Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Способ получения противоопухолевого препарата "Циннаборин" путем глубинного культивирования мицелия базидиомицетов на питательной среде, характеризующийся тем, что глубинное культивирование проводят из мицелия Picnoporus cinnabarius в течение 96 ч на питательной среде, содержащей неохмеленное пивное сусло с содержанием сахаров до 14ш Б, воду в соотношении 1:3 и агар-агар, с последующим выделением и очисткой целевого продукта из культуральной жидкости, выделение полисахаридов из высушенного фильтрата культуральной жидкости ведут 7%-ным раствором гидроксида натрия при соотношении массы 1:10 при 64-67шC, с последующим охлаждением и нейтрализацией гидролизата 4H раствором HCl до 6,9-7,1 и очистку ведут ультрафильтрацией и трехкратным диализом водой с последующим осаждением их 96% этанолом.

 

Текст

Смотреть все

1 Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается способа получения фармацевтического препарата, используемого в медицине для химиотерапии онкологических заболеваний. В последние годы стали известны работы по выделению и изучению химической структуры и биологических свойств индивидуальных химических соединений, ответственных за противоопухолевое действие, из экстрактов растений, микроорганизмов и других природных объектов. Однако только несколько десятков из них вошли в практику клинической химиотерапии злокачественных образований. От многих пришлось отказаться, главным образом, из-за их высокой токсичности [1]. Чтобы снизить эффект токсичности противоопухолевых препаратов ведется поиск и разработка лекарственных средств, воздействующих на иммунную систему и повышающих ее устойчивость к раковым заболеваниям, а также создание противоопухолевых препаратов, избирательно действующих на определенные типы злокачественных опухолей. В настоящее время исследования по разработке новых противоопухолевых препаратов, относящихся к первой группе, связаны с поиском более эффективных средств лечения форм рака, с относительно медленным размножением опухолевых клеток. Известны модификаторы биологических реакций, относящиеся к группе противоопухолевых средств (иммунотерапевтические средства) [2]. Противоопухолевые препараты этого типа почти не вызывают побочных эффектов,хотя и не оказывают сильного противоопухолевого действия. Однако технологии массового производства противоопухолевых препаратов этой группы на основе природных веществ не разработаны. Особое место в ряду противоопухолевых препаратов занимают препараты микробного происхождения. Число таких препаратов невелико, и поиск их интенсивно ведется в разных странах. Среди микроорганизмов широко распространенными и перспективными являются грибные объекты, т.к. многие из них являются продуцентами различных метаболитов, среди которых выделены вещества с противоопухолевой активностью. Известны лечебные противоопухолевые препараты из базидиомицетов [3, 4] и способы получения активных субстанций из видов, хорошо растущих, главным образом, в глубинной культуре. Выделенные высокополимерные полисахариды обладали противоопухолевой активностью. Полисахариды общей формулы(С 6 Н 10O5)m х (С 5 Н 3 О 4)n и молекулярной массой более 10 000 Да получены путем экстракции мицелия водой, слабыми растворами кислот,щелочей или органическими растворителями. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения про 005095 2 тивоопухолевых препаратов путем глубинного культивирования мицелия базидиомицетов [5]. Способность полисахаридов из дрожжеподобных грибов тормозить рост опухоли связана в определенной мере с повышением противоопухолевой активности макрофагов, что в свою очередь зависит как от структуры этих полисахаридов, так и от их молекулярной массы. Один из механизмов, ответственных за противоопухолевый эффект, связан со стимуляцией Т-клеточного иммунитета. Вместе с тем, под влиянием полисахарида, полученного синтетическим путем из природного глюкана, увеличивается содержание -спиралей в молекуле сывороточного альбумина, а это, в свою очередь, достоверно коррелирует с онкологическим эффектом. Изменение структуры альбумина связано с противоопухолевой активностью -глюканов, выделенных преимущественно из базидиомицетов. Другой аспект действия грибных полисахаридов заключается в непосредственном участии в процессе накопления пораженными тканями серотонина и гистамина, которые способны угнетать рост опухоли напрямую, а также, в комплексе с растворимыми факторами, вызывать также другие фармакологические эффекты. Известно, что недостаток в организме веществ полисахаридной природы является одной из причин низкой реактивности Т-лимфоцитов и быстрого развития опухоли. Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в расширении ассортимента противоопухолевых лекарственных препаратов из грибного сырья, обладающих иммуномодулирующим действием и низкой токсичностью. Поставленная задача решается тем, что в способе получения противоопухолевого препарата - циннабарина путем глубинного культивирования мицелия базидиомицетов его ведут на неохмеленном пивном сусле с содержанием сахаров до 14 Б, при этом в качестве продуцента базидиомицет берут Picnoporus cinnabarinus. Способ осуществляют следующим образом. Процесс получения противоопухолевого препарата - циннаборина состоит из трех технологических стадий. На стадии ТП 1 проводят биосинтез полисахарида с наращиванием биомассы базидиомицета Picnoporus cinnabarinus (получение рабочей партии) и ферментацией. На стадии ТП 2 проводят выделение и химическую очистку полисахарида. На стадии ТП 3 получают препарат циннаборин, ведут стерильную фильтрацию и розлив. ТП 1. Биосинтез полисахарида. ТП 1.1. Подготовка рабочей партии продуцента. Рабочую партию готовят из исходной культуры продуцента полисахарида Picnoporuscinnabarinus, который хранится в пробирках, на скошенном сусло-агаре при Т = +4 С. При работе с культурой гриба используют питательную среду, которая состоит из пивного сусла, воды водопроводной и агар-агара. Для приготовления питательной среды берут 330 мл сусла, 770 мл воды, 22 г агар-агара,все перемешивают и нагревают, доводя до растворения агар-агара. Горячую жидкую среду разливают в пробирки по 10-15 мл в каждую,закрывают ватной пробкой. Стерилизуют при Т = +120 С в течение 30 мин. После стерилизации пробирки раскладывают с уклоном, в результате чего при охлаждении и застывании агар-агара получают скошенные поверхности питательной среды. Исходную культуру рассевают в пробирки путем переноса петлей кусочка мицелия из исходной пробирки в стерильных условиях вблизи горящего факела. Далее пробирки помещают в термостат и инкубируют при Т = +25-26 С в течение 9-10 суток. В течение этого времени на поверхности среды развивается культура гриба. Далее пробирки хранят при Т = +4 С в рефрижераторе. ТП 1.2. Посевная ферментация. Для выращивания посевного мицелия в колбах пивное сусло разводят водой из расчета 1:3. Затем его разливают в качалочные колбы на 500 мл по 150 мл и стерилизуют при одной атмосфере в течение 30 мин. После охлаждения колбы со стерильной питательной средой ее засевают мицелием Picnoporas cinnabarinus. Для этого из пробирки две трети скошенного агарагара и выросшего на нем мицелия переносят в колбу с жидкой питательной средой. Посевной мицелий выращивают на качалке при 240 об/мин при Т = +25-26 С 96 ч. Посевной мицелий должен удовлетворять следующим требованиям: а) рост культуры должен быть глобулярным. При отстаивании в колбе объем мицелия должен составлять не менее 1/3 объема среды. При микроскопическом контроле мицелий должен иметь следующие особенности: ветвиться,иметь пряжки, утолщенные округлые или лимоновидные хламидоспоры, расположенные на концах гиф или среди клеток по длине гифы; б) отсутствие посторонней микрофлоры. Проводят контроль под микроскопом на отсутствие посторонней микрофлоры, а также путем предварительного посева культуральной жидкости (КЖ) на косяки с МПА. Спустя 12 ч при Т = +37 С выявляют наличие или отсутствие посторонней микрофлоры. Для обнаружения дрожжей или других посторонних грибных организмов делают высев КЖ на косяки с суслоагаром. В этом случае косяки помещают в термостат при Т = +24-26 С на 2-3 суток. По истечении указанного времени содержимое косяков просматривают под микроскопом или визуально. 4 Выросший вегетативный мицелий гриба используют для ферментации на следующей стадии. ТП 1.3. Ферментация. В ферментатор АК-10 загружают вегетативный мицелий гриба Picnoporus cinnabarinus,полученный на предыдущей стадии, в количестве 8% от объема загружаемой среды. Для ферментации не охмеленное пивное сусло разводят водой из расчета 1:3 до концентрации 5 Б. Ферментацию проводят в течение 96 ч при Т = 27 С и при рН=5,8 без перемешивания. Расход воздуха для аэрации 0,5 л/л средымин. После ферментации цвет культуральной жидкости темнеет и становится темно-коричневым. Отмечают наличие фруктового запаха. ТП 1.4. Фильтрация культуральной жидкости. Для фильтрации культуральной жидкости используют марлю в 2 слоя, стеклянную воронку, куда помещают марлю, и чистую емкость на 4-5 л. Воронку с марлей помещают в емкость и фильтруют культуральную жидкость путем слива ее из ферментатора. Так как рост мицелия глобулярный, то такой фильтрации бывает достаточно для полного отделения культуральной жидкости от мицелия. Фильтрат должен быть прозрачным, темно-коричневым по цвету, с фруктовым запахом, стерильным. Стерильность определяют под микроскопом по отсутствию посторонней бактериальной или грибной микрофлоры, а также путем высева на косяки с мясо-пептонным агаром (для выявления бактерий) или с сусло-агаром (для выявления грибной микрофлоры). Охлажденный фильтрат хранят не более суток при Т = +4 С. ТП 2. Выделение полисахаридов (получение циннаборин-субстанции) ТП 2.1. Сушка культуральной жидкости. Фильтрат разливают во флаконы объемом 0,5 л по 150 мл и проводят упаривание фильтрата. Упаривание ведут в отделении лиофильной сушки методом обкатки по следующей программе:- после замораживания фильтрата флаконы быстро переносят в сублиматор лиофильной установки. Дальнейшее высушивание проводят в следующей последовательности: 1 ч без подогрева, 3 ч с подогревом 0 С, 10 ч с подогревом +40 С. Продукт считают высушенным, если в течение 4 ч его температура не изменяется. Далее продукт направляют на щелочной гидролиз. ТП 2.2. Щелочной гидролиз. Щелочной гидролиз фильтрата проводят путем обработки его 7% раствором гидроокиси натрия, при соотношении компонентов 1:10. Полученную смесь заливают в емкость и поме 5 щают в термостат при 64-67 С. Гидролиз ведут в течение от 72 до 76 ч, после чего емкость выставляют для охлаждения при комнатной температуре на 24 ч. ТП 2.3. Нейтрализация. Гидролизат нейтрализуют путем добавления в емкость для гидролиза 4 н раствор НСl до достижения в гидролизате рН=6,9-7,1. ТП 2.4. Ультрафильтрация нейтрализата. Ультрафильтрацию нейтрализата проводят для удаления белковой природы и других низкомолекулярных примесей. Процесс ведут на ультрафильтрационной установке с мембранными элементами ПА-10 М, которые концентрируют все вещества с молекулярной массой выше 10 000 Да. Нейтрализат в начале концентрируют до объема 2 л, затем проводят диализ, приливая 8 л очищенной воды, и опять концентрируют до 2 л. Диализ проводят три раза. Из диализованного нейтрализата выделяют полисахарид осаждением спиртом. ТП 2.5. Осаждение спиртом. Осаждение полисахарида из нейтрализата тремя объемами спирта-ректификата с массовой долей этанола 96% ведут при Т =4 С в течение от 80 до 85 ч в емкостях путем медленного приливания к нейтрализату предварительно охлажденного до Т = -18 С этилового спирта. ТП 2.6. Отделение осадка. Поскольку полисахарид растворим в воде и не растворим в спирте, он выпадает в виде темно-коричневого осадка. Спиртовой раствор центрифугируют при 3000 об/мин в течение 50 мин. Супернатант сливают в отдельную емкость, а осадок растворяют в минимальном объеме дистиллированной воды. Полученная циннаборин-субстанция после контроля на содержание сухих веществ, глюкозы, белка, а также рН поступает на приготовление препарата циннабарин. ТП 3. Получение препарата циннаборин ТП 3.1. Стерильная фильтрация. Циннаборин-субстанцию фильтруют через микропористые капроновые мембраны Химифил с диаметром пор в порядке уменьшения: 1,2 мкм; 0,8 мкм; 0,45 мкм с целью проведения осветляющей фильтрации. Затем фильтруют через стерилизующую мембрану с диаметром пор 0,2 мкм. ТП 3.2 Розлив препарата циннаборин. После фильтрации препарат разливают по 50 мл во флаконы оранжевого стекла и укупоривают. Физико-химические свойства циннаборина. Полученный противоопухолевый препарат циннаборин представляет собой порошкообразное вещество коричневого цвета без запаха, нерастворимое в спирте и ацетоне, растворимое в воде. Молекулярная масса - около 15000 Да,зольность менее 13%. По химическому составу 005095 6 высокомолекулярный полисахарид, относящийся к группе глюканов. Циннаборин состоит из смеси остатков глюкозы и маннозы, разной степени полимеризации. В качестве хромофорной группы в молекуле циннаборина выступает 4,7-диоксикумариновый фрагмент. Одна хромофорная группа приходится на 20-40 моносахаридных звеньев циннабарина. Молекула циннабарина содержит до 13 остатков 4,7-диоксикумарина. Методом тонкослойной хроматографии на пластинах Silufol-254 был установлен состав моносахаров, входящих в состав циннаборин. В качестве маркеров использовали водные растворы глюкозы, маннозы, мальтозы, арабинозы,лактозы, рамнозы, ксилозы, галактозы в концентрации 1 и 5%. Полученные данные свидетельствуют о содержании в циннаборине глюкозы,ксилозы, мальтозы, а также галактозы. При этом в зависимости от условий культивирования соотношение и набор моносахаров могут варьировать. При проведении тонкослойной хроматографии после предварительного гидролиза (как кислотного, так и щелочного) в гидролизате обнаруживаются 4 вещества углеводной природы с разными значениями Rf. Структуры, содержащие хромофор, прочно сорбируются силикагелем и остаются на старте. Методом гель-хроматографии на двух различных носителях установлена гомогенность циннаборина по молекулярной массе. Молекулярная масса равна 15 140 Да. Молекулы циннаборина заряжены отрицательно, но для разных молекул примерно одинаковой молекулярной массы число заряженных функциональных групп различно. Анализ спектров циннаборина позволяет предположить наличие некоторых структурных различий в хромофорной группе. Различная выраженность максимумов поглощения при 264 нм и 306 нм, а также ИК-спектр циннаборина указывает на наличие большого количества гидроксильных групп, соединенных водородными связями (валентные колебания 3400 см-1). Наличие плеча в области 3250 см-1 свидетельствует о присутствии в структуре N - Н групп, связанных водородными связями. В спектре имеется полоса в области валентных колебаний карбонильной группы, которая, вероятно, состоит из трех не разрешившихся полос при 1600, 1665 и 1695 см-1. Их можно отнести к валентным колебаниям лактонного (а), сложноэфирного (б) и амидного карбонилов. Остальные полосы поглощения в спектре являются не характерными и, вероятно,связаны с валентными и деформационными колебаниями С - Н, С - О и С - N связей. Спектр поглощения циннаборина имеет ярко выраженный максимум в ультрафиолетовой области 264 нм и максимум с меньшим коэффициентом экстинкции при 306 нм. Такой характер УФспектра, ИК-спектра и данные литературы по 7 зволяют предположить наличие в структуре циннаборина в качестве хромофорных групп оксикумариновых структур. Известно, что для оксикумаринов характерно влияние рН среды на интенсивность максимумов поглощения, поэтому было проведено спектрофотометрическое титрование раствора циннаборина в интервале рН от 4,7 до 10,6. Максимум поглощения наблюдается при 264 нм и 306 нм, а изобестическая точка находится при 283 нм, в хромофорной группе имеются две титруемые функциональные группы с рK 6,1 и 9,95. рK гидроксильных групп оксикумарина в положении 4 равно 5,9, а в положении 7 - 9,22, что очень близко к полученным значениям. Имеющиеся различия могут быть обусловлены влиянием гликозидной связи, вероятнее всего, в положении 5 или 6 оксикумариновой структуры. Доказательством наличия оксикумариновой структуры может служить исчезновение полос поглощения циннаборина при 264 нм и 306 нм после кислотного гидролиза и появления полосы с максимумом поглощения при 284 нм,характерной для ароматической системы. Коротковолновой максимум поглощения оксикумаринов имеет коэффициент экстинкции 30000 - 50000 л/мольсм-1. Исходя из средней молекулярной массы сахаров, можно принять число моносахаридных остатков в молекуле циннаборина равным 76-80. Один хромофорный остаток приходится на 3040 моносахаридных звеньев. Циннаборин представляет собой высокомолекулярный полисахарид, относящийся к группе глюканов. В качестве хромофорной группы в молекуле циннаборина выступает 4,7 диоксикумариновый фрагмент. Одна хромофорная группа приходится на 20-40 моносахаридных звеньев циннаборина. Молекула циннаборина содержит до 13 остатков 4,7-диоксикумарина. Молекулярная масса - около 15000 Да. Фармакологическое действие Циннаборин предназначен для лечения опухолевых заболеваний, как в качестве самостоятельного лекарственного средства, так и в базовых схемах стандартной противоопухолевой терапии. Исследования по изучению противоопухолевой эффективности препарата циннаборин,проведенные на экспериментальных модельных системах перевивных опухолей беспородных крыс (У-256, Sa-45, Ca M-1), позволили сделать следующие выводы. Циннаборин при внутрибрюшинном введении в дозах 19 мг/кг пятикратно и 95 мг/кг однократно обладал выраженным противоопухолевым действием по таким параметрам эффективности, как динамика роста опухоли и процент торможения роста по объему. Во всех исследованных опытных группах получено достоверное торможение роста опухоли по размеру. Процент торможения существенно превышал 8 установленный минимальный критерий активности ( 50%). Излечено 25% крыс с У-256 при пятикратном и 16,7% - при однократном введении циннаборина. Количество животных, выживших в опытной группе, было больше, чем в контрольной. Проведенные эксперименты с введением в 10 раз меньшей дозы циннаборина (2 мг/кг пятикратно и 10 мг/кг - однократно) животным с опухолью У-256 подтвердили высокий противоопухолевый эффект препарата. Торможение роста У-256 по объему за время наблюдения составило 55,9-81,8%. Значительный противоопухолевый эффект циннаборина отмечен при одно- и пятикратном введении крысам с Sa-45. Помимо достоверного торможения роста опухоли по размеру процент торможения колебался от 60,2 до 77,5. Специфическое действие циннаборина проявлялось не только в торможении роста опухоли в широком диапазоне доз, но также в нормализации ряда биохимических и гематологических показателей выздоровления части экспериментальных животных. Изучение возможного механизма действия циннаборина выявило его иммунотропное и антиоксидантное действие. Циннаборин in vitro оказывает модулирующее действие на фагоцитарную активность нейтрофилов: в больших дозах снижает фагоцитарный показатель, а в малых стимулирует,кроме того, способствует достоверному увеличению фагоцитарного числа. Введение циннаборина увеличивает метаболическую активность нейтрофилов в NSTтесте in vitro. Циннаборин в зависимости от дозы угнетает или активирует хемотаксический индекс нейтрофилов. Циннаборин не оказывает влияния на экспрессию рецепторов к эритроцитам барана, а в отношении рецепторов к С 3-компоненту комплемента вызывает снижение числа экспрессирующих данный рецептор клеток в наиболее высокой из исследованных дозе. Циннаборин в отдельных случаях может оказывать митогенный/антигенный в РБТЛ эффект, но в целом это влияние не прослеживается. Аналогичная ситуация характерна и при индукции РБТЛ фитогемагглютинином и Кон А. Высокие дозы циннаборина снижают выраженность РБТЛ, индуцированной митогеном фитолакки, а низкие дозы препарата угнетают РБТЛ,индуцированную липополисахаридом, что свидетельствует о возможности влияния циннаборина на функциональную активность лимфоцитов. Установлены изменения функционального состояния эритроцитов крови человека при их обработке циннаборином. Полученные данные свидетельствуют о влиянии препарата на водноэлектролитный баланс клеток. Результатом это 9 го воздействия становится усиление гомогенности популяции эритроцитов, видимо вследствие нормализации водно-электролитного баланса клеток с нарушенными ранее свойствами. Изучение антиоксидантного действия циннаборина показало, что препарат активно участвует в функционировании системы антиоксидантной защиты организма и нормализует содержание малонового диальдегида в исследованных органах облученных животных. Введение циннаборина за 1 сутки до облучения оказывает радиопротекторное действие на активность ключевого фермента системы антиоксидантной защиты супероксиддисмутазы. Введение циннаборина за 1 ч до облучения снижает содержание конечного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида в гомогенатах органов облученных животных. Уровень содержания глюкозы в органах облученных животных свидетельствует о накоплении препарата в кроветворных органах и определенном радиопротекторном действии циннаборина при введении за 1 сутки до облучения. Изучение радиопротекторного действия препарата по частоте аберрантных клеток, индуцируемых в костном мозге мышей облучением в дозе 2.5 Гр, показало, что циннаборин оказывает выраженный защитный эффект при введении в дозе 0,7 мл за час до облучения 14,4 и 24,8 аберрантных клеток в опыте и контроле,соответственно. По спектру аберраций достоверного различия между опытной и контрольной группой не было. Следовательно, защитный эффект препарата выражен на уровне кроветворных клеток, а не самих хромосом. Фармакокинетика Изучение характера фармакокинетики показало, что циннаборин выводится из организма в течение 24 ч. Максимальное накопление препарата наблюдается на втором часу после введения. Затем концентрация циннаборина снижается, и через 24 ч в крови сохраняются следовые количества препарата. Время полувыведения циннаборина составляет 6 ч. Циннаборин метаболизируется в печени с образованием моносахаров. Препарат выводится в основном с мочой в неизменном виде, а также в виде неактивных метаболитов. Наибольшая часть принятой дозы выводится через 6 ч после приема. После многократных приемов внутрь кумуляции препарата в организме не наблюдается. Токсичность Изучение общей токсичности и некоторых видов специфической токсичности показало,что препарат по токсичности относится к малотоксичным веществам.LD50 при введении максимального объема препарата, допустимого для каждого вида взятых в эксперимент животных, не представилось 10 возможным установить. Ни при внутрибрюшинном, ни при внутривенном введении циннаборина не было отмечено гибели животных. Изучение токсичности циннаборина на культуре клеток показало, что препарат не токсичен при концентрации 6 мкг на 500 тыс. клеток, что в пересчете на организм человека составляет 65 г. Введение препарата в течение 20 суток показало, что циннаборин не обладает кумулятивностью: гибели животных не наблюдалось. Препарат в эксперименте не проявлял мутагенных, эмбриотоксичных, тератогенных свойств. Он не оказывал ни кожнораздражающего, ни аллергенного, ни анафилактогенного действия. Не отмечено также иммунотоксичности при введении циннаборина. Изучение хронической токсичности не выявило статистически значимых изменений в основных параметрах организма. Данные морфологических, гистологических и биохимических исследований свидетельствуют об отсутствии токсического воздействия циннаборина на организм крыс при внутрибрюшинном введении в терапевтических дозах. Таким образом, циннаборин в эксперименте проявляет достаточную эффективность при относительно низкой токсичности. Изучение острой токсичности циннаборина на культуре клеток Изучение острой токсичности препарата на культуре клеток проводили с использованием перевиваемых культур клеток - FL, Vero, Л-41,RD. Методика эксперимента. Характеристика культур. В работе использовали питательную среду Игла, эмбриональную телячью сыворотку, сыворотку крупного рогатого скота, Версен, гемогидролизат 5 и 2,5%. Флаконы засевали культурой клеток Vero и FL. В течение 24 ч инкубирования в термостате образовывался монослой. Содержание клеток достигало 300-500 тыс/мл. Такой ранний монослой обладает наибольшей чувствительностью к токсическим агентам. Состояние культуры клеток оценивалось с помощью микроскопа. Циннаборин разводили до концентрации 0,07-4,0 мг /мл. В каждый пенфлакон вносили по 0,1 мл соответствующего разведения. Адсорбция препарата продолжалась 30 мин при комнатной температуре. Затем клетки промывали раствором Хенкса, добавляли во флаконы по 1 мл питательной среды и помещали флаконы в термостат при 37 С. Через 24 ч контрольные клетки просматривали, и в случае отсутствия изменений опыт продолжался до естественной гибели клеток. Оценку состояния культуры клеток проводили через 24 и 48 ч, 5 и 7 суток. В результате эксперимента установлено,что в контроле деструктивных изменений кле 11 ток не наблюдалось. В культуре клеток с введением циннаборина деструкция и гибель клеток наблюдалась при дозе препарата 0,5-4,0 мг/мл. При этом LD50 была равна 0,5 мг/мл. Изучение действия циннаборина в широком диапазоне доз (от 1 до 100 терапевтических доз) не выявило значимых отклонений в функционировании основных параметров и систем организма животных. Использованная литература 1. Новые иммунорегулирующие препараты и иммунологические методы. Рига, Зинатне,1978. 2. Неспецифические стимуляторы реактивности организма в онкологии. Рига, Зинатне, 1974. 3. Результаты и перспективы научных исследований микробных полисахаридов. Тез. докл. Всесоюзн. Научн.конф. Л., 1978, с.55-56. 4. Therapeutic effects os substances occurring 12 5. Морозова Г.Р. и др. Промышленное получение мицелия высших грибов. Обзор. М.,1978, (ОНТИТЭИ). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения противоопухолевого препарата Циннаборин путем глубинного культивирования мицелия базидиомицетов на питательной среде, характеризующийся тем, что глубинное культивирование проводят из мицелия Picnoporus cinnabarius в течение 96 ч на питательной среде, содержащей неохмеленное пивное сусло с содержанием сахаров до 14 Б,воду в соотношении 1:3 и агар-агар, с последующим выделением и очисткой целевого продукта из культуральной жидкости, выделение полисахаридов из высушенного фильтрата культуральной жидкости ведут 7%-ным раствором гидроксида натрия при соотношении массы 1:10 при 64-67 С, с последующим охлаждением и нейтрализацией гидролизата 4 Н раствором НСl до 6,9-7,1 и очистку ведут ультрафильтрацией и трехкратным диализом водой с последующим осаждением их 96% этанолом.

МПК / Метки

МПК: C12R 1/645, A61P 35/00, C12P 19/04, A61K 31/715

Метки: препарата, противоопухолевого, циннаборин, получения, способ

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/7-5095-sposob-polucheniya-protivoopuholevogo-preparata-cinnaborin.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ получения противоопухолевого препарата “циннаборин”</a>

Похожие патенты