифицированных исходя из недавно полученных данных о -сайте. Таким образом, недостаткомDFK-167 является его слабое ингибирующее действие. Более того, L-685458 и ингибитор -химотрипсина JLK-6, которые были синтезированы в ходе разработки терапевтических лекарственных средств для лечения СПИД'а, и изначально не были получены как соединения, являющиеся специфическими ингибиторами продуцирования А из АРР под действием-секретазы. Поэтому они являются недостаточно эффективными для данной ткани-мишени, и недостаток таких ингибиторов заключается в том, что их неспецифическое ингибирование -секретазной активности может вызывать серьезные побочные эффекты, такие как индуцирование злокачественного перерождения клеток. Кроме того, в патентном документе 1 описано соединение типа Thr-Leu-Val-Met, представляющее собой пептидомиметик, полученный на основе -сайта. Однако недостатком этого соединения является его неэффективное ингибирующее действие. Примером, описанным в данном документе, является соединение типа Thr-Leu-Val-Met (1'a), имеющее гидроксильную группу в Thr, этерифицированную третбутиловым эфиром. Однако такое соединение представляет собой просто синтетическое промежуточное соединение и неполное соединение типа Thr-Leu-Val-Met. В дополнение, соединение типа Thr-Leu-Val-Met, имеющее незащищенную гидроксильную группу в Thr и являющееся специфическим ингибитором действия -секретазы, не было до сих пор известно. Патентный документ 1: WO 03/091278. Непатентный документ 1: J. Med. Chem., 1998, 41 (1), 6-9. Непатентный документ 2: Biochemistry, 2000, 39 (30), 8698-8704. Непатентный документ 3: J. Biol. Chem., 1979, 254 (10), 4027-4032. Описание настоящего изобретения Проблемы, решаемые с помощью настоящего изобретения Таким образом, задачей настоящего изобретения является получение нового соединения, которое представляет собой в высокой степени эффективный ингибитор -секретазы и специфически ингибирует продуцирование А. Другой задачей настоящего изобретения является разработка терапевтического лекарственного средства и терапевтического способа и т.п., которые могут быть использованы при лечении болезни Альцгеймера и заболеваний, ассоциированных с болезнью Альцгеймера. В данном контексте заболеваниями, ассоциированными с болезнью Альцгеймера, являются синдром Дауна или другие заболевания,-1 017495 которые, как известно или как предполагается, вызываются прямым или опосредованным действием А,а также заболевания, при которых пораженные нервные клетки содержат детектируемый А. Способы решения указанных проблем Настоящее изобретение было разработано на основе данных, полученных в результате применения патентноспособных способов, которые были направлены на изучение -сайта АРР, исходя из результатов, полученных из ранее проведенных исследований, и которые показали, что сильное и эффективное ингибирующее действие на -секретазу и на продуцирование А достигается с использованием пептидомиметика, имеющего конкретную структуру, которая аналогична химической структуре последовательности, состоящей из четырех аминокислот (Thr-Leu-Val-Met) и содержащей -сайт АРР, и в которой пептидная связь между Thr и Leu в -сайте ферментативного расщепления заменена связью, устойчивой к действию данного фермента. В частности, настоящее изобретение относится к соединению нижеследующей формулы (1) или к его фармацевтически приемлемой соли где R1 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, или фенильную группу; R2 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена одной или несколькими фенильными или галогенфенильными группами; R3 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая содержит одну или несколько гидроксильных групп; R4 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; и символозначает хиральный центр. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическому средству, содержащему соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к ингибитору -секретазы, содержащему соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к ингибитору продуцирования амилоидного белка, содержащему соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к средству для лечения или предотвращения заболевания,ассоциированного с действием -секретазы, где указанное средство содержит соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли для получения ингибитора -секретазы, ингибитора продуцирования амилоидного белка или средства для лечения или предотвращения заболевания, ассоциированного с действием секретазы. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования действия -секретазы, к способу ингибирования продуцирования амилоидного белка или к способу лечения или предотвращения заболевания, ассоциированного с действием -секретазы, где указанные способы включают применение соединения формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли. Осуществление настоящего изобретения Соединение настоящего изобретения и его фармацевтически приемлемая соль могут быть использованы для предотвращения/лечения болезни Альцгеймера и заболеваний, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, например синдрома Дауна или других заболеваний, которые, как известно или как предполагается, вызываются прямым или опосредованным действием А, а также заболеваний, при которых пораженные нервные клетки содержат детектируемый А. Кроме того, соединение настоящего изобретения и его фармацевтически приемлемая соль обладают активностью, направленной на специфическое ингибирование продуцирования А, и могут быть использованы для эффективного и безопасного лечения или предотвращения указанных заболеваний. Наилучший способ осуществления изобретения В соответствии с настоящим изобретением соединение формулы (1) содержит по меньшей мере пять хиральных центров (в формуле хиральный центр обозначен символом ) и может существовать в различных энантиомерных или диастереомерных формах, поскольку такие хиральные центры могут приобретать R- и S-конфигурации. Рацемические смеси таких соединений, а также все оптические изомеры и все их стереоизомеры, существующие в виде отдельных энантиомеров/диастереомеров и в виде-2 017495 их смесей, входят в объем настоящего изобретения. Примерами изомеров являются (2R,4R)-, (2R,4S)-,(2C,4R)- и (2 С,4S)-изомеры. (2R,4R)-изомер является особенно предпочтительным с точки зрения его способности к сильному ингибированию действия -секретазы и к специфическому ингибированию продуцирования А. В настоящем изобретении R1 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода, или фенильную группу. Примерами прямых или разветвленных алкильных групп, имеющих от 1 до 4 атомов углерода, являются метильная, этильная, пропильная, изопропильная, н-бутильная, втор-бутильная и трет-бутильная группы. Особенно предпочтительно R1 представляет собой метильную, изопропильную или фенильную группу. В настоящем изобретении R2 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена одной или несколькими фенильными или галогенфенильными группами. Примерами прямых или разветвленных алкильных групп, имеющих от 1 до 4 атомов углерода, являются метильная, этильная, пропильная, изопропильная, н-бутильная,втор-бутильная и трет-бутильная группы. В частности, предпочтительной является метильная, этильная или н-бутильная группа. Кроме того, предпочтительными примерами прямых или разветвленных алкильных групп, имеющих от 1 до 4 атомов углерода, которые могут быть замещены одной или несколькими фенильными группами, являются бензильная и 1-фенилэтильная группы. Примерами атомов галогена в галогенфенильных группах являются фтор, хлор, бром и йод. При этом предпочтительным является фтор. Одним из предпочтительных примеров прямой или разветвленной алкильной группы, имеющей от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена галогенфенильными группами, является 4-фторбензильная группа. В настоящем изобретении R3 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена одной или несколькими гидроксильными группами. Конкретными примерами являются 1-гидроксиэтильная и гидроксиметильная группы. В частности, предпочтительной является 1-гидроксиэтильная группа. В настоящем изобретении R4 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода. Конкретными примерами являются изобутильная и втор-бутильная группы. В частности, предпочтительной является изобутильная группа. В настоящем изобретении соединение нижеследующей формулы (2) или его фармацевтически приемлемая соль являются более предпочтительными с точки зрения их способности к сильному ингибированию действия -секретазы и к специфическому ингибированию продуцирования А где R1, R2, R3 и R4 являются такими, как определено выше. В соответствии с настоящим изобретением соединение формулы (3) или его фармацевтически приемлемая соль являются еще более предпочтительными с точки зрения их способности к сильному ингибированию действия -секретазы и специфическому ингибированию продуцирования А где R1 и R2 являются такими, как определено выше. В соответствии с настоящим изобретением особенно предпочтительными являются следующие соединения и их фармацевтически приемлемые соли: бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4S,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-Lвалил-L-метионина (TLVM-5),н-бутиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]L-валил-L-метионина (TLVM-7),(S)метилбензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)-3 017495 гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-8),4-фторбензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-9),бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-Lаланил-L-метионина (TLVM-10) и бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-Lфенилглицил-L-метионина (TLVM-11). В настоящем изобретении примерами фармацевтически приемлемых солей являются кислотноаддитивные соли, такие как гидрохлорид, сульфат, цитрат, тартрат, ацетат, метансульфонат, фосфат, оксалат, бензоат, трифторацетат, малеат, фумарат, лактат, бромат, йодат, сукцинат и глутарат; и соли металлов, такие как соли лития, соли натрия, соли калия и соли магния. В соответствии с настоящим изобретением термин "ингибитор продуцирования амилоидного белка" означает различные мембранные белки типа I, служащие в качестве субстратов для -секретазы; соединение, ингибирующее продуцирование А и не оказывающее ингибирующего действия на продуцирование других мембранных белков (например, человеческого алькадеина), используемых в качестве субстратов. Более конкретно, данный термин означает соединение, действие которого дает (i) уровень секреции А, составляющий 50% или менее, и (ii) уровень секреции алкадеина, составляющий 60% или более, соответственно, как было определено методами, описанными ниже (пример 11), и при этом отношение уровней (i)/(ii) составляет 0,8 или менее и более предпочтительно 0,4 или менее. В результате проводимых ранее тщательных исследований продуктов разложения АРР и в попытке создать соединение, которое по своей структуре аналогично -сайту и является стабильным к действию фермента, был получен пептидомиметик настоящего изобретения и было высказано предположение, что-секретазная активность может быть ингибирована путем стабилизации -сайта от действия фермента. Пептидомиметик настоящего изобретения может быть использован в качестве ингибитора, действующего не только на продуцирование А при спорадической болезни Альцгеймера, но и на продуцирование А, имеющего генетические изменения, вызывающие раннюю наследственную болезнь Альцгеймера. Из различных пептидных аналогов, в которых аминокислотная последовательность аналогична аминокислотной последовательности -сайта АРР и его окружению, и в которых аминокислотная последовательность модифицирована для стабилизации сайта расщепления -секретазой, в целях настоящего изобретения могут быть использованы соединения, ингибирующие -секретазную активность. Примерами таких соединений являются соединения, обладающие активностью, направленной на ингибирование-секретазы, в форме, при которой некоторые аминокислотные остатки -NH-CHR-CO- в окружении сайта заменены другими аминокислотными остатками, которые по своим свойствам (гидрофобности/гидрофильности, кислотности/основности, присутствию или отсутствию серы, присутствию или отсутствию гидроксильной группы и т.п.) аналогичны свойствам группы R. Примерами аминокислот, которые могут быть использованы для такой замены, являются Leu, Ile, Val, Ala и Gly; Thr, Serf-Met, Ala иVal, Leu, Ala, Gly, Ile, трет-бутилглицин, норлейцин, норвалин, фенилглицин и 2-аминомасляная кислота. Исходные вещества для синтеза соединения настоящего изобретения и методы, используемые на каждой стадии синтеза, хорошо известны в данной области. Поэтому специалисты в данной области смогут самостоятельно получить представляющее интерес соединение путем его синтеза, выделения, очистки и т.п. Кроме того, полипептидная часть в соединении настоящего изобретения может быть продуцирована методом рекомбинации генов с использованием хозяев, известных per se, например таких как Е.coli, дрожжи, Bacillus subtilis, клетки насекомых, клетки животных и клетки растений. Химический синтез может быть осуществлен, например, как описано ниже в примерах. Однако может быть применен любой метод при условии, что таким методом может быть получено представляющее интерес соединение. Такое соединение может быть получено с использованием соответствующей комбинации хорошо известных методов, таких как, например, реакция с использованием Boc (трет-бутоксикарбонила),ДМСО-окисление, щелочная реакция, кислотная реакция, эпоксидирование, хроматография на колонке с силикагелем, алкилирование, омыление, реакция с выделением тепла, декарбоксилирование, конденсация, высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой, ацилирование, реакция переноса группы, изомеризация, реакция метатезиса, реакция присоединения, окисление, восстановление,галогенирование, свободно-радикальная реакция, реакция сочетания, элиминация, нитрование и сульфирование. При этом предпочтительно выбирать метод, который включает последовательную реакцию взаимодействия частей структурных элементов соединения настоящего изобретения и проведение соответствующего анализа на эффективность и чистоту продуктов реакции. Соединение настоящего изобретения может содержать модификацию, облегчающую его синтез или очистку; модификацию, обеспечивающую его физическую/химическую стабилизацию; активирующую модификацию, такую как модификация, обеспечивающая метаболическую стабильность и нестабильность in vivo и метаболическое кондиционирование in vivo; и регулируемую модификацию, которая усиливает или ослабляет эффективность переноса молекулы в органы, включая переход через гематоэнцефалический барьер. В данном контексте регулируемая модификация представляет последовательность из-4 017495 11 аминокислот, Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg. Данное соединение, содержащее регулируемую последовательность, связанную пептидной связью с N-концом, может более легко проходить через гематоэнцефалический барьер и более эффективно достигать нужного участка в головном мозге. Примерами других модификаций соединения настоящего изобретения являются ацетилирование,ацилирование, АДФ-рибозилирование, амидирование, ковалентное связывание с флавином, ковалентное связывание с гемом, ковалентное связывание с нуклеотидом или нуклеотидным производным, ковалентное связывание с липидом или его производным, ковалентное связывание с фосфатидилинозитом, перекрестное связывание, циклизация, образование дисульфидных связей, деметилирование, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистина, образование пироглутамата, формилирование,-карбоксилирование, гликозилирование, GPI-заякоривание, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристоилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизация, связывание с липидом, сульфирование, селеноилирование, присоединение аминокислот к белкам, опосредуемое переносом РНК (например, аргинилирование), убихитинизация, дегидратирующая конденсация и алкоксикарбонилирование. Кроме того, для облегчения детектирования или очистки соединения настоящего изобретения или для сообщения ему дополнительных функций могут быть осуществлены присоединение, модификация и замена структуры, которые являются технически легко осуществимыми. Полученные продукты также входят в объем настоящего изобретения. В данном контексте продукты, полученные методами генной инженерии, такими как введение модификаций, меченных FLAG-меткой, -галактозидазой, щелочной фосфатазой, Fc-фрагментами иммуноглобулина (например, IgG) или GFP, также входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, при необходимости может быть получено антитело против соединения настоящего изобретения. Такое антитело может быть очищено путем скрининга соединения настоящего изобретения,его производного или продукта разложения и их применения в качестве антигена. Таким антигеном может быть соединение или его производное, которое состоит, например, из 4 или менее аминокислотных остатков, предпочтительно из 3 или менее аминокислотных остатков и еще более предпочтительно из 2 аминокислотных остатков. При очистке такие антигены могут быть объединены. Таким антигеном необязательно должно быть само соединение настоящего изобретения, его производное или продукты разложения, при этом необходимо только, чтобы таким антигеном было соединение, имеющее первичную последовательность, расположенную вблизи от -сайта АРР, который находится на поверхности трехмерной структуры. Тип и количество антитела не имеет конкретных ограничений, при условии, что такое антитело будет иммунологически связываться с указанным сайтом или распознавать данный сайт. Наличие или отсутствие связывания с антителом или распознавания антителом определяют с помощью реакции "антиген-антитело", известной в данной области. Антитело продуцируют с использованием соединения настоящего изобретения, его производного или продукта разложения, используемого в качестве антигена, и путем индуцирования гуморального и/или клеточно-опосредуемого иммунного ответа против одного антигена или его конъюгата, или антигена, взятого в комбинации с носителем в присутствии или в отсутствии адъюванта. Альтернативно, индуцирование иммунного ответа может быть также осуществлено путем иммунологической стимуляции лимфоцитов или клеток-предшественников в соответствующих условиях культивирования. Тип носителя не имеет конкретных ограничений при условии, что данный носитель не будет оказывать отрицательного воздействия на хозяина. Примерами таких носителей являются, но не ограничиваются ими, целлюлоза,физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстроза, вода, глицерин, этанол,полимеризованные аминокислоты, альбумин и их смеси. Предпочтительными животными, используемыми для иммунизации, являются мыши, крысы, кролики, козы, лошади, коровы и т.п. Поликлональные антитела получают в виде сыворотки методом, известным специалистам per se, или методом сбора антител из сыворотки. Предпочтительным примером таких методов является иммуноаффинная хроматография. Моноклональные антитела продуцируют путем забора ткани (например, селезенки или лимфоузлов) или культивированных клеток, содержащих антитела, у иммунизованных животных, и слияния этих клеток с иммортализованными клетками (например, миеломными штаммами, такими как штаммыP3X63Ag8), известными per se. Так, например, гибридомы, полученные из антителопродуцирующих клеток и иммортализованных клеток, клонируют и гибридомы подвергают скринингу для выявления гибридом, которые продуцируют антитело, специфически распознающее новое соединение настоящего изобретения. Антитело выделяют из культурального раствора гибридом. В качестве иллюстрации можно указать на различные описанные методы, например гибридомный метод (Kohler G. and Milstein С. (1975)et al., Monoclonal antibodies and cancer therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985): 77-96). Данное антитело может быть использовано для идентификации, детектирования или количественной оценки соединения настоящего изобретения, его производного или продукта разложения или для получения и очистки указанного соединения с помощью аффинной хроматографии. Антитело может-5 017495 быть преобразовано в человеческое антитело методом, известным per se. В частности, соединение настоящего изобретения, его производное или продукт разложения и направленное против них специфическое антитело, повышающее активность соединения настоящего изобретения, его производного или продукта разложения, могут быть использованы в качестве стандартов для скрининга соединений в качестве ингибиторов продуцирования А или в качестве средств для такого скрининга. Примерами анализов, проводимых с использованием антитела против соединения настоящего изобретения, его производного или продукта разложения, являются радиоиммуноанализ, анализ на конкурентное связывание, высокоэффективная жидкостная хроматография, вестерн-блот-анализ и анализELISA и их комбинации. Соединение настоящего изобретения используют для предотвращения, лечения и ослабления симптомов болезни Альцгеймера и родственных заболеваний путем введения пациенту соединения, взятого отдельно или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, в количестве, эффективном для лечения указанных заболеваний, проводимого путем регуляции количества продуцируемого А. Соединение настоящего изобретения может быть изготовлено в виде соответствующего препарата, повышающего эффективность транспорта указанного соединения в ткани головного мозга. В данном контексте примерами болезни Альцгеймера и родственных заболеваний являются болезнь Альцгеймера; болезнь Крейцфельда-Якоба; заболевание, вызываемые прионами; амиотрофический боковой склероз; прогрессирующий надъядерный паралич; травмы головы; удар; синдром Дауна; панкреатит; миозит, вызываемый тельцами включения; другие периферические амилоидозы и сахарный диабет. Соединения настоящего изобретения могут быть использованы как отдельно, так и в комбинации с двумя или более соединениями. Кроме того, соединение настоящего изобретения может быть использовано в комбинации с дополнительным соединением, обладающим терапевтической активностью. Такое дополнительное соединение может действовать по такому же механизму, как и соединение настоящего изобретения, или по другому механизму. Системной дозированной формой фармацевтической композиции, содержащей соединение настоящего изобретения, является предпочтительно инъекция и особенно предпочтительно внутривенная инъекция. Могут быть также применены и другие способы инъекции,такие как подкожная, внутримышечная и внутрибрюшинная инъекция. Другим способом системного введения является введение через слизистую или чрезкожное введение с использованием пенетранта,такого как соль желчной кислоты, фузидиновая кислота или другие поверхностно-активные вещества. Кроме того, пероральное введение может быть осуществлено с использованием препарата с энтеросолюбильным покрытием, или капсул, или т.п. Такие фармацевтические композиции могут быть введены местно и в форме мазей, паст, гелей и т.п. Доза пептидного аналога, используемого в качестве активного ингредиента ингибитора -секретазы настоящего изобретения, не является строго ограниченной. Предпочтительная подходящая доза может быть назначена самим специалистом, поскольку достигаемые эффекты варьируются в зависимости от способов введения конкретному индивидууму, от конкретного заболевания, подвергаемого лечению, и т.п. Такая доза предпочтительно составляет 0,01-100 г и более предпочтительно 0,1-10 г в день. Примерами таких препаратов являются твердые препараты, такие как таблетки, гранулы, порошки и капсулы; жидкие препараты, такие как растворы, суспензии и эмульсии; и лиофилизированные препараты. Указанные препараты могут быть получены в соответствии с обычной фармацевтической практикой. Примерами нетоксичных фармацевтических носителей являются крахмал, декстрин, глицерид жирной кислоты, полиэтиленгликоль, гидроксиэтилированный крахмал, этиленгликоль, сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты, аминокислоты, желатин, альбумин, вода и физиологический раствор. Кроме того, при необходимости могут быть включены соответствующие обычно используемые добавки, такие как стабилизаторы, увлажнители, эмульгаторы, связующие вещества, агенты, придающие тоничность, и эксципиенты. Кроме того, ингибитор -секретазы настоящего изобретения может быть использован не только в виде фармацевтического препарата, но также в виде пищевого продукта, или напитка, или подобного. В данном случае пептидный аналог настоящего изобретения может содержаться в пищевом продукте или в напитке отдельно или в виде смеси, в которую добавлены различные питательные вещества. Такой пищевой продукт или напиток может быть использован в качестве пищевой добавки или пищевого ингредиента, подходящего для ослабления симптомов и предотвращения перечисленных ниже заболеваний, и какого-либо другого воздействия на такие заболевания, как болезнь Альцгеймера; болезнь КрейцфельдаЯкоба; заболевание, вызываемое прионами; амиотрофический боковой склероз; прогрессирующий надъядерный паралич; травмы головы; инсульт; синдром Дауна; панкреатит; миозит, вызываемый тельцами включения; другие периферические амилоидозы; сахарный диабет и т.п. Такой пищевой продукт, или напиток, или контейнер, в котором они содержатся, может быть снабжен инструкцией, в которой указано, что он обладает действием, указанным выше. В частности, если ингибитор -секретазы настоящего изобретения изготовлен в виде пищевого продукта или напитка, то такой ингибитор -секретазы может быть изготовлен в форме, подходящей для его применения в пищевых продуктах, например в виде гра-6 017495 нул, порошков, таблеток, капсул и паст в соответствии с обычно применяемой технологией с использованием соответствующих добавок, подходящих для приготовления пищевых продуктов и напитков, и такой ингибитор может быть добавлен в различные пищевые продукты, такие как, например, мясо, прошедшее технологическую обработку (например, окорок и колбаса), морепродукты, прошедшие технологическую обработку (например, камабоко (паста из копченой рыбы) и чикуба (рыбные сосиски), хлеб,кондитерские изделия, сливочное масло, сухое молоко и ферементированные пищевые продукты и напитки, или в напитки, например в воду, фруктовые соки, молоко, безалкогольные напитки и чай. В данном контексте такими пищевыми продуктами или напитками может быть также корм или питье для животных. Кроме того, в качестве таких пищевых продуктов или напитков предпочтительно используются ферментированные молочные продукты, такие как кисломолочный продукт; напитки, приготовленные с добавлением молочно-кислых бактерий; ферментированное соевое молоко; ферментированные фруктовые соки и ферментированные овощные соки, содержащие пептидный аналог в качестве активного ингредиента. Такие ферментированные пищевые продукты и напитки могут быть приготовлены стандартным методом. Так, например, для приготовления кисломолочного продукта в стерилизованную молочную среду могут быть инокулированы молочно-кислые бактерии или бифидобактерии и культивированы, и полученную среду гомогенизируют с получением кисломолочной основы. Затем в основу добавляют отдельно приготовленный раствор сиропа и пептидный аналог и смешивают и образовавшуюся смесь гомогенизируют, используя гомогенизатор или т.п., в который добавляют ароматизатор, с получением конечного продукта. Полученный таким образом кисломолочный продукт может быть приготовлен в любой форме, такой как продукт без добавок, безалкогольный продукт, фруктовый сок с ароматизатором, твердый продукт и жидкий продукт. Кроме того, ингибитор -секретазы настоящего изобретения может быть использован для употребления в пищу всеми млекопитающими, включая человека. Примеры Ниже приводится более подробное описание настоящего изобретения со ссылками на примеры. Однако они не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение. Пример 1. Получение бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-4). Стадия 1. 3-Бензилоксикарбонил-2,2-диметил-4S-(N-метокси-N-метилкарбамоил)-5R-метилоксазолидин (соединение 1).(8,4 мл, 60 ммоль) и HOBtН 2 О (7,7 г, 50 ммоль) и смесь перемешивали при 40 С в течение 6 дней. К реакционной смеси добавляли этилацетат, органический слой промывали 1 н. хлористо-водородной кислотой, водой и водным раствором насыщенного бикарбоната натрия и затем сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток (12,4 г) растворяли в толуоле(250 мл). К раствору добавляли 2-метоксипропен (35 мл) и PPTS (0,39 г) и смесь перемешивали при 80 С в течение 2 ч. Толуол отгоняли. Затем к остатку добавляли хлороформ и органический слой промывали водным раствором насыщенного бикарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1-4:1), получением указанного в заголовке соединения(12,2 г, 36 ммоль, 80%). 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 1,36 и 1,40 (3 Н, 2 д, J=6 Гц), 1,60 и 1,68 (3 Н, 2 с), 1,62 и 1,71 (3 Н, 2 с), 3,02 (3 Н, с),3,24 и 3,26 (3 Н, 2 с), 4,15 и 4,22 (1 Н, 2 м), 4,39 и 4,57 (1 Н, 2 д, J=7 Гц), 4,92 и 5,12 (1 Н, 2 д, J=12 Гц), 5,09 и 5,20 (1 Н, 2 д, J=12 Гц), 7,28-7,38 (5 Н, м). Стадия 2. 3-Бензилоксикарбонил-2,2-диметил-4S-(4-пентеноил)-5R-метилоксазолидин (соединение 2). Соединение 1 (12,2 г, 36 ммоль) растворяли в ТГФ (170 мл). К раствору по каплям добавляли 3 бутенилмагнийбромид (0,5 моль/л раствора ТГФ, 130 мл, 65 ммоль) на ледяной бане, смесь перемешивали в течение 0,5 ч на ледяной бане и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. К реакционной смеси добавляли водный раствор лимонной кислоты, смесь перемешивали в течение 10 мин и затем экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=9:1-6:1), с получением указанного в заголовке соединения (6,9 г, 20,8 ммоль, 78%) и непрореагировавшего соединения 1 (3,14 г, 9,3 ммоль). 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 1,37 и 1,38 (3 Н, 2 д, J=5 Гц), 1,56 и 1,68 (3 Н, 2 с), 1,57 и 1,62 (3 Н, 2 с), 2,05-2,85-7 017495 мг), воду (105 мл) и уксусную кислоту (21 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин на ледяной бане. Затем добавляли KMnO4 (11,3 г, 71,4 ммоль) и смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. К реакционной смеси добавляли NaHSO3, затем рН указанной смеси доводили до 1-2 путем добавления водного раствора насыщенного бисульфата калия на ледяной бане. После экстракции хлороформом, органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1-CHCl3:МеОН=97:3), с получением указанного в заголовке соединения (5,2 г, 14,9 ммоль,83%) и непрореагировавшего соединения 2 (1,02 г, 3,1 ммоль). 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 1,38 и 1,41 (3 Н, 2 д, J=5 Гц), 1,57 и 1,63 (3 Н, 2 с), 1,58 и 1,68 (3 Н, 2 с), 2,28-3,02(4 Н, м), 4,01-4,15 (2 Н, м), 4,94 и 5,11 (1 Н, 2 д, J=12 Гц), 5,10 и 5,16 (1 Н, 2 д, J=12 Гц), 7,28-7,40 (5 Н, м). Стадия 4. Метиловый эфир 4-(3-бензилоксикарбонил-2,2-диметил-5R-метилоксазолидин-4S-ил)-4 оксомасляной кислоты (соединение 4). Соединение 3 (5,2 г, 15 ммоль) растворяли в толуоле (240 мл). К раствору добавляли МеОН (60 мл) и триметилсилилдиазометан (10% раствор гексана, 27 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. К реакционной смеси по каплям добавляли уксусную кислоту. После подтверждения исчезновения желтой окраски, растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1) с получением указанного в заголовке соединения (4,6 г, 12,7 ммоль, 85%). 1(4 Н, м), 3,64 и 3,70 (3 Н, 2 с), 3,97-4,18 (2 Н, м), 4,94 и 5,10 (1 Н, 2 д, J=12 Гц), 5,10 и 5,15 (1 Н, 2 д, J=12 Гц),7,26-7,38 (5 Н, м). Стадия 5. 3-Бензилоксикарбонил-2,2-диметил-5R-метил-4S-[5-оксотетрагидрофуран-2-ил]оксазолидин (соединение 5). Соединение 4 (4,13 г, 11,4 ммоль) растворяли в МеОН (120 мл). К раствору добавляли NaBH4 (860 мг, 23 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель отгоняли из реакционной смеси при пониженном давлении. Затем к остатку добавляли воду и смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в толуоле (100 мл). К раствору добавляли уксусную кислоту (3 мл) и смесь перемешивали в течение 4 ч при кипячении с обратным холодильником. К реакционной смеси добавляли водный раствор насыщенного бикарбоната натрия и затем смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=3:1-2:1) с получением указанного в заголовке соединения (2,99 г, 9,00 ммоль,79%). 1 Н-ЯМР (CDCl3)1,39 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,53 (3 Н, с), 1,59 (3 Н, с), 1,95-2,23 (2 Н, м), 2,42-2,57 (2 Н, м),3,98-4,16 (2 Н, м), 4,79 и 5,06 (1 Н, 2 м), 5,15 (2 Н, с), 7,28-7,40 (5 Н, м). Стадия 6. 3-Бензилоксикарбонил-2,2-диметил-5R-метил-4S-[4R-(2-метил-2-пропенил)-5-оксотетрагидрофуран-2S-ил]оксазолидин (соединение 6). Соединение 5 (2,99 г, 9,0 ммоль) растворяли в ТГФ (50 мл) в атмосфере аргона и раствор перемешивали при -78 С в течение 20 мин. Затем добавляли LiHMDS (l,0M раствора ТГФ, 12 мл, 12 ммоль) и смесь перемешивали при -78 С в течение 1 ч. В реакционную систему шприцем по каплям добавляли 3 бром-2-метилпропен (1,2 мл, 12 ммоль) и смесь перемешивали при -78 С в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли водный раствор лимонной кислоты и затем смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=4:1-3:1) с получением указанного в заголовке соединения (2,22 г, 5,7 ммоль, 83%). 1H-ЯМР (CDCl3) : 1,37 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,55 (3 Н, м), 1,60 (3 Н, с), 1,69 (3 Н, с), 1,95 (1 Н, м), 2,09 (1 Н,м), 2,30 (1 Н, м), 2,53 (1 Н, м), 2,65 и 2,79 (1 Н, 2 м), 3,90-4,13 (2 Н, м), 4,68 (1 Н, м), 4,81 (1 Н, м), 5,11 (1 Н, м) 5,15 и 5,18 (2 Н, 2 с), 7,30-7,40 (5 Н, м). Стадия 7. трет-Бутиловый эфир 2R-гидрокси-1S-[4R-(2-метилпропил)-5-оксотетрагидрофуран-2Sил]пропилкарбаминовой кислоты (соединение 7). Соединение 6 (1,30 г, 3,36 ммоль) растворяли в метаноле (120 мл) и 0,1 н. хлористо-водородной кислоте (30 мл). К раствору при перемешивании добавляли 10% палладий на углероде (0,9 г). Атмосферу в реакционной системе заменяли водородом с использованием баллона, заполненного газообразным водородом и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате(300 мл). К раствору добавляли воду (90 мл) и бикарбонат натрия (1,68 г, 20 ммоль) и смесь перемешивали в течение 10 мин на ледяной бане. К реакционной системе по каплям постепенно добавляли Вос 2 О(800 мг, 3,67 ммоль), смесь перемешивали в течение 6 ч на ледяной бане и затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли хлороформ и органический слой промывали водным раствором насыщенного бикарбоната натрия. Органический слой сушили над без-8 017495 водным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=4:1-2:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,62 г, 1,97 ммоль, 59% за 2 стадии). 1(2,7 г, 40 ммоль), DMAP (24 мг, 0,2 ммоль) и трет-бутилдиметилхлорсилан (3,0 г, 20 ммоль) и смесь перемешивали при 50 С в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Затем добавляли метанол и смесь перемешивали в течение 0,5 ч. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем к реакционной смеси добавляли хлороформ и органический слой промывали водным раствором лимонной кислоты и насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1) с получением указанного в заголовке соединенияH-ЯМР (CDCl3) : 0,07 (3 Н, с), 0,08 (3 Н, с), 0,88 (9 Н, с), 0,89 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,94 (3 Н, д, J=7 Гц),1,19 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,31 (1 Н, м), 1,43 (9 Н, с), 1,61-1,71 (2 Н, м), 1,96 (1 Н, м), 2,31 (1 Н, м), 2,65 (1 Н, м),3,60 (1 Н, м), 3,90 (1 Н, м), 4,63 (1 Н, м), 4,66 (1 Н, д, J=10 Гц, NH). Стадия 9. [5S-(трет-Бутоксикарбониламино)-6R-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4S-гидрокси-2R-(2 метилпропил)гептил]ацетат (соединение 9). Соединение 8 (0,81 г, 1,89 ммоль) растворяли в ТГФ (11 мл) и этаноле (11 мл). К раствору добавляли хлорид кальция (420 мг, 3,8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 15 мин на ледяной бане. Затем добавляли NaBH4 (290 мг, 7,6 ммоль) и смесь перемешивали в течение 3 ч на ледяной бане. Во время охлаждения реакционной смеси на ледяной бане к смеси добавляли 1 М водный раствор KHSO4. Смесь перемешивали в течение 15 мин и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором насыщенного бикарбоната натрия и затем сушили над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением соединения в форме диола (0,85 г). Диольное соединение (0,85 г) растворяли в метиленхлориде (50 мл) в атмосфере аргона и раствор перемешивали в течение 10 мин на ледяной бане. Затем добавляли триэтиламин (273 мг, 2,7 ммоль) и ацетилхлорид (212 мг, 2,7 ммоль) и смесь перемешивали в течение 3 ч на ледяной бане. К реакционной смеси добавляли метанол (1 мл), смесь перемешивали в течение 10 мин и затем растворитель отгоняли. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1-6:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,66 г, 1,39 ммоль, 73% за 2 стадии). 1(0,53 мл, 2,3 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли насыщенный раствор соли и смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=9:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,55 г, 0,93 ммоль, 67%). 1(1 Н, м), 4,81 (1 Н, д, J=10 Гц, NH). Стадия 11. трет-Бутиловый эфир 1S-(1R-трет-бутилдиметилсилилоксиэтил)-2S-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4R-гидроксиметил-6-метилгептилкарбаминовой кислоты (соединение 11). Соединение 10 (0,10 г, 0,17 ммоль) растворяли в ТГФ (4 мл) и этаноле (4 мл). К раствору добавляли хлорид кальция (114 мг, 1,0 ммоль) и смесь перемешивали в течение 15 мин на ледяной бане. Затем добавляли NaBH4 (78 мг, 2,0 ммоль), смесь перемешивали в течение 1 ч на ледяной бане и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Во время охлаждения реакционной смеси на ледяной бане к смеси добавляли 1 М водный раствор KHSO4. Смесь перемешивали в течение 15 мин и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором насыщенного бикарбоната натрия, затем сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1) с получениемH-ЯМР (CDCl3) : 0,06 (3 Н, с), 0,07 (3 Н, с), 0,08 (3 Н, с), 0,09 (3 Н, с), 0,88 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,89 (9 Н,с), 0,89 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,90 (9 Н, с), 1,04 (1 Н, м), 1,15 (1 Н, м), 1,18 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,27 (1 Н, м), 1,44 (9 Н,с), 1,56-1,68 (3 Н, м), 1,78 (1 Н, м), 3,26 (1 Н, м), 3,53-3,64 (2 Н, м), 3,31-3,41 (2 Н, м), 4,70 (1 Н, д, J=10 Гц,NH). Стадия 12. 4S,6R-бис(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2R-(2-метилпропил)гептановая кислота (соединение 12). Соединение 11 (0,36 г, 0,66 ммоль) растворяли в ацетонитриле (4 мл) и тетрахлорметане (4 мл). К раствору добавляли воду (6 мл) и периодат натрия (0,55 г, 2,56 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем добавляли хлорид рутенияnH2O (20 мг) с последующим интенсивным перемешиванием смеси при комнатной температуре в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли воду и хлороформ. Органический слой отделяли, затем фильтровали через слой целита и затем фильтрат промывали насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,37 г). Полученное соединение непосредственно использовали в следующей реакции. Стадия 13. 1S-Гидроксиметил-2-метилпропиламид 4S,6R-бис(трет-бутилдиметилсилилокси)-5S(трет-бутоксикарбониламино)-2R-(2-метилпропил)гептановой кислоты (соединение 13). Соединение 12 (0,37 г) и L-валинол (83 мг, 0,80 ммоль) растворяли в ДМФА (30 мл) и раствор перемешивали в течение 10 мин на ледяной бане. Затем добавляли диэтилцианофосфонат (DEPC, 130 мг,0,830 ммоль) и диизопропилэтиламин (103 мг, 0,80 ммоль), смесь перемешивали в течение 1 ч на ледяной бане и затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли этилацетат и органический слой промывали водным раствором бисульфата калия, водой и водным раствором насыщенного бикарбоната натрия в указанном порядке. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (CHCl3:МеОН=98:2), с получением указанного в заголовке соединения (0,39 г, 0,60 ммоль, 91% за 2 стадии). 1[4S,6R-бис(трет-Бутилдиметилсилилокси)-5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-валин (соединение 14). Соединение 13 (0,39 г, 0,60 ммоль) растворяли в ацетонитриле (3,2 мл) и тетрахлорметане (3,2 мл). К раствору добавляли воду (4,8 мл) и периодат натрия (496 мг, 2,32 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем добавляли хлорид рутенияnH2O (20 мг) с последующим интенсивным перемешиванием смеси при комнатной температуре в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли воду и хлороформ. Органический слой отделяли, фильтровали через слой целита и затем фильтрат промывали насыщенным раствором соли. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,33 г, 83%). Полученное соединение непосредственно использовали в следующей реакции. 1H-ЯМР (CDCl3) : 0,03 (3 Н, с), 0,05 (3 Н, с), 0,08 (3 Н, с), 0,11 (3 Н, с), 0,81 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,84 (3 Н,д, J=6 Гц), 0,85 (9 Н, с), 0,86 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,87 (9 Н, с), 0,88 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,05 (1 Н, м) , 1,13 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,38 (9 Н, с), 1,40-1,56 (2 Н, м), 1,67-1,80 (2 Н, м), 2,23 (1 Н, м), 2,40 (1 Н, м), 3,56 (1 Н, м), 3,72-3,82 (2 Н,м), 4,51 (1 Н, м), 4,94 (1 Н, д, J=10 Гц, NH), 7,33 (1 Н, д, J=7 Гц, NH). Стадия 15. Бензиламид [4S,6R-бис(трет-бутилдиметилсилилокси)-5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (соединение 15). Соединение 14 (0,18 г, 0,27 ммоль) и H-Met-NHBn растворяли в ТГФ (4 мл) в атмосфере аргона. К полученному раствору добавляли при перемешивании 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4 метилморфолинийхлорид (DMT-MM nH2O, 125 мг) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли этилацетат и органический слой промывали водным раствором бисульфата калия и насыщенным раствором соли в указанном порядке. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (CHCl3:МеОН=98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,14 г, 0,15 ммоль, 67%). 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 0,06 (3 Н, с), 0,07 (3 Н, с), 0,08 (3 Н, с), 0,10 (3 Н, с), 0,84 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,88 (3 Н,д, J=7 Гц), 0,89 (9 Н, с), 0,89 (9 Н, с), 0,90 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,94 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,07 (1 Н, м), 1,18 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,43 (9 Н, с), 1,48 (1 Н, м), 1,63 (1 Н, м), 1,69-1,82 (2 Н, м), 1,94 (1 Н, м), 2,05-2,11 (2 Н, м), 2,06 (3 Н, с),2,40 (1 Н, м), 2,44-2,59 (2 Н, м), 3,44 (1 Н, м), 3,78 (1 Н, м), 3,90 (1 Н, м), 4,05 (1 Н, м), 4,37-4,48 (2 Н, м), 4,58- 10017495 гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-4). Соединение 15 (0,15 г, 0,17 ммоль) растворяли в ТГФ (3 мл). К раствору добавляли уксусную кислоту (80 мг). К раствору добавляли уксусную кислоту (80 мг). Затем добавляли тетрабутиламмонийфторидnH2O (TBAF, 0,47 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 дней. К реакционной смеси добавляли хлороформ и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (CHCl3:МеОН=97:3) с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 0,092 ммоль,81%). 1(1 Н, м), 2,00-2,15 (2 Н, м), 2,07 (3 Н, с), 2,42-2,50 (2 Н, м), 2,60 (1 Н, м), 3,38 (1 Н, м), 3,77 (1 Н, м), 4,02 (1 Н,м), 4,10 (1 Н, м), 4,37 (1 Н, д, J=15 Гц), 4,42 (1 Н, д, J=15 Гц), 4,50 (1 Н, м), 7,20-7,37 (5 Н, м). Пример 2. Получение бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-5). Стадия 1. трет-Бутиловый эфир 1S-[4R-(2-метилпропил)-5-оксотетрагидрофуран-2S-ил]-2Rтриэтилсилилоксипропилкарбаминовой кислоты (соединение 16). Указанное в заголовке соединение (1,73 г, 4,0 ммоль, 85%) получали из соединения 7 (2,00 г, 6,3 ммоль) и триэтилсилилтрифторметансульфоната (2,64 г, 10 ммоль) по методике, аналогично методике синтеза соединения 10. 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 0,56-0,65 (6 Н, м), 0,89 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,92-1,00 (9 Н, м), 0,96 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,20(1H, м), 3,61 (1H, м), 3,92 (1H, м), 4,66 (1H, м), 4,74 (1H, д, J=10 Гц, NH). Стадия 2. [5S-(трет-Бутоксикарбониламино)-4S-гидрокси-2R-(2-метилпропил)-6R-триэтилсилилоксигептил]ацетат (соединение 17). Указанное в заголовке соединение (1,73 г, 3,6 ммоль, 91% за 2 стадии) получали из соединения 16(1,73 г, 4,0 ммоль) по методике, аналогично методике синтеза соединения 9. 1H-ЯМР (CDCl3) : 0,65 (2 Н 3, кв., J=8 Гц), 0,89 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,89 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,98 (3 Н 3, т,J=8 Гц), 1,14 (1 Н, м), 1,21 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,27 (1 Н, м), 1,38 (1 Н, м), 1,47 (9 Н, с), 1,50 (1 Н, м), 1,65 (1 Н, м),1,98 (1 Н, м), 2,05 (3 Н, с), 3,36 (1 Н, м), 3,42 (1 Н, шир. с, ОН), 3,97 (1 Н, м), 4,00-4,14 (2 Н, м), 4,18 (1 Н, м),5,15 (1 Н, д, J=10 Гц, NH). Стадия 3. [5S-(трет-Бутоксикарбониламино)-2R-(2-метилпропил)-4-оксо-6R-триэтилсилилоксигептил]ацетат (соединение 18). Соединение 17 (1,73 г, 3,6 ммоль) растворяли в метиленхлориде (20 мл). К раствору добавляли реагент Десс-Мартина (DMP, 1,7 г, 4,0 ммоль). Затем к смеси постепенно добавляли насыщенный водой метиленхлорид (2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли водный раствор тиосульфата натрия и затем смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=9:1) с получением указанного в заголовке соединения (1,44 г, 3,0 ммоль, 84%). 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 0,58 (2 Н 3, кв., J=8 Гц), 0,86 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,91 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,93 (3 Н 3, т,J=8 Гц), 1,11 (1 Н, м), 1,13 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,18 (1 Н, м), 1,46 (9 Н, с), 1,58 (1 Н, м), 2,02 (3 Н, с), 2,36 (1 Н, м),2,41 (1 Н, дд, J=18, 6 Гц), 2,74 (1 Н, дд, J=18, 6 Гц), 3,92 (1 Н, дд, J=11, 6 Гц), 4,03 (1 Н, дд, J=11, 5 Гц), 4,12(соединение 19). Соединение 18 (0,25 г, 0,53 ммоль) растворяли в ТГФ (4 мл). К раствору добавляли воду (1 мл) и уксусную кислоту (4 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. К реакционной смеси осторожно добавляли водный раствор насыщенного бикарбоната натрия. После завершения образования газа смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,24 г). 1(1 Н, м), 1,45 (9 Н, с) 1,59 (1 Н, м), 2,03 (3 Н, с), 2,38 (1 Н, м), 2,50 (1 Н, дд, J=18, 5 Гц), 2,65 (1 Н, дд, J=18, 8 Гц), 3,87 (1 Н, дд, J=11,6 Гц), 4,14 (1 Н, дд, J=11, 4 Гц), 4,19 (1 Н, шир. д, J=9 Гц), 4,30 (1 Н, м), 5,41 (1 Н, д,J=9 Гц, NH). Стадия 5. 2R-[5S-(трет-Бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан-4R-ил]метил-4 метилпентилацетат (соединение 20). Соединение 19 (0,24 г) растворяли в ТГФ (5 мл) и раствор перемешивали в течение 10 мин на ледяной бане. Затем добавляли суспензию NaBH(OAc)3 (318 мг, 1,5 ммоль) в ТГФ (3 мл) и уксусной кислоте(0,3 мл) и смесь перемешивали в течение 1 ч на ледяной бане с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3 ч. К реакционной смеси добавляли водный раствор ацетата калия и смесь перемешивали в течение 10 мин. Затем добавляли насыщенный раствор соли и смесь экстрагировали- 11017495 хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток растворяли в толуоле (30 мл). К раствору добавляли 2 метоксипропен (1,2 мл) и PPTS (30 мг) и смесь перемешивали при 70 С в течение 3 ч. Толуол отгоняли. Затем к остатку добавляли хлороформ и органический слой промывали водным раствором насыщенного бикарбоната натрия. Затем органический слой сушили над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:AcOEt=8:1-6:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,09 г, 0,22 ммоль, 42% за 3 стадии) и его защищенной 5-членной циклической формы (0,08 г). 1(1 Н, ддд, J=10, 7, 3 Гц), 3,57 (1 Н, ддд, J=10, 8, 5 Гц), 3,94-4,04 (2 Н, м), 4,08 (1 Н, м), 4,65 (1 Н, д, J=10 Гц,NH). Стадия 6. трет-Бутиловый эфир [2,2-диметил-4R-(2R-гидроксиметил-4-метилпентил)-6R-метил-1,3 диоксан-5S-ил]карбаминовой кислоты (соединение 21). Указанное в заголовке соединение (0,12 г) получали из соединения 20 (0,12 г, 0,30 ммоль) по методике, аналогично методике синтеза соединения 11. Полученное соединение непосредственно использовали в следующей реакции. Стадия 7. 2R-[5S-(трет-Бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан-4R-ил]метил-4 метилпентановая кислота (соединение 22). Указанное в заголовке соединение (0,38 г, 1,0 ммоль, 95% за 2 стадии) получали из соединения 21(0,43 г) по методике, аналогично методике синтеза соединения 12. 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 0,89 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,90 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,09 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,25 (1 Н, м), 1,30(3 Н, с), 1,43 (9 Н, с), 1,46 (3 Н, с), 1,55-1,65 (2 Н, м), 1,77 (1 Н, м), 1,96 (1 Н, м), 2,52 (1 Н, м), 3,35 (1 Н, м),4,08 (1 Н, м), 4,80 (1 Н, д, J=10 Гц, NH). Стадия 8. Бензиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан-4Rил]метил-4-метилпентаноил-L-валил-L-метионина (соединение 23). Указанное в заголовке соединение (0,10 г, 0,14 ммоль, 48%) получали из соединения 22 (0,11 г, 0,29 ммоль) и H-Val-Met-NHBn по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1(1 Н, м), 4,42 (1 Н, д, J=6 Гц), 4,43 (1 Н, д, J=6 Гц), 4,55 (1 Н, м), 4,61 (1 Н, д, J=7 Гц, NH), 6,28 (1 Н, м, NH),6,78 (1 Н, м, NH), 6,84 (1 Н, м, NH), 7,20-7,34 (5 Н, м). Стадия 9. Бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил) гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-5). Соединение 23 (0,10 г, 0,14 ммоль) растворяли в метаноле (20 мл). К раствору добавляли PPTS (20 мг) и смесь перемешивали при 40 С в течение 24 ч. Метанол отгоняли при пониженном давлении. Затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (CHCl3:MeOH=98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,07 г, 0,107 ммоль, 77%). 1H-ЯМР (CDCl3-CD3OD) : 0,87 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,91 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,91 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,93 (3 Н, д,J=7 Гц), 1,15 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,24 (1 Н, м), 1,45 (9 Н, с), 1,46-1,61 (2 Н, м), 1,66-1,81 (2 Н, м), 1,94 (1 Н, м),2,03-2,16 (2 Н, м), 2,08 (3 Н, с), 2,44-2,55 (3 Н, м), 3,28 (1 Н, м), 3,64 (1 Н, м), 4,11 (1 Н, д, J=7 Гц), 4,23 (1 Н,м), 4,32-4,43 (2 Н, м), 4,50 (1 Н, м), 7,22-7,35 (5 Н, м). Пример 3. Получение н-бутиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-7). Стадия 1. н-Бутиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан 4R-ил]метил-4-метилпентаноил-L-валил-L-метионина (соединение 24). Указанное в заголовке соединение (0,17 г) получали из соединения 22 (0,08 г, 0,21 ммоль) и H-ValMet-NH-n-Pr по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1H-ЯМР (CDCl3) : 0,88 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,90 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,91 (3 Н, т, J=6 Гц), 0,96 (3 Н, д, J=7 Гц),1,01 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,09 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,20 (1 Н, м), 1,31 (2 Н, м), 1,33 (3 Н, с), 1,34 (3 Н, с), 1,44 (9 Н, с),1,46 (2 Н, м), 1,62 (1 Н, м), 1,75-1,89 (2 Н, м), 1,90-2,14 (4 Н, м), 2,09 (3 Н, с) 2,26 (1 Н, м), 2,43-2,61 (2 Н, м),3,22 (2 Н, м), 3,35 (1 Н, м), 3,57 (1 Н, м), 4,05 (1 Н, м), 4,17 (1 Н, м), 4,40 (1 Н, м), 4,72 (1 Н, д, J=10 Гц, NH),6,25 (1 Н, шир. д, J=9 Гц, NH) 6,77 (1 Н, шир. д, J=9 Гц, NH), 7,25 (1 Н, шир. д, J=10 Гц, NH). Стадия 2. н-Бутиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил) гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-7). Указанное в заголовке соединение (0,07 г, 0,11 ммоль, 54% за 2 стадии) получали из соединения 24(0,16 г) по методике, аналогично методике синтеза TLVM-5. 1(1 Н, м, NH), 7,92 (1 Н, м, NH). Пример 4. Получение (S)метилбензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6Rдигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-8). Стадия 1. (S)метилбензиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3 диоксан-4R-ил]метил-4-метилпентаноил-L-валил-L-метионина (соединение 25). Указанное в заголовке соединение (0,12 г) получали из соединения 22 (0,07 г, 0,19 ммоль) и H-ValMet-NH-(S)-CH(Me)Ph по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1(1 Н, м), 4,56 (1 Н, м), 4,72 (1 Н, д, J=10 Гц, NH), 5,07 (1 Н, м), 6,23 (1 Н, м, NH), 6,69 (1 Н, м, NH), 6,76 (1 Н,м, NH), 7,21-7,36 (5 Н, м). Стадия 2. (S)метилбензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-8). Указанное в заголовке соединение (0,08 г, 0,12 ммоль, 63% за 2 стадии) получали из соединения 25(0,12 г) по методике, аналогично методике синтеза соединения TLVM-5. 1(2 Н, м), 1,88 (1 Н, м), 1,96-2,06 (2 Н, м), 2,02 (3 Н, с), 2,24 (1 Н, м), 2,31-2,44 (3 Н, м), 2,50 (1 Н, м), 3,28 (1 Н,м), 3,68 (1 Н, м), 4,18 (1 Н, д, J=7 Гц), 4,26 (1 Н, м), 4,49 (1 Н, м), 4,52 (1 Н, м), 5,42 (1 Н, м, NH), 7,05 (1 Н, м,NH), 7,55 (1 Н, м, NH), 7,83 (1 Н, м, NH). Пример 5. Получение 4-фторбензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-9). Стадия 1. 4-Фторбензиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3 диоксан-4R-ил]метил-4-метилпентаноил-L-валил-L-метионина (соединение 26). Указанное в заголовке соединение (0,16 г) получали из соединения 22 (0,08 г, 0,21 ммоль) и H-ValMet-NH-p-F-Bn по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1(1 Н, м, NH), 6,83 (1 Н, м, NH), 6,95-7,03 (2 Н, м), 7,20-7,28 (2 Н, м). Стадия 2. 4-Фторбензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина (TLVM-9). Указанное в заголовке соединение (0,09 г, 0,13 ммоль, 64% за 2 стадии) получали из соединения 26(0,16 г) по методике, аналогично методике синтеза соединения TLVM-5. 1H-ЯМР (CDCl3-CD3OD) : 0,87 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,90 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,91 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,91 (3 Н, д,J=7 Гц), 1,16 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,26 (1 Н, м), 1,45 (9 Н, с), 1,47-1,58 (2 Н, м), 1,68-1,81 (2 Н, м), 1,93 (1 Н, м),2,05-2,24 (2 Н, м), 2,08 (3 Н, с), 2,43-2,52 (3 Н, м), 3,22 (1 Н, м), 3,64 (1 Н, м), 4,12 (1 Н, д, J=7 Гц), 4,26 (1 Н,м), 4,33 (1 Н, д, J=15 Гц), 4,38 (1 Н, д, J=15 Гц), 4,50 (1 Н, дд, J=8,6 Гц), 5,52 (1 Н, м, NH), 6,97-7,04 (2 Н, м),7,20 (1 Н, м, NH), 7,21-7,36 (2 Н, м), 7,73 (1 Н, м, NH), 7,83 (1 Н, м, NH). Пример 6. Получение бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-аланил-L-метионина (TLVM-10). Стадия 1. Бензиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан-4Rил]метил-4-метилпентаноил-L-аланил-L-метионина (соединение 27). Указанное в заголовке соединение (0,04 г, 0,06 ммоль, 55%) получали из соединения 22 (0,04 г, 0,11 ммоль) и H-Ala-Met-NH-Bn по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1 Н-ЯМР (CDCl3) : 0,85 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,86 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,09 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,16 (1 Н, м), 1,31(3 Н, с), 1,32 (3 Н, с), 1,36 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,44 (9 Н, с), 1,57 (1 Н, м), 1,74 (1 Н, м), 1,86 (1 Н, м), 1,98 (1 Н, м),2,03 (1 Н, м), 2,05 (3 Н, с), 2,12 (1 Н, м), 2,33 (1 Н, м), 2,43-2,58 (2 Н, м), 3,33 (1 Н, м), 3,56 (1 Н, м), 4,08 (1 Н,м), 4,34 (1 Н, м), 4,42 (2 Н, м), 4,59 (1 Н, м), 4,82 (1 Н, д, J=10 Гц, NH), 6,28 (1 Н, м, NH), 6,88 (1 Н, м, NH),7,00 (1 Н, м, NH), 7,17-7,34 (5 Н, м). Стадия 2. Бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил) гептаноил]-L-аланил-L-метионина (TLVM-10). Указанное в заголовке соединение (0,01 г, 0,016 ммоль, 27%) получали из соединения 27 (0,04 г) по методике, аналогично методике синтеза соединения TLVM-5. 1- 13017495 Пример 7. Получение бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2 метилпропил)гептаноил]-L-фенилглицил-L-метионина (TLVM-11). Стадия 1. Бензиламид 2R-[5S-(трет-бутоксикарбониламино)-2,2-диметил-6R-метил-1,3-диоксан-4Rил]метил-4-метилпентаноил-L-фенилглицил-L-метионина (соединение 28). Указанное в заголовке соединение (0,12 г, 0,17 ммоль, 79%) получали из соединения 22 (0,13 г, 0,35 ммоль) и H-Phg-Met-NH-Bn по методике, аналогично методике синтеза соединения 15. 1 Н-ЯМР (CDCl3-CD3OD) : 0,89 (3 Н, д, J=7 Гц), 0,92 (3 Н, д, J=7 Гц), 1,14 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,24 (1 Н,м), 1,34 (3 Н, с), 1,42 (3 Н, с), 1,43 (9 Н, с), 1,48-1,62 (2 Н, м), 1,65-1,80 (2 Н, м), 1,98 (1 Н, м), 2,07 (3 Н, с), 2,14(10 Н, м). Стадия 2. Бензиламид [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил) гептаноил]-L-фенилглицил-L-метионина (TLVM-11). Указанное в заголовке соединение (0,06 г, 0,09 ммоль, 51%) получали из соединения 28 (0,12 г, 0,17 ммоль) по методике, аналогично методике синтеза соединения TLVM-5. 1 Н-ЯМР (CDCl3-CD3OD) : 0,88 (3 Н, д, J=6 Гц), 0,92 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,14 (3 Н, д, J=6 Гц), 1,23 (1 Н,м), 1,44 (9 Н, с), 1,47-1,62 (2 Н, м), 1,64-1,76 (2 Н, м), 1,97 (1 Н, м), 2,07 (3 Н, с), 2,16 (1 Н, м), 2,44-2,55 (3 Н,м), 3,22 (1 Н, м), 3,60 (1 Н, м), 4,21 (1 Н, м), 4,27-4,40 (3 Н, м), 4,57 (1 Н, м), 7,16-7,40 (10 Н, м). Пример 8. Оценка ингибирующего действия на -секретазу-(I).(искусственный фрагмент АРР, который изначально не содержал полипептидной части, расщепляемой под действием - или -секретазы на первой стадии двухстадийной реакции продуцирования A из АРР), использовали для исследования действия четырех тестируемых соединений (TLVM-5, TLVM-7,TLVM-8 и TLVM-9) in vitro, направленного на ингибирование -секретазы. В данном тесте средой, используемой для клеток С 99, является модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (500 мл) (DMEM, Sigma-Aldrich Corp.), в которую было добавлено 55 мл фетальной телячьей сыворотки (Biosource), 5,5 мл среды MEM, содержащей заменимые аминокислоты (Gibco),и 5,5 мл пенициллина/стрептомицина (Gibco). Клетки C99 суспендировали при концентрации 5104 клеток/мл в данной среде. Полученную суспензию добавляли при концентрации 1 мл 5104 клеток/лунка в 24-луночный планшет с коллагеном(Akita Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) и культивировали в течение 3 дней. Затем среду удаляли из лунок,лунки промывали средой (1 мл/лунка). Затем среду удаляли и добавляли свежую среду при концентрации 0,4 мл/лунка. Клетки обрабатывали тестируемыми соединениями и положительным контролем, затем инкубировали в течение 24 ч и супернатанты культур собирали. В качестве положительного контроля использовали L-685458 (CALBIOCHEM) и соединение Boc-Leu-Val-Met-Leu-OMe (далее обозначаемое LVML-1), описанное в примере 1 патентного документа 1 (WO 03/091278). Обработку всеми тестируемыми соединениями и положительным контролем проводили при четырех концентрациях: 0,3, 1, 3 и 10 мкмоль/л. Концентрации A (1-40) и А (1-42) в супернатантах культуры измеряли с использованием набора для анализа на человеческий амилоидный белок(1-40) (N) (L)-IBL и на человеческий амилоидный белок(1-42) (N) (L)-IBL (Immuno-Biological Laboratories, Co., Ltd.). Количество секретируемых A(1-40) и A (1-42) вычисляли путем вычитания концентраций А (1-40) и A (1-42), содержащихся в среде до инокуляции клеток С 99, из измеренных концентраций, содержащихся в среде после инокуляции,соответственно. Кроме того, уровень секреции A в отрицательном контроле (5% ДМСО-содержащей среде, доведенной до конечной концентрации 1% ДМСО) принимали за 100% и вычисляли уровни секреции A для каждой концентрации тестируемых соединений и положительного контроля.(2) Результаты. Как показано в табл. 1-3, соединения TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM-9 обладали гораздо более высокой активностью, направленной на ингибирование действия -секретазы, чем L-685458 и LVML1, используемые в качестве положительного контроля. Кроме того, в примере 6 патентного документа 1 (WO 03/091278) показано, что соединение типаThr-Leu-Val-Met (1'а) снижает уровень продуцирования А 40 (при обработке концентрацией 10 мкМ) на 73%. С другой стороны, как показано в табл. 1, соединения TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM-9 дают уровень секреции A 40 (при обработке концентрацией 10 мкМ) 3% или менее (уровень ингибирования составляет 97% или более), а также обладают активностью, которая дает уровень секреции 24% или менее (уровень ингибирования составляет 76% или более) даже при более низких интервалах концентраций(при обработке концентрацией 0,3 мкМ). Полученные данные показали, что соединение настоящего изобретения обладает гораздо более высокой активностью, направленной на ингибирование действия секретазы, чем известные соединения.- 14017495 Таблица 1 Уровень секреции A (1-40) (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения Таблица 2 Уровень секреции A (1-42) (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения Таблица 3 Уровень секреции A [(1-40)+(1-42)] (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения Пример 9. Оценка ингибирующего действия на -секретазу-(II).(1) Метод тестирования. Соединения TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM-9, которые, как было подтверждено в примере 8,обладают сильной активностью, направленной на ингибирование действия -секретазы, использовали при низких концентрациях в дополнительном эксперименте (тестируемые соединения, используемые для обработки, брали в трех концентрациях: 0,03, 0,1 и 0,3 мкмоль/л, и обработку положительным контролем проводили при четырех концентрациях: 0,1, 0,3, 1 и 3 мкмоль/л). Кроме того, уровни секреции A при обработке двумя концентрациями тестируемого соединения,где в скобках указаны концентрации, при которых секреция A ингибируется на 50% (IC50), использовали для вычисления IC50 по следующей формуле: где А - самая высокая концентрация тестируемого соединения из двух крайних значений в диапазоне величин, которые дают 50%-ное ингибирование,В - самая низкая концентрация тестируемого соединения из двух крайних значений в диапазоне величин, которые дают 50%-ное ингибирование,С - уровень секреции (%) при концентрации В и(2) Результаты. Как показано в табл. 4-6, соединения TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM-9 обладали превосходной активностью, направленной на ингибирование действия -секретазы, даже в интервалах низких кон- 15017495 центраций (0,03-0,3 мкмоль/л).IC50 тестируемых соединений (TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM-9), ингибирующих А (1-40) и А (1-42), составляют 0,033-0,089 мкмоль/л (положительный контроль: 1,8 мкмоль/л) и 0,11-0,29 мкмоль/л (положительный контроль: 1,7 мкмоль/л) соответственно, и указанные соединения обладают гораздо большей активностью, чем положительный контроль. Таблица 4 Уровень секреции А (1-40) (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения Таблица 5 Уровень секреции А (1-42) (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения Таблица 6 Уровень секреции A [(1-40)+(1-42)] (%) в клетках С 99 после добавления каждого тестируемого соединения(1) Метод тестирования. Цитотоксическое действие четырех тестируемых соединений (TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8 и TLVM9) на клетки С 99 оценивали методом, описанным ниже. В данном тесте средой, используемой для клеток С 99, является модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (500 мл) (DMEM, Sigma-Aldrich Corp.), в которую было добавлено 55 мл фетальной телячьей сыворотки (Biosource), 5,5 мл среды MEM, содержащей заменимые аминокислоты (Gibco),и 5,5 мл пенициллина/стрептомицина (Gibco). Клетки С 99 суспендировали в концентрации 0,75105 клеток/мл в данной среде. Полученную суспензию добавляли при концентрации 100 мкл 0,75104 клеток/лунка в 96-луночный планшет с коллагеном (Akita Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) и культивировали в течение 2 дней. Затем среду (соответствующую 50 мкл/лунка) удаляли из лунок и добавляли свежую среду в концентрации 30 мкл/лунка. Клетки обрабатывали тестируемыми соединениями (20 мкл/лунка; конечные концентрации: 0,3, 1, 3, 10, 30 и 100 мкмоль/л) в течение 24 ч. Затем оценивали жизнеспособность клеток с использованием набора для подсчета клеток-8 (Dojindo Laboratories).(2) Результаты. Как показано в табл. 7, было подтверждено, что все ингибиторы, взятые для обработки в указанных концентрациях (10 мкмоль/л или ниже) и используемые в примерах настоящего изобретения, не оказывают отрицательного влияния на жизнеспособность клеток, хотя некоторые тестируемые соединения в концентрациях 30 мкмоль/л или выше снижали жизнеспособность клеток. Из этого можно сделать вы- 16017495 вод, что действие, направленное на ингибирование -секретазной активности и подтвержденное в примерах настоящего изобретения, не связано с цитотоксичностью тестируемых соединений. Таблица 7 Жизнеспособность (%) клеток С 99 после добавления каждого тестируемого соединения(1) Метод тестирования. Для исследования специфичности ингибитора -секретазы настоящего изобретения к субстрату использовали искусственный фрагмент Alc (далее обозначаемый Alc C150), в котором был определен первый внеклеточный сайт расщепления и сайт расщепления -секретазой, и который принадлежит к семейству человеческих алькадеинов (далее обозначаемых Alc), известных как субстраты для секретазы, которые вместе с АРР локализуются в нейронах головного мозга. -Alc, полученный из конструкции Alc при первом расщеплении, не может быть количественно оценен с помощью sELISA, используемого при определении уровня А. Поэтому в клетках осуществляли экспрессию белков с FLAGметкой, присоединенной у N-конца конструкций Alc и С 99, полученных при первом расщеплении.FLAG-A-подобные пептиды, секретируемые в среду, собирали путем иммунопреципитации с использованием анти-FLAG антител и детектировали с помощью вестерн-блоттинга с использованием указанных антител. Конкретный метод описан ниже. Клетки HEK 293 (АТСС) (1107 клеток/10 см чашка), культивированные в 6 мл среды DMEM, содержащей 10% FCS (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), трансфицировали pcDNA3.1 FLAG-APP C99Biol. Chem., 2003, 278, 49448-49458 (которая была получена из pcDNA3-APPC99 или pcDNA3.1 FLAGAlc C150 (нуклеотидная последовательность, кодирующая область белка, представленная в SEQ IDNO:3) (J. Biol. Chem., 2004, 279, 24343-24354 (которая была получена как pcDNA3AlcE с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen Corp.) в соответствии с протоколом введения реагентов. Каждый ингибитор и положительный контроль (ингибитор IX -секретазы (DAPT (Calbiochem Contact Information) добавляли отдельно при концентрации 0,2 или 2 мкмоль/л. В качестве отрицательного контроля добавляли ту же самую дозу ДМСО (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Через 24 ч супернатанты культуры собирали и образцы предварительно очищали с использованием сфер (100 мкл 50% (об./об.) Gбелка-сефарозы (GE Healthcare. Затем добавляли 15 мкл 50% (об./об.) сфер, на которые было нанесено анти-FLAG антитело М 2 (Sigma-Aldrich Corp.), и образцы инкубировали при 4 С в течение 1 ч. Сферы собирали центрифугированием и три раза промывали буфером (10 мМ трис-HCl [рН 8,0], 140 мМ NaCl,0,1% н-октилглюкозида, 0,025% азида натрия) и затем собирали А и -Alc в среде. Белки подвергали электрофорезу в ДСН-ПААГ с использованием 15% трис-трицинового геля (Anal. Biochem., 1987, 166(2), 368-379), с последующим их перенесением на мембрану. Мембрану кипятили в течение 5 мин в PBS. Затем добавляли анти-FLAG антитела М 2 (5 мкг/мл) (Sigma-Aldrich Corp.), мембрану инкубировали и затем детектировали методом вестерн-блоттинга с использованием детектирующего ECL-реагента (GEHealthcare). Полученный сигнал количественно оценивали с использованием системы Versa-doc (Bio-RadLaboratories, Inc.) для вычисления уровней секреции белка (уровень секреции белка в отрицательном контроле принимали за 100%).(2) Результаты. Как показано в табл. 8 и 9, соединения TLVM-5, TLVM-7, TLVM-8, TLVM-9 и TLVM-11 при концентрации 0,2 мкмоль/л и соединение TLVM-10 при концентрации 2 мкмоль/л при их взаимодействии с клетками не ингибировали расщепление Alc-С 150 под действием -секретазы и специфически ингибировали расщепление АРР-С 99. Было подтверждено, что соединение настоящего изобретения обладает специфическим ингибирующим действием в конкретном интервале концентраций, и поэтому можно считать, что такое соединение может быть использовано в качестве подходящего терапевтического лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.- 17017495 Таблица 8 Уровни секреции А и -Alc (%) в клетках HEK 293 после добавления каждого тестируемого соединения (0,2 мкмоль/л) Таблица 9 Уровни секреции А и -Alc (%) в клетках HEK 293 после добавления каждого тестируемого соединения (2 мкмоль/л) ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемая соль где R1 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, или фенильную группу; R2 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу,имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть замещена одной или несколькими фенильными или галогенфенильными группами; R3 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода, которая содержит одну или несколько гидроксильных групп; R4 представляет собой прямую или разветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 4 атомов углерода; и символозначает хиральный центр. 2. Соединение по п.1 формулы (2) или его фармацевтически приемлемая соль где R1, R2, R3 и R4 являются такими, как определено п.1. 3. Соединение по п.1 или 2 формулы (3) или его фармацевтически приемлемая соль где R1 и R2 являются такими, как определено в п.1. 4. Соединение, выбранное из нижеследующих соединений или их фармацевтически приемлемых солей: бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4S,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]- 18017495L-валил-L-метионина,н-бутиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]L-валил-L-метионина,(S)метилбензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил) гептаноил]-L-валил-L-метионина,4-фторбензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]-L-валил-L-метионина,бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]L-аланил-L-метионина и бензиламида [5S-(трет-бутоксикарбониламино)-4R,6R-дигидрокси-2R-(2-метилпропил)гептаноил]L-фенилглицил-L-метионина. 5. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания, ассоциированного с действием -секретазы, содержащая соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. 6. Ингибитор -секретазы, представляющий собой соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль. 7. Ингибитор продуцирования амилоидного белка, представляющий собой соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль. 8. Средство для предупреждения или лечения заболевания, ассоциированного с действием секретазы, содержащее соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемую соль. 9. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора -секретазы. 10. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора продуцирования амилоидного белка. 11. Применение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения или предупреждения заболевания, ассоциированного с действием секретазы. 12. Способ ингибирования -секретазы, заключающийся во взаимодействии соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли с -секретазой. 13. Способ ингибирования продуцирования амилоидного белка, заключающийся во взаимодействии соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли с -секретазой. 14. Способ лечения или предупреждения заболевания, ассоциированного с действием -секретазы,включающий введение соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли.