Тетрапропиламмония тетратиомолибдат и родственные соединения для антиангиогенной терапии

Номер патента: 8683

Опубликовано: 29.06.2007

Авторы: Бревер Джордж Дж., Коукоуванис Димитрий, Мерайвер София Д.

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Композиция, содержащая биологически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и фармацевтически приемлемый эксципиент.

2. Композиция по п.1, где указанная композиция содержит тетраметиламмония тетратиомолибдат.

3. Композиция по п.1, где указанная композиция содержит тетраэтиламмония тетратиомолибдат.

4. Композиция по п.1, где указанная композиция содержит тетрабутиламмония тетратиомолибдат.

5. Композиция по п.1, где указанная композиция содержит тетрапропиламмония тетратиомолибдат.

6. Композиция, содержащая биологически эффективное количество соединения, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и фармацевтически приемлемый эксципиент, где тетраалкиламмония тетратиомолибдат, по существу, стабилен во влажном нагретом воздухе в течение по меньшей мере примерно 7 суток, имеет период полувыведения при воздействии воздуха при комнатной температуре, по меньшей мере в два раза больший чем период полувыведения аммония тетратиомолибдата, растворим в воде по меньшей мере до 1 мг/мл и в водном растворе высвобождает тетратиомолибдат, имеющий, по существу, неизмененные свойства связывания меди.

7. Композиция по любому из пп.1-6, предназначенная для внутривенного введения.

8. Композиция по любому из пп.1-6, предназначенная для введения в глаза.

9. Композиция по любому из пп.1-6, предназначенная для перорального введения.

10. Композиция по любому из пп.1-6, дополнительно содержащая второй терапевтический агент.

11. Композиция по п.10, дополнительно содержащая соединение цинка.

12. Композиция по п.10, дополнительно содержащая антиангиогенный агент.

13. Композиция по п.12, дополнительно содержащая антиангиогенный агент, выбранный из группы, состоящей из ангиостатина, эндостатина, триентина, пеницилламина и цинка.

14. Композиция по п.10, дополнительно содержащая противораковый агент.

15. Композиция по п.14, дополнительно содержащая противораковый агент, выбранный из группы, состоящей из химиотерапевтического агента, радиотерапевтического агента, иммунотоксина, антиангиогенного агента, агента, индуцирующего апоптоз, связывающего медь агента, отличного от тетраалкиламмония тетратиомолибдата, и соединения цинка.

16. Композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, для применения в терапии.

17. Композиция, содержащая тетраалкиламмония тетратиомолибдат, для применения при лечении или предупреждении заболевания, связанного с аберрантной васкуляризацией.

18. Композиция, содержащая тетраалкиламмония тетратиомолибдат, для применения при лечении или предупреждении рака.

19. Композиция по любому из пп.1-6 для применения при лечении рака.

20. Применение тетраалкиламмония тетратиомолибдата в качестве активного соединения в производстве лекарства для лечения или предупреждения заболевания, характеризующегося аберрантной васкуляризацией.

21. Применение по п.20, где указанное заболевание представляет собой дегенерацию желтого пятна влажного типа или ревматоидный артрит.

22. Применение по п.20, где указанное заболевание представляет собой рак.

23. Применение композиции по любому из пп.1-6 в производстве лекарства для лечения рака.

24. Набор, содержащий по меньшей мере один контейнер, терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и:

а) терапевтически эффективное количество второго терапевтического агента или

б) по меньшей мере один компонент аналитической системы для определения уровней сывороточного церулоплазмина.

25. Набор по п.24, где указанный тетраалкиламмония тетратиомолибдат находится в фармацевтически приемлемой композиции.

26. Набор по п.24, где указанный тетраалкиламмония тетратиомолибдат представляет собой тетрапропиламмония тетратиомолибдат.

27. Набор по любому из пп.24-26, содержащий указанное по меньшей мере одно соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и указанный второй, отличающийся терапевтический агент.

28. Набор по п.27, где указанный второй терапевтический агент представляет собой соединение цинка или второй, отличающийся антиангиогенный агент.

29. Набор по п.27, где указанный второй терапевтический агент представляет собой противораковый агент.

30. Набор по п.27, где тетраалкиламмония тетратиомолибдат и указанный второй терапевтический агент содержатся в одном контейнере.

31. Набор по п.27, где тетраалкиламмония тетратиомолибдат и указанный второй терапевтический агент содержатся в разных контейнерах.

32. Набор по любому из пп.24-26, содержащий тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и указанный по меньшей мере один компонент аналитической системы для определения уровней сывороточного церулоплазмина.

33. Набор по п.32, содержащий все компоненты аналитической системы для определения уровней сывороточного церулоплазмина.

34. Способ лечения или предупреждения заболевания, связанного с аберрантной васкуляризацией, при котором животному, имеющему указанное заболевание, или имеющему риск его развития, вводят фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат.

35. Способ по п.34, где указанная фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество тетрапропиламмония тетратиомолибдата.

36. Способ по п.34 или 35, где указанную фармацевтическую композицию вводят указанному животному парентерально.

37. Способ по п.34 или 35, где указанную фармацевтическую композицию вводят указанному животному в глаза.

38. Способ по п.34 или 35, где указанную фармацевтическую композицию вводят указанному животному перорально.

39. Способ по п.34 или 35, где указанному животному дополнительно вводят терапевтически эффективное количество второго терапевтического агента.

40. Способ по п.39, где указанный второй терапевтический агент представляет собой соединение цинка или второй, отличающийся антиангиогенный агент.

41. Способ по п.34 или 35, где указанное заболевание представляет собой дегенерацию желтого пятна влажного типа или риск ее развития.

42. Способ по п.34 или 35, где указанное заболевание представляет собой ревматоидный артрит или риск его развития.

43. Способ по п.34 или 35, где указанное заболевание представляет собой рак или риск его развития.

44. Способ по п.43, где указанное заболевание представляет собой рак.

45. Способ по п.44, при котором указанному животному дополнительно вводят терапевтически эффективное количество второго противоракового агента.

46. Способ по п.34 или 35, при котором указанному животному вводят от примерно 10 до примерно 300 мг указанного тетраалкиламмония тетратиомолибдата.

47. Способ по п.34 или 35, при котором тетраалкиламмония тетратиомолибдат вводят животному в количестве и в течение периода времени, эффективных для снижения уровня меди у этого животного до уровня между примерно 10 и примерно 40% от уровня меди у указанного животного до введения указанного тетраалкиламмония тетратиомолибдата.

48. Способ по п.47, при котором тетраалкиламмония тетратиомолибдат вводят указанному животному в количестве и в течение периода времени, эффективных для снижения уровня меди у этого животного до уровня между примерно 10 и примерно 20% от уровня меди у указанного животного до введения указанного тетраалкиламмония тетратиомолибдата.

49. Способ по п.47, при котором указанному животному дополнительно вводят терапевтически эффективное количество агента, связывающего медь, в течение периода времени, эффективного для поддержания уровня меди у этого животного, составляющего примерно 10-20% от уровня, имевшегося до введения тетраалкиламмония тетратиомолибдата.

50. Способ по п.49, где вводимый агент, связывающий медь, представляет собой соединение тиомолибдата.

51. Способ по п.49, где вводимый агеэт, связывающий медь, представляет собой соединение цинка.

52. Способ по п.47, при котором ударную дозу указанного тетраалкиламмония тетратиомолибдата сначала вводят указанному животному в количестве и в течение периода времени, эффективных для первоначального снижения уровня меди у этого животного до уровня, составляющего примерно 10-20% от уровня, имевшегося до введения, и затем указанному животному вводят поддерживающую дозу тетраалкиламмония тетратиомолибдата в количестве и в течение периода времени, эффективных для поддержания уровня меди у указанного животного, составляющего примерно 10-20% от уровня до введения.

53. Способ по любому из пп.34 или 35, где указанная фармацевтическая композиция понижает уровень сывороточного церулоплазмина.

54. Способ по любому из пп.34 или 35, где указанное животное представляет собой человека.

 

Текст

Смотреть все

008683 По настоящей заявке заявлен приоритет находящейся в процессе одновременного рассмотрения предварительной заявки США, серийный 60/397804, поданной 23 июля 2002 г., полное описание которой включено сюда путем ссылки без отказа. 1. Область изобретения Настоящее изобретение в целом относится к области ангиогенных заболеваний. Более конкретно в нем предложены соединения, связывающие медь, с улучшенными свойствами и способы применения таких соединений при предупреждении и лечении заболеваний с ангиогенным компонентом, включая рак. Также предложены фармацевтические композиции, терапевтические наборы и способы комбинированного лечения. 2. Предшествующий уровень техники Солидным опухолям необходима пролиферация кровеносных сосудов (ангиогенез) для поддержания роста, чтобы обеспечивалось адекватное питание слоев помимо большинства периферических клеточных слоев (Hayes, 1994; Horak et al., 1993; Parangi et al., 1996). Нормальным тканям взрослого человека, с другой стороны, требуется небольшой рост новых кровеносных сосудов, за исключением случаев заживления раны, регенерации после травмы или операции и пролиферации внутренней выстилки матки во время менструального цикла. Таким образом, зависимость от ангиогенеза составляет фундаментальное различие между опухолевой и нормальной тканью. Это различие количественно более резкое чем различия в скоростях клеточной репликации и клеточной гибели, на которых основаны многие циторедуктивные методы химиотерапии. В результате зависимости опухоли от ангиогенеза была разработана концепция антиангиогенной терапии для злокачественных опухолей (Folkman, 1995a; Folkman, 1995b;Hanahan and Folkman, 1996). Существует ряд других примеров заболеваний, характеризующихся аберрантным ангиогенезом. Одним из примеров такого заболевания, опосредованного ангиогенезом, является неоваскулярное заболевание глаз. Это заболевание характеризуется инвазией новых кровеносных сосудов в структуры глаза,такие как сетчатка или роговица. Это является наиболее распространенной причиной слепоты и вовлечено примерно в двадцать глазных заболеваний. При возрастной дегенерации желтого пятна сопутствующие проблемы зрения вызваны врастанием капилляров сосудистой оболочки через дефекты в оболочке Бруха при пролиферации фиброзно-сосудистой ткани под пигментным эпителием сетчатки. Другим заболеванием, в которое, как считают, вовлечен ангиогенез, является ревматоидный артрит. Кровеносные сосуды в синовиальной выстилке суставов претерпевают ангиогенез. Кроме образования новых сосудистых сеток, эндотелиальные клетки высвобождают факторы и реактивный кислород, которые вызывают рост паннуса и разрушение хряща. Факторы, вовлеченные в ангиогенез, могут вносить активный вклад в состояние хронического воспаления при ревматоидном артрите и способствовать его поддержанию. Медь является как потребностью, так и эффективным стимулом для ангиогенеза, как показано в исследованиях неоваскуляризации роговицы кролика (Parke et al., 1998). Во время индуцированного простагландином El (PGE1) ангиогенеза в роговице кролика медь аккумулируется в том месте, где происходит ангиогенез (Parke et al., 1998). Напротив, у кроликов с дефицитом меди ангиогенез в роговице в ответ на PGE1 в значительной степени снижен. В роговице кролика медь для ангиогенеза может доставляться как церулоплазмином (белком, содержащим медь), так и растворенным сульфатом меди, хотя апоцерулоплазмин (церулоплазмин без меди) не поддерживает ангиогенез (Gullino, 1986). В дополнительных исследованиях также показано, что медь является важным ангиогенньм агентом (Raju et al., 1982; Ziche etal., 1982). Все эти исследования подтверждают концепцию, что для ангиогенеза необходима несвязанная медь. Несколько лет назад были созданы некоторые модели опухолей животных с использованием подхода, направленного против меди (Brem et al., 1990a; 1990b; Yoshida et al., 1995). Хелатирующий агент пеницилламин и диету с низким содержанием меди использовали для снижения уровней меди у крыс и кроликов с имплантированными интрацеребральными опухолями. Однако животные, которых лечили режимом с низким содержанием меди, хотя и показывали уменьшение размеров опухоли, не показывали улучшенной выживаемости по сравнению с необработанными контролями. Пеницилламиновая терапия, как сообщали, также связана со значительными побочными эффектами, включая тошноту и желудочный дискомфорт, а также более серьезные побочные эффекты, такие как лейкопения и тромбоцитопения, которые могут приводить к апластической анемии. В некоторых случаях также сообщали о нефротическом синдроме. Отрицательные результаты в литературе, включая исследование Brem et al. (1990b), в котором гибель обработанных животных происходила с такой же частотой, как и необработанных контрольных животных, значительно затормозили дальнейшую работу в данной области. Однако после преодоления таких предубеждений были, наконец, разработаны успешные антиангиогенные методы терапии, основанные на эффективном модулировании статуса меди в целостном организме (заявка РСТ WO 00/13712). В основу данной работы было положено определение окна дефицита меди, в пределах которого ангиогенез может быть ингибирован, но необходимые зависимые от меди клеточные процессы поддерживаются в достаточной степени, чтобы избежать токсичности. Эффективная терапия в пределах данного окна-1 008683 была достигнута с использованием ряда агентов, которые связывают медь и образуют комплексы агентмедь-белок, таких как тетратиомолибдат (ТМ), и были сообщения об огромных успехах в клинических испытаниях (заявка РСТ WO 00/13712). Однако, несмотря на эти достижения, в данной области остается необходимость в усовершенствованных агентах для применения с целью антиангиогенной терапии посредством снижения и поддержания уровня меди. Особенно желательна разработка соединений с повышенной стабильностью и увеличенным сроком хранения. При попытке разработки более стабильных соединений, связывающих медь,должно быть важно решить проблемы, типично встречающиеся в таких исследованиях, такие как низкая растворимость и/или снижение терапевтической активности. Соответственно, возможность изготовления фармацевтических препаратов растворимых и терапевтически эффективных связывающих медь соединений с повышенной стабильностью и увеличенным сроком хранения будет особенно значительным прогрессом. Краткое изложение сущности изобретения Настоящее изобретение решает такие проблемы в данной области техники, предлагая ряд соединений, которые связывают медь и образуют трехкомпонентные комплексы соединение-медь-белок, причем эти соединения проявляют повышенную стабильность без значительной потери растворимости или терапевтической эффективности. Соединения, фармацевтические препараты и наборы по изобретению, следовательно, обладают различными преимуществами в антиангиогенной и противоопухолевой терапии в клинике, включая простоту изготовления и обращения и увеличенный срок хранения, причем эти преимущества достигаются без ограничения терапевтического профиля этих соединений. В изобретении предложены как лежащие в основе соединения, фармацевтические препараты, лекарства и наборы, так и превентивные и терапевтические способы применения для безопасного и эффективного вмешательства в ангиогенные заболевания, включая рак. В изобретении, в частности, предложены соединения, композиции, фармацевтические препараты и наборы, содержащие биологически или терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, и соответствующие им способы лечения и медицинское применение. Эти композиции предпочтительно представляют собой фармацевтические композиции или препараты, которые содержат фармацевтически приемлемый эксципиент вместе, по меньшей мере с первым соединением, представляющим собой алкиламмония тиомолибдат. При использовании во всей заявке единственного числа существительных, подразумевают, что это означает по меньшей мере один, по меньшей мере первый, один или более или множество указанных компонентов или стадий, за исключением случаев, где за этим конкретно указан верхний предел либо он должен быть очевиден специалистам в данной области. Следовательно, алкиламмония тиомолибдат означает по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат. Используемые пределы и параметры комбинаций, как и количества любого отдельного агента,должны быть известны обычным специалистам в данной области в свете настоящего описания. Единственное число существительных также используют для обозначения по меньшей мере одной, по меньшей мере первой, одной или более или множества стадий в описываемых способах,за исключением особых указаний. Это в частности, относится к стадиям введения в способах лечения. Таким образом, по настоящему изобретению можно применять не только различные дозы, но и различные количества доз вплоть до многократных введений и включая их. На протяжении всего настоящего описания и формулы изобретения термин или используют в том смысле, что он означает и/или применительно к раскрываемым и заявленным компонентам и стадиям,за исключением тех случаев, когда после этого иной смысл конкретно указан либо должен быть очевиден обычным специалистам в данной области. Следовательно, указание моноалкиламмоний, диалкиламмоний, триалкиламмоний или тетраалкиламмоний, как здесь используют, означает как моноалкиламмоний, диалкиламмоний, триалкиламмоний или тетраалкиламмоний, так и их комбинации, как, например, моноалкиламмоний и диалкиламмоний; моноалкиламмоний и тетраалкиламмоний; диалкиламмоний и триалкиламмоний и тому подобное. Таким образом, если иное не указано особо или не очевидно обычным специалистам в данной области, термин или просто используют как краткий относительный термин, охватывающий каждый перечисленный компонент либо стадию и все их комбинации. Композиции, фармацевтические композиции, лекарства и наборы по настоящему изобретению содержат более стабильные агенты, которые, кроме того, снижают уровни меди посредством образования трехкомпонентного комплекса агент-медь-белок, который впоследствии выводится из организма. Медь, связанная в этих трехкомпонентных комплексах агент-медь-белок, не претерпевает обратимого высвобождения из этих комплексов, что является отличительным признаком изобретения от обратимого двухкомпонентного хелатирования меди. В некоторых воплощениях композиции, фармацевтические композиции, лекарства и наборы по настоящему изобретению содержат фармацевтически приемлемый эксципиент и по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, которое по существу стабильно при воздействии воздуха и влаги, сохраняет растворимость, и которое высвобождает биологически и терапевтически эффективное соединение тиомолибдата в раствор.-2 008683 Число алкильных групп в соединениях, представляющих собой алкиламмония тиомолибдат, можно варьировать при применении изобретения на практике. Примеры воплощения изобретения, таким образом, включают соединения моноалкиламмония, диалкиламмония, триалкиламмония и тетраалкиламмония тиомолибдата, и их фармацевтические композиции. В некоторых воплощениях предпочтительны будут соединения тетраалкиламмония тиомолибдата. Число групп серы также можно варьировать, как известно в химии тиомолибдатов. Другие примеры соединений по изобретению, таким образом, включают алкиламмония монотиомолибдат, дитиомолибдат, тритиомолибдат, тетратиомолибдат, октатиомолибдат и додекатиомолибдат и их фармацевтические композиции. Соединения, представляющие собой алкиламмония тиомолибдата, и фармацевтические композиции по изобретению, кроме того, включают те, в которых соединение алкиламмония тиомолибдата содержит по меньшей мере первый атом железа или по меньшей мере первый атом кислорода. Одним из конкретных примеров является алкиламмония железа октатиомолибдат. Должно быть понятно, что следует избегать полного окисления соединения тиомолибдата. В некоторых предпочтительных воплощениях согласно изобретению предложены композиции,фармацевтические композиции, лекарства и наборы, содержащие фармацевтически приемлемый эксципиент и по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тетратиомолибдат,которое содержит число алкильных групп, достаточное для защиты тетратиомолибдата от окисления при воздействии воздуха и влаги, повышая посредством этого стабильность соединения тетратиомолибдата,причем это соединение, представляющее собой алкиламмония тетратиомолибдат, высвобождает биологически или терапевтически эффективное количество тетратиомолибдата в раствор. В других предпочтительных воплощениях согласно изобретению предложены соединения, представляющие собой тетраалкиламмония тиомолибдат, и их фармацевтические композиции. Природа алкильных групп не ограничена изобретением, которое, следовательно, включает тетраметиламмония тетратиомолибдат, тетраэтиламмония тетратиомолибдат и тетрабутиламмония тетратиомолибдат и их фармацевтические композиции. В некоторых аспектах изобретения предпочтительным будет тетрапропиламмония тетратиомолибдат и его фармацевтические композиции. Таким образом, такие композиции, фармацевтические композиции, лекарства и наборы содержат фармацевтически приемлемый эксципиент и по меньшей мере первое соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, в котором алкильные группы защищают тетратиомолибдат от окисления при воздействии воздуха и влаги, повышая посредством этого стабильность соединения тетратиомолибдата, где соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, сохраняет растворимость и высвобождает по существу биологически или терапевтически активный тетратиомолибдат и по существу биологически инертные группы алкиламмония в водный раствор. Согласно изобретению, также предложены композиции, фармацевтические композиции, лекарства и наборы, которые содержат биологически или терапевтически эффективное количество соединения,представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, и фармацевтически приемлемый эксципиент, где указанное соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, по существу, стабильно во влажном нагретом воздухе в течение по меньшей мере примерно 7 суток; имеет период полураспада при воздействии воздуха при комнатной температуре по меньшей мере в два раза больше чем аммония тетратиомолибдат; растворимо в воде до по меньшей мере примерно 1 мг/мл и в водном растворе высвобождает тетратиомолибдат по существу с неизмененными свойствами в отношении связывания меди. Некоторые предпочтительные композиции и фармацевтические композиции, которые обеспечивают такие преимущественные свойства, представляют собой те, в которых по меньшей мере первое соединение, представляющее собой тетралкиламмония тетратиомолибдат, является тетрапропиламмония тетратиомолибдатом. Композиции, лекарства и наборы, содержащие биологически эффективное количество тетрапропиламмония тетратиомолибдата и фармацевтически приемлемый эксципиент, являются,таким образом, предпочтительными воплощениями изобретения. Природа фармацевтических композиций и фармацевтически приемлемых эксципиентов не является критической для воплощения изобретения на практике. Типично такие композиции и эксципиенты будут выбраны таким образом, чтобы соответствовать ангиогенному состоянию, подлежащему лечению, например, будут приготовлены в виде препарата для внутривенного введения, перорального введения,глазного введения и тому подобное. Преимущество изобретения состоит в том, что системное введение композиций и соединений эффективно для лечения ряда состояний. Особенно предпочтительны композиции, изготовленные в виде препаратов для перорального введения. Тем не менее, также рассматривается местное введение в конкретные места, а, следовательно, и офтальмологические, местные и другие препараты по изобретению. Любая заданная композиция или фармацевтическая композиция по изобретению может содержать одно или более чем одно соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, как, например,содержащая по меньшей мере два, три, четыре или более таких соединений. Композиции и фармацевтические композиции, содержащие множество соединений, представляющих собой алкиламмония тиомо-3 008683 либдат, также охватываются изобретением. Композиции и фармацевтические композиции по изобретению могут также содержать биологически или терапевтически эффективные количества дополнительных биологических и/или терапевтических агентов, например содержать биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере второго, третьего, четвертого или более биологического и/или терапевтического агента. Естественно, выражение по меньшей мере второй биологический и/или терапевтический агент выбрано как соотносящееся с выражением по меньшей мере, к первому соединению, представляющему собой алкиламмония тиомолибдат, которое является первым биологическим и/или терапевтическим агентом в рамках композиции. По меньшей мере второй биологический и/или терапевтический агент часто, но не обязательно будет представлять собой терапевтический агент. Например, по меньшей мере второй биологический агент может представлять собой фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель; противогрибковый или антибактериальный агент; либо другой биологический агент, связанный с изготовлением и/или хранением фармацевтических препаратов. Этот второй биологический агент может также представлять собой диагностический агент, который поддерживают отдельно от терапевтического агента, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Когда по меньшей мере второй биологический агент представляет собой терапевтический агент, такой агент типично будет выбран исходя из состояния, подлежащего лечению. Например, при лечении артрита можно применять противоартритные соединения, и т.д. Такие комбинированные композиции и фармацевтические композиции по изобретению включают как смеси или коктейли, так и отдельные препараты, которые упакованы для продажи и/или применения в рамках изобретения. В комбинированных композициях, фармацевтических препаратах, коктейлях, наборах и связанных с ними способах, лекарствах и первом и втором медицинском применении изобретения комбинации являются терапевтически эффективными комбинациями. Таким образом, подразумеваемая практика изобретения включает предшествующее, одновременное или последующее введение второго терапевтического агента таким образом, чтобы результатом in vivo было комбинированное терапевтически эффективное количество агентов независимо от времени введения и от того, является ли комбинированное терапевтически эффективное количество возрастающим, аддитивным или синергическим количеством. Некоторые предпочтительные вторые терапевтические агенты представляют собой вторые антиангиогенные агенты или вторые отдельные антиангиогенные агенты, причем по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, является первым антиангиогенным агентом в рамках композиции. Примеры вторых антиангиогенных агентов включают другие соединения тиомолибдата, не связанные с алкиламмониевыми группами, такие как тетратиомолибдат аммония как таковой. Дополнительные соединения тиомолибдата, связанные по меньшей мере с первой углеводной молекулой, такой как моносахарид, дисахарид, трисахарид, олигосахарид или полисахарид, являются дополнительными примерами агентов, которые можно применять в комбинации с соединениями, представляющими собой алкиламмония тиомолибдат, по изобретению. Другими примерами антиангиогенных агентов для комбинированного применения в композициях и фармацевтических композициях по изобретению являются агенты, выбранные из табл. 2. Антитела антиVEGF являются другой группой пригодных антиангиогенных агентов. Например, указанный по меньшей мере второй антиангиогенный агент может представлять собой антиангиогенный агент, выбранный из группы, состоящей из ангиостатина (angiostatin), эндостатина (endostatin), триентина (trientine) и пеницилламина. Другими эффективными вторыми антиангиогенными агентами для комбинированного применения по изобретению являются соединения цинка. Если состояние, связанное с аберрантным ангиогенезом и подлежащее лечению, представляет собой рак, то по меньшей мере второй терапевтический агент может представлять собой, по меньшей мере,второй противораковый агент, то есть по меньшей мере второй отдельный противораковый агент. В таких воплощениях по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, будет опять же по меньшей мере первым противораковым агентом. Примеры вторых противораковых агентов включают агенты, выбранные из химиотерапевтических агентов, радиотерапевтических агентов, иммунотоксинов, агентов, индуцирующих апоптоз, отдельных антиангиогенных агентов и отдельных агентов, которые связывают медь. Вторые противораковые агенты, опять же, включают соединения цинка. Как он применяется здесь, термин химиотерапевтический агент используют в отношении классического химиотерапевтического агента или лекарства, используемого при лечении злокачественных опухолей. Этот термин используют для простоты, несмотря на тот факт, что другие соединения, включая иммунотоксины, могут быть технически описаны как химиотерапевтические агенты, поскольку они вызывают противораковый эффект. Однако термин химиотерапевтический введен как имеющий отдельное значение в данной области, и его используют соответственно этому стандартному значению. Химиотерапевтический в контексте настоящего изобретения, следовательно, в общем не относится к иммунотоксинам, радиотерапевтическим агентам и тому подобному, несмотря на то, что они имеют перекрывающееся действие.-4 008683 Ряд примеров химиотерапевтических агентов известен в данной области и дополнительно раскрыт ниже. Обычным специалистам в данной области будут легко понятны способы применения и соответствующие дозы химиотерапевтических агентов, хотя эти дозы могут быть снижены при применении в комбинации с настоящим изобретением. Новые лекарства, которые могут быть также обозначены термином химиотерапевтические агенты, представляют собой агенты, которые индуцируют апоптоз. Любое одно или более чем одно такое лекарство, включая гены, векторы и антисмысловые конструкции, как подходит, можно также применять в сочетании с настоящим изобретением. Согласно изобретению также предложен ряд терапевтических наборов. Некоторые терапевтические наборы включают, в качестве одного примера по меньшей мере первую фармацевтическую композицию,содержащую фармацевтически приемлемый эксципиент и биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Другие наборы, в качестве другого примера, содержат биологически или терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, и инструкции по введению этого соединения при лечении или предупреждении заболевания, связанного с аберрантной васкуляризацией, например инструкции по введению этого соединения при лечении или предупреждении рака. Предпочтительно любой из этих наборов будет включать по меньшей мере первый контейнер для фармацевтической композиции или композиции. Эти наборы могут также включать биологически или терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного диагностического компонента или, по меньшей мере, второго биологического или терапевтического агента, такого как антиангиогенный агент или противораковый агент. В таких наборах можно использовать любой один или более чем один второй биологический или терапевтический агент,описанный выше. В таких наборах любые комбинированные терапевтические агенты могут содержаться внутри одного контейнера или контейнерного средства, либо содержаться внутри отдельных контейнеров или контейнерных средств. Коктейли будут, как правило, смешаны вместе для комбинированного применения. Компоненты для диагностики и анализа будут помещены внутри отдельных контейнеров или контейнерных средств. В конкретных воплощениях наборы по изобретению содержат по меньшей мере один компонент системы анализа на определение уровней сывороточного церулоплазмина. Предпочтительно эти наборы будут содержать каждый компонент этой системы анализа, необходимый для определения уровней сывороточного церулоплазмина. Такие компоненты или целая система анализа будут содержаться в отдельном контейнере, отдельно от по меньшей мере первого соединения этого набора, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат. В предпочтительных воплощениях в такие наборы будут дополнительно включены дополнительные инструкции, такие как инструкции по регуляции терапии алкиламмония тиомолибдатом на основании уровней сывороточного церулоплазмина, определенных для данного пациента. Еще одни наборы по изобретению включают наборы, которые содержат биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного компонента системы анализа для обнаружения или диагностики рака, то есть компонента для диагностики рака. Предпочтительными будут целые диагностические системы или анализы рака. Такие компоненты или системы будут содержаться в композиции отдельно от по меньшей мере первого соединения, представляющего собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат. Соединения, композиции, фармацевтические препараты, наборы и комбинации по изобретению являются особенно пригодными для применения для связывания меди и образования комплексов агентмедь-белок, и могут, таким образом, эффективно применяться для лечения или предупреждения ряда заболеваний и расстройств, характеризующихся аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, или связанных с ними. Соответственно, согласно изобретению также предложено применение одного или более чем одного соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, в производстве лекарства для лечения или предупреждения заболевания, характеризующегося аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом. Особым аспектом изобретения является применение по меньшей мере первых соединений,представляющих собой алкиламмония тиомолибдат, в производстве лекарства для лечения или предупреждения заболевания, характеризующегося аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, у субъекта-человека. Другой особый аспект изобретения составляет применение соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, которое связывает медь и образует комплекс агент-медь-белок, в производстве лекарства для лечения или предупреждения заболевания, характеризующегося аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, возможно, у субъекта-человека. Эти аспекты изобретения приводят к следующим наборам по изобретению. Например, терапевтическам наборам, предпочтительно для введения субъекту человеку, которые содержат:(а) лекарство, произведенное в соответствии с настоящим изобретением, то есть лекарство, содержащее по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, и(б) средства для определения уровней сывороточного церулоплазмина (Ср), предпочтительно для-5 008683 определения уровней сывороточного церулоплазмина у субъекта человека. Дополнительными наборами по изобретению являются наборы, которые содержат:(а) ударную дозу лекарства, изготовленного в соответствии с настоящим изобретением, то есть лекарства, содержащего по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, где эта ударная доза снижает сывороточный церулоплазмин до уровня ниже примерно 20% от уровня до введения лекарства и(б) поддерживающую дозу лекарства, изготовленного в соответствии с настоящим изобретением, то есть лекарства, содержащего по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, где эта поддерживающая доза поддерживает сывороточный церулоплазмин на уровне ниже примерно 20% от уровня до введения лекарства. Что касается способов, в изобретении далее предложены способы лечения или предупреждения заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом. Как применяется здесь, термины аберрантная васкуляризация и аберрантный ангиогенез следует понимать как означающие аномальное новообразование кровеносных сосудов, включая образование новых кровеносных сосудов,увеличенные кровеносные сосуды, более разветвленные кровеносные сосуды (инвагинация), а также любой механизм или все механизмы, которые приводят к непригодной или повышенной способности переноса крови к больной ткани или месту. Агенты по настоящему изобретению следует понимать как противодействующие аберрантной васкуляризации и аберрантному ангиогенезу независимо от фактического механизма действия. Антиангиогенную терапию, предложенную изобретением, можно применять для животных и пациентов, которые имеют любое заболевание или расстройство либо риск развития любого заболевания или расстройства, характеризующиеся нежелательными, непригодными, аберрантными, избыточными и/или патологическими васкуляризацией или ангиогенезом. Обычным специалистам в данной области хорошо известно, что, поскольку процессы, лежащие в основе ангиогенеза, по существу одинаковы независимо от окружающей ткани, и, поскольку аберрантный ангиогенез встречается при широком ряде заболеваний и расстройств, данную антиангиогенную терапию можно применять для лечения целого ряда заболеваний и расстройств, связанных с ангиогенезом, как только показано, что она является эффективной в любой приемлемой модельной системе. Способы, лекарства и медицинское применение по изобретению, в частности, предназначены для применения у животных и у пациентов, которые имеют любую форму васкуляризованной опухоли; дегенерацию желтого пятна, включая возрастную дегенерацию желтого пятна; артрит, включая ревматоидный артрит; атеросклероз и атеросклеротические бляшки; диабетическую ретинопатию и другие ретинопатии; гиперплазии щитовидной железы, включая болезнь Грейвса; гемангиому; неоваскулярную глаукому и псориаз, либо у которых есть риск их развития. Эти способы, лекарства и виды медицинского применения можно, кроме того, использовать при лечении животных и пациентов, которые имеют артериовенозные мальформации (АВМ), менингиому и рестеноз сосудов, включая рестеноз после ангиопластики, либо у которых есть риск их развития. Другими рекомендованными мишенями терапевтических способов и применений являются животные и пациенты, которые имеют ангиофиброму, дерматит, эндометриоз, гемартроз, гипертрофированные рубцы,воспалительные заболевания и расстройства, пиогенную гранулему, склеродерму, синовит, трахому и сосудистые спайки, либо у которых есть риск их развития. Как раскрыто в патенте США 5712291, специально включенном сюда путем ссылки, каждая из вышеуказанных по тем или иным причинам предпочтительных терапевтических групп не является никоим образом исчерпывающей для типов состояний, которые подлежат лечению по данному изобретению. Патент США 5712291 включен сюда путем ссылки в целях, включающих идентификацию ряда других состояний, которые можно эффективно лечить с помощью антиангиогенной терапии, чтобы показать,что лечение всех ангиогенных заболеваний представляет унифицированную концепцию, как только раскрыта определенная категория антиангиогенных соединений (в данном случае - соединений, представляющих собой алкиламмония тиомолибдат), и чтобы показать, что лечение всех ангиогенных заболеваний закономерно на основании данных, полученных только на одной модельной системе. В следующих аспектах, как раскрыто в патенте США 5712291, включенном сюда путем ссылки,способы, лекарства и медицинские применения по настоящему изобретению предназначены для лечения животных и пациентов, которые имеют аномальную пролиферацию фиброваскулярной ткани, розовые угри, синдром приобретенного иммунодефицита, окклюзию артерий, атопический кератит, бактериальные язвы, болезнь Бехчета, врожденные аневризмы, обструктивную болезнь сонных артерий, химические ожоги, хориоидальную неоваскуляризацию, хроническое воспаление, хроническую отслойку сетчатки,хронический увеит, хронический витрит, избыточное ношение контактных линз, отторжение трансплантата роговицы, неоваскуляризацию роговицы, неоваскуляризацию трансплантата роговицы, болезнь Крона, болезнь Илза, эпидемический кератоконъюнктивит, грибковые язвы, инфекции простого герпеса,инфекции опоясывающего герпеса, синдромы повышенной вязкости, саркому Капоши, лейкемию, жировую дегенерацию, болезнь Лайма, краевой кератолиз, разъедающую язву роговицы (Морена), инфекции-6 008683 зрительного нерва, синдром Ослера - Вебера (Рандю - Вебера - Ослера), остеоартрит, болезнь Педжета,pars planitis, пемфигоид, филектенулезный кератит, полиартериит, осложнения после лазера, протозойные инфекции, эластичную псевдоксантому, сухой крыловидный кератит, радиальную кератотомию,неоваскуляризацию сетчатки, ретинопатию преждевременного развития, ретролентальные фиброплазии,саркоид, склерит, серповидно-клеточную анемию, синдром Шегрена, солидные опухоли, болезнь Штаргарта, болезнь Стивенса - Джонсона, верхнелимбический кератит, сифилис, системную красную волчанку, краевую дегенерацию Терриена, токсоплазмоз, травму, опухоли саркомы Эвинга, опухоли нейробластомы, опухоли остеосаркомы, опухоли ретинобластомы, опухоли рабдомиосаркомы, язвенный колит,окклюзию вен, дефицит витамина А и саркоидоз Вегенера, либо у которых есть риск их развития. Далее, согласно настоящему изобретению предложены способы, лекарства и медицинское применение для лечения животных и пациентов, которые имеют артрит либо у которых есть риск его развития,имеющие общие черты с лечением артрита, описанным в патенте США 5753230, специально включенном сюда путем ссылки. Патент США 5972922 также специально включен сюда путем ссылки,чтобы привести еще дополнительные примеры применения ангиогенных стратегий к лечению нежелательного ангиогенеза, связанного с диабетом, паразитарными заболеваниями, аномальным заживлением раны, гипертрофией после операции, ожогами, повреждениями или травмами, ингибированием роста волос, ингибированием овуляции и образования желтого тела, ингибированием имплантации и ингибированием развития эмбриона в матке. Далее, патент США 5639757 специально включен сюда путем ссылки, чтобы привести пример применения антиангиогенных стратегий к общему лечению отторжения трансплантата. Все вышеуказанные состояния, следовательно, рассматриваются как релевантные для лечения способами и применением по настоящему изобретению. Хотя лечение каждого из вышеуказанных заболеваний обеспечено в пределах настоящего унифицированного изобретения, особенно предпочтительный аспект способов, лекарств и медицинского применения изобретения составляет применение антиангиогенной терапии у животных и у пациентов, которые имеют васкуляризованную солидную опухоль, метастатическую опухоль или метастазы первичной опухоли, либо у которых есть риск их развития. В контексте настоящего изобретения термин васкуляризованная опухоль, наиболее предпочтительно, означает васкуляризованную злокачественную опухоль, солидную опухоль или рак. В отношении лечения рака, композиции и способы по изобретению можно применять для лечения всех форм солидных опухолей, имеющих сосудистый компонент. Солидные опухоли, такие как карциномы и саркомы, являются примерами типов опухолей, особенно поддающихся лечению настоящими композициями и способами. Примерные типы опухолей, которые можно предупреждать или лечить, используя настоящее изобретение, включают, но не ограничены ими, опухоли почек, легкого, молочной железы, ободочной кишки, простаты, желудка, печени, поджелудочной железы, пищевода, головного мозга и гортани, а также ангиосаркомы и хондросаркомы. Опухоли различных размеров можно также лечить, используя данное изобретение. Таким образом,небольшие опухоли, включая метастатические опухоли, примером которых являются опухоли, диаметр которых составляет примерно 1 см или менее, средние или умеренные опухоли, примером которых являются опухоли, диаметр которых составляет между примерно 1 и примерно 5 см, и большие опухоли,примером которых являются опухоли, диаметр которых составляет примерно 5 см или более, рассматриваются для лечения с использованием настоящего изобретения. Опухоли могут представлять собой первичные или метастатические опухоли, либо и те, и другие. Поскольку композиции и способы по настоящему изобретению применимы к лечению различных опухолей независимо от фенотипа опухолевых клеток, пациентов, имеющих более чем один тип опухоли, можно эффективно лечить с помощью изобретения. Так, пациенты, имеющие, по меньшей мере, первый и второй, третий или другой, отдельный тип опухоли, примерами которых являются пациенты,имеющие опухоль молочной железы и хондросаркому или опухоль почки и опухоль легкого, рассматриваются для лечения с использованием настоящего изобретения. Примерные способы по изобретению включают введение животному или пациенту, имеющему заболевание, связанное с аберрантной васкуляризацией, включая дегенерацию желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, или у которого есть риск его развития, фармацевтической композиции, содержащей биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Любое одно или более чем одно из вышеописанных соединений, представляющих собой алкиламмония тиомолибдат, можно применять в таких способах,включая соединения, представляющие собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, такие как тетраметиламмония тетратиомолибдат, тетраэтиламмония тетратиомолибдат или тетрабутиламмония тетратиомолибдат, причем в некоторых воплощениях предпочтителен тетрапропиламмония тетратиомолибдат. В некоторых воплощениях в изобретении предложены способы лечения или предупреждения заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, включая дегенерацию желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, при которых животному или пациенту, имеющему такое заболевание или обладающему риском его развития, вводят по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тиомолибдат, которое является по существу растворимым в воде и по существу-7 008683 стабильным при воздействии воздуха и влаги, в количестве, эффективном для высвобождения терапевтической дозы биоактивного соединения тиомолибдата при введении животному или пациенту. В других воплощениях в изобретении предложены способы лечения или предупреждения заболеваний, связанных с аберрантной васкуляризацией или ангиогенезом, включая дегенерацию желтого пятна,ревматоидный артрит и рак, при которых животному или пациенту, имеющему такое заболевание или у которого есть риск его развития, вводят по меньшей мере первое соединение, представляющее собой алкиламмония тетратиомолибдат, которое содержит число алкильных групп, достаточное, чтобы по существу защитить тетратиомолибдат от окисления во время хранения до введения; причем указанное соединение, представляющее собой алкиламмония тетратиомолибдат, высвобождает терапевтически эффективное количество биоактивного тетратиомолибдата при введении животному или пациенту. В других воплощениях способы по изобретению включают способы лечения или предупреждения заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, включая дегенерацию желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, при которых животному или пациенту, имеющему такое заболевание или у которого есть риск его развития, вводят фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере первое соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, в котором алкильные группы придают существенно увеличенный срок хранения соединению тетратиомолибдата; где это соединение, представляющее собой тетраалкиламмония тетратиомолибдат, сохраняет растворимость и высвобождает эффективное количество по существу терапевтически активного тетратиомолибдата и по существу нетоксичные группы алкиламмония при введении животному или пациенту. Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить животным или пациентам любым пригодным путем, таким как парентеральный, пероральный, в глаза и тому подобные. В некоторых аспектах предпочтительно пероральное введение. Однако рассматриваются другие пути введения, включающие, но не ограниченные ими, внутривенные, внутримышечные и подкожные инъекции; ректальное,назальное, местное и вагинальное введение; препараты медленного высвобождения и тому подобное. Независимо от заболевания в изобретении предложены способы отдаления начала или предупреждения заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризащией или ангиогенезом, включая дегенерацию желтого пятна, ревматоидный артрит и рак. В таких способах животному или пациенту, имеющему заболевание, связанное с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, такое как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит или рак, или у которого есть риск его развития, вводят по меньшей мере первую фармацевтическую композицию, содержащую профилактически эффективное количество по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Для таких превентивных или профилактических способов пациент, у которого есть риск развития заболевания, связанного с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, такого как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит или рак, может быть выбран или идентифицирован, например, путем идентификации родственников имеющихся пациентов, идентификации склонных к болезни субъектов с помощью генетического тестирования и тому подобного. Профилактически эффективными количествами являются количества одного или более соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, эффективные для откладывания начала или, по существу, предупреждения заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом,таких как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, при введении животному или пациенту. В соответствии с настоящим изобретением также предложены очевидные терапевтические способы, которые применимы к целому ряду ангиогенных заболеваний. В изобретении, таким образом, предложены способы лечения заболевания, связанного с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом,такого как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, при которых животному или пациенту, имеющему заболевание, связанное с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, такое как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит или рак, или имеющему риск его развития, вводят, по меньшей мере, первую фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Терапевтически эффективными количествами по изобретению являются, таким образом, количества одного или более чем одного соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, эффективные для отдаления начала или, по существу, предупреждения прогрессирования и/или для облегчения симптомов заболевания, связанного с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, такого как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит или рак, при введении животному или пациенту. Например, терапевтически эффективные количества могут замедлить рост больной ткани, например,опухоли; по существу остановить такой рост; специфично индуцировать некроз, по меньшей мере, в части больной ткани или опухоли; и/или индуцировать регресс заболевания или ремиссию при введении животному или пациенту. Такие терапевтические эффекты достигаются при проявлении предпочтительно пренебрежимо малых или управляемых вредных побочных эффектов в отношении нормальных здоровых тканей животного или пациента. Таким образом, терапевтически эффективное количество может варьировать от животного к животному или от пациента к пациенту в зависимости от ряда факторов, включая, но не огра-8 008683 ничиваясь ими, степень заболевания и размер пациента. Все подобные вопросы по дозировке могут быть рутинно адресованы лечащему врачу в свете настоящего описания. В некоторых аспектах изобретения биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере первых соединений, представляющих собой алкиламмония тиомолибдат, составляет между примерно 10 и примерно 300 мг на пациента. В других аспектах биологически или терапевтически эффективные количества составляют между примерно 20 и примерно 200 мг на пациента в течение терапевтически эффективного периода времени. Как правило, агент вводят пациенту ежесуточно, и, таким образом, в этих воплощениях биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере первого агента составляет между примерно 10 и примерно 300 мг, либо между примерно 20 и примерно 200 мг на пациента в сутки. Некоторые предпочтительные дозы составляют между примерно 125 и примерно 190 мг и между примерно 150 и примерно 180 мг. Между примерно 10 мг и примерно 300 мг включает все значения в данном интервале и, таким образом, включает количества примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 40 мг, примерно 50 мг, примерно 60 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 90 мг, примерно 100 мг, примерно 110 мг, примерно 120 мг, примерно 125 мг, примерно 130 мг, примерно 140 мг,примерно 150 мг, примерно 160 мг, примерно 170 мг, примерно 180 мг, примерно 190 мг, примерно 200 мг, примерно 210 мг, примерно 220 мг, примерно 230 мг, примерно 240 мг, примерно 250 мг, примерно 260 мг, примерно 270 мг, примерно 280 мг, примерно 290 мг и примерно 295 мг. Примерно следует понимать как включающее значения меньше и больше данного числа. Таким образом, примерно 20 мг следует понимать как включающее примерно 18 мг, примерно 19 мг, примерно 21 мг и примерно 22 мг и т.д., а примерно 200 мг следует понимать как включающее примерно 201 мг, примерно 202 мг, примерно 203 мг и примерно 204 мг и т.д. В других воплощениях изобретения биологически или терапевтически эффективное количество по меньшей мере первого агента составляет между примерно 10 мг и примерно 190 мг, между примерно 20 и примерно 180 мг, между примерно 20 и примерно 170 мг, между примерно 20 и примерно 160 мг, между примерно 20 и примерно 150 мг, между примерно 20 и примерно 140 мг, между примерно 20 и примерно 130 мг, между примерно 20 и примерно 120 мг, между примерно 20 и примерно 110 мг, между примерно 20 и примерно 100 мг, между примерно 20 и примерно 90 мг, между примерно 20 и примерно 80 мг, между примерно 20 и примерно 70 мг, между примерно 20 и примерно 60 мг, между примерно 20 и примерно 50 мг, между примерно 20 и примерно 40 мг, между примерно 20 и примерно 30 мг, между примерно 30 и примерно 200 мг, между примерно 40 и примерно 200 мг, между примерно 50 и примерно 200 мг, между примерно 60 и примерно 200 мг, между примерно 70 и примерно 200 мг, между примерно 80 и примерно 200 мг, между примерно 90 и примерно 200 мг, между примерно 100 и примерно 200 мг,между примерно 110 и примерно 200 мг, между примерно 120 и примерно 200 мг, между примерно 130 и примерно 200 мг, между примерно 140 и примерно 200 мг, между примерно 150 и примерно 200 мг, между примерно 160 и примерно 200 мг, между примерно 170 и примерно 200 мг, между примерно 180 и примерно 200 мг, между примерно 190 и примерно 200 мг, между примерно 30 и примерно 190 мг, между примерно 40 и примерно 180 мг, между примерно 50 ипримерно 170 мг, между примерно 60 и примерно 160 мг, между примерно 70 и примерно 150 мг, между примерно 80 и примерно 140 мг, между примерно 90 и примерно 130 мг, между примерно 100 и примерно 120 мг, между примерно 125 и примерно 200 мг или между примерно 150 и примерно 180 мг на пациента в сутки. Приведенные выше значения также могут быть выражены в мг/кг массы тела. Как описано выше,биологически или терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от размера пациента - животного или человека. Однако, принимая среднюю массу человека примерно за 70 кг, можно легко вычислить биологически или терапевтически эффективное количество соединений в мг/кг. Биологически и терапевтически эффективные количества можно также эффективно выражать относительно уровней снижения меди. Как таковое, изобретение предпочтительно касается введения по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, животному или пациенту с заболеванием, связанным с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, таким как дегенерация желтого пятна, ревматоидный артрит и рак, в количестве и в течение периода времени, которые эффективны для снижения уровня меди у животного или у пациента до уровня между примерно 10 и примерно 40% меди у этого животного или пациента до введения соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Снижение уровней меди до уровней между примерно 15 и примерно 30%,между примерно 10 и примерно 20% или между примерно 15 и примерно 20% особенно эффективно,причем снижение до уровня примерно 20% от уровня до лечения эффективно для большинства животных и пациентов. Уровни меди у животных и пациентов можно легко определить, и предпочтительным способом является определение уровня сывороточного церулоплазмина. В следующих воплощениях за первоначальным лечением по изобретению затем следует введение животному или пациенту количества связывающего медь агента, эффективного для того, чтобы по существу поддерживать сниженные уровни меди у этого животного или пациента. Такое последующее введение предпочтительно осуществляют в количествах и в течение периодов времени, эффективных для под-9 008683 держания уровня меди у животного или пациента на уровне примерно 10-20% от уровня до первоначального лечения. Таким образом, изобретение включает способы лечения, где ударную дозу по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, сначала вводят животному или пациенту в количестве и в течение периода времени, эффективных для первоначального снижения уровня меди у этого животного или пациента до примерно 20-40% от уровня до введения, и где затем вводят животному или пациенту поддерживающую дозу связывающего медь агента в количестве и в течение периода времени, эффективных для поддержания уровня меди у этого животного или пациента на уровне примерно 10-20% от уровня до первоначального лечения. Эти способы по изобретению применимы к лечению или предупреждению заболеваний, связанных с аберрантными васкуляризацией или ангиогенезом, включая дегенерацию желтого пятна, ревматоидный артрит и рак. В таких способах животному или пациенту, имеющему такое заболевание или риск его развития, вводят:(а) количество по меньшей мере первого соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, достаточное для эффективного снижения уровня меди у животного или пациента предпочтительно до уровня от примерно 10 до примерно 40% уровня меди до лечения, более предпочтительно до уровня примерно 20% от уровней меди до лечения, и(б) по существу поддерживают сниженные уровни меди у этого животного или пациента. Во всех таких воплощениях последовательно вводимый связывающий медь агент может представлять собой любой агент, эффективный для связывания и снижения уровней меди у животного. Пригодными связывающими медь агентами являются соединения тиомолибдата, включая соединения, представляющие собой алкиламмония тиомолибдат, для первоначального лечения. Однако можно эффективно применять и другие связывающие медь агенты, в частности, соединения цинка, такие как ацетат цинка. Индикатором уровней меди предпочтительно являются уровни сывороточного церулоплазмина. Любой из вышеописанных способов может дополнительно включать введение животному или пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере второго терапевтического агента. Этот второй терапевтический агент может представлять собой второй антиангиогенный агент или второй противораковый агент. Вторые терапевтические агенты могут также представлять собой агенты для борьбы с заболеванием, которое нужно лечить средствами, иными, чем борьба с ангиогенезом, такими как противоартритные соединения. Примерными вторыми антиангиогенными агентами являются отдельные агенты, хелатирующие медь, и соединения цинка. Примерными вторыми противораковыми агентами являются химиотерапевтические агенты, радиотерапевтические агенты, иные антиангиогенные агенты и агенты, индуцирующие апоптоз. По меньшей мере второй терапевтический, антиангиогенный или противораковый агент можно вводить животному или пациенту по существу одновременно по меньшей мере с первым соединением,представляющим собой алкиламмония тиомолибдат, как, например, из единой фармацевтической композиции или из двух фармацевтических композиций, вводимых близко друг к другу. Альтернативно, по меньшей мере второй терапевтический, антиангиогенный или противораковый,агент можно вводить животному или пациенту после введения по меньшей мере первого соединения,представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. После, как используют здесь, означает разнесенно,так что по меньшей мере второй агент вводят животному или пациенту во время, разнесенное со временем введения соединения, представляющего собой алкиламмония тиомолибдат. Как правило, эти два агента вводят в моменты времени, эффективно отделенные друг от друга, чтобы дать возможность этим двум агентам вызвать их соответствующие терапевтические эффекты, то есть их вводят через биологически эффективные временные интервалы. По меньшей мере второй агент можно вводить животному или пациенту в биологически эффективный момент времени до соединения,представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, или в биологически эффективный момент времени после этого соединения. Другие комбинированные терапии, включая хирургическую резекцию и радиотерапию, например рентгенотерапию, также включены в настоящее изобретение. Краткое описание графических материалов Следующие графические материалы составляют часть настоящего описания и включены для дополнительной демонстрации некоторых аспектов настоящего изобретения. Изобретение может быть лучше понято со ссылкой на один или более чем один из этих графических материалов в сочетании с подробным описанием конкретных представленных здесь воплощений. Фиг. 1 - проекция кристаллической упаковки (n-Pr4N)2MoS4 (TP-TM); фиг. 2 - паттерн дифракции рентгеновских лучей на порошке, рассчитанный на основании атомных координат, полученных при рентгеноструктурном анализе на монокристалле; фиг. 3 - паттерн дифракции рентгеновских лучей на порошке, полученный экспериментально на кристаллическом (n-Pr4N)2MoS4 (TP-TM); фиг. 4 - повышенная стабильность ТР-ТМ по сравнению с ТМ (AmmTM). Стабильность каждого соединения исследовали в условиях, которые усиливают нестабильность, то есть лекарства находились в открытых чашках Петри при комнатной температуре. Процент активности нанесен на график как функ- 10008683 ция от времени, в сутках. Фиг. 5. ТР-ТМ ингибирует in vivo рост ксенотрансплантатов опухоли человека так же эффективно,как ТМ. 106 клеток рака молочной железы инъецировали в жировое тело молочной железы 4 группам бестимусных голых мышей (5 мышей на группу). Контрольные мыши не получали никакого лечения. В 3 экспериментальных группах лечение начинали в указанное время, и они получали либо 1 мг/сутки исходного ТМ, AmmTM; либо 1 мг/сутки ТР-ТМ, тетрапропил-тетратиомолибдата (указанного на фиг. как ТР 1 мг); либо 1,5 мг/сутки ТР-ТМ (ТР 1,5 мг на фиг. ). Границы ошибок находились в пределах 5% от представленных значений. Кривые роста у животных, которых лечили, значительно отличаются от кривых для контрольных животных, р 0,01. Кривые роста ТР-ТМ (ТР) статистически не отличаются от кривых ТМ. Описание иллюстративных воплощений Солидные опухоли оценивают как более чем 90% всех случаев рака у человека (Shockley et al.,1991). Терапевтическое применение моноклональных антител и иммунотоксинов исследовано в терапии лимфом и лейкемий (Lowder et al., 1987; Vitetta et al., 1991), но, к сожалению, в клинических испытаниях оно оказалось неэффективным против солидных опухолей (Byers and Baldwin, 1988; Abrams and Oldham,1985). Принципиальной причиной неэффективности методов терапии на основе антител является то, что макромолекулы с трудом транспортируются в солидные опухоли (Sands, 1988; Epenetos et al., 1986). Даже когда эти молекулы попадают в опухолевую массу, они не способны равномерно распространяться вследствие наличия плотных соединений между опухолевыми клетками (Dvorak et al., 1991), фиброзной стромы (Baxter et al., 1991), интерстициальных градиентов давления (Jain, 1990) и барьеров сайтов связывания (Juweid et al., 1992). Слишко часто при контроле рака хорошо фукционирующий индивидуум сталкивается с высокой вероятностью клинической диагностики рака или с неизбежным прогрессированием во многом бессимптомного рака до летальной стадии. На клеточном уровне, несмотря на различие клинических проявлений, для всех зарождающихся и существующих опухолей будет требоваться рост новых кровеносных сосудов, или ангиогенез, который влияет на качество жизни их хозяев. Следовательно, разработка успешных антиангиогенных методов терапии может дать предупреждение зарождающейся опухоли от превращения в клинически релевантную, либо может дать возможность пролонгированного бессимптомного состояния при стабильном метастатическом заболевании. Кроме того, такая терапия может также давать эффект обратного развития очевидных опухолей. С 1970-х гг. было показано, что медь является кофактором при ангиогенезе. Многие ключевые ангиогенные медиаторы, такие как FGF, ангиогенин и SPARC, связываются или взаимодействуют с медью в их проангиогенном состоянии. Концепция антиангиогенной терапии для солидных опухолей (Folkman,1972; 1995 с; 1997) имеет твердую разумную основу и показывает эффективность в животных моделях опухолей (Volpert et al., 1996; Millauer et al., 1996; Warren et al., 1995; Borgstom et al., 1996; 1998; Yuan etal., 1996; O'Reilly et al., 1997; Benjamin et al., 1999 и Merajver et al., 1998). Соединения, которые вмешиваются в критические стадии в каскаде ангиогенеза, поступают в клиники (Marshall et al., 1997). Стадии,необходимые для успешного ангиогенеза опухоли в первичном и метастатическом сайтах, различаются,и они зависят от дисбаланса между активаторами ангиогенеза (Iruela-Arispe and Dvorak, 1997; Hanahan(Volpert et al., 1995; Salnikow et al., 1997; Guo et al., 1997; Schapira and Schapira, 1983; Qian et al., 1997),ангиостатин (O'Reilly et al., 1994; Lannutti et al., 1997; Sim et al., 1997) и эндостатин (O'Reilly et al., 1997). Относительная значимость различных молекул, модулирующих ангиогенез в различных тканях, может определять относительную эффективность ангиогенных соединений, вызывающих ответ, как в первичном, так и в метастатическом сайтах. Было достаточно полно продемонстрировано, что медь необходима для ангиогенеза (Parke et al,1988; Raju et al., 1982; Ziche et al., 1982). Brem et al. (1990 a, b) и позднее Yoshida et al. (1995) предприняли попытку применения подхода, направленного против меди, при лечении опухолей в исследованиях на животных. Они применили диету с дефицитом меди, комбинированную с терапией пеницилламином,названную CDPT. Эти исследования показали относительное ингибирование роста карциномы VX2 кролика в головном мозге кролика (Brem et al., 1990b) и глиосаркомы 9L крысы в головном мозге крысы(Brem et al., 1990a, Yoshida et al., 1995) в результате такой терапии, но, что важно, не сообщили об улучшении общей выживаемости. Животных у Yoshida et al. умерщвляли раньше, чем можно было оценить общую выживаемость. В исследованиях Brem et al. смерть наступала вследствие сопутствующего интрацеребрального отека, который был достаточно тяжелым у обработанных животных, чтобы вызывать смерть с той же частотой, как и необработанная опухоль у контрольных животных. Кроме того, в противоположность модели головного мозга кроликов, CDPT была неспособна ингибировать рост опухоли и васкуляризацию карциномы VX2 в бедренной мышце и в метастазах в легком. Отсутствие улучшения выживаемости в моделях имплантации опухоли головного мозга и отсутствие эффекта в отношении опухолей, находящихся не в головном мозге, по-видимому, затормозило дальнейшую работу в этой области. Авторы изобретения рассудили, что было бы очень желательно разработать антиангиогенную стра- 11008683 тегию, которая влияла бы на множественные активаторы ангиогенеза, так чтобы она была общеприменима к опухолям человека. Многие ангиогенные проекты направлены против одной мишени. Поскольку медь является необходимым кофактором для функции многих ключевых медиаторов ангиогенеза, таких как bFGF (Watanabe et al., 1990; Engleka and Maciag, 1994; Shing, 1988; Patstone and Maher, 1996), VEGF и ангиогенин (Badet et al., 1989), авторы изобретения разработали антиангиогенную стратегию для лечения рака и других заболеваний, характеризующихся аберрантным ангиогенезом, основанную на модулировании статуса меди в целом организме. В основе ранней работы авторов изобретения лежала идентификация окна дефицита меди, в пределах которого ангиогенез нарушен, а другие зависимые от меди клеточные процессы не подвержены воздействию, достаточному чтобы вызвать клиническую токсичность. Авторы изобретения достигли успеха в своих клинических задачах, несмотря на документированные неудачи других исследователей, использующих животные модели. Разработка безопасных и эффективных профилактических или терапевтических агентов, которые снижают уровень меди in vivo, явилась актуальной проблемой в данной области. Гипотеза авторов изобретения об антиангиогенном подходе к терапии рака, направленном против меди, состоит в том, что уровень меди, необходимый для ангиогенеза, выше уровня, необходимого для существенных зависимых от меди клеточных функций, таких как синтез гема, функция цитохромов и включение меди в ферменты и другие белки. Сначала авторы изобретения рассудили, что уникальные и благоприятные характеристики тетратиомолибдата (ТМ) в качестве агента против меди по сравнению с другими лекарствами против меди могут сделать ТМ нетоксичным, эффективным новым орудием в антиангиогенной терапии, направленной против меди. Как подробно описано ниже, в течение последних 20 лет авторы изобретения разработали новые направленные против меди способы терапии для лечения болезни Вильсона, аутосомно-рецессивного заболевания транспорта меди, которое приводит в результате к аномальной аккумуляции и токсичности меди. Одним из лекарств, применяемых в настоящее время, является ТМ, который проявляет уникальные и желательные свойства быстрого действия, специфичности к меди и низкой токсичности (Brewer et al.,1991a; 1994b; 1996), а также уникальный механизм действия. ТМ образует стабильный трехкомпонентный комплекс с медью и белком. Если давать его во время еды, он образует комплексы пищевой меди с пищевым белком и предотвращает всасывание меди из желудочно-кишечного тракта. Существует эндогенная секреция меди в слюне и желудочных секретах, связанная с приемом пищи, и эта медь также образует комплексы с ТМ, когда его дают во время еды, предотвращая, таким образом, обратное всасывание меди. Таким образом, пациенты оказываются в условиях отрицательного баланса меди, когда ТМ дают во время еды. Если ТМ дают между приемами пищи, он всасывается в кровоток, где образует комплексы либо свободной, либо слабо связанной меди с сывороточным альбумином. Эта связанная с ТМ фракция меди уже не доступна для захвата клеткой и не обладает известной биологической активностью. Ранние исследования авторов изобретения действительно показали, что ТМ является безопасным и эффективным противораковым агентом. ТМ проявлял эффективность в отношении нарушения развития опухолей молочной железы de novo у трансгенных мышей Her2-neu (пример 2) и не проявил очевидной клинической токсичности, когда уровни меди были снижены до 10% от базового уровня. В настоящее описание также включены детали первого испытания на человеке подхода к антиангиогенной терапии,направленного против меди, основанного на применении тетратиомолибдата у пациентов с метастатическим раком (примеры 3 и 4). Исследования ТМ фазы I, дающие информацию о дозе, ответе на дозу,оценке статуса меди у пациентов, токсичности и эффективности, являются удивительно благоприятными, особенно в свете безуспешных исследований на животных, проводимых другими исследователями(Brem et al., 1990a, b; Yoshida et al., 1995). Хотя концептуальный прорыв и основополагающую работу авторов изобретения, которая развила эту концепцию до клинического успеха, нельзя преуменьшать, простое и экономичное развитие широко распространенных способов лечения значительно продвинулось бы вперед благодаря разработке усовершенствованных соединений второго поколения, особенно соединений с повышенной стабильностью и увеличенным сроком хранения. В настоящем изобретении предложен ряд таких соединений, которые обладают значительно улучшенной стабильностью при воздействии воздуха и влаги, но которые при этом сохраняют растворимость и обеспечивают такие же терапевтические ответы при введении inI. Болезнь Вильсона А. Предшествующий уровень техники Болезнь Вильсона представляет собой аутосомно-рецессивное расстройство метаболизма меди. При данном расстройстве экскреция меди в желчь оказывается дефектной, и имеется пониженное включение меди в церулоплазмин в печени, приводящее к аккумуляции меди в плазме и большинстве тканей организма. Болезнь Вильсона обычно приводит к печеночной и/или неврологической дисфункции. Терапию болезни Вильсона можно разделить на две широкие категории (Brewer and YuzbasiyanGurkan, 1992a). Они представляют собой первоначальную терапию пациентов с острым заболеванием и поддерживающую терапию. Первоначальная терапия составляет тот период времени, в течение которого вновь поступивший пациент все еще страдает острой токсичностью меди, как правило, в течение первых- 12008683 нескольких недель-месяцев терапии. Поддерживающая терапия составляет по существу оставшийся период жизни пациента или тот период времени, после которого уровни меди снижаются до субтоксичного порогового значения, и пациент подлежит терапии просто для предупреждения рецидива аккумуляции меди и токсичности меди. Для поддерживающей терапии болезни Вильсона в настоящее время доступны три лекарства. Они включают доступное старейшее лекарство пеницилламин (Walshe, 1956), лекарство, называемое триен или триентин, которое разработано для пациентов с непереносимостью пеницилламина (Walshe, 1982), и ацетат цинка (Brewer and Yuzbasiyan-Gurkan, 1992a, b; Brewer et al., 1983; Hill et al., 1987; Hill et al., 1986;al., 1992; Brewer et al., 1993a, b, c, d; Brewer, 1993; Hoogenraad et al., 1978; Hoogenraad et al., 1979; Hoogenraad et al., 1987). Цинк обеспечивает эффективную поддерживающую терапию при очень низком уровне токсичности. Примерно у 2/3 пациентов, у которых представлена болезнь Вильсона, проявляются симптомы, относящиеся к головному мозгу (Brewer et al., 1992a; Scheinberg and Sternlieb, 1984; Danks, 1989). Могут быть неврологические симптомы или симптомы психиатрической природы, повляющимися в начале, и неврологическими симптомами - позже. Терапия для этих пациентов почти не является настолько же простой, как для пациентов поддерживающей фазы. Авторы изобретения обнаружили, что примерно 50% этих пациентов, которых лечили пеницилламином, становилось скорее хуже, чем лучше (Brewer etal., 1987a). Половина тех пациентов, которым становилось хуже, или примерно 25% исходной выборки,никогда не восстанавливала базовый уровень, имевший место перед введением пеницилламина. Иными словами, пеницилламин вызывал дополнительное необратимое нарушение. Механизмы этого ухудшения точно неизвестны, хотя вероятно, что мобилизация печеночной меди этим лекарством еще больше повышает уровень меди в головном мозге. Авторы изобретения показали,что это может происходить на крысиной модели. Независимо от механизма, пациентам, у которых представлены неврологические симптомы, очень часто в конце концов становится намного хуже после того,как их первоначально лечили пеницилламином. Действительно, даже у пресимптоматических пациентов может развиваться неврологическое заболевание после первоначального лечения пеницилламином (Glasset al., 1990; Brewer et al., 1994a). Неизвестно, дает ли триентин феномен неврологического ухудшения при применении его в качестве первоначальной терапии, поскольку его не применяли так много в данной ситуации. Было бы неудивительно, если бы он проявлял эту проблему в той же степени в связи с механизмом его действия, подобным пеницилламину, но, возможно, в меньшей степени, поскольку его действие в отношении меди кажется несколько более мягким. Цинк не является идеальным агентом для первоначальной терапии для данного типа пациентов. Цинк имеет относительно медленное начало действия и дает только умеренный отрицательный баланс меди. Таким образом, в течение нескольких месяцев, необходимых цинку для снижения меди до субтоксичного порогового значения, у пациентов может быть риск дальнейшей токсичности меди и ухудшения их заболевания. В. Результаты терапии ТМ В течение последних нескольких лет авторы изобретения проводили исследование с открытой маркировкой применения ТМ для первоначального лечения пациентов с болезнью Вильсона с неврологическими проявлениями. Авторы изобретения разработали как спектрофотометрический, так и биологический анализ активности этого лекарства, чтобы оценить стабильность и гарантировать эффективность вводимого лекарства (Brewer et al., 1991a; Brewer et al., 1994b). Это лекарство медленно теряет эффективность при воздействии воздуха. Молекулы кислорода заменяют молекулы серы, делая лекарство неактивным. Результаты у первого исследованного пациента можно использовать для иллюстрации нескольких положений. В течение первых семи суток пациент получал ТМ только во время еды (три раза в сутки во время еды). Это немедленно давало отрицательный баланс меди, который можно было ожидать в результате первого механизма действия (блокада всасывания меди при приеме во время еды). После первых семи суток ТМ также давали между приемами пищи (три раза в сутки во время еды и три раза в сутки между приемами пищи). Это привело к немедленному подъему уровня меди в плазме, ожидаемому в результате всасывания ТМ в кровь и образования комплекса меди, ТМ и альбумина. Медь в комплексе с ТМ и альбумином недоступна для захвата клетками, и эта медь, следовательно, нетоксична (Gooneratneet al., 1981b). В этом комплексе существует стехиометрическое отношение 1:1 между молибденом и медью. Зная уровень молибдена в крови и уровень церулоплазмина (церулоплазмин также содержит медь,которая является нетоксичной), можно вычислить, сколько меди плазмы не связано с тем или с другим. Так называемая свободная медь (медь плазмы, не связанная с церулоплазмином) потенциально представляет собой токсичную медь. При снижении до нуля разрыв (гэп) медь - молибден в плазме закрывается. Это заняло 16 суток у первого пациента (9 суток после добавления доз между приемами пищи). Поскольку свободная медь головного мозга (и другого органа) находится в равновесии с кровью, при снижении свободной меди до нулевого уровня начинается процесс снижения уровня свободной (токсич- 13008683 ной) меди в головном мозге. К настоящему времени авторы изобретения пролечили ТМ в сумме 51 пациента с болезнью Вильсона, причем у всех их имелось неврологическое или психиатрическое заболевание, в исследовании с открытой маркировкой. Диагностику всех этих пациентов проводили по стандартным критериям. У этих пациентов диагностировали повышенную медь в печени или в моче, обычно и в том, и в другом. Некоторых из них до этого испытания кратковременно лечили другими агентами. У двух пациентов были психиатрические, но не неврологические симптомы. За исключением трех пациентов в самой ранней части исследования, все пациенты получали дозу 20 мг три раза в сутки во время еды или четыре раза в сутки во время трех приемов пищи и одной легкой закуски. Таким образом, единственное различие между пациентами, получающими суммарную дозу 120 и 140 мг, состоит в том, что первые получали 20 мг три раза в сутки, или 60 мг, во время еды, а последние получали 20 мг четыре раза в сутки, или 80 мг, во время еды плюс во время легкой закуски. Остальную часть суммарной суточной дозы делили на три равные дозы и давали между приемами пищи. Суммарная суточная доза значительно варьировала среди пациентов от высокой 410 мг до низкой 120 мг. В конце авторы изобретения не могли различить никакой связанной с дозой корреляции ни с изменениями меди, ни с функциональными изменениями, измеренными либо во время исследования, либо через год и через два года. Введение цинка также применяли у этих пациентов. Начальное время введения цинка широко варьировало и не коррелировало с изменениями уровня меди, варьирующими результатами или токсичностью. Ранняя терапия цинком теоретически должна помогать сохранению функции печени. У этих пациентов функция печени возвращалась к норме в течение 1 года, но, поскольку эти тесты не измеряют степень сохранения ткани, кажется вероятным, что цинк обладал некоторым благоприятным действием. Измерение меди плазмы, растворимой в трихлоруксусной кислоте (ТХУ), определенным образом полезно для оценки воздействия ТМ терапии на метаболизм меди при болезни Вильсона. Как правило,большая доля меди плазмы у этих пациентов растворима в ТХУ (в среднем 56% у пациентов, что составляет 27 мкг/дл). Вся медь плазмы, не связанная с церулоплазмином, растворима в ТХУ, и несколько варьирующая доля меди церулоплазмина также растворима в ТХУ. Поскольку уровни церулоплазмина при болезни Вильсона обычно очень низки, большая часть меди плазмы является растворимой в ТХУ. Медь комплекса ТМ/альбумин/медь в крови является нерастворимой в ТХУ. Таким образом, по мере процесса терапии фракция меди плазмы, которая является растворимой в ТХУ, становится меньше. В течение последних стадий ТМ терапии растворимая в ТХУ фракция плазматической меди пациентов в среднем составляла 15 мкг/дл - значительное снижение от исходного значения 27. Растворимую в ТХУ фракцию нельзя использовать в качестве абсолютной конечной точки, например, пытаясь снизить ее до нуля, поскольку небольшая и несколько вариабельная растворимая фракция обычно присутствует за счет плазматического церулоплазмина. Однако значительное среднее снижение от 27 до 15 мкг/дл иллюстрирует, что ТМ терапия обладает благоприятным эффектом в отношении статуса потенциально токсичной меди плазмы у этих пациентов. Дополнительное свидетельство желательного воздействия терапии ТМ на метаболизм меди продемонстрировано снижением средних значений меди в моче в течение более поздней стадии терапии ТМ по сравнению с базовыми уровнями. ТМ воздействует на метаболизм меди быстро и благоприятно, снижая потенциально токсичный уровень меди крови и, теоретически, остального организма. Первоочередной клинической задачей является обеспечение контроля над токсичностью меди, не давая возможности клинического ухудшения. Иными словами, первоочередной задачей является защита всей неврологической функции, которая присутствует в момент начала терапии. Это оценивали еженедельно путем количественного неврологического и речевого экзаменов. Методология и система неврологической рейтинговой шкалы опубликованы(Young et al., 1986). В течение недель введения ТМ, во время которого контролировали метаболизм меди,неврологическая функция, как оценивали с помощью количественного неврологического экзамена, защищена. Только два пациента (4% выборки) показали изменение более чем на 5 единиц - показатель значительного ухудшения. В течение последующих лет, по мере того как эти пациенты находятся на поддерживающей терапии, повреждение головного мозга, прежде индуцированное медью, по меньшей мере, частично восстанавливается. Примером этого является частичное восстановление неврологических очков, наблюдаемое раз в год при последующем врачебном наблюдении. Ясно, что при подходе с первоначальным использованием ТМ долгосрочное восстановление является отличным, причем большинство пациентов показывают существенное неврологическое восстановление. Эти отличные результаты противоположны терапии пеницилламином. Как отмечено ранее, примерно 50% пациентов сначала получают ухудшения на пеницилламине, и что половина из них или 25% исходной выборки никогда не возвращается к их базовому уровню до введения пеницилламина. Результаты в течение первоначальных 8 недель ТМ терапии на количественных речевых экзаменах получали, как описано (Brewer et al., 1996). В течение недель введения ТМ, во время которого контролировали метаболизм меди, неврологическая функция, как измерено на основании количественных речевых экзаменов, контролируется. Ни один пациент не показал значимого (более чем 2,0 единиц) снижения- 14008683 очков. В течение последующих лет, по мере того как эти пациенты находятся на поддерживающей терапии, повреждение головного мозга, прежде индуцированное медью, частично восстанавливается. Примером этого является частичное восстановление речевых очков за годы последующего врачебного наблюдения. Долгосрочное восстановление является отличным. Ни один пациент не показал значимо (более чем 2,0 единиц) сниженной долгосрочной функции по сравнению с функцией в момент начала терапии, и большинство показали значимое улучшение. У этих пациентов наблюдали два нежелательных эффекта. Одним является обратимая анемия/угнетение костного мозга, которая проявлялась у семи пациентов. Падение гемоглобина у всех этих пациентов было значительным, в среднем 3,4 г %. Трое из этих пациентов показали снижение количества тромбоцитов, а четверо из этих пациентов показали снижение количества лейкоцитов, что, возможно,имело значение. ТМ перестали давать во всех семи случаях. За исключением двух пациентов, прекращение было поздним, на 56 сутки курса ТМ. В момент анемии все эти пациенты имели нулевую плазматическую медь, не связанную с церулоплазмином, и крайне низкую медь, растворимую в ТХУ. Последнее значение в среднем составляло 2,7 у этих пациентов, а среднее значение для этой переменной в целой группе пациентов составляло 27 в начале и 15 на пике терапии. Был сделан вывод, что причиной анемии/угнетения костного мозга является истощение меди костного мозга. Поскольку медь необходима для синтеза гема и других стадий пролиферации клеток, можно было бы ожидать, что анемия и воздействие на костный мозг будут первыми признаками истощения меди. Этот результат истощения меди является хорошо известным феноменом. Таким образом, нежелательный ответ на ТМ не является побочным эффектом, а возникает, скорее,вследствие избыточного лечения. Вероятно, удивительно, что можно продуцировать даже локализованное истощение меди костного мозга в пределах такого короткого периода времени при болезни Вильсона- заболевании, при котором организм перегружен медью. Этот ответ на ТМ является уникальным. Ни одно другое лекарство против меди неспособно продуцировать этот эффект при ранней терапии. Таким образом, это говорит об эффективности ТМ и скорости, с которой он может регулировать уровни меди. Вероятно также, что костный мозг является особенно зависимым от плазматической меди, и что он представляет собой первый пул, который снижается до очень низких уровней. При дозе 180 мг/сутки или более избыточное лечение встречалось у 6 из 37 пациентов. При дозе 150 или ниже только 1 из 13 пациентов проявлял избыточное лечение, и это произошло очень поздно (53 сутки в 56-суточной программе). Вторым нежелательным эффектом ТМ терапии у этих пациентов является повышение значений трансаминазы у четырех из этих пациентов. Значения сывороточных AST и ALT были повышены. ТМ терапию прервали у одного пациента в связи с этими повышениями. Во время этих повышений медь в моче увеличивается в противоположность общей тенденции у других пациентов, где она уменьшается. Эти данные подтверждают концепцию, что гепатит имеет место при высвобождении меди из поврежденных гепатоцитов. Неясно, почему такой гепатит имеет место. Однако, без лечения пациенты с болезнью Вильсона имеют эпизодический гепатит как составляющую их истории болезни. Поскольку данных наблюдения пациентов без лечения после диагностики очень мало, не существует хорошей информации и том, как часто эпизоды повышений трансаминазы встречаются как часть естественной истории этого заболевания. Альтернативно ТМ в некоторых случаях может мобилизовать печеночную медь с большей скоростью, чем она может быть израсходована, причем в этом случае пациентов следует классифицировать как проявляющих побочный эффект лечения. Против этого свидетельствует наблюдение за овцами с отравлением медью, у которых острый гепатит, некроз печени и гемолитическая анемия быстро корректировались высокими дозами ТМ. Всех четырех из этих пациентов лечили 150 мг ТМ/сутки или больше. Ни один из пациентов, которых лечили 150 мг или меньше, не проявлял этот ответ. Других отрицательных эффектов ТМ не наблюдали.II. Соединения тиомолибдата А. Тетратиомолибдат Тетратиомолибдат (ТМ) представляет собой соединение, состоящее из атома молибдена, окруженного четырьмя сульфидными группами. Открытие биологических эффектов ТМ началось с наблюдений за крупным рогатым скотом и овцами, у которых развивался дефицит меди при содержании на пастбищах с высоким содержанием молибдена (Mo) (Ferguson et al., 1943; Dick and Bull, 1945; Miller and Engel,1960). Было установлено, что введение добавочного Mo нарушало метаболизм меди у жвачных животных (Macilese Ammerman et al., 1969); однако Мо обладал небольшим эффектом на животных, не являющихся жвачными, таких как крысы (Mills et al., 1958; Сох et al., 1960). Ответ на эту задачу пришел из наблюдений, в которых предположили, что Мо превращался в тиомолибдаты в рубце в результате высокого сульфидного метаболизма в нем, и что тиомолибдаты являются активными агентами против меди(Dick et al., 1975). Эта теория была подтверждена, когда соединения тиомолибдата давали крысам и продуцировали эффекты против меди (Mills et al., 1981a, b; Bremner et al., 1982). Тетратиозамещенное соединение, ТМ, является наиболее эффективным из таких соединений. Механизм действия ТМ против меди является двойным (Mills et al., 1981a, b; Bremner et al., 1982;Gooneratne et al., 1981b). Один механизм действует в желудочно-кишечном тракте, второй в крови. В ЖК-тракте ТМ образует комплексы с медью и пищевыми белками (или другими белками), которые не всасываются. В этот блок всасывания вовлечена не только пищевая медь, но также достаточно значительное количество эндогенно секретируемой меди в слюне, желудочном соке и других секретах ЖК тракта (Allen and Solomons, 1984). ТМ является более эффективным блокатором всасывания меди, чем цинк, поскольку цинк действует только в тех областях тонкого кишечника, где может быть индуцирован металлотионеин (Yuzbasiyan-Gurkan et al., 1992). Напротив, ТМ работает по всему ЖК-тракту, в начале и в конце. Другим преимуществом ТМ по сравнению с цинком в этом отношении является то, что ТМ действует немедленно. Он не имеет lag-периода, необходимого для индукции металлотионеина. Вторым эффектом ТМ является воздействие на кровь. ТМ, даваемый в периоды времени вне приема пищи, относительно хорошо всасывается в кровь. Там он образует комплексы с медью и альбумином,делая медь в комплексе недоступной для захвата клетками (Gooneratne et al., 1981b). Нормальная плазматическая медь находится в двух первичных пулах. Большая часть плазматической меди у нормальных людей составляет часть молекулы церулоплазмина. Эта медь, по существу, недоступна для простого обмена с клетками и считается нетоксичной. Другой пул меди более слабо связан с альбумином и малыми молекулами, такими как аминокислоты. Этот пул меди значительно расширяется во время острой токсичности меди при заболеваниях, таких как болезнь Вильсона, и является легко доступным для захвата клетками и, следовательно, потенциально токсичным (Scheinberg and Sternlieb, 1984). Когда ТМ поступает в кровь, он образует комплекс с последней указанной медью и делает ее, подобно меди церулоплазмина, недоступной для захвата клетками и для дальнейшей токсичности. Существуют очень хорошие доказательства того, что медь в комплексе с ТМ недоступна для захвата клетками. Наиболее прямым свидетельством является то, что у овец уровни меди в плазме, которые в норме должны быть достаточно высокими, чтобы давать гемолитическую анемию, не делают этого в присутствии ТМ (Gooneratne et al., 1981b). Было показано, что связанная с ТМ медь не проходит в эритроцит. Это является прямым свидетельством того, что медь в комплексе с ТМ не проходит в клетки. ТМ и соли ТМ имеются в продаже; одной из предпочтительных солей ТМ является аммониевая соль. ТМ, выпускаемый Aldrich Chemical Company (номер по каталогу W180-0; Milwaukee, WI), представляет собой черный порошок, который является умеренно растворимым в воде, давая ярко-красный раствор. ТМ, выпускаемый Aldrich Chemical Company (имеется в продаже партиями по одному килограмму сыпучего вещества), сертифицирован по чистоте для применения человеком. Сыпучее лекарство должно храниться в отсутствие кислорода, либо кислород будет постепенно обмениваться с серой, делая лекарство неэффективным с течением времени. Сыпучее лекарство, следовательно, хранят в атмосфере аргона. Анализы на стабильность, разработанные авторами изобретения, показывают, что это лекарство является стабильным в течение нескольких лет в атмосфере аргона (Brewer et al., 1991a). Капсулы могут быть заполнены вручную, и лекарство является стабильным в капсулах в течение нескольких месяцев при комнатной температуре. ТМ действует посредством образования трехкомпонентного комплекса с медью и белком (Mills etal., 1981a, b; Bremner et al., 1982). ТМ имеет два механизма действия. Принимаемый во время еды, он образует комплекс меди в пище и эндогенно секретируемой меди с самим собой и с пищевым белком и предотвращает всасывание меди. У пациентов можно создать немедленный отрицательный баланс меди с использованием ТМ посредством его введения во время еды. Даваемый между приемами пищи, ТМ всасывается в кровоток и образует комплекс сывороточной меди с самим собой и с альбумином, быстро делая медь недоступной для захвата клетками. Поскольку свободная медь в органах находится в равновесии со свободной медью в крови, свободная медь в органах и в опухолевой ткани будет быстро снижаться до очень низких уровней, если медь крови связана. Этот комплекс претерпевает клиренс через почки и печень. ТМ является самым эффективным и самым быстродействующим известным агентом против меди. В. Эффективность ТМ Тетратиомолибдат (ТМ) представляет собой лекарство, которые авторы изобретения разработали в качестве единственной терапии для болезни Вильсона. Это лекарство обладает отличным действием,обеспечивая быстрый контроль над токсичностью меди и предупреждение неврологического ухудшения,которое встречается у 50% во время первоначальной терапии традиционно применяемым лекарством для болезни Вильсона пеницилламином (Brewer et al., 1991a; Brewer et al., 1994b; Brewer et al., 1996). Таким образом, авторы изобретения пролечили ТМ 55 пациентов с болезнью Вильсона, как правило, в течение восьминедельного периода. ТМ, таким образом, занимает очень важное место в первоначальном лечении болезни Вильсона. Работа по исследованию болезни Вильсона обеспечила обширный опыт применения ТМ у людей и помогла документировать крайне низкий уровень токсичности ТМ у людей. В исследованиях болезни Вильсона у человека единственным изредка наблюдаемым побочным эффектом является обратимая анемия вследствие действий ТМ против меди. Даваемый в слишком высокой дозе ТМ создает в костном мозге тяжелый или полный дефицит меди. Поскольку медь необходима для эритропоэза, анемия развивается. Эта анемия является быстро обратимой посредством простого прекращения ТМ. В исследованиях болезни Вильсона эффект избыточного лечения ТМ был уменьшен путем- 16008683 простого снижения дозы до 20 мг шесть раз в сутки. У людей без болезни Вильсона, таких как пациенты с раком, уровень слабого дефицита меди при преанемическом состоянии может быть установлен просто путем осторожного мониторинга уровней церулоплазмина (Ср) в процессе ТМ-терапии. ТМ в конечном счете претерпевает метаболизм до тиомолибдатов, молибдатов и оксидов молибдена, поэтому потенциальную токсичность этих соединений нужно учитывать. Однако оказывается, эти соединения молибдена являются достаточно безвредными при уровнях, которые создаются в результате распада ТМ, применяемого в клинических ситуациях, описанных здесь. Примерно 37% ТМ по массе составляет Мо, таким образом, в исследованиях, описанных здесь, вплоть до 50 мг Mo/сутки вводят в течение двух недель, затем не более чем примерно 25 мг/сутки для поддерживающей терапии. Высокие дозы от 350 до 1400 мг/сутки Мо ранее применяли в течение 4-11 месяцев у пациентов с болезнью Вильсона без токсичности (Bickel et al., 1957). Таким образом, интервал дозы 25-50 мг/сутки не создает предсказуемых проблем и должен быть полностью безопасным. Значительная работа по потенциальной токсичности ТМ была проведена на крысах (Mills et al.,1981a, b; Bremner et al., 1982). Примерно при 6 мг ТМ на килограмм пищи крысы проявляют существенные эффекты в отношении меди, включая снижение плазматического церулоплазмина и снижение меди в печени и почках. Примерно при 12 мг ТМ все эти изменения возрастали и, кроме того, был повышен Мо в печени. Присутствовала слабая анемия, и у одного из шести животных присутствовали повреждения скелета. При 18 мг ТМ анемия была тяжелой. Меланогенез шерсти был нарушен, присутствовала диарея,скорость роста была значительно нарушена, и все животные имели повреждения скелета, характеризующиеся дисплазией эпифизарных хрящевых клеток длинных костей, резорбцией трабекулярной кости и структурными изменениями в связках. Позднее было показано, что все токсичные эффекты ТМ вплоть до 36 мг ТМ на килограмм пищи можно предотвратить путем перорального снабжения медью или внутрибрюшинной инъекции меди(Mills et al., 1981b). Таким образом, оказывается, что все токсические повреждения, индуцированные ТМ,являются следствием дефицита меди, индуцированного ТМ. Это подтверждается тем, что почти все вышеуказанные повреждения индуцированы диетическим дефицитом меди за двумя исключениями, представляющими собой скелетные повреждения и повреждение митохондрий энтероцитов, которое приводит к диарее. Причина того, что последние два повреждения наблюдаются при введении ТМ, но могут не наблюдаться при диетическом дефиците меди, может быть связана с тяжестью и быстротой дефицита меди, индуцированного ТМ. При диетическом дефиците меди всегда имеется некоторое количество доступных примесей меди, и быстро делящиеся клетки, такие как энтероциты и эпифизарные клетки, могут получить достаточно меди, чтобы предотвратить эти повреждения. Предотвращение как этих двух повреждений, так и всех других индуцированных ТМ повреждений путем снабжения медью указывает на то, что эти повреждения, вероятно, являются результатом дефицита меди. Другая группа исследователей изучила патологию кишечника на крысах, получающих примерно 18 мг ТМ на килограмм пищи (Fell et al., 1979). Эти крысы также получали примерно 3 мг меди на килограмм пищи. Данные исследователи обнаружили патологию кишечника, включающую клеточный апоптоз, отек и некроз, которые не были следствием гипокупроза, хотя это не было доказано. Вероятно, для защиты было необходимо большее снабжение медью, ввиду того, что все проблемы предотвращались в результате адекватного обеспечения медью (Mills et al., 1981b). Пациенты с болезнью Вильсона обладают тяжелым запасом избытка меди, поэтому никакие аспекты токсичности ТМ вследствие дефицита меди не представляют риска для этих пациентов. Даже в случае повреждений скелета и энтероцитов, поскольку они защищены введением меди, пациент с болезнью Вильсона с интенсивными запасами меди должен быть также защищен. Другие исследователи изучили воздействие ТМ на овец с нагрузкой медью (Gooneratne et al., 1981a). Хорошо известно, что овцы очень чувствительны к токсичности меди, и обычно у них развивается печеночная недостаточность и гемолитическая анемия. Исследования включали диетическую нагрузку овец медью до точки начала печеночного повреждения, затем внутривенно давали ТМ в дозах 50 или 100 мг 2 раза в неделю в период вплоть до 11 недель. Пятеро из 26 овец умерли во время исследования. На основании результатов аутопсии все смерти были связаны с медным токсикозом. 3 из 5 смертей случились в контролях, которые получали медь, но не получали ТМ. Одна смерть случилась после того, как животное получило только одну дозу ТМ, а другая - у животного, которое получило только 4 дозы. Ясно, что эти 2 животных умерли от токсичности меди прежде, чем ТМ был способен спасти их. Если животные переживали исходное возникновение медного токсикоза, они были защищены ТМ от дальнейшей токсичности меди, даже при том, что в некоторых случаях введение меди продолжали. Эти животные переносили вплоть до 22 инъекций ТМ без клинических проблем. Также было показано подтверждение благоприятного эффекта либо IV (Humphries et al., 1986), либо подкожного (Humphries et al., 1988) ТМ при защите овец от тяжелой печеночной токсичности меди. ТМ уменьшал не только количество печеночной меди, но и существующее повреждение печени. ТМ также применяли профилактически для предупреждения токсичности меди в коммерческих стадах овец. Более 400 животных пролечили ТМ без каких-либо вредных побочных эффектов (Humphries et al., 1988).- 17008683 Предшествующая работа также показала, что ТМ может быть очень эффективным против токсичности меди в крысиной модели LEC (Suzuki et al., 1993). Как показано недавно, генетический дефект у этих крыс является следствием дефекта в гене болезни Вильсона (Wu et al., 1994). У этих крыс развивается тяжелое заболевание печени, и они обычно умирают. ТМ был очень эффективным при лечении этих животных на поздних стадиях их заболевания печени. Метаболизм Мо у овец был исследован после TV инъекции ТМ, меченого 99 Мо (Mason et al., 1983). Имело место быстрое исчезновение в плазме в течение 15 мин, а затем медленное исчезновение при t1/2,составляющем примерно 40 ч. ТМ постепенно превращался в молибдат, и более 90% выделялось с мочой по сравнению с 5% в фекалиях. Затем той же группой исследователей была опубликована работа по метаболизму 99 Мо и 35S после IV инъекции дважды меченого ТМ у овец (Hynes et al., 1984). Большая часть 99 Мо и 35S исходно были связаны с альбумином. Вытесненный или несвязанный ТМ быстро претерпевал гидролиз до молибдата и сульфата. Отсутствовали данные, свидетельствующие об обратимом взаимодействии либо 35S, либо 99 Мо с медью и плазмой, несмотря на появление нерастворимой в ТХУ фракции меди. Ясно, что в присутствии высоких уровней меди результатом введения ТМ является аккумуляция меди в комплексе с ТМ как в печени, так и в почках (Jones et al., 1984; Bremner and Young, 1978). Однако,нет данных о болезни накопления, связанной с этим комплексом. Современная теория полагает, что этот комплекс диссоциирует, и что ТМ претерпевает метаболизм до оксимолибдатов и выводится (Mason etal., 1983). Затем медь поступает в другие пути метаболизма в печени. В присутствии высоких уровней металлотионеина наиболее вероятно, что она захватывается металлотионеином. Имеются данные, что в почках медь просто выводится. Описаны два случая обратимого угнетения костного мозга у пациентов, получающих ТМ для поддерживающей терапии (Harper and Walshe, 1986). Авторы изобретения наблюдали обратимую анемию у семи пациентов. У этих пациентов был сильный ответ на терапию и, вероятно, закончился локализованным дефицитом меди в костном мозге. Поскольку медь необходима для синтеза гема, это кажется проявлением избыточного лечения, по меньшей мере, что касается костного мозга. Поскольку ТМ является настолько эффективным агентом против меди, во время поддерживающей терапии ТМ, как в случаяхHarper и Walshe (Harper and Walshe, 1986), не должно быть неожиданностью избыточное лечение. Примерно 37% ТМ составляет Мо. Нормальное поглощение Мо составляет примерно 350 мг/сутки(Seelig, 1972) или эквивалентное количество Мо, которое будет находиться примерно в 1,0 мг ТМ. Оказывается, молибден очень хорошо переносится людьми. Относительно высокие дозы 5-20 мг/кг/сутки Мо(эквивалентно Мо в 1-4 г ТМ) применяли в течение 4-11 месяцев у пациентов с болезнью Вильсона в исследовании 1957 без известной токсичности (Bickel et al., 1957). Однако они были неэффективными,поскольку, как отмечено выше, ТМ является активным метаболитом и, таким образом, эффективно образуется из Мо только у жвачных. С. Другие соединения тиомолибдата Другие соединения тиомолибдата, которые обладают подобным типом действия при снижении свободной меди, включают додекатиодимолибдат, тритиомолибдат, дитиомолибдат и монотиомолибдат. Эти соединения, подобно тетратиомолибдату, образуют трехкомпонентный комплекс с медью и белком,который делает медь недоступной и в конце концов приводит к выведению комплекса с медью. Описан синтез и характеристика ряда комплексов тиомолибдата, комплексов оксо/тиомолибдата и гетерометаллических комплексов, содержащих железо, молибден и серу, с кислородом или без кислорода (Coucouvanis, 1998; Coucouvanis et al., 1989; Coucouvanis et al, 1988; Hadjikyriacou and Coucouvanis,1987; Coucouvanis et al., 1984; Teo et al., 1983; Coucouvanis et al., 1983; Kanatzidis and Coucouvanis, 1983;Coucouvanis et al., 1981; Coucouvanis, 1981; Coucouvanis et al., 1980a, b). Показано, что эти комплексы связываются с медью, и, следовательно, рассмотрены для применения в настоящих воплощениях лечения. Среди предпочтительных соединений или комплексов тиомолибдата находятся те, которые содержат один, два или три атома молибдена, один атом молибдена и один атом железа, два атома молибдена и один атом железа, и один атом молибдена, и два атома железа. Структуры трех общих классов соединений тиомолибдата и двух предпочтительных соединений тиомолибдата описаны в WO 00/13712. Примеры соединений тиомолибдата, рассматриваемых для применения, включают, но не ограничены ими, нонатиомолибдат ([MoS9]2-), гексатиодимолибдат ([Мо 2S6]2-), гептатиодимолибдат ([Mo2S7]2-),октатиодимолибдат ([Mo2S8]2-), нонатиодимолибдат ([Мо 2S9]2-), декатиодимолибдат ([Mo2S10]2-), ундекатиодимолибдат ([Mo2S11]2-), додекатиодимолибдат ([Mo2S12]2-), аммониевая соль додекатиодимолибдатаNH4)2([Mo2(S2)6]); Muller et al., 1980; Muller and Krickemeyer, 1990), аммониевая соль тридекатиотримолибдата NH4)2([Mo3(S)(S2)6]); Muller and Krickemeyer, 1990) и тиомолибдаты со структурами ядра[FeCl2S2MoS2FeCl]2-, [S2MoS2FeS2MoS2]2- и [S2MoS2FeCl2]2-. Кроме того, авторы изобретения открыли, что глюконат железа является источником железа, который не содержит ионы галогенидов. Его взаимодействие с тетратиомолибдатом в присутствии гидроксида аммония приводит к образованию другого соединения тиомолибдата, новой аммониевой соли октатиобимолибдата железа NH4)3[S2MoS2FeS2MoS2]), которая очень хорошо растворима в воде. Хотя неко- 18008683 торые из этих соединений могут быть менее эффективными при снижении уровней меди в организме,чем тетратиомолибдат, они будут, тем не менее, находить применение в конкретных терапиях.D. Комплексы тиомолибдат-углевод Ранее авторы изобретения сделали открытие, что посредством образования комплекса между соединениями тиомолибдата и углеводами, такими как сахароза, образуется стабильная форма соединений тиомолибдата. В этих комплексах тиомолибдат-углевод слои молекул углевода собираются вокруг соединения тиомолибдата в структурные мотивы, стабилизированные водородными связями. Эти слои служат для защиты сердцевины тиомолибдата от окисления и гидролиза. Другие молекулы, такие как аминокислоты, которые способны к образованию водородных связей с соединениями тиомолибдата,также рассматривались для применения. Примером такого стабилизированного соединения тиомолибдата является тетратиомолибдат, стабилизированный сахарозой. Чтобы получить комплекс сахароза-тетратиомолибдат аммония, 26 г сахарозы растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Добавляют 1 г тетратиомолибдата аммония, и эту смесь перемешивают в атмосфере аргона до тех пор, пока ТМ не образует раствор. Затем воду удаляют из смеси путем однократного испарения в высоком вакууме. Термин углевод охватывает широкое разнообразие химических соединений, имеющих общую формулу (СН 2 О)n и включает такие соединения, как моносахариды, дисахариды, трисахариды, олигосахариды, полисахариды и их аминированные, сульфатированные, ацетилированные и другие производные формы. Олигосахариды представляют собой цепи, состоящие из единиц сахара, которые также известны как моносахариды. Сахарные единицы могут быть расположены в любом порядке и связаны с сахарными единицами любым количеством различных путей. Следовательно, число возможных различных стереоизомерных цепей олигосахаридов является достаточно большим. Как известно из уровня техники, моносахарид представляет собой молекулу сахара, которая содержит одну сахарную единицу. Как его используют здесь, термин сахарная единица означает моносахарид. Как также известно из уровня техники, дисахарид представляет собой молекулу сахара, которая содержит 2 сахарные единицы, трисахарид представляет собой молекулу сахара, которая содержит 3 сахарные единицы, олигосахарид представляет собой молекулу сахара, которая, как правило, содержит от примерно 2 до примерно 10 сахарных единиц, и полисахарид представляет собой молекулу сахара, которая содержит более 10 сахарных единиц. Сахарные единицы в ди-, три- и олигосахариде все связаны гликозидными связями. Тем не менее, термин олигосахарид означает молекулу сахара, которая содержит, по меньшей мере, две сахарные единицы. Моносахариды следует понимать как включающие, но не ограниченные ими, либо D-, либо Lизомеры триоз, альдопентоз, альдогексоз, альдотетроз, кетопентоз и кетогексоз. Упомянутые соединения могут также находиться в форме лактонов. Примеры альдопентозы включают, но не ограничены ими,рибозу, арабинозу, ксилозу и лиозу; примерами альдогексозы являются аллоза, альтроза, глюкоза, манноза, гулоза, идоза, галактоза, талоза, фуктоза и рамноза. Примеры кетопентозы включают, но не ограничены ими, рибулозу и ксилулозу, примеры тетрозы включают, но не ограничены ими, эритрозу и треозу,а примеры кетогексозы включают, но не ограничены ими, псикозу, фруктозу, сорбозу или тагатозу. Примерами дисахарида являются трегалоза, мальтоза, изомальтоза, целлобиоза, гентиобиоза, сахароза, лактоза, хитобиоза, N,N-диацетилхитобиоза, палатиноза или сахароза. Примерами трисахаридов являются раффиноза, паноза, мелезитоза или мальтотриоза. Примерами олигосахаридов являются мальтотетраоза, мальтогексаоза или хитогептаоза. Термин углевод, как его используют здесь, также должен охватывать сахарные спирты, например, альдитолы, такие как маннит, лактит, ксилит, глицерин или сорбит. Примеры полисахаридов включают, но не ограничены ими, полидекстрозу и мальтодекстрин. Стабилизацию рассматривают как эффективную с использованием любого углевода, как определено здесь, в соотношении между примерно 5 сахарными единицами и примерно 100 или 200 сахарными единицами или примерно в таком количестве на металлический центр тиомолибдата. Этот интервал следует понимать как включающий все значения в пределах данного интервала, как, например, соотношения примерно 10 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 20 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 25 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 30 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 40 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 50 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 60 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 70 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 75 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 80 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 90 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 110 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 125 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 150 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата, примерно 175 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата или примерно 190 сахарных единиц на металлический центр тиомолибдата.III. Стабилизированные соединения тиомолибдата Комплексы тиомолибдата чувствительны к окислению при воздействии воздуха. Это создает неко- 19008683 торые практические препятствия для готового препарата и применения таких соединений в клинике. Следовательно, с целью развития уровня техники при клиническом лечении ангиогенных заболеваний с использованием комплексообразования меди авторы изобретения разработали ряд усовершенствованных соединений тиомолибдата с повышенной стабильностью. Полученные в результате соединения легче включать в препарат в фармацевтически приемлемых носителях и, изготовленные таким образом, они обладают улучшенным сроком хранения. При разработке и отборе новых молекул было важно не получить стабильность ценой пониженной растворимости или эффективности. Обычным специалистам в данной области техники понятно, что взаимоотношения между физическими, химическими и биологическими свойствами данного класса соединений таковы, что до тех пор, пока указанное соединение не получено и не протестировано, наличие желаемых свойств без каких-либо новых недостатков нельзя предсказать. Таким образом, в настоящем изобретении предложен ряд новых соединений в плане продемонстрированных усовершенствований стабильности без какой-либо потери растворимости, активности против меди или терапевтической активности в контрольных исследованиях. Соединения, фармацевтические препараты и наборы, предложенные по изобретению, следовательно, имеют преимущества, состоящие в легкости приготовления и обращения и в увеличенном сроке хранения без каких-либо побочных эффектов при их терапевтическом применении. Новые соединения основаны на соединениях, представляющих собой алкиламмония тиомолибдат,предпочтительным примером которых является тетрапропиламмония тетратиомолибдат (ТР-ТМ). Эту терминологию используют на протяжении всей настоящей заявки для краткости, и обычным специалистам в данной области техники будет понятно, что более точным названием является дитетрапропиламмоний-тетратиомолибдат, [N(C3H7)4]+MoS42-[N(C3H7)4]. В изобретении можно также применять аналогичные производные соединений тетратиовольфрамата, где вместо молибдена используют вольфрам. Эта новая соль и родственные соединения, представляющие собой алкиламмония тиомолибдат,стабилизируют тиомолибдатный центр молекулы, сохраняя при этом растворимость, низкую токсичность и свойства против меди. При использовании аммониевой соли тетратиомолибдата (AmmTM или ТМ) в ранних исследованиях авторов изобретения при воздействии воздуха кислород замещает серу,делая соединение неактивным в отношении его важных свойств против меди. Этот процесс дополнительно катализируется любой влагой в воздухе. В новом семействе молекул алкильные группы окружают сердцевину тиомолибдата, защищая ее от влаги и воздуха. В предварительных тестах стабильность в увлажненном нагретом воздухе (который усиливает потерю активности AmmTM примерно в 10 раз по сравнению с условиями окружающей среды) очевидна в течение по меньшей мере 7 суток. Затем была продемонстрирована стабильность в течение более чем 2-месячного периода. Период полураспада ТР-ТМ, например, в открытых чашках Петри при комнатной температуре составляет примерно 180 суток в противоположность только примерно 40 суткам для AmmTM. Однако эти соединения сохраняют достаточную растворимость для фармацевтических целей, примером чего является ТР-ТМ, который является растворимым по меньшей мере до 1 мг/мл воды, что является более чем адекватным. В анализе in vitro новые соединения, такие как ТР-ТМ, показывают стандартное трехкомпонентное связывание медь-альбумин-ТМ исходного соединения AmmTM, что является предсказанием биологической активности против меди. Различие в стабильности при сохраненной растворимости и свойствах связывания меди делает ТР-ТМ значительно усовершенствованным лекарством по сравнению с AmmTM. Однако настоящее изобретение основано не только на таких данных in vitro, но демонстрирует эффективность новых соединений и отсутствие их токсичности in vivo. В исследованиях на моделях, принятых в уровне техники, эффективность ТР-ТМ, представителя этих новых соединений, была неотличима от активности AmmTM в ингибировании опухолевого роста. Авторы изобретения также представляют данные in vivo, показывающие безопасность нового класса соединений, в частности, ТР-ТМ. Хотя тетраметиламмоний и в меньшей степени - тетраэтиламмоний,которые будут высвобождаться из родственных соединений, могут обладать некоторой функцией ганглиоблокаторов ЦНС, этим может управлять лечащий врач, в частности, в отношении порога безопасности, установленного в приведенном ниже исследовании ТР-ТМ. Высвобождение группировок тетрапропиламмония из ТР-ТМ было представлено в исследовании in vivo простым введением тетрапропиламмония хлорида. При дозах вплоть до доз в 466 раз более высоких чем было бы необходимо для противоопухолевых эффектов у человека, все животные были живыми и здоровыми после 58 доз. Эти данные, таким образом, показывают, что соль, высвобождаемая из NP-TM, является нетоксичной в дозах, во много раз более высоких, чем могло бы быть необходимо для терапии снижения меди этим соединением у людей. Новые соединение, таким образом, являются стабильными, растворимыми, терапевтически эффективными и по существу нетоксичными и представляют неожиданное усовершенствование по сравнению с существующими AmmTM и родственными соединениями первого поколения.IV. Мониторинг уровней меди Сывороточный церулоплазмин, который непосредственно зависит от статуса меди в печени, является точным показателем статуса меди. Доза ТМ, используемая в предшествующих исследованиях на грызунах, в среднем составляла 0,5 мг/сутки у крыс средней массы. Исследования авторов изобретения на мышах и крысах и обширный опыт авторов изобретения на людях с болезнью Вильсона и на людях с раком показывают, что в 4 раза большая доза, чем эта, требуется крысам для снижения сывороточного церулоплазмина до примерно 10% от нормального, что является оптимальным критерием низкого статуса меди у грызунов. Эти концепции оптимального мониторинга статуса Сu и дозировки ТМ были впоследствии включены в исследования ТМ на животных, описанные в примере 2. На основании приведенных здесь исследований и опыта авторов изобретения с ТМ снижение уровня церулоплазмина (Ср) до значения между примерно 40 и примерно 10% базового значения перед лечением будет приводить, по меньшей мере, к некоторому уровню благоприятного клинического антиангиогенного эффекта. Однако снижение Ср до уровня примерно 20% базового значения перед лечением предпочтительно при большинстве клинических показаний. Представленные здесь данные, касающиеся ТР-ТМ, показывают, что ТР-ТМ является, по меньшей мере, столь же эффективным, что и ТМ, при ингибировании опухолевого роста in vivo (фиг. 5). Следовательно, объем данных, полученных по ТМ, будет легко применим к клиническому применению ТР-ТМ и родственных соединений.V. Комбинированные терапии Способы по настоящему изобретению можно комбинировать с любыми другими способами, обычно применяемыми при лечении конкретного заболевания или расстройства, которое имеется у пациента. Например, в сочетании с лечением солидных опухолей способы по настоящему изобретению можно применять в сочетании с классическими подходами, такими как хирургия, радиотерапия и тому подобное. Если конкретный терапевтический подход неизвестен как вредный сам по себе или не препятствует эффективности настоящей терапии, рассматривают комбинирование его с изобретением. Когда один или более чем один агент применяют в комбинации с более стабильными соединениями тиомолибдата, такими как ТР-ТМ, необязательно, чтобы комбинированные результаты были аддитивными по эффектам,наблюдаемым, когда каждую терапию проводят по отдельности, хотя это, очевидно, является желательным, и нет особой необходимости, чтобы комбинированное лечение проявляло синергические эффекты,хотя это, конечно, возможно и предпочтительно. В отношении хирургии одновременная операция во время дефицита меди не является предпочтительной, поскольку рост кровеносных сосудов необходим для заживления раны. Однако, поскольку медь можно восполнить в пределах примерно 24 ч прерывающейся терапии, любое хирургическое вмешательство можно осуществлять после восполнения меди. Затем изобретение может быть восстановлено после того, как заживление раны стабилизировано, обычно, примерно через 1-2 недели после операции. В отношении радиотерапии рассматривается любой механизм индукции повреждения ДНК локально в пределах опухолевых клеток, такой как -облучение, рентгеновские лучи, УФ-облучение, микроволновое излучение и даже электронные излучения и тому подобное. Рассматривают также непосредственную доставку радиоизотопов к опухолевым клеткам, и ее можно применять в сочетании с целевым антителом или другими целевыми средствами. Доказано, что терапия цитокинами также является эффективным партнером для комбинированных терапевтических режимов. В таких комбинированных подходах можно применять различные цитокины. Примеры цитокинов включают ИЛ-1, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, ИЛ-9, ИЛ-10,ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, TGF-, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, TNF, TNF, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF,BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, ИФН-, ИФН-, ИФН-. Цитокины вводят согласно стандартным режимам, соответствующим клиническим показателям, таким как состояние пациента и относительная токсичность цитокина. А. Агенты, хелатирующие медь 1. Цинк Авторы изобретения рассматривают применение цинка после достижения низкого статуса меди у пациентов с раком с целью поддержания состояния дефицита меди в течение длительного периода. Авторы изобретения разработали цинк в качестве агента против меди при болезни Вильсона, и он был одобрен для этой цели в январе 1997 г. Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США(Food and Drag Administration, FDA). Цинк действует путем индукции металлотионеина в интерстициальных клетках слизистой оболочки, блокируя, таким образом, всасывание меди (Brewer and YuzbasiyanGurkan, 1992a). Цинк также крайне безопасен. В исследованиях, в настоящее время достигающих 200 пациентов с болезнью Вильсона, цинк в дозах 150 мг в сутки не давал совсем никакой токсичности(Brewer and Yuzbasiyan-Gurkan, 1992a). Соединения цинка, такие как ацетат цинка, таким образом, применяют для обширного лечения болезни Вильсона, включая первоначальное лечение (Hoogenraad et al., 1978; Hoogenraad et al., 1979;Hoogenraad et al., 1987). Однако цинк сам по себе не является идеальным для первоначальной терапии, в основном, потому, что он является достаточно медленно действующим. Таким образом, достижение ин- 21008683 дукции металлотионеина в тонком кишечнике и отрицательного баланса меди занимает примерно две недели (Yuzbasiyan-Gurkan, 1992), На двухнедельной точке цинк немедленно меняет в обратную сторону(положительный) баланс меди +0,54 мг в сутки у этих пациентов в среднем, однако индуцированный отрицательный баланс является достаточно умеренным, составляя в среднем -0,35 мг в сутки (Brewer etal., 1990; Brewer et al., 1993b). Вследствие этой низкой скорости удаления меди снижение уровня меди в моче и плазматической меди, не связанной с церулоплазмином (потенциально токсичной меди, измеряемой в крови), до субтоксичных уровней занимает по меньшей мере шесть месяцев терапии цинком. Тем не менее, применение цинка в качестве поддерживающей терапии после достижения низкого статуса меди остается предпочтительным аспектом изобретения. Вследствие того факта, что соединения цинка являются относительно недорого стоящими и могут быть легко получены, и их широкой доступности, даже применение соединений цинка для достижения низкого первоначального статуса меди остается аспектом всего изобретения. 2. Пеницилламин Пеницилламин представляет собой лекарство, которое применялось наиболее широко и является самым известным. Однако он должен быть выбран в последнюю очередь для первоначального лечения неврологических пациентов в связи с очень высоким риском их неврологического ухудшения (Brewer etal., 1987a; Glass et al., 1990; Brewer et al., 1994a). Другой проблемой, связанной с пеницилламином, является то, что примерно у пациентов в количестве от четверти до трети развивается синдром начальной гиперчувствительности, требующий значительных вмешательств, таких как временное прекращение приема этого лекарства и возобновление его в более низкой дозе, обычно с одновременным введением кортикостероидов. Этот опыт является, некоторым образом, пугающим для пациентов, которые уже больны, и не дает лечащему врачу применять исследования авторов изобретения вслепую. Наконец, существует большой перечень других побочных эффектов, которые могут встречаться при пеницилламине в течение первых нескольких недель терапии. Они включают угнетение костного мозга, протеинурию, а также аутоиммунные расстройства. 3. Триентин Триентин действует посредством хелатирования и выделения меди с мочой (Walshe, 1982). Терапевтическая доза (1000-2000 мг/сутки) обычно приводит только примерно к половине количества купруреза (cupruresis) при подобной дозе пеницилламина. Тем не менее, триентин способен давать вначале отрицательный баланс меди в несколько мг, значительно больше, чем цинк. Типично этот купрурез 4-5 мг уменьшается в течение первых нескольких недель терапии до более умеренного, но все же существенного, 2-3 мг. Поглощение меди составляет примерно 1 мг/сутки при обязательных немочевых потерях примерно 0,5 мг. Таким образом, купрурез 2-3 мг приводит к отрицательному балансу меди от 1,5 до 2,5 мг/сутки. Триентин официально одобрен для применения у пациентов, не переносящих пеницилламиновую терапию. В связи с этим, а также с тем, что он был введен намного позже, чем пеницилламин, он не очень интенсивно применялся и описывался. Он не проходил формального исследования токсичности. По-видимому, он представляет существенно меньший риск побочных эффектов, чем пеницилламин. О проблеме начальной гиперчувствительности не сообщали. Он вызывает протеинурию после нескольких недель применения примерно у 20% пациентов. Он может также иногда приводить к угнетению костного мозга и аутоиммунным аномалиям, хотя последнее имеет место обычно после длительного применения. До сих пор не сообщали о том, что триентин вызывает начальное ухудшение у неврологических пациентов, но его исключительное применение у пациентов данного типа, вероятно, очень ограничено. Были случаи, когда авторы изобретения получали пациентов при переводе, которым становилось хуже на пеницилламине, их на короткое время переключали на триентин и, когда им становилось хуже (или отсутствовало улучшение), их переводили авторам изобретения для терапии ТМ. У этих типов пациентов невозможно выяснить, играл ли триентин какую-либо роль в ухудшении. Теоретически это было возможно, поскольку, как при пеницилламине, он мобилизует медь, продуцируя более высокий уровень в крови до достижения выделения с мочой. Но неизвестно, переходит ли этот повышенный уровень меди в крови в повышенные уровни в головном мозге и повышенную нейротоксичность. В. Химиотерапевтические комбинации и лечение Безотносительно к механизмам, посредством которых достигается усиленный распад опухоли, указанные аспекты комбинированного лечения по настоящему изобретению обладают очевидной пользой в эффективном лечении заболевания. Чтобы применять настоящее изобретение в комбинации с введением химиотерапевтического агента, следует просто вводить животному более стабильное соединение тиомолибдата, такое как ТР-ТМ, в комбинации с химиотерапевтическим агентом способом, эффективным для достижения результата их сочетанных противоопухолевых действий в организме этого животного. Эти агенты, следовательно, нужно обеспечивать в эффективном количестве и в течение эффективного периода времени для достижения результата их совместного нахождения в сосудистой системе опухоли и их сочетанных действий в окружении опухоли. Для достижения этой цели более стабильное соединение тиомолибдата, такое как ТР-ТМ, и химиотерапевтический агент можно вводить животному одновременно либо в единой композиции, либо в виде двух отдельных композиций с использованием различных- 22008683 путей введения. Альтернативно лечение более стабильным соединением тиомолибдата, таким как ТР-ТМ, может предшествовать лечению химиотерапевтическим агентом или проводиться после него через интервалы в диапазоне от минут до недель. В воплощениях, где химиотерапевтический фактор и более стабильное соединение тиомолибдата применяют у животного по отдельности, как правило, следует убедиться, что между временем каждого приема не пройдет значительный период времени, так чтобы химиотерапевтический агент и более стабильное соединение тиомолибдата все еще были способны проявлять полезно сочетанный эффект в отношении опухоли. В таких случаях рассматривают, что следует приводить в контакт опухоль с обоими агентами в интервале от примерно 5 мин до примерно одной недели друг от друга, более предпочтительно в интервале примерно 12-72 ч друг от друга, причем наиболее предпочтительным временем отсрочки является только примерно 12-48 ч. Однако в некоторых ситуациях может быть желательно значительно продлить период времени лечения, где промежуток времени между соответствующими введениями составляет несколько суток (2, 3,4, 5, 6 или 7) или даже несколько недель (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8). Кроме того, предпочтительным воплощением изобретения является введение более стабильного соединения тиомолибдата, такого как ТР-ТМ,между периодами химиотерапии, либо в поддерживающем режиме после химиотерапии. Таким образом,также возможно, что будет желательно более чем одно введение более стабильного соединения тиомолибдата, такого как ТР-ТМ, и/или химиотерапевтического агента. Для достижения развития опухоли в обратную сторону оба агента доставляют в сочетанном количестве, эффективном для ингибирования ее роста безотносительно ко времени введения. Ряд химиотерапевтических агентов предназначен для применения в способах комбинированного лечения, описанных здесь. Химиотерапевтические агенты, рассматриваемые в качестве примерных,включают, например, этопозид (VP-16), адриамицин, 5-фторурацил (5-FU), камптотецин, актиномицинD, митомицин С, карбаплатин, паклитаксел, доцетаксел и даже перекись водорода. Как должно быть понятно обычным специалистам в данной области, подходящие дозы химиотерапевтических агентов будут,как правило, приблизительно такими как уже применяемые в клинической терапии, где химиотерапевтические агенты вводят одни или в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами. Другие полезные агенты включают соединения, которые вмешиваются в репликацию ДНК, митоз и хромосомную сегрегацию. Такие химиотерапевтические соединения включают адриамицин, также известный как доксорубицин, этопозид, верапамил, подофиллотоксин и тому подобные. Широко применяемые в клинической практике для лечения новообразований, эти соединения вводят посредством болюсных инъекций внутривенно в дозах в интервале от 25-75 мг/м 2 через интервалы в 21 сутки для адриамицина до 35-50 мг/м для этопозида внутривенно, либо двойную внутривенную дозу перорально. Агенты, которые прерывают синтез и правильность полинуклеотидных предшественников, также можно применять. Особенно полезны агенты, которые прошли широкое тестирование и легко доступны. Как таковые, агенты, такие как 5-фторурацил (5-FU), преимущественно используются опухолевой тканью, что делает этот агент особенно полезным для направления в опухолевые клетки. Хотя он достаточно токсичен, 5-FU применим в широком ряде носителей, включая носители для местного введения, однако, широко используют внутривенное введение при дозах в интервале от 3 до 15 мг/кг/сутки. Примерные химиотерапевтические агенты, которые являются полезными в отношении комбинированной терапии, перечислены в табл. 1. Каждый из перечисленных в ней агентов является примерным и никоим образом не ограничивающим. Специалист в данной области отсылается к "Remington's Pharmaceutical Sciences", 15th Ed., гл. 33, в частности, стр. 624-652. Некоторая вариация дозировки будет неизбежно встречаться в зависимости от состояния субъекта, подлежащего лечению. Лицо, ответственное за введение, будет в любом случае определять подходящую дозу для индивидуального субъекта. Кроме того, для введения человеку препараты должны соответствовать стандартам стерильности, пирогенности,общей безопасности и чистоты в соответствии с требованиями Департамента по биологическим стандартам FDA (FDA Office of Biologies standards).- 23008683 Таблица 1. Химиотерапевтические агенты, полезные при неопластичеком заболевании С. Антиангиогенные агенты Термин ангиогенез относится к образованию новых кровеносных сосудов, как правило, в ткани или в органе. В нормальных физиологических условиях люди или животные претерпевают ангиогенез только в очень специфических ограниченных ситуациях. Например, ангиогенез в норме наблюдается при заживлении раны, развитии плода или эмбриона и формировании желтого тела, эндометрия и плаценты. Считают, что как контролируемый, так и неконтролируемый ангиогенез происходит подобным образом. Эндотелиальные клетки и перициты, окруженные базальной мембраной, образуют капиллярные кровеносные сосуды. Ангиогенез начинается с эрозии базальной мембраны ферментами, высвобождаемыми эндотелиальными клетками и лейкоцитами. Эндотелиальные клетки, которые выстилают просвет кровеносных сосудов, затем выступают через базальную мембрану. Ангиогенные стимуляторы индуцируют миграцию эндотелиальных клеток через эродированную базальную мембрану. Эти мигрирующие клетки образуют отростки от исходного кровеносного сосуда, где эндотелиальные клетки претерпевают митоз и пролиферируют. Эндотелиальные отростки соединяются друг с другом с образованием капиллярных петель, создавая новый кровеносный сосуд. Более стабильные соединения тиомолибдата по изобретению, такие как ТР-ТМ, могут применяться в комбинации с любой одной или более другой антиангиогенной терапией. В частности, включены комбинации с агентами, которые ингибируют VEGF, такими как нейтрализующие антитела, растворимые рецепторные конструкции, ингибиторы тирозинкиназы, антисмысловые стратегии, аптамеры и рибозимы РНК против VEGF или рецепторов VEGF. Можно также применять варианты VEGF с антагонистическими свойствами, как описано в WO 98/16551. Как правило, антиангиогенные терапии могут быть основаны на подаче антиангиогенного агента или ингибировании ангиогенного агента. Например, можно применять антитела к ангиогенину, как описано в патенте США 5520914, специально включенном сюда путем ссылки. Поскольку FGF связан с ангиогенезом, можно также применять ингибиторы FGF. Определенными примерами являются соединения, имеющие измененную последовательность N-ацетилглюкозамина с 2-O-сульфатированной уроновой кислотой в качестве ее основных повторяющихся единиц, включая гликозаминогликаны, такие как сульфат архарана. Такие соединения описаны в патенте США 6028061, специально включенном сюда путем ссылки, и могут применяться в комбинации с описанными здесь соединениями. Различные ингибиторы тирозинкиназы, полезные для лечения ангиогенеза, проявляющегося при различных болезненных состояниях, в настоящее время известны. Они включают, например, 4 аминопирроло[2,3-d]пиримидины (патент США 5639757), специально включенном сюда путем ссылки, и могут также применяться в комбинации с настоящим изобретением. Дополнительньми примерами органических молекул, способных к модулированию преобразования сигнала тирозинкиназой посредством рецептора VEGFR2, являются соединения хиназолина и композиции, описанные в патенте США 5792771, который специально включенн сюда путем ссылки с целью описания дополнительных комбинаций для применения с настоящим изобретением при лечении ангиогенных заболеваний. Также показано, что соединения других химических классов ингибируют ангиогенез и могут применяться в комбинации с настоящим изобретением. Например, стероиды, такие как ангиостатические 4,9(11)-стероиды и С 21-окисленные стероиды, как описано в патенте США 5972922, специально включенном сюда путем ссылки, могут применяться в комбинированной терапии. В патентах США- 26008683 5712291 и 5593990, каждый из которых специально включен сюда путем ссылки, описаны талидомид и родственные соединения, предшественники, аналоги, метаболиты и продукты гидролиза, которые могут также применяться в комбинации с настоящим изобретением для ингибирования ангиогенеза. Соединения, описанные в патентах США 5712291 и 5593990 можно вводить перорально. Примерные дополнительные антиангиогенные агенты, которые полезны в связи с комбинированной терапией, перечислены в табл. 2. Каждый из агентов, перечисленных в ней, является примером и никоим образом не ограничивающим. Таблица 2. Ингибиторы и негативные регуляторы ангиогенеза Некоторыми соединениями для применения при ингибировании ангиогенеза в комбинации с более стабильными соединениями тиомолибдата по изобретению, такими как ТР-ТМ, являются ангиостатин,эндостатин, васкулостатин, канстатин (canstatin) и маспин (maspin). Ангиостатин раскрыт в патентах США 5776704, 5639725 и 5733876, каждый из которых включен сюда путем ссылки. Ангиостатин представляет собой белок, имеющий молекулярную массу между примерно 38 кД и примерно 45 кД, как определено с помощью электрофореза в восстанавливающих условиях в полиакриламидном геле, который содержит приблизительно районы Крингла 1-4 молекулы плазминогена. Ангиостатин, как правило,имеет аминокислотную последовательность, по существу подобную последовательности фрагмента мышиного плазминогена, начинающуюся с аминокислоты 98 интактной молекулы мышиного плазминогена. Аминокислотная последовательность ангиостатина немного варьирует между видами. Например, у- 27008683 человеческого ангиостатина аминокислотная последовательность по существу подобна последовательности вышеописанного фрагмента мышиного плазминогена, хотя последовательность активного человеческого ангиостатина может начинаться с аминокислоты либо 97, либо 99 интактной последовательности человеческого плазминогена. Кроме того, можно применять человеческий плазминоген, поскольку он обладает подобной антиангиогенной активностью, как показано в модели опухоли мыши. Ангиостатин и эндостатин стали находиться в фокусе интенсивного исследования, поскольку они являются первыми ингибиторами ангиогенеза, которые продемонстрировали способность не только ингибировать опухолевый рост, но также вызывать регрессию опухоли у мыши. Существует множество протеаз, которые, как показано, продуцируют ангиостатин из плазминогена, включая эластазу, макрофагальную металлоэластазу (ММЕ), матрилизин (9 ММР-7) и 92 кДа желатиназу В/коллагеназу типа IV(ММР-9). ММЕ может продуцировать ангиостатин из плазминогена в опухолях, и гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор (GMCSF) положительно регулирует экспрессию ММЕ макрофагами, индуцируя продуцирование ангиостатина. Роль ММЕ в образовании ангиостатина подтверждена открытием, что ММЕ действительно экспрессируется в клинических образцах печеночноклеточных карцином от пациентов. Другой протеазой, которая способна продуцировать ангиостатин,считают стромелизин-1 (ММР-3). Показано, что ММР-3 продуцирует подобные ангиостатину фрагменты из плазминогена in vitro. Механизм действия для ангиостатина в настоящее время неясен, существует гипотеза, что он связывается с неидентифицированным рецептором клеточной поверхности на эндотелиальных клетках, индуцируя эндотелиальную клетку претерпевать запрограммированную клеточную гибель или остановку митоза. Эндостатин, по-видимому, является даже более сильнодействующим антиангиогенным и противоопухолевым агентом. Эндостатин эффективен в том, что вызывает регрессию опухолей в ряде моделей у мышей. В опухолях не развивается устойчивость к эндостатину, и после множественных циклов лечения опухоли вступают в состояние покоя, во время которого они не увеличиваются в объеме. В этом состоянии покоя процент опухолевых клеток, претерпевающих апоптоз, был повышен, приводя к тому, что популяция по существу оставалась того же размера. Патент США 5854205, Folkman and O'Reilly, специально включенный сюда путем ссылки, касается эндостатина и его применения в качестве ингибитора пролиферации эндотелиальных клеток и ангиогенеза. Белок эндостатин соответствует С-концевому фрагменту коллагена типа XVIII, и этот белок можно выделить из ряда источников. В патенте США 5854205 также показано, что эндостатин может иметь аминокислотную последовательность фрагмента коллагена типа XVIII, коллагена типа XV или преджелудочной эстеразы BOVMPE 1. Комбинации эндостатина с другими антиангиогенными белками,в частности, с ангиостатином, также описаны в патенте США 5854205, так что эти комбинированные композиции способны давать эффективное обратное развитие опухолевой массы, зависимой от ангиогенеза. Васкулостатин, канстатин и маспин также пригодны для комбинирования с настоящим изобретением. Уже показано, что некоторые антиангиогенные способы терапии вызывают регрессию опухоли,включая бактериальный полисахарид СМ 101 и антитело LM609. СМ 101 представляет собой бактериальный полисахарид, который хорошо охарактеризован по его способности индуцировать воспаление новых кровеносных сосудов в опухолях. СМ 101 связывается с рецепторами, экспрессируемыми на недифференцированном эндотелии, и поперечно сшивает их, что стимулирует активацию системы комплемента. Он также инициирует направляемый цитокинами воспалительный ответ, который направлен избирательно на опухоль. Он является уникальным антипатоангиогенным агентом, который негативно регулирует экспрессию VEGF и его рецепторов. СМ 101 в настоящее время находится в клинических испытаниях в качестве противоракового лекарства и может применяться в комбинации, описанной здесь. Тромбоспондин (TSP-1) и тромбоцитарный фактор 4 (PF4) могут также применяться в комбинации с настоящим изобретением. Оба они являются ингибиторами ангиогенеза, которые связываются с гепарином и обнаруживаются в -гранулах тромбоцитов. TSP-1 представляет собой большой 450 кДа мультидоменный гликопротеин, который является составной частью внеклеточного матрикса. TSP-1 связывается со многими молекулами протеогликанов, обнаруживаемых во внеклеточном матриксе, включаяHSPG, фибронектин, ламинин и различные типы коллагена. TSP-1 ингибирует миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток in vitro и ангиогенез in vivo. TSP-1 может также подавлять злокачественный фенотип и онкогенез трансформированных эндотелиальных клеток. Показано, что ген опухолевого супрессора р 53 непосредственно регулирует экспрессию TSP-1, так что потеря активности р 53 вызывает резкое снижение продуцирования TSP-1 и сопутствующее повышение инициируемого опухолью ангиогенеза.PF4 представляет собой белок из 70 аминокислот, который является членом семейства хемокинов СХС ELR, которые способны эффективно ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток in vitro и ангиогенез in vivo. PF4, водимый внутрь опухоли или доставляемый посредством аденовирусного вектора, способен вызывать ингибирование опухолевого роста. Интерфероны и ингибиторы металлопротеиназ представляет собой два других класса природных- 28008683 ангиогенных ингибиторов, которые можно комбинировать с настоящим изобретением. Антиэндотелиальная активность интерферона была показана, начиная с ранних 1980-х гг., однако механизм этого ингибирования до сих пор неясен. Известно, что они могут ингибировать миграцию эндотелиальных клеток и что они обладают некоторой антиангиогенной активностью in vivo, которая, возможно, опосредована способностью к ингибированию продуцирования ангиогенных промоторов опухолевыми клетками. Сосудистые опухоли, в частности, чувствительны к интерферону, например, пролиферирующие гемангиомы можно успешно лечить ИФН-. Тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMP) представляют собой семейство природных ингибиторов матриксных металлопротеиназ (ММР), которые могут также ингибировать ангиогенез и могут применяться в протоколах комбинированного лечения. ММР играют ключевую роль в ангиогенном процессе, поскольку они разрушают матрикс, через который эндотелиальные клетки и фибробласты мигрируют при расширении или ремоделировании сосудистой сети. Показано, что, действительно, один из членов ММР, ММР-2, связан с активированным эндотелием посредством интегринаv3 преимущественно для данной цели. Если это взаимодействие прерывается фрагментом ММР-2, то ангиогенез негативно регулируется, и опухолевый рост ингибирован. Существует ряд фармакологических агентов, которые ингибируют ангиогенез, любой один или более чем один из которых можно применять в комбинации с настоящим изобретением. Они включаютAGM-1470/TNP-470, талидомид и карбоксиамидотриазол (CAI). В 1990 году обнаружено, что фумагиллин является эффективным ингибитором ангиогенеза, и с этого времени разработаны синтетические аналоги фумагиллина, AGM-1470 и TNP-470. Оба этих лекарства ингибируют пролиферацию эндотелиальных клеток in vitro и ангиогенез in vivo. TNP-470 интенсивно исследован в клинических испытаниях на человеке, данные которых позволяют предположить, что долгосрочное введение является оптимальным. Талидомид сначала применялся в качестве седативного агента, но было обнаружено, что он является эффективным тератогеном, и он был отменен. В 1994 году было обнаружено, что талидомид является ингибитором ангиогенеза. Талидомид в настоящее время находится в клинических испытаниях в качестве противоракового агента, а также средства для лечения сосудистых глазных заболеваний.CAI представляет собой низкомолекулярный ингибитор ангиогенеза, который действует в качестве блокатора кальциевого канала, который предотвращает реорганизацию актина, миграцию и распространение эндотелиальных клеток на коллагене IV. CAI ингибирует неоваскуляризацию при физиологически достижимых концентрациях и хорошо переносится перорально раковыми больными. Клинические испытания с CAI привели к стабилизации заболевания у 49% раковых больных, имеющих прогрессирующее заболевание до лечения. Было показано, что кортизон в присутствии гепарина или фрагментов гепарина ингибирует опухолевый рост у мышей посредством блокирования пролиферации эндотелиальных клеток. Механизм, вовлеченный в аддитивный ингибиторный эффект стероида и гепарина, неясен, хотя считают, что гепарин может увеличивать захват стероида эндотелиальными клетками. Показано, что эта смесь усиливает растворение базальной мембраны под вновь образованными капиллярами, и это также является возможным объяснением аддитивного ангиостатического эффекта. Конъюгаты гепарин-кортизол также обладают сильнодействующими ангиостатическими и противоопухолевыми эффектами активности in vivo. Дополнительные специфичные ингибиторы ангиогенеза, включающие, но не ограниченные ими,антиинвазивный фактор, ретиноевые кислоты и паклитаксел (патент США 5716981; включен сюда путем ссылки; AGM-1470 (Ingber et al., 1990; включен сюда путем ссылки); экстракт хряща акулы (патент США 5618925; включен сюда путем ссылки); анионный полиамид или олигомеры полимочевины(патент США 5593664; включен сюда путем ссылки); производные оксиндола (патент США 5576330; включен сюда путем ссылки); производные эстрадиола (патент США 5504074; включен сюда путем ссылки) и производные тиазолопиримидина (патент США 5599813; включен сюда путем ссылки) также рассмотрены для применения в качестве антиангиогенных соединений для комбинированного применения настоящего изобретения. Композиции, содержащие антагонист v3 интегрина, также могут применяться для ингибирования ангиогенеза в комбинации с настоящим изобретением. Как раскрыто в патенте США 5766591 (включенном сюда путем ссылки), RGD-содержащие полипептиды и их соли, включая циклические полипептиды, являются подходящими примерами антагонистов v3 интегрина. Антитело LM609 против v3 интегрина также индуцирует регрессию опухолей. Антагонисты v3 интегрина, такие как LM609, индуцируют апоптоз ангиогенных эндотелиальных клеток, оставляя без воздействия неактивные кровеносные сосуды. LM609 или другие антагонисты v3 могут также действовать посредством ингибирования взаимодействия v3 и ММР-2, протеолитического фермента, который,как считают, играет важную роль в миграции эндотелиальных клеток и фибробластов. Патент США 5753230 точно включен здесь путем ссылки для описания антител против v3 (витронектина v3) для комбинирования с настоящим изобретением по ингибированию ангиогенеза. Апоптоз ангиогенного эндотелия в этом случае может давать каскадный эффект в отношении остальной сосудистой сети. Ингибирование опухолевой сосудистой сети в результате полного ответа на- 29008683 сигнал на распространение опухоли может в действительности инициировать частичный или полный коллапс сосудистой сети, приводящий в результате к гибели опухолевых клеток и потере объема опухоли. Возможно, что эндостатин и ангиостатин функционируют подобным образом. Тот факт, что LM609 не действует на неактивные кровеносные сосуды, но способен вызывать регрессию опухоли, позволяет сделать очень резонное предположение, что не все кровеносные сосуды опухоли должны быть мишенью для лечения, чтобы получить противоопухолевый эффект. Другие способы терапевтического вмешательства, основанные на изменении передачи сигнала через рецептор Tie2, могут также применяться в комбинации с настоящим изобретением, как, например,применение растворимого рецептора Tie2, способного блокировать активацию Tie2. Показано, что доставка такой конструкции с использованием рекомбинантной аденовирусной генотерапии эффективна при лечении рака и уменьшении метастазов.D. Агенты, индуцирующие апоптоз Более стабильные соединения тиомолибдата по изобретению, такие как ТР-ТМ, можно также комбинировать со способами лечения, которые индуцируют апоптоз в любых клетках в пределах опухоли,включая опухолевые клетки и опухолевые сосудистые эндотелиальные клетки. Хотя многие противораковые агенты могут обладать эффектом, индуцирующим апоптоз, как частью механизма их действия,некоторые агенты открыты, разработаны или выбраны с этим эффектом в качестве главного механизма,как описано ниже. Описан ряд онкогенов, которые ингибируют апоптоз или программируемую клеточную гибель. Примерные онкогены в этой категории включают, но не ограничены ими, bcr-abl, bcl-2 (отличный от bcl1; циклина D1; номера по каталогу GenBank M14745, Х 06487; патент США 5650491 и 5539094; каждый включен сюда путем ссылки) и члены семейства, включающего Bcl-x1, Mcl-1, Bak, Al, A20. Избыточная экспрессия bcl-2 была впервые открыта в лимфомах Т клеток. Вс 1-2 функционирует в качестве онкогена посредством связывания и инактивации Вах, белка в апоптотическом пути. Ингибирование функции bcl-2 предотвращает инактивацию Вах и дает возможность прохождения апоптотического пути. Таким образом, ингибирование этого класса онкогенов, например, используя антисмысловые нуклеотидные последовательности, рассматривается для применения в настоящем изобретении в аспектах, где желательно усиление апоптоза (патент США 5650491; 5539094 и 5583034; каждый включен сюда путем ссылки). При многих формах рака описаны мутации в генах-супрессорах опухоли, таких как р 53. Инактивация р 53 приводит в результате к нарушению стимуляции апоптоза. При этом нарушении раковые клетки прогрессируют в онкогенезе, а не имеют тенденции к клеточной гибели. Таким образом, обеспечение опухолевых супрессоров также рассматривается для применения по настоящему изобретению для стимуляции клеточной гибели. Примерные опухолевые супрессоры включают, но не ограничены ими, р 53,ген ретинобластомы (Rb), опухоли Вильмса (WT1), bах альфа, интерлейкин-1b-превращающий фермент и семейство, ген MEN-1, нейрофиброматоз, типа 1 (NF1), cdk ингибитор р 16, ген колоректального рака(DCC), ген семейного аденоматозного полипоза (FAP), множественный опухолевый супрессорный ген(MTS-1), BRCA1 и BRCA2. Предпочтительными для применения являются гены р 53 (патент США 5747469; 5677178 и 5756455; каждый включен сюда путем ссылки), ретинобластомы, BRCA1 (патент США 5750400; 5654155; 5710001; 5756294; 5709999; 5693473; 5753441; 5622829 и 5747282; каждый включен сюда путем ссылки), MEN-1 (номер по каталогу GenBank U93236) и аденовируса Е 1 А (патент США 5776743; включен сюда путем ссылки). Другие композиции, которые могут применяться, включают гены, кодирующие связанный с фактором некроза опухоли лиганд, индуцирующий апоптоз, называемый TRAIL (tumor necrosis factor relatedapoptosis inducing ligand), и полипептид TRAIL (патент США 5763223; включен сюда путем ссылки); 24 кДа протеазу, связанную с апоптозом, патента США 5605826 (включен сюда путем ссылки); связанный с Fas фактор 1, FAF1 (патент США 5750653; включен сюда путем ссылки). Обеспечение интерлейкин-1-превращающего фермента и членов семейства, которые также, как сообщали, стимулируют апоптоз, также рассматривается для применения в этих аспектах настоящего изобретения. Можно также применять такие соединения как производные карбостирила (патент США 5672603 и 5464833; каждый включен сюда путем ссылки); разветвленные апогенные пептиды (патент США 5591717; включен сюда путем ссылки); ингибиторы фосфотирозина и не гидролизуемые аналоги фосфотирозина (патент США 5565491 и 5693627; каждый включен сюда путем ссылки); агонисты рецепторов ретиноида RXR (патент США 5399586; включен сюда путем ссылки) и даже антиоксиданты (патент США 5571523; включен сюда путем ссылки). Ингибиторы тирозинкиназы, такие как генистеин,могут также связываться с лигандами, которые направлены на рецептор клеточной поверхности (патент США 5587459; включен сюда путем ссылки).VI. Фармацевтические композиции и наборы Фармацевтические композиции по настоящему изобретению будут, как правило, содержать эффективное количество соединения тиомолибдата с повышенной стабильностью, в частности, соединения,представляющего собой алкиламмония тиомолибдат, такой как тетрапропиламмония тетратиомолибдат

МПК / Метки

МПК: A61P 35/00, A61P 9/10, A61K 31/205

Метки: антиангиогенной, тетрапропиламмония, терапии, соединения, тетратиомолибдат, родственные

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/30-8683-tetrapropilammoniya-tetratiomolibdat-i-rodstvennye-soedineniya-dlya-antiangiogennojj-terapii.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Тетрапропиламмония тетратиомолибдат и родственные соединения для антиангиогенной терапии</a>

Похожие патенты