Ингибитор фосфоинозитид-3-киназы, содержащий цинксвязывающий фрагмент

Номер патента: 22434

Опубликовано: 30.12.2015

Авторы: Лай Чэнцзюн, Чжай Хайсяо, Цянь Чангэн, Цай Сюн, Бао Жуди

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Соединение формулы I

Рисунок 1

или его фармацевтически приемлемая соль,

в котором R представляет собой водород или R1C(O)-, где R1 представляет собой С124-алкил, С224-алкенил или фенил.

2. Соединение по п.1, в котором R1 представляет собой C110-алкил или фенил.

3. Соединение по п.2, в котором R1 представляет собой C16-алкил.

4. Соединение по п.1, в котором R представляет собой Н или ацетил.

5. Соединение по п.1, представленное формулой

Рисунок 2

или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Фармацевтическая композиция, подходящая для перорального введения и содержащая в качестве активного ингредиента соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

8. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента соединение по п.5 и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Фармацевтическая композиция, подходящая для перорального введения и содержащая в качестве активного ингредиента соединение по п.5 и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Способ лечения заболевания или нарушения, связанного с PI3K, у субъекта, нуждающегося в этом, где данный способ включает стадию, на которой субъекту вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы I

Рисунок 3

или его фармацевтически приемлемой соли,

где R представляет собой водород или R1C(O)-, где R1 представляет собой С124-алкил, С224-алкенил или фенил.

11. Способ по п.10, в котором указанное заболевание или нарушение, связанное с PI3K, является нарушением клеточной пролиферации.

12. Способ по п.11, в котором нарушение клеточной пролиферации является раком.

13. Способ по п.12, в котором рак выбран из группы, состоящей из папилломы, глиобластомы, саркомы Капоши, меланомы, немелкоклеточного рака легкого, рака яичника, рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы, астроцитомы, рака головы, рака шеи, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака легкого, колоректального рака, рака щитовидной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, гепатоцеллюлярной карциномы, лейкоза, лимфомы, болезни Ходжкина и болезни Беркитта.

14. Способ лечения HDAC-опосредованного заболевания, включающий стадию, на которой субъекту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы I

Рисунок 4

или его фармацевтически приемлемой соли,

где R представляет собой водород или R1C(O)-, где R1 представляет собой С124-алкил, С224-алкенил или фенил.

15. Способ лечения заболевания, опосредованного и PI3K, и HDAC, включающий стадию, на которой субъекту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы I

Рисунок 5

или его фармацевтически приемлемой соли,

где R представляет собой водород или R1C(O)-, где R1 представляет собой С124-алкил, С224-алкенил или фенил.

16. Способ по п.10, в котором R представляет собой водород.

17. Способ по п.16, в котором указанное заболевание или нарушение, связанное с PI3K, является нарушением клеточной пролиферации.

18. Способ по п.17, в котором нарушение клеточной пролиферации является раком.

19. Способ по п.18, в котором рак выбран из группы, состоящей из папилломы, глиобластомы, саркомы Капоши, меланомы, немелкоклеточного рака легкого, рака яичника, рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы, астроцитомы, рака головы, рака шеи, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака легкого, колоректального рака, рака щитовидной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, гепатоцеллюлярной карциномы, лейкоза, лимфомы, болезни Ходжкина и болезни Беркитта.

20. Способ по п.14, в котором R представляет собой водород.

21. Способ по п.15, в котором R представляет собой водород.

Текст

Смотреть все

ИСПРАВЛЕННОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Изобретение описывает соединение формулы I фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, и применение таких соединений при лечении заболеваний или нарушений, связанных с фосфоинозитид-3-киназой, таких как рак. Кроме того, изобретение относится к лечению нарушений, связанных с гистоновой деацетилазой,или заболеваний, связанных и с гистоновой деацетилазой и фосфоинозитид-3-киназой. Примечание: библиография отражает состояние при переиздании Родственные заявки Для настоящего изобретения испрашивается приоритет по предварительным заявкам США 61/470,849, поданной 1 апреля 2011, и 61/559,489, поданной 14 ноября 2011. Все содержание вышеуказанных заявок включаются в настоящее описание посредством ссылки. Уровень техники Фосфоинозитиды (PI), представляющие собой фосфорилированные производные фосфатидилинозитола, имеют большое значение в прокариотических клетках, регулируя процессы в ядре, динамику цитоскелета, прохождение сигналов и мембранный транспорт. Из числа ферментов, участвующих в PIметаболизме, особое внимание привлекают PI3-киназы (PI3K), вследствие их онкогенных свойств и потенциального использования в качестве мишени для лекарственных средств. PI3-киназы фосфорилируют фосфатидилинозитолы или фосфоинозитиды в 3-положении инозитольного кольца (Lindmo et al. Journalof Cell Science 119, 605-614, 2006). 3-фосфорилированные фосфолипиды, образующиеся вследствие активности PI3K, связываются с плекстрин-гомологичным (РН) доменом протеинкиназы В (РКВ), вызывая транслокацию РКВ к клеточной мембране и последующее фосфорилирование РКВ. Фосфорилированная РКВ ингибирует белки, вызывающие апоптоз, такие как FKHR, Bad и каспазы, и, как полагают, играет важную роль в развитии рака. PI3K делятся на I-III классы, причем класс I дополнительно подразделяется на классы Ia и Ib. Полагают, что среди этих изоформ ферменты класса Ia играют самую важную роль в клеточной пролиферации в ответ на активацию тирозинкиназного пути факторами роста (Hayakawa et al.,BioorganicMedicinal Chemistry 14 6847-6858, 2006). Три часто встречающиеся при раке мутации постоянно активируют PI3K и, при экспрессии в клетках, они запускают онкогенную трансформацию и хроническую активацию нисходящих сигналов с помощью таких молекул, как РКВ, S6K и 4 Е bpl, которые в большинстве случаев обнаруживаются в раковых клетках. (Stephens et al., Current Opinion in Pharmacology, 5(4) 357-365, 2005). Следовательно, PI3-киназы представляют собой перспективные мишени для лечения пролиферативных заболеваний. Существует несколько известных ингибиторов PI3-киназы, включая вортманнин и LY294002. Хотя вортманнин является сильным ингибитором PI3K с низким наномолярным значением IC50, он обладает низкой противоопухолевой активностью in vivo. (Hayakawa et al., Bioorg. Med. Chem. 14(20), 6847-6858(2006. He так давно сообщалось о группе морфолинзамещенных хиназолиновых, пиридопиримидиновых и тиенопиримидиновых соединений, являющихся эффективными при ингибировании PI3 киназыp110. (Hayakawa, 6847-6858). При пероральном введении дозы морфолинзамещенного соединения тиенопиримидина (GDC-0941) было показано подавление роста опухоли в ксенотрансплантатах глиобластомы in vivo. (Folkes et al., Journal of Medicinal Chemistry, 51, 5522-5532, 2008). Следующие публикации раскрывают ряд ингибиторов PI3-киназы на основе тиенопиримидина, пиридопиримидина и хиназолина:WO 2008/073785; WO 2008/070740; WO 2007/127183; патентная заявка США 20080242665. Ацетилирование гистона представляет собой обратимую модификацию, в рамках которой диацетилирование катализируется семейством ферментов, называемых гистоновые деацетилазы (HDACs).HDAC представлены у людей 18 генами и подразделяются на четыре разных класса (J Mol Biol, 2004,338:1, 17-31). У млекопитающих HDAC класса I (HDAC1-3, и HDAC8) родственны с HDAC дрожжейCsordas, Biochem. J., 1990, 286: 23-38 сообщает, что гистоны подвергаются посттрансляционному ацетилированию Е-аминогрупп N-концевых остатков лизина, катализируемому гистоновой ацетилтрансферазой (НАТ 1). Ацетилирование нейтрализует положительный заряд боковой цепи лизина и, как полагают, влияет на структуру хроматина. Действительно, доступ факторов транскрипции к хроматиновым матрицам увеличивается при гиперацетилировании гистонов, а в транскрипционно молчащих участках генома наблюдается накопление недоацетилированного гистона Н 4 (Taunton et al., Science, 1996,272:408-411). В случае генов-супрессоров опухолей транскрипционное молчание вследствие модификации гистонов может приводить к онкогенной трансформации и раку. Некоторые классы ингибиторов HDAC в настоящее время проходят оценку в клинических исследованиях. Примеры включают производные гидроксамовой кислоты, сибероиланилид гидроксамовую кислоту (SAHA), PXD101 и LAQ824, которые в настоящее время проходят клинические испытания. Из класса бензамидных HDAC-ингибиторов MS-275, MGCD0103 и CI-994 достигли стадии клинических испытаний. Mourne et al. (Abstract 4725, AACR 2005) показали, что тиофенильная модификация бензамидов значительно увеличивает HDAC-ингибирующую активность против HDAC1. Некоторые виды злокачественных новообразований эффективно лечат с помощью комбинирован-1 022434 ного подхода; однако, режимы лечения, использующие смеси цитотоксических лекарственных средств,часто лимитируются дозами, ограничиваемыми соображениями токсичности и взаимодействия между лекарственными средствами. Более современные достижения на основе молекулярных таргетных (нацеленных) лекарственных препаратов предоставляют новые возможности для комбинированного лечения рака, давая возможность использовать одновременно несколько таргетных средств, или комбинируя такие новые способы лечения со стандартными химиотерапевтическими средствами или облучением для улучшения результата без достижения ограничивающей дозу токсичности. Однако возможность использования таких комбинаций в настоящее время ограничивается лекарственными средствами, демонстрирующими совместимые фармакологические и фармакодинамические свойства. Кроме того, нормативные испытания безопасности и эффективности комбинированных способов лечения могут быть более дорогими и длительными, чем соответствующие исследования в режиме монотерапии. Кроме того, после утверждения комбинированные подходы могут быть связаны с дополнительными затратами для пациентов,а также с ухудшенным соблюдением режима пациентами вследствие необходимости сложной системы дозирования. Раскрытие изобретения Изобретение относится к соединению формулы I и его фармацевтически приемлемым солям, где R представляет собой водород или ацильную группу. Ацильная группа предпочтительно представляет собой R1C(O)-, где R1 представляет собой замещенный или незамещенный С 1-С 24-алкил, предпочтительно C1-С 10-алкил и более предпочтительно C1-С 6 алкил; замещенный или незамещенный С 2-С 24-алкенил, предпочтительно С 2-С 10-алкенил и более предпочтительно С 2-С 6-алкенил; замещенный или незамещенный С 2-С 24-алкинил, предпочтительно С 2-С 10 алкинил, и более предпочтительно С 2-С 6-алкинил; замещенный или незамещенный арил, предпочтительно замещенный или незамещенный фенил; или замещенный или незамещенный гетероарил. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем. Соединения формулы I и, в частности, соединение 1, обладают полезными свойствами с точки зрения их применения в качестве терапевтических средств, например для лечения рака и других заболеваний, а также расстройств, связанных с активностью PI3-киназы и/или активностью HDAC. Соединение 1,например, обладает сильной ингибирующей активностью по отношению к молекулярным мишеням PI3K и HDAC и сильной антипролиферативной активностью по отношению к целому ряду клеточных линий рака in vitro. Соединение 1 имеет существенную пероральную биодоступность, как показано на животных моделях. При пероральном или внутривенном дозировании на мышах с ксенотрансплантатом опухоли это соединение показывает значительное поглощение опухолевой тканью и фармакодинамическую активность в опухолевой ткани. Соединение 1 также демонстрирует существенную противоопухолевую активность на мышиных моделях ксенотрансплантантной опухоли после перорального или внутривенного введения. Соединение также имеет благоприятный профиль безопасности, как показано, например,при проверке генотоксичности с использованием теста Эймса. В дополнение к этому, настоящее изобретение относится к применению соединения по изобретению при лечении заболеваний и нарушений, связанных с PI3K, таких как рак. Такие соединения дополнительно выступают в качестве HDAC ингибитора за счет их способности связываться с ионами цинка. Эти соединения действуют на множество терапевтических мишеней и являются эффективными при лечении целого ряда заболеваний. Кроме того, в некоторых случаях было обнаружено, что эти соединения обладают повышенной активностью по сравнению с активностью комбинаций отдельных молекул, каждая из которых отдельно обладает PI3-киназной ингибирующей активностью и HDAC-ингибирующей активностью. Другими словами, комбинация PI3-киназной ингибирующей активности и HDACингибирующей активности в одной молекуле может обеспечить синергетический эффект по сравнению с ингибиторами PI3-киназы и HDAC, взятыми по отдельности. Кроме того, эффективность отдельных ингибиторов PI3K-пути ограничивается появлением первичных/приобретенных генетических изменений и активации множества путей про-выживаемости и роста(Engelman (2009) Nature Reviews Cancer, 9: 550-562). Ингибирование PI3K с помощью отдельных ингибиторов PI3K-пути может на самом деле повышающим образом отрегулировать передачу сигнала в RAFMEK-ERK-пути посредством снятия отрицательных обратных связей. Соединения по изобретению (за счет их комбинированной PI3K/HDAC-ингибирующей активности) предоставляют возможность преодо-2 022434 ления ограничений, имеющих место при лечении рака одноцелевыми PI3K ингибиторами. Соединения по изобретению вызывают разрушение регуляторных сетей рака в экспериментах in vivo и in vitro, обусловленное стойким ингибированием PI3K-AKT-mTOR пути, ингибированием RAF-MEK-ERK пути и понижающей регуляцией уровней рецепторной тирозинкиназы (RTK). В дополнение к этому, соединения по изобретению вызывают остановку клеточного цикла и апоптоз в линиях опухолевых клеток in vitro путем повышающей регуляции опухолевых супрессоров р 53 и р 21. Соответственно, соединения по изобретению потенциально способны преодолевать первичную и приобретенную лекарственную резистентность и могут быть более эффективными, чем монолечение с использованием отдельных ингибиторовPI3K пути при использовании в медицинской практике. Другой аспект настоящего изобретения касается способов ингибирования активности PI3 киназы путем контактирования PI3-киназы с эффективным ингибирующим количеством соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Краткое описание чертежей Фиг. 1 - график концентрации соединения 1 в плазме и опухолевой ткани в зависимости от времени после перорального введения бестимусным мышам с ксенотрансплантированной опухолью Н 2122. Фиг. 2 А - график концентрации соединения 1 в плазме в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди после перорального введения в дозах 25, 50 и 100 мг/кг. Фиг. 2 В - график концентрации соединения 1 в опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди после перорального введения доз 25, 50 и 100 мг/кг. Фиг. 2 С - график концентрации соединения 1 в плазме и опухолевой ткани в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди после перорального введения дозы 100 мг/кг. Фиг. 3 - результаты вестерн-блоттинга экстрактов опухолевой ткани, полученной от контрольных и леченых соединением 1 (25, 50 и 100 мг/кг) мышей Scid с ксенотрансплантатом опухоли Дауди. Фиг. 4 - график концентрации соединения 1 в плазме в зависимости от времени у собак породы бигль после перорального или внутривенного введения. Фиг. 5 А - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли Н 2122, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 5 В - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли Дауди, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 5 С - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли ОРМ 2, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 6 - график, показывающий уровни Т и В лимфоцитов в циркулирующей крови после лечения соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 7 А-G - результаты вестерн-блоттинга экстрактов контрольных и обработанных соединением 1 клеток Н 460 (Kras, PI3K). GDC представляет собой GDC-0941;LBH-LBH-589. Фиг. 8 А-С - результаты вестерн-блоттинга экстрактов контрольных и обработанных соединением 1 клеток HI975 (EGFR, PI3K), ВТ 474 (HER2, PI3K), H1975 (EGFR, PI3K), А 375 (B-Raf) и RPMI-822 (р 53'). Фиг. 9 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди, которых перорально лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 10 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди, которых лечили носителем, соединением 1, SAH, GDC-0941 или комбинацией SAHA и GDC-0941. Фиг. 11 - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли SU-DHL4, которых перорально лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 12 - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли ОРМ 2, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 13 - график роста опухоли в зависимости от времени у бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли MM1S, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 14 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей SCID с ксенотрансплантатом опухоли MM1R, которых лечили соединением 1 или чистым носителем. Фиг. 15 - результаты вестерн-блоттинга опухолевых экстрактов, полученных от мышей SCID, которых лечили соединением 1, с ксенотрансплантатами опухолей Дауди, SuDHL-4, HS-Sultan, DOHH-2,OPM-2, MM1R или MM1S. Фиг. 16 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди, которых лечили соединением 1, CAL-101 (Иделалисиб) или чистым носителем. Фиг. 17 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью Дауди, которых лечили соединением 1, циклофосфамидом, комбинацией соединения 1 и циклофосфамида или чистым носителем. Фиг. 18 - график роста опухоли в зависимости от времени у мышей Scid с ксенотрансплантированной опухолью MM1S, которых лечили соединением 1, леналидомидом, комбинацией соединения 1 и леналидомида или чистым носителем. Подробное описание изобретения В предпочтительном варианте осуществления соединение формулы I представлено формулой ниже:(в дальнейшем называемой "соединение 1", также называемом N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамид) или его фармацевтически приемлемой солью. Изобретение дополнительно описывает способы предотвращения или лечения заболеваний или нарушений, связанных с нарушенной пролиферацией, дифференцировкой или выживаемостью клеток. В одном варианте осуществления изобретение дополнительно раскрывает одно или более соединений по изобретению для применения в производстве медикамента, предназначенного для остановки или ослабления заболеваний, связанных с нарушенной пролиферацией, дифференцировкой или выживаемостью клеток. В предпочтительном варианте осуществления заболевание является злокачественным заболеванием. В одном варианте осуществления изобретение относится к способу лечения рака у субъекта, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. Термин "рак" относится к любому раку, вызванному пролиферацией злокачественных неопластических клеток, такому как злокачественные опухоли, новообразования, карциномы, саркомы, лейкемия,лимфома и т.п. Например, раки включают, но не ограничиваются этим, мезотелиому, лейкемию и лимфому, такую как кожная Т-клеточная лимфома (CTCL), некожная периферическая Т-клеточная лимфома,лимфома, связанная с Т-клеточным лимфотропным вирусом человека (HTLV), такая как Т-клеточная лейкемия/лимфома взрослых (ATLL), В-клеточная лимфома, острый нелимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, острый миелогенный лейкоз, лимфома и множественная миелома, неходжкинская лимфома, острый лимфолейкоз (ALL), хронический лимфолейкоз (CLL), лимфома Ходжкина, лимфома Беркитта, Т-клеточный лейкоз/лимфома взрослых, острый миелолейкоз (АМЛ), хронический миелоидный лейкоз (СМЛ) или гепатоцеллюлярной карцинома. Дополнительные примеры включают миелодиспластический синдром, солидные опухоли детей, такие как опухоли мозга, нейробластома, ретинобластома, опухоль Вильямса, опухоли костей, саркому мягких тканей, общие солидные опухоли взрослых, такие как раки головы и шеи (например, раки рта, гортани,носоглотки и пищевода), урогенитальные раки (например, простаты, мочевого пузыря, почки, матки,яичника, яичка), рак легкого (например, мелкоклеточный и немелкоклеточный рак), рак молочной железы, рак поджелудочной железы, меланома и другие раки кожи, рак желудка, рак мозга, опухоли, связанные с синдромом Горлина (например, медуллобластома, менингиома и т.д.) и рак печени. Дополнительные иллюстративные формы рака, которые можно лечить описываемыми соединениями, включают, но не ограничиваются этим, рак скелетной или гладкой мускулатуры, рак желудка, рак тонкого кишечника,карциному прямой кишки, рак слюнной железы, рак эндометрия, рак надпочечника, рак анального канала, рак прямой кишки, рак околощитовидной железы и рак гипофиза. Описанные здесь соединения могут использоваться при предотвращении, лечении и изучении и других видов рака, например рака толстой кишки, семейного аденоматозного полипоза и наследственного неполипозного рака толстой кишки или меланомы. Кроме того, злокачественные опухоли включают,но не ограничиваются этим, карциному губы, карциному гортани, карциному глотки, карциному языка,карциному слюнной железы, рак желудка, аденокарциному, рак щитовидной железы (медуллярную и папиллярную карциному щитовидной железы), карциному почки, карциному паренхимы почки, рак шейки матки, карциному матки, карциному эндометрия, хорион-карциому, карциному яичка, карциному мочевого пузыря, меланому, опухоли мозга, такие как глиобластома, астроцитома, менингиома, медуллобластома и периферические нейроэктодермальные опухоли, карциному желчного пузыря, бронхиальную карциному, множественную миелому, базалиому, тератому, ретинобластому, меланому сосудистой оболочки глаза, семиному, рабдомиосаркому, краниофарингеому, остеосаркому, хондросаркому, миосаркому, липосаркому, фибросаркому, саркому Юинга и плазмоцитому. В одном аспекте настоящее изобретение описывает использование одного или более соединений по изобретению в производстве медикамента для лечения рака. В одном варианте осуществления соединения по изобретению используются для лечения гематологических злокачественных опухолей или гематологического предракового состояния. Гематологические раки включают лейкоз, лимфому и множественную миелому. Примеры включают лимфоцитарный лейкоз, такой как острый лимфоцитарный лейкоз, включая острый лимфобластный лейкоз предшественников В-клеток, острый лимфобластный лейкоз предшественников Т-клеток, лейкоз Беркитта и острый бифенотипический лейкоз; и хронический лимфоцитарный лейкоз, включая В-клеточный пролимфоци-4 022434 тарный лейкоз; и миелогенный лейкоз, такой как острый миелогенный лейкоз, включая острый промиелоцитарный лейкоз, острый миелобластный лейкоз и острый мегакариобластный лейкоз; и хронический миелогенный лейкоз, включая хронический моноцитарный лейкоз; острый моноцитарный лейкоз. Другие лейкозы включают волосатоклеточный лейкоз; Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз; крупногранулярный лимфоцитарный лейкоз; и Т-клеточный лейкоз взрослых. Лимфомы включают лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому, включая В-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, такую как кожная Т-клеточная лимфома, и NK-клеточную лимфому. Гематологические предраковые состояния включают миелодиспластический синдром и миелопролиферативные нарушения, такие как первичный миелофиброз, истинная полицитемия и эссенциальная тромбоцитемия. Показано, что соединения по изобретению вызывают обратимую лимфопению и поэтому являются полезными для устранения или уменьшения уровня циркулирующих в крови раковых клеток лимфоцитарного происхождения. Такие соединения также находят применение для лечения аутоиммунных нарушений или для модулирования иммунного ответа. В одном варианте осуществления изобретение раскрывает способ уменьшения числа циркулирующих лимфоцитов у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества соединения по изобретению. В предпочтительном варианте осуществления уменьшенное число циркулирующих лимфоцитов является обратимым, то есть число циркулирующих лимфоцитов возвращается к нормальному уровню после того, как прекращается введение доз соединения по изобретению. В одном варианте осуществления уменьшенное число циркулирующих лимфоцитов оказывает ниже нормального уровня, и при этом субъект является субъектом с лимфопенией. Предпочтительно субъект получает терапевтическую или профилактическую пользу от уменьшенного числа циркулирующих лимфоцитов. Такие субъекты включают субъектов, страдающих от гематологического заболевания, такого как гематологический рак, субъектов, страдающих от аутоиммунного расстройства, и субъектов, нуждающихся в модулировании иммунного ответа, таких как пациенты, страдающие от диабета, или реципиенты трансплантированных органов. У человека число циркулирующих лимфоцитов, например, В-лимфоцитов, Т-лимфоцитов или и тех и других может снижаться от нормального уровня до уровней, характерных для лимфопении. При некоторых заболеваниях число циркулирующих лимфоцитов является аномально высоким. При таких заболеваниях число циркулирующих лимфоцитов может быть уменьшено до нормального предела или до состояния лимфопении. В одном варианте осуществления настоящее изобретение включает применение одного или более соединений по изобретению в производстве медикамента, который предотвращает дальнейшую неправильную пролиферацию, дифференцировку или выживаемость клеток. Например, соединения по изобретению могут быть пригодны при предотвращении увеличения размера опухолей или достижения стадии метастазирования. Соединения по изобретению могут вводиться с целью прекращения развития и распространения рака или с целью вызвать апоптоз опухоли или ингибировать ангиогенез опухоли. В дополнение к этому настоящее изобретение включает использование описываемых соединений для предотвращения рецидива рака. Данное изобретение дополнительно включает лечение или предотвращение заболеваний, связанных с нарушениями клеточной пролиферации, таких как гиперплазия, дисплазия и предраковые изменения. Дисплазия является ранней формой предракового изменения, которое распознается патологом при биопсии. Описываемые соединения могут быть введены с целью предотвращения продолжающегося развития или озлокачествления указанной гиперплазии, дисплазии или предраковых изменений. Примеры предраковых изменений могут наблюдаться на коже, в ткани пищевода, молочной железы и в эпителиальной ткани внутри цервикального канала шейки матки."Комбинированная терапия" включает введение описываемого соединения в дополнительной комбинации с другими биологически активными ингредиентами (такими как, но не ограничиваясь этим,второе и иное антинеопластическое средство) и безмедикаментозными видами терапии (такими как, но не ограничиваясь этим, хирургическое лечение или облучение). Например, соединения по изобретению могут использоваться в комбинации с другими фармацевтически активными соединениями, предпочтительно соединениями, способными увеличивать эффект соединения по изобретению. Соединения по изобретению могут вводиться одновременно (в виде единого препарата или отдельных препаратов) или последовательно с другим видом лекарственной терапии. В общем, комбинированная терапия предполагает введение двух или более лекарственных средств в одном цикле или курсе лечения. В одном аспекте изобретения описываемые соединения могут вводиться в комбинации с одним или более отдельными средствами, которые модулируют протеинкиназы, участвующие в различных болезненных состояниях. Примеры таких киназ могут включать, но не ограничиваются этим: серин/треонин специфические киназы, рецепторные тирозин-специфические киназы и нерецепторные тирозинспецифические киназы. Серин/треониновые киназы включают митоген-активируемые протеинкиназы(MAPK), мейоз-специфические киназы (MEK), RAF и aurora-киназа. Примеры семейств рецепторных киназ включают рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) (например, HER2/neu, HER3, HER4,ErbB, ErbB2, ErbB3, ErbB4, Xmrk, DER, Let23); рецептор фактора роста фибробластов (FGF) (например,FGF-R1,GFF-R2/BEK/CEK3, FGF-R3/CEK2, FGF-R4/TKF, KGF-R); рецептор фактора роста гепатоци-5 022434 тов/рассеивающего фактора (HGFR) (например, MET, RON, SEA, SEX); инсулиновый рецептор (например, IGFI-R); Eph (например, CEK5, CEK8, EBK, ECK, EEK, EHK-1, ЕНК-2, ELK, EPH, ERK, HEK,MDK2, MDK5, SEK); Axl (например, Mer/Nyk, Rse); RET; и рецептор фактора роста тромбоцитов(PDGFR) (например, PDGF-R, PDG-R, CSF1-R/FMS, SCF-R/C-KIT, VEGF-R/FLT, NEK/FLK1,FLT3/FLK2/STK-1). Семейства нерецепторных тирозинкиназ включают, но не ограничиваются этим,BCR-ABL (например, р 43abl, ARG); ВТК (например, ITK/EMT, TEC); CSK, FAK, FPS, JAK, SRC, BMX,FER, CDK и SYK. В другом аспекте изобретения описываемые соединения могут вводиться в комбинации с одним или более отдельными средствами, которые модулируют некиназные биологические мишени или процессы. Такие мишени включают гистоновые деацетилазы (HDAC), ДНК метилтрансферазу (DNMT),белки теплового шока (например, HSP90), белки, связанные с сигнальным путем hedgehog (например,sonic hedgehog (белок, названный "ежик Сони"), белок patched, белок smoothened) и протеосомы. В предпочтительном варианте осуществления описываемые соединения могут быть скомбинированы с антинеопластическими средствами (например, небольшими молекулами, моноклональными антителами, антисмысловой РНК и гибридными белками), ингибирующими одну или более биологических мишеней, такими как золинза, тарцева, пресса, тайверб, гливек, сутент, спрайцел, нексавар, сорафиниб,CNF2024, RG108, BMS387032, аффинитак, авастин, герцептин, эрбитукс, AG24322, PD325901, ZD6474,PD184322, Obatodax, ABT737, GDC-0449, IPI-926, BMS833923, LDE225, PF-04449913 и АЕЕ 788. Подобные комбинации могут увеличивать терапевтическую эффективность по сравнению с эффективностью,достигаемой с помощью любого из этих средств в отдельности, и могут предотвращать или задерживать появление резистентных мутационных вариантов. В отдельных предпочтительных вариантах осуществления соединения по изобретению вводятся в комбинации с химиотерапевтическим средством. Химиотерапевтические средства включают большое число терапевтических воздействий в области онкологии. Эти средства вводятся на различных стадиях заболевания с целью уменьшения опухолей, разрушения раковых клеток, оставшихся после хирургического вмешательства, вызова ремиссии, поддержания ремиссии и/или облегчения симптомов, связанных с раковым заболеванием или его лечением. Примеры таких средств включают, но не ограничиваются этим, алкилирующие средства, такие как производные горчичного газа (азотистый иприт, циклофосфамид, хлорамбуцил, мелфалан, ифосфамид), этиленимины (тиотепа, гексаметилмеланин), алкилсульфонаты (бусульфан), гидразины и триазины (алтретамин, прокарбазин, дакарбазин и темозоломид), нитрозомочевины (кармустин, ломустин и стрептозоцин), ифосфамид и соли металлов (карбоплатин, цисплатин,и оксалиплатин); растительные алкалоиды, такие как подофиллотоксины (этопозид и тенизопид), таксаны (паклитаксель и доцетаксель), винкаалкалоиды (винкристин, винбластин, виндезин и винорельбин), и аналоги камптотекана (иринотекан и топотекан); противоопухолевые антибиотики, такие как хромомицины (дактиномицин и пликамицин), антрациклины (доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин, митоксантрон, валрубицин и идарубицин), и прочие антибиотики, такие как митомицин, актиномицин и блеомицин; антиметаболиты, такие как антагонисты фолиевой кислоты (метотрексат, пеметрексед, ралтитрексед, аминоптерин), антагонисты пиримидина (5-фторурацил, флоксуридин, цитарабин, капецитабин и гемцитабин), антагонисты пурина (6-меркаптопурин и 6-тиогуанин) и ингибиторы аденозиндезаминазы(кладрибин, флударабин, меркаптопурин, клофарабин, тиогуанин, неларабин и пентостатин); ингибиторы топоизомеразы, такие как ингибиторы топоизомеразы I (иронотекан, топотекан) и ингибиторы топоизомеразы II (амсакрин, этопозид, этопозида фосфат и тенипозид); моноклональные антитела (алемтузумаб, гемтузумаб, озогамицин, ритуксимаб, трастузумаб, ибритумомаб, тиоксетан, цетуксимаб, панитумумаб, тозитумомаб, бевацизумаб); и прочие антинеопластические средства, такие как ингибиторы рибонуклеотидредуктазы (гидроксимочевина); адренокортикальный стероидный ингибитор (митотан); ферменты (аспарагиназа и пегаспаргаза); противомикротрубочковые средства (эстрамустин); ретиноиды(бексаротен, изотретионин, третионин (ATRA) и леналидомид. В отдельных предпочтительных вариантах осуществления соединения по изобретению вводятся в комбинации с хемопротективным средством. Хемопротективные средства предохраняют организм или сводят к минимуму побочные действия химиотерапии. Примеры таких средств включают, но не ограничиваются этим, амфостин, месну и дексразоксан. В одном аспекте изобретения описываемые соединения вводятся в комбинации с лучевой терапией. В большинстве случаев облучение доставляется с внутренней стороны (имплантация радиоактивного материала около местоположения злокачественной опухоли) или снаружи с помощью устройства, использующего фотоны (рентгеновские лучи или гамма-лучи) или корпускулярное излучение. В случае,когда комбинированная терапия дополнительно включает лучевую терапию, лучевая терапия может быть проведена в любое подходящее время, при условии, что достигается полезный эффект от совместного действия комбинации терапевтических средств и лучевой терапии. Например, в соответствующих случаях полезный эффект по-прежнему достигается, когда лучевая терапия отодвигается во времени от введения терапевтических средств, возможно на дни или даже недели. Следует понимать, что соединения по изобретению могут использоваться в комбинации с иммунотерапевтическим средством. Одной формой иммунотерапии является возбуждение активного системного опухоль-специфического иммунного ответа хозяина путем введения вакцинной композиции в удаленное от опухоли место. Предлагаются различные типы вакцин, включая опухоль-антигенные вакцины и антиидиотипические вакцины. Другим подходом является использование опухолевых клеток, полученных от субъекта,которого необходимо лечить, или потомков таких клеток (смотри Schirrmacher et al, (1995) J. Cancer Res.Clin. Oncol. 12 1:487). В патенте США 5,484,596, Hanna Jr., et al. заявлен способ лечения операбельной карциномы, предназначенный для предотвращения рецидива или метастазирования, включающий хирургическое удаление опухоли, диспергирование клеток с помощью коллагеназы, облучение клеток и вакцинирование пациента по меньшей мере тремя последовательными дозами около 107 клеток. Следует понимать, что соединения по изобретению могут успешно использоваться в сочетании с одним или более дополнительными терапевтическими средствами. Примеры подходящих средств для дополнительного лечения включают агонисты 5 НТ], такие как триптан (например, суматриптан или наратриптан); агонист аденозина А 1; ЕР лиганд; модулятор NMDA, такой как антагонист глицина; блокатор натриевых каналов (например, ламотригин; антагонист субстанции Р (например, NK1 антагонист); каннабиоид; ацетаминофен или фенацетин; ингибитор 5-липоксигеназы; антагонист лейкотриеновых рецепторов; DMARD (например, метотрексат); габапентин и родственные соединения; трициклический антидепрессант (например, амитриптиллин); стабилизирующее нейрон антиэпилептическое лекарственное средство; ингибитор моноаминергического поглощения (например, венлафаксин); ингибитор матриксных металлопротеиназ; ингибитор синтазы оксида азота (NOS), такой как iNOS, или ингибиторnNOS; ингибитор высвобождения или действия фактора некроза опухоли альфа; терапию антителами,такую как терапия моноклональными антителами; противовирусное средство, такое как нуклеозидный ингибитор (например, ламивудин), или модулятор иммунной системы (например, интерферон); опиоидный аналгетик; анестезирующее средство местного действия; стимулятор, включая кофеин; Н 2 антагонист (например, ранитидин); ингибитор протонного насоса (например, омепразол); антацид (например, гидроксид алюминия или магния); средство, устраняющее метеоризм (например, симетикон); противоотчное средство (например, фенилэфрин, фенилпропаноламин, псевдоэфедрин, оксиметазолин,эпинефрин, нафазолин, ксилометазолин, пропилгекседрин или леводезоксиэфедрин); противокашлевое средство (например, кодеин, гидрокодон, кармифен, карбетапентан или декстрометорфан); мочегонное средство; или седативные или неседативные антигистаминные средства. Соединения по изобретению также могут использоваться при лечении нарушения, касающегося,имеющего отношение к или ассоциируемого с дисрегуляцией гистоновой деацетилазы (HDAC). Известно, что существует целый ряд нарушений, связанных с или опосредованных, по меньшей мере частично,активностью HDAC, когда активность HDAC играет роль в инициировании начала заболевания, или заболевания, симптомы которого, как известно или как показано, ослабляются HDAC-ингибиторами. Нарушения этого типа, которые, как ожидается, должны поддаваться лечению соединениями по изобретению, включают, но не ограничиваются этим: антипролиферативные нарушения (например, рак); нейродегенеративные заболевания, включая болезнь Хантингтона, полиглутаминовое заболевание, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, эпилептические припадки, стрионигральную дегенерацию, прогрессирующий надъядерный паралич, торсионную дистонию, спастическую кривошею и дискинезии, семейный тремор, синдром Жилль де ла Туретта, болезнь диффузных телец Леви, прогрессирующий надъядерный паралич, болезнь Пика, внутримозговое кровоизлияние, первичный латеральный склероз, спинальную мышечную атрофию, боковой амиотрофический склероз, гипертрофическую интерстициальную полиневропатию, пигментную дегенерацию сетчатки, наследственную атрофию зрительного нерва, наследственную параплегию, прогрессирующую атаксию и синдром Шая-Дрейджера; метаболические заболевания, включая диабет 2 типа; дегенеративные болезни глаз, включая глаукому, возрастную макулярную дистрофию, глаукому Rubeotic; воспалительные заболевания и/или нарушения иммунной системы, включая ревматоидный артрит (RA), остеоартрит, ювенильный хронический артрит, болезнь "трансплантат против хозяина", псориаз, астму, спондилоартропатию, болезнь Крона, воспалительную болезнь кишечника, язвенный колит, алкогольный гепатит, диабет, синдром Шегрена, рассеянный склероз, анкилозирующий спондилоартрит, мембранозную гломерулопатию, дискогенную боль, системную красную волчанку; заболевания, затрагивающие ангиогенез, включая рак, псориаз, ревматоидный артрит; психологические нарушения, включая биполярное расстройство, шизофрению, манию, депрессию и деменцию; сердечнососудистые заболевания, включая предотвращение и лечение связанного с ишемией или реперфузией повреждения сосудистой и миокардиальной ткани, сердечную недостаточность, рестеноз и артериосклероз; фиброзные заболевания, включая фиброз печени, кистозный фиброз и ангиофиброму; инфекционные заболевания, включая грибковые инфекции, такие как кандидоз или Candida Albicans,бактериальные инфекции, вирусные инфекции, такие как простой герпес, полиовирус, риновирус и коксакивирус, протозойные инфекции, такие как малярия, инфекция Leishmania, инфекция Trypanosomabrucei, токсоплазмоз и кокцидиоз, и гематопоэтические нарушения, включая талассемию, анемию и серповидноклеточную анемию. Соединения по изобретению также могут использоваться при лечении нарушения, касающегося,имеющего отношение к или ассоциируемого с дисрегуляцией PI3 киназы. Показано, что PI3 киназная активность непосредственно связана или вовлечена в целый ряд нарушений. Известно, что в некоторых случаях PI3 киназная активность участвует в инициировании заболевания, тогда как в других показано,что симптомы ослабляются при использовании ингибиторов активности PI3 киназы. Нарушения такого типа, которые, как предполагают, будут поддаваться лечению соединениями по изобретению, включают,но не ограничиваются этим, рак, включая лейкоз, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак молочной железы,рак матки, рак яичника, рак предстательной железы, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак почки,рак желудка и рак мозга; рестеноз, атеросклероз, поражение костей, артрит, диабетическую ретинопатию, псориаз, доброкачественную гипертрофию предстательной железы, атеросклероз, воспаление, ангиогенез, иммунологические нарушения, панкреатит и болезнь почек. В одном варианте осуществления соединения по изобретению могут использоваться для того, чтобы вызвать или ингибировать апоптоз, процесс физиологической смерти клетки, являющийся решающим для нормального развития и гомеостаза. Изменения апоптотических сигнальных путей способствуют развитию ряда заболеваний человека. Соединения по изобретению в качестве модуляторов апоптоза будут полезны при лечении целого ряда заболеваний человека с нарушениями апоптоза, включая рак (в частности, но не ограничиваясь этим, фолликулярную лимфому, карциному с мутациями р 53, гормонозависимые опухоли молочной железы, предстательной железы и яичника, и предраковые повреждения,такие как семейный адематозный полипоз), вирусные инфекции (включая, но не ограничиваясь этим,вирус герпеса, поксвирус, вирус Эпштейна-Барр, вирус Синдбис и аденовирус), аутоиммунные заболевания (включая, но не ограничиваясь этим, системную красную волчанку, эритематоз, иммуноопосредованный гломерулонефрит, ревматоидный артрит, псориаз, воспалительные заболевания кишечника и аутоиммунный сахарный диабет), нейродегенеративные заболевания (включая, но не ограничиваясь этим, болезнь Альцгеймера, деменцию, ассоциированную с синдромом приобретенного иммунодефицита (AIDS), болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз, пигментный ретинит, спинальную мышечную дистрофию и мозжечковую дегенерацию), AIDS, миелодиспластический синдром, апластическую анемию, ишемическое повреждение, связанное с инфарктом миокарда, инсульт и реперфузионное повреждение, аритмию, атеросклероз, заболевания печени, вызванные токсинами или алкоголем,гематологические заболевания, (включая, но не ограничиваясь этим, хроническую анемию и апластическую анемию), дегенеративные заболевания скелетно-мышечной системы (включая, но не ограничиваясь этим, остеопороз и артрит), чувствительные к аспирину риносинуситы, кистозный фиброз (муковисцидоз), рассеянный склероз, заболевания почек и боль, связанную с раковым заболеванием. В одном аспекте изобретение описывает применение соединений по изобретению для лечения и/или предотвращения иммунного ответа или иммуно-опосредованных ответов и заболеваний, такого как предотвращение или лечение отторжения после трансплантации синтетических или органических трансплантированных материалов, клеток, органов или ткани для возмещения всей или части функции тканей, таких как сердце, почка, печень, костный мозг, кожа, роговица, сосуды, легкие, поджелудочная железа, кишечник, конечности, мышцы, нервная ткань, двенадцатиперстная кишка, тонкая кишка, клетки островка Лангерганса, включая ксенотранплантанты, и т.д.; для лечения или предотвращения болезни"трансплантат против хозяина", аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, тиреоидит, тиреоидит Хашимото, рассеянный склероз, миастения гравис (тяжелая миастения), диабет I типа, увеит, сахарный диабет в юношеском возрасте или недавно возникший сахарный диабет, базедова болезнь, псориаз, атопический дерматит, болезнь Крона, язвенный колит, васкулит, заболевания, опосредованные аутоантителами, апластическая анемия, синдром Эванса, аутоиммунная гемолитическая анемия, и тому подобного; и дополнительно для лечения инфекционных заболеваний, вызывающих неправильный иммунный ответ и/или активацию, таких как иммунная дисрегуляция, вызванная травмой или патогеном, включая, например, вызванную заражением вирусом гепатита В и С, вирусом иммунодефицита человека HIV, инфекцию золотистым стафилококком, вирусный энцефалит, сепсис, паразитарные заболевания, при которых повреждение вызывается воспалительным ответом (например, проказа); и для предотвращения или лечения заболеваний системы кровообращения, таких как артериосклероз, атеросклероз, васкулит, нодозный полиартериит и миокардит. Кроме того, настоящее изобретение может использоваться для предотвращения/подавления иммунного ответа, связанного с генотерапией, например, введением чужеродных генов в аутологичные клетки и экспрессией закодированного продукта. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания или нарушения, связанного с иммунным ответом, или иммуно-опосредованного ответа или нарушения у субъекта, нуждающегося в лечении, при этом способ включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. В одном аспекте изобретение описывает применение соединений по изобретению при лечении целого ряда нейродегенеративных заболеваний, неполный список которых включает:I. Расстройства, отличающиеся прогрессирующей деменцией при отсутствии других выраженных неврологических симптомов, такие как болезнь Альцгеймера; старческое слабоумие; и болезнь Пика (ограниченная предстарческая атрофия).II. Синдромы, объединяющие прогрессирующее слабоумие с другими выраженными неврологическими расстройствами, такие как: А) синдромы, появляющиеся в основном у взрослых (например, бо-8 022434 лезнь Хантингтона, множественная системная атрофия, сочетающаяся с деменцией и атаксией и/или проявлениями болезни Паркинсона, прогрессирующий надьядерный паралич (болезнь СтилаРичардсона-Ольшевского), болезнь диффузных телец Леви и кортикодентатонигральная дегенерация; и В) синдромы, проявляющиеся в основном у детей или молодежи (например, болезнь ГалленворденаШпатца и прогрессирующая семейная миоклоническая эпилепсия).III. Синдромы постепенно развивающихся нарушений положения и движения, такие как дрожательный паралич (болезнь Паркинсона), стриатонигральная дегенерация, прогрессирующий надъядерный паралич, торсионная дистония (торсионный спазм; деформирующая мышечная дистония), спастическая кривошея и другие дискинезии, семейный тремор и синдром Жилль де ла Туретта.IV. Синдромы прогрессирующей атаксии, такие как мозжечковая дегенерация (например, мозжечковая кортикальная дегенерация и оливомостомозжечковая атрофия (ОРСА и спиноцеребеллярная дегенерация (атаксия Фридрейха и родственные нарушения).V. Синдром расстройства центральной вегетативной нервной системы (синдром Шая-Джейджера).VI. Синдром мышечной слабости и истощения без сенсорных изменений (болезнь двигательного нейрона, такая как боковой амиотрофический склероз, спинальная мышечная атрофия (например, детская спинальная мышечная атрофия (Верднига-Гофмана), юношеская спинальная мышечная атрофия(Вольфарта-Кугельберга-Веландера) и другие формы семейной спинальной мышечной атрофии), первичный латеральный склероз и наследственная параплегия.VII. Синдромы, объединяющие мышечную слабость и истощение с сенсорными изменениями (прогрессирующая невральная мышечная атрофия; хронические семейные полиневропатии) такие как мышечная атрофия перонеального типа (болезнь Шарко-Мари-Тута), гипертрофическая интерстициальная полинейропатия (Дежерин-Сотта), и смешанные формы хронической прогрессирующей невропатии.VIII. Синдромы прогрессирующей потери зрения, такие как пигментная дегенерация сетчатки (пигментная дистрофия сетчатки) и наследственная атрофия зрительного нерва (болезнь Лебера). Кроме того,соединения по изобретению могут вовлекаться в реконструкцию хроматина. Настоящее изобретение охватывает фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемые соли описанных выше соединений по изобретению. Изобретение также охватывает сольваты соединений по изобретению и фармацевтические композиции, содержащие такие сольваты, например гидраты, метанолаты или этанолаты. Термин "сольват" относится к твердой, предпочтительно кристаллической, форме соединения, в кристаллической структуре которой присутствуют молекулы растворителя. Сольватные соединения, содержащие конкретный растворитель, как правило, получают путем кристаллизации соединения из этого растворителя. Сольваты могут содержать ряд растворителей, включая воду, метанол и этанол. Термин"гидрат" относится к сольвату, в котором растворителем является вода, и включает, но не ограничивается этим, полугидрат, моногидрат, дигидрат, тригидрат и тому подобное. Кроме того, настоящее изобретение охватывает фармацевтические композиции, содержащие какую-либо твердую или жидкую физическую форму соединения по изобретению, включая кристаллические и кристаллосольватные формы. Например,соединения могут иметь кристаллическую форму, аморфную форму, и иметь любой размер частиц. Частицы могут быть микронизированными (тонкоизмельченными) или могут быть агломерированными,содержащими частицы, гранулами, порошками, маслами, масляными суспензиями или любыми другими формами, имеющими жидкую или твердую физическую форму. Соединения по изобретению, их производные, фрагменты, аналоги, гомологи, фармацевтически приемлемые соли или сольваты могут быть включены в состав фармацевтических композиций, подходящих для введения, в сочетании с фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами. Такие композиции, как правило, содержат терапевтически эффективное количество какого-либо вышеуказанного соединения и фармацевтически приемлемый носитель. Предпочтительно, при лечении рака эффективное количество является количеством, эффективным для того, чтобы селективно вызывать терминальную дифференцировку соответствующих неопластических клеток, и меньшим, чем количество, вызывающее токсичность у пациента. Соединения по изобретению могут быть введены любыми подходящими способами, включая, без ограничения, парентеральное, внутривенное, внутримышечное, подкожное введение, имплантацию, пероральное, подъязычное, буккальное, назальное, трансдермальное, местное, вагинальное, ректальное и чресслизистое введение или тому подобное. Местное введение также относится к использованию чрескожного введения, такого как трансдермальные пластыри или ионтофоретические устройства. Фармацевтические препараты включают твердые, полутвердые или жидкие препараты (таблетки, пилюли, пастилки, капсулы, суппозитории, кремы, мази, аэрозоли, порошки, жидкости, эмульсии, суспензии, сиропы, препараты для инъекций и т.д.), содержащие соединение по изобретению в качестве активного ингредиента и являющиеся пригодными для выбранного способа введения. В одном варианте осуществления фармацевтические композиции вводятся перорально, и следовательно заключаются в состав, подходящий для перорального введения, т.е. в виде твердого или жидкого препарата. Подходящие твердые пероральные композиции включают таблетки, капсулы, пилюли, гранулы, шарики, порошки для приготовления раствора и шипучие таблетки, порошки и тому подобное. Подходящие жидкие пероральные композиции включают растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии, масла и тому подобное. В одном ва-9 022434 рианте осуществления настоящего изобретения композиция заключается в состав капсулы. В соответствии с этим вариантом осуществления композиции настоящего изобретения содержат в дополнение к активному соединению и инертному носителю или разбавителю твердую желатиновую капсулу. Любой инертный эксципиент, обычно используемый в качестве носителя или разбавителя, может использоваться в композициях настоящего изобретения, такой как, например, камедь, крахмал, сахар,целлюлозный материал, акрилат или их смеси. Предпочтительным разбавителем является микрокристаллическая целлюлоза. Композиции могут дополнительно содержать дезинтегрирующее средство (например, кроскармелозу натрия) и смазывающее вещество (например, стеарат магния), и могут дополнительно содержать одно или более вспомогательных веществ, выбранных из связывающего вещества, буфера,ингибитора протеазы, поверхностно-активного вещества, солюбилизирующего средства, смягчителя,эмульгатора, стабилизирующего средства, средства, увеличивающего вязкость, подсластителя, пленкообразующего вещества или любой их комбинации. Кроме того, композиции настоящего изобретения могут иметь форму композиций с контролируемым высвобождением или композиций с немедленным высвобождением. В случае жидких композиций, фармацевтически приемлемые носители могут быть водными или неводными растворами, суспензиями, эмульсиями или маслами. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и инъецируемые органические эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевые и буферные среды. Примерами масел являются нефтяные масла, масла животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло,оливковое масло, подсолнечное масло и жир из печени рыб. Растворы или суспензии также могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор,жирные масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие средства, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA); буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и средства для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Значение рН можно отрегулировать с помощью кислот или оснований, таких как хлористоводородная кислота или гидроксид натрия. Кроме того, композиции могут дополнительно содержать связывающие вещества (например, аравийскую камедь, кукурузный крахмал, желатин, карбомер, этилцеллюлозу, гуаровую камедь, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, повидон), дезинтегрирующие средства (например,кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновую кислоту, диоксид кремния, кроскармеллозу натрия, кросповидон, гуаровую камедь, натрия крахмалгликолат, примогель), буферы (например, трисHCI, ацетат, фосфат) различных значений рН и ионной силы, вспомогательные вещества, такие как альбумин или желатин для предотвращения абсорбции на поверхности, детергенты (например, твин 20, твин 80, плюроник F68, соли желчных кислот), ингибиторы протеазы, поверхностно-активные вещества (например, лаурилсульфат натрия), вещества, увеличивающие проникновение, солюбилизирующие средства(например, глицерин, полиэтиленглицерин, полиэтиленгликоль), глидант (вещество, способствующее скольжению) (например, коллоидный диоксид кремния), антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, метабисульфит натрия, бутилированный гидроксианизол), стабилизирующие вещества (например,гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза), средства увеличивающие вязкость (например, карбомер, коллоидный диоксид кремния, этилцеллюлозу, гуаровую камедь), подсластители (например, сахарозу, аспартам, лимонную кислоту), вкусовые вещества (например, мяту перечную, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор), консервирующие вещества (например, тимеросал, бензиловый спирт, парабены), смазывающие вещества (например, стеариновая кислота, стеарат магния, полиэтиленгликоль, лаурилсульфат натрия), вещества, повышающие текучесть (например, коллоидный диоксид кремния), смягчители (например, диэтилфталат, триэтилцитрат), эмульгаторы (например, карбомер,гидроксипропилцеллюлоза, лаурилсульфат натрия), полимерные покрытия (например, полоксамеры или полоксамины), средства, образующие покрытия и пленки (например, этилцеллюлоза, акрилаты, полиметакрилаты) и/или вспомогательные лекарственные средства (адьюванты). В одном варианте осуществления активные соединения заключаются в композицию вместе с носителями, которые предохраняют от быстрого выведения соединения из организма, например, в состав композиции с контролируемым высвобождением, включая имплантанты и системы микроинкапсулированной доставки. Могут использоваться биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолиевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы приготовления таких композиций понятны специалистам в данной области техники. Материалы также можно получить коммерческим путем от компаний Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. В качестве фармацевтически приемлемых носителей также могут использоваться липосомальные суспензии (включая липосомы, нацеленные на инфицированные клетки с помощью моноклональных антител к вирусным антигенам). Эти суспензии можно получить в соответствии с методами, известными специалистам в данной области техники, например, как описано в патенте США 4522811. Особенно выгодно создавать композиции для перорального приема в стандартной лекарственной форме для удобства введения и равномерности дозирования. Использованный в описании термин стандартная лекарственная форма относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве однократных дозировок для субъекта, которого необходимо лечить; каждая единица при этом содержит заранее определенное количество активного соединения, подсчитанное с целью получения желательного терапевтического эффекта в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Требования к стандартным лекарственным формам изобретения обуславливаются и непосредственно зависят от характерных особенностей активного соединения и определенного терапевтического эффекта, которого нужно достичь, и ограничений, характерных в данной области техники для приготовления лекарственного средства, например, активного соединения для лечения индивидуумов. Композиции по изобретению, предназначенные для перорального введения, могут включать одно или более веществ, увеличивающих проникновение, включая жирные кислоты с длинной цепью или их соли, такие как декановая кислота и деканоат натрия. В одном предпочтительном варианте осуществления соединение может иметь форму водного раствора для внутривенной инъекции. В одном варианте осуществления могут использоваться солюбилизирующие средства. Особенно предпочтительные солюбилизирующие средства включают циклодекстрины и модифицированные циклодекстрины, такие как замещенное производное -циклодекстрина сульфоновой кислоты или соль, включая сульфобутиловое производное -циклодекстрина, такое как сульфобутилэфир-7 циклодекстрин, который продается компанией CyDex, Inc. под торговой маркой CAPTISOL. Фармацевтические композиции могут быть заключены в контейнер, пакет или дозатор вместе с инструкциями для введения. Ежедневное введение может продолжаться непрерывно в течение периода времени от нескольких дней до нескольких лет. Пероральное лечение может продолжаться в промежутке от одной недели и до конца жизни пациента. Предпочтительно введение происходит в течение пяти последовательных дней,после этого времени проводится оценка необходимости дальнейшего введения пациенту. Введение может быть непрерывным или прерывистым, например, лечение в течение ряда последовательных дней с последующим периодом "отдыха". Соединения настоящего изобретения могут быть введены внутривенно в первый день лечения, пероральным путем во второй день лечения и потом в течение всех последующих дней. Приготовление фармацевтической композиции, содержащей активный компонент, например, путем смешивания, гранулирования или формования таблеток, хорошо изучено в данной области техники. Активный терапевтический ингредиент часто смешивают с фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом эксципиентами. Для перорального введения активные вещества смешивают с добавками, общеупотребительными для этой цели, такими как разбавители, стабилизирующие вещества или инертные разбавители, и с помощью общепринятых методов придают им подходящие для введения формы, такие как таблетки с покрытием, твердые и мягкие желатиновые капсулы, водные, спиртовые и масляные растворы и тому подобное, как подробно описано выше. Количество соединения, вводимое пациенту, меньше количества, которое может вызвать токсичность у пациента. В некоторых вариантах осуществления количество соединения, которое вводится пациенту, меньше, чем количество, приводящее к концентрации соединения в плазме у пациента, равной или превышающей токсичный уровень соединения. Предпочтительно концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 10 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 25 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 50 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 100 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 500 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 1000 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 2500 нМ. В одном варианте осуществления концентрация соединения в плазме пациента поддерживается около 5000 нМ. Оптимальное количество соединения, которое должно быть введено пациенту при осуществлении на практике настоящего изобретения, будет зависеть от конкретного используемого соединения и типа рака, который необходимо лечить. Определения Перечисленные далее определения различных терминов используются для описания этого изобретения. Эти определения применяются к терминам на всем протяжении данного описания и формулы изобретения, если иное не указано в конкретных случаях, как по отдельности так и для части большой группы. Термин "ацил" относится к карбонильным группам, замещенным водородом, алкилом, частично насыщенным или полностью насыщенным циклоалкильном, частично насыщенным или полностью насыщенным гетероциклильном, арилом и гетероарилом. Например, ацил включает такие группы как (С 1 С 6)алканоил (например, формил, ацетил, пропионил, бутирил, валерил, капроил, трет-бутилацетил и т.д.), (С 3-С 6)циклоалкилкарбонил (например, циклопропилкарбонил, циклобутилкарбонил, циклопентил- 11022434 карбонил, циклогексилкарбонил, и т.д.), гетероциклический карбонил (например, пирролидинилкарбонил, пирролид-2-он-5-карбонил, пиперидинилкарбонил, пиперазинилкарбонил, тетрагидрофуранилкарбонил и т.д.), ароил (например, бензоил) и гетероароил (например, тиофенил-2-карбонил, тиофенил-3 карбонил, фуранил-2-карбонил, фуранил-3-карбонил, 1H-пирроил-2-карбонил, 1 Н-пирроил-3-карбонил,бензо[b]тиофенил-2-карбонил и т.д.). В дополнение к этому, алкильная, циклоалкильная, гетероциклильная, арильная и гетероарильная часть ацильной группы может быть любой одной из групп, описанных в соответствующих определениях. Когда указано, что ацильная группа является "необязательно замещенной", ацильная группа может быть незамещенной или, необязательно, замещенной одним или более заместителями (в большинстве случаев от одного до трех заместителей), независимо выбранными из группы заместителей, перечисленных ниже в определении для "замещенный", или алкильная, циклоалкильная, гетероциклильная, арильная и гетероарильная часть ацильной группы может быть замещенной, как описано выше в списке предпочтительных и более предпочтительных заместителей, соответственно. Термин "алкил" включает линейные или разветвленные радикалы, имеющие от одного до примерно двадцати атомов углерода или, предпочтительно, от одного до примерно двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными алкильными радикалами являются "низшие алкильные" радикалы, имеющие от одного до примерно десяти атомов углерода. Наиболее предпочтительными являются низшие алкильные радикалы, имеющие от одного до примерно восьми атомов углерода. Примеры таких радикалов включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изоамил, гексил и тому подобное. Термин "алкенил" включает линейные или разветвленные радикалы, имеющие по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, содержащие от двух до примерно двадцати атомов углерода или, предпочтительно, от двух до двенадцати атомов углерода. Более предпочтительные алкенильные радикалы представляют собой "низшие алкенильные" радикалы, имеющие от двух до примерно десяти атомов углерода и более предпочтительно от двух до примерно восьми атомов углерода. Примеры алкенильных радикалов включают этенил, аллил, пропенил, бутенил и 4-метилбутенил. Термины "алкенил" и"Z" ориентации. Термин "алкинил" включает линейные или разветвленные радикалы, имеющие по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь, содержащие от двух до примерно двадцати атомов углерода или, предпочтительно от двух до примерно двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными алкинильными радикалами являются "низшие алкинильные" радикалы, имеющие от двух до примерно десяти атомов углерода, и более предпочтительно от двух до примерно восьми атомов углерода. Примеры алкинильных радикалов включают пропаргил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-бутил, 2-бутинил и 1 пентинил. Термин "арил", отдельно или в какой-либо комбинации, означает карбоциклическую ароматическую систему, содержащую одно, два или три кольца, в которой такие кольца могут соединяться вместе обычным образом или же могут быть конденсированными. Термин "арил" включает ароматические радикалы, такие как фенил, нафтил, тетрагидронафтил, индан и бифенил. Термины "гетероциклил", "гетероцикл", "гетероциклический" или "гетероцикло" включает насыщенные, частично ненасыщенные и ненасыщенные гетероатомсодержащие кольцевидные радикалы, которые также могут называться "гетероциклил", "гетероциклоалкенил" и "гетероарил" соответственно, в которых гетероатомы могут быть выбраны из азота, серы и кислорода. Примеры насыщенных гетероциклильных радикалов включают насыщенную 3-6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую от 1 до 4 атомов азота (например, пирролидинил, имидазолидинил, пиперидино, пиперазинил и т.д.); насыщенную 3-6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую от 1 до 2 атомов кислорода и от 1 до 3 атомов азота (например, морфолинил и т.д.); насыщенную 3-6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую от 1 до 2 атомов серы и от 1 до 3 атомов азота (например, тиазолидинил и т.д.). Примеры частично ненасыщенных гетероциклических радикалов включают дигидротиофен, дигидропиран, дигидрофуран и дигидротиазол. Гетероциклические радикалы могут включать пятивалентный азот, как, например, в радикалах тетразолия и пиридиния. Термин "гетероцикл" также включает радикалы, в которых гетероциклические радикалы конденсированы с арильными или циклоалкильными радикалами. Примеры таких конденсированных бициклических радикалов включают бензофуран, бензотиофен и тому подобное. Термин "гетероарил" включает ненасыщенные гетероциклические радикалы. Примеры гетероарильных радикалов включают ненасыщенную 3-6-членную, предпочтительно 5 или 6-членную, гетеромоноциклическую группу, содержащую от 1 до 4 атомов азота, например пирролил, пирролинил, имидазолил, пиразолил, пиридил, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, триазолил (например, 4 Н-1,2,4 триазолил, 1 Н-1,2,3-триазолил, 2 Н-1,2,3-триазолил и т.д.) тетразолил (например, 1 Н-тетразолил, 2 Нтетразолил, и т.д.) и т.д.; ненасыщенную конденсированную гетероциклильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов азота, например индолил, изоиндолил, индолизинил, бензимидазолил, хинолил, изохинолил, индазолил, бензотриазолил, тетразолопиридазинил (например, тетразоло [1,5-b] пиридазинил и т.д.) и т.д.; ненасыщенную 3-6-членную, предпочтительно 5- или 6-членную, гетеромоноциклическую группу,- 12022434 содержащую атом кислорода, например пиранил, фурил и т.д.; ненасыщенную 3-6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую атом серы, например, тиенил и т.д.; ненасыщенную 3-6-членную,предпочтительно 5- или 6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую 1-2 атома кислорода и от 1 до 3 атомов азота, например оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил (например, 1,2,4-оксадиазолил,1,3,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил и т.д.) и т.д.; ненасыщенную конденсированную гетероциклическую группу, содержащую 1-2 атома кислорода и от 1 до 3 атомов азота (например, бензоксазолил, бензоксадиазолил и т.д.); ненасыщенную 3-6-членную, предпочтительно 5- или 6-членную гетеромоноциклическую группу, содержащую 1-2 атома серы и от 1 до 3 атомов азота, например тиазолил, тиадиазолил(например, 1,2,4-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил и т.д.) и т.д.; ненасыщенную конденсированную гетероциклильную группу, содержащую 1-2 атома серы и от 1 до 3 атомов азота (например,бензотиазолил, бензотиадиазолил и т.д.) и тому подобное. Термин "гетероциклоалкил" включает гетероциклозамещенные алкильные радикалы. Более предпочтительными гетероциклоалкильными радикалами являются "низшие гетероциклоалкильные" радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода в гетероциклорадикалах. Термин "замещенный" относится к замещению одного или более водородных радикалов в рассматриваемой структуре группой указанного заместителя, включая, но не ограничиваясь этим: гало, алкил,алкенил, алкинил, арил, гетероциклил, тиол, алкилтио, арилтио, алкилтиоалкил, арилтиоалкил, алкилсульфонил, алкилсульфонилалкил, арилсульфонилалкил, алкокси, арилокси, аралкокси, аминокарбонил,алкиламинокарбонил, ариламинокарбонил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, галоалкил, амино, трифторметил, циано, нитро, алкиламино, ариламино, алкиламиноалкил, ариламиноалкил, аминоалкиламино, гидрокси, алкоксиалкил, карбоксиалкил, алкоксикарбонилалкил, аминокарбонилалкил, ацил, аралкоксикарбонил, карбоновую кислоту, сульфоновую кислоту, сульфонил, фосфоновую кислоту, арил, гетероарил, гетероциклический и алифатический радикал. Понятно, что заместитель может быть далее дополнительно замещен. В целях упрощения химические фрагменты, определенные и упоминаемые в настоящем документе,могут быть одновалентными химическими фрагментами (например, алкил, арил и т.д.) или многовалентными фрагментами в соответствующих структурных состояниях, что понятно специалистам в данной области техники. Например, "алкильным" фрагментом может называться одновалентный радикал (например, СН 3-СН 2-) или, в иных случаях, двухвалентный соединяющий фрагмент также может быть "алкильным". В последнем случае специалистам в данной области техники понятно, что данный алкил является двухвалентным радикалом (например, -СН 2-СН 2-), который является эквивалентным термину "алкилен." Аналогичным образом, в обстоятельствах, когда требуются двухвалентные фрагменты, являющиеся "алкокси", "алкиламино", "арилокси", "алкилтио", "арил", "гетероарильными", "гетероциклическими","алкильными" "алкенильными", "алкинильными", "алифатическими" или "циклоалкильными" группами,специалистам в данной области техники будет понятно, что термины "алкокси", "алкиламино", "арилокси", "алкилтио", "арил", "гетероарил", "гетероциклический", "алкил", "алкенил", "алкинил", "алифатический" или "циклоалкильный" относятся к соответствующему двухвалентному фрагменту. Термины "галоген" или "гало" в настоящем изобретении относятся к атому, выбранному из фтора,хлора, брома и иода. В настоящем изобретении термин "нарушенная пролиферация" относится к ненормальному клеточному росту. Фраза "дополнительная терапия" включает лечение субъекта средствами, которые уменьшают или предотвращают побочные эффекты, связанные с комбинированной терапией по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, например, такие средства, которые уменьшают токсическое действие противораковых лекарственных средств, например ингибиторы резорбции костей, кардиозащитные средства; предотвращают или уменьшают случаи возникновения тошноты и рвоты, связанной с химиотерапией, радиотерапией или оперативным вмешательством; или уменьшают случаи возникновения инфекции, связанной с введением миелосупрессивных противоопухолевых лекарственных средств. Использованный в описании термин "ангиогенез" относится к образованию кровеносных сосудов. Конкретнее, ангиогенез представляет собой многоступенчатый процесс, при котором эндотелиальные клетки претерпевают фокальную деградацию и вторгаются через их собственную базальную мембрану,мигрируют через интерстициальную строму по направлению к ангиогенному стимулу, размножаются вблизи от мигрирующего конца, формируют кровеносные сосуды и снова прикрепляются к вновь синтезированной базальной мембране (смотри Folkman et al., Adv. Cancer Res., Vol. 43, pp. 175-203 (1985. Антиангиогенные средства вмешиваются в этот процесс. Примеры средств, которые вмешиваются в некоторые из этих стадий, включают тромбоспондин-1, ангиостатин, эндостатин, интерферон альфа и такие соединения, как ингибиторы матриксной металлопротеиназы (ММР), которые блокируют действие ферментов, расчищающих и создающих пути для прохождения вновь сформированных кровеносных сосудов; такие соединения как альфа-v-бета-3 ингибиторы, мешающие молекулам, которые клетки кровеносных сосудов используют для соединения первичного кровеносного сосуда и опухоли; такие средства как специфические СОХ-2 ингибиторы, предотвращающие рост клеток, образующих новые кровеносные сосуды; и соединения на основе белков, которые одновременно затрагивают несколько из этих мишеней. Термин "апоптоз" при использовании в настоящем изобретении относится к программируемой клеточной смерти, которая запускается в нормально функционирующих клетках человека и животных, когда того требует возраст или "состояние здоровья" клетки. "Средство, вызывающее (индуцирующее) апоптоз", инициирует (запускает) процесс программируемой смерти клетки. Использованный в настоящем изобретении термин "рак" означает класс заболеваний или нарушений, отличающийся неконтролируемым делением клеток и способностью этих клеток вторгаться в другие ткани, или путем непосредственного "врастания" в соседнюю ткань путем инвазии, или путем внедрения в отдаленные места при метастазировании. Использованные в настоящем изобретении термины "соединение" и "соединение по изобретению" относятся к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям. Соединения по изобретению могут быть получены в различных формах, включая кристаллические и аморфные формы. Соединения также могут встречаться в виде сольватов, например гидратов, или сольватов органического растворителя, предпочтительно фармацевтически приемлемого растворителя. Соединения также могут встречаться в множественных кристаллических или полиморфных формах. Соединения по изобретению дополнительно включают фармацевтически приемлемые пролекарства и сложные эфиры соединения формулы I. Термин "устройство" относится к любому аппарату, обычно механическому или электрическому,созданному для выполнения определенной функции. Использованный в описании термин "дисплазия" относится к аномальному клеточному росту, и в большинстве случаев относится к ранней форме предракового поражения, которое распознается патологом при исследовании биопсийного материала. Использованный в описании термин "эффективное количество описываемых соединений", в отношении описываемого способа лечения, относится к количеству описываемого соединения, которое при введении его в качестве части необходимого режима дозирования, приводит, например, к изменению скорости клеточной пролиферации и/или состояния дифференцировки и/или уровня выживаемости клетки до клинически приемлемых стандартных значений. Это количество может дополнительно облегчать до некоторой степени один или несколько симптомов неопластического нарушения, включая, но не ограничиваясь этим: 1) уменьшение количества раковых клеток; 2) уменьшение размера опухоли; 3) ингибирование (т.е., замедление до некоторой степени, предпочтительно остановку) инфильтрации раковых клеток в периферические органы; 4) ингибирование (т.е., замедление до некоторой степени, предпочтительно остановку) метастазирования опухоли; 5) ингибирование, до некоторой степени, роста опухоли; 6) облегчение или уменьшение до некоторой степени одного или более симптомов, связанных с нарушением; и/или 7) облегчение или уменьшение побочных эффектов, связанных с введением противоопухолевых препаратов. Использованный в описании термин "гиперплазия" относится к избыточному делению или росту клеток. Фраза "иммунотерапевтическое средство" относится к средствам, используемым для передачи иммунитета иммунокомпетентного донора, например, другого человека или животного, хозяину с помощью инокуляции. Термин включает применение сыворотки или гамма глобулин содержащих антител, выработанных другим индивидуумом или животным; неспецифическое системное стимулирование; адьюванты; активную специфическую иммунотерапию; и адоптивную иммунотерапию. Адоптивная иммунотерапия относится к лечению заболевания с помощью лечения или средств, которые включают введение хозяину сенсибилизированных лимфоцитов, фактора переноса, иммунной РНК или антител в сыворотке или гаммаглобулина. В контексте неоплазии "ингибирование" роста опухоли или роста опухолевой клетки можно определить по отсроченному появлению первичных или вторичных опухолей, замедленному развитию первичных или вторичных опухолей, уменьшенному появлению первичных или вторичных опухолей, замедленному проявлению или уменьшенной тяжести вторичных эффектов заболевания, остановке роста опухоли и регрессии опухолей, среди прочего. Особенно полное ингибирование называется предотвращением или хемопредотвращением. Использованный в описании термин "метастазирование" относится к миграции раковых клеток из первоначального места локализации опухоли через кровеносные и лимфатические сосуды и появлению раковых опухолей в других тканях. Кроме того, термин метастазирование используется для вторичного рака, выросшего в отдаленном месте. Использованный в описании термин "новообразование" относится к аномальной массе ткани, которая является результатом избыточного клеточного деления. Новообразования могут быть доброкачественными (не раковыми) или злокачественными (раковыми) и также могут называться опухолями. Термин "новообразование (неоплазия)" обозначает патологический процесс, который приводит к образованию опухоли. Использованный в описании термин "предраковый" относится к состоянию, которое не является злокачественным, но вероятно станет злокачественным, если останется нелеченым. Термин "пролиферация" относится к клеткам, проходящим деление (митоз). Фраза "заболевание или нарушение, связанное с PI3 киназой", относится к заболеванию или нарушению, характеризующемуся несоответствующей активностью фосфоинозитид-3-киназы или сверхактивностью фосфоинозитид-3-киназы. Несоответствующая активность относится к (i) экспрессии PI3 киназы в клетках, которые в норме не экспрессируют PI3 киназу; (ii) увеличенной экспрессии PI3 киназы,приводящей к нежелательной пролиферации клеток, дифференцировке и/или росту; или (iii) уменьшенной экспрессии PI3 киназы, приводящей к нежелательному уменьшению пролиферации клеток, дифференцировке и/или росту. Сверхактивность PI3 киназы относится или к амплификации гена, кодирующего конкретную PI3 киназу, или выработке уровня активности PI3 киназы, который может коррелировать с нарушением клеточной пролиферации, дифференцировки и/или роста (то есть, в связи с тем, что уровеньPI3 киназы увеличивается, тяжесть одного или более признаков клеточного нарушения увеличивается). Фраза "радиотерапевтическое средство" относится к использованию электромагнитного и корпускулярного излучения при лечении новообразований. Использованный в описании термин "рецидив" относится к возвращению рака после периода ремиссии. Это может происходить из-за неполного удаления клеток первоначального рака, и рецидив может появляться локально (в месте первоначального рака), регионально (поблизости от первоначального рака, возможно в лимфатических узлах или ткани) и/или отдаленно в результате метастазирования. Термин "лечение" относится к любому процессу, действию, применению, терапии или тому подобному, при котором млекопитающее, включая человека, является объектом медицинской помощи с целью улучшения состояния млекопитающего, непосредственно или опосредованно. Термин "вакцина" включает средства, которые стимулируют иммунную систему человека, чтобы повысить иммунный ответ против опухоли, воздействуя на клетки, экспрессирующие опухольассоциированные антигены (Tea). Использованный в изобретении термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к таким солям, которые с медицинской точки зрения являются пригодными для использования в контакте с тканями людей и низших животных без неспецифической токсичности, воспаления, аллергического ответа и тому подобного, и соответствуют приемлемому отношению польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области техники. Например, S. M. Berge, et al. подробно описывает фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977). Эти соли можно получить insitu в ходе окончательного выделения и очистки соединений по изобретению, или отдельно путем взаимодействия свободного основания с подходящей органической кислотой или неорганической кислотой. Примеры фармацевтически приемлемых нетоксичных солей присоединения кислоты включают, но не ограничиваются этим, соли аминогруппы, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и хлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, лактобионовая кислота или малоновая кислота или с помощью других методов, используемых в данной области техники, таких как ионный обмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются этим, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидроиодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурил сульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, pтолуолсульфонат, ундеканоат, валерат и тому подобное. Иллюстративные соли щелочных и щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и тому подобное. Дополнительные фармацевтически приемлемые соли включают, где это целесообразно, нетоксичные аммониевые соли, четвертичные аммониевые соли и катионы амина, образованные с применением противоионов,таких как галид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, алкил сульфонат, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, сульфонат и арил сульфонат. Было обнаружено, что некоторые соли, такие как натриевые, калиевые и холиновые основные соли, а также кислые соли, такие как сульфат и метансульфонат,улучшают растворимость соединений формулы I в фармацевтически приемлемых водных средах. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемая соль соединения 1 является холиновой солью. Предпочтительные соли соединения 1 включают соль натрия и соль калия. Другие предпочтительные соли включают сульфат и метансульфонат. Использованный в описании термин "фармацевтически приемлемые сложные эфиры" относится к сложным эфирам, которые подвергаются гидролизу in vivo и включают такие сложные эфиры, которые легко распадаются в организме человека с высвобождением исходного соединения или его соли. Подходящие сложноэфирные группы включают, например, группы, происходящие от фармацевтически приемлемых алифатических карбоновых кислот, в частности, алкановой, алкеновой, циклоалкановой и алкандионовой кислот, в которых каждый алкильный или алкенильный фрагмент преимущественно имеет не более, чем 6 атомов углерода. Примеры определенных сложных эфиров включают, но не ограничиваются этим, формиаты, ацетаты, пропионаты, бутираты, акрилаты и этилсукцинаты. Использованный в описании термин "фармацевтически приемлемые пролекарства" относится к таким пролекарствам соединения по настоящему изобретению, которые с медицинской точки зрения являются пригодными для использования в контакте с тканями людей и низших животных без избыточной токсичности, воспаления, аллергического ответа и тому подобного, соответствуют приемлемому отношению польза/риск, и являются эффективными для предполагаемого использования, а также к цвиттерионным формам соединения по настоящему изобретению, где это возможно. Использованный в описании термин "пролекарство" означает соединение, которое превращается in vivo при метаболизме (например, путем гидролиза) в соединение по изобретению. Различные формы пролекарств известны в данной области техники, например, как указано в работах Bundgaard, (ed.), Design of Prodrugs, Elsevier (1985);Society (1975); и Bernard TestaJoachim Mayer, "Hydrolysis In Drug и Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry и Enzymology, John Wiley и Sons, Ltd. (2002). Использованный в настоящем изобретении термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические средства, средства, замедляющие абсорбцию, и тому подобные, совместимые с фармацевтическим введением, такие как стерильная апирогенная вода. Подходящие носители описаны в самом последнем издании Фармации (Remington's Pharmaceutical Sciences), общепринятом стандарте в данной области, которая включается в настоящее описание посредством ссылки. Предпочтительные примеры таких носителей или разбавителей включают, но не ограничиваются этим, воду, физраствор,растворы Рингера, раствор декстрозы и 5% сывороточный альбумин человека. Также могут использоваться липосомы и неводные растворители, такие как жирные масла. Использование таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением тех случаев, когда обычная среда или средство являются несовместимыми с активным соединением, подразумевается возможность их использования в композициях по изобретению. Кроме того, в состав композиции могут быть включены дополнительные активные соединения. В настоящем изобретении термин "предраковый" относится к состоянию, которое не является злокачественным, но вероятно станет злокачественным, если останется нелеченым. Термин "субъект", использованный в настоящем изобретении, относится к животному. Предпочтительно животное является млекопитающим. Более предпочтительно млекопитающее является человеком. Термин "субъект" также относится, например, к собакам, кошкам, лошадям, коровам, свиньям, морским свинкам, рыбам, птицам и тому подобному. Соединения по настоящему изобретению могут быть модифицированы путем добавления соответствующих функциональностей для усиления выбранных биологических свойств. Такие модификации известны в данной области техники и могут включать модификации, увеличивающие биологическое проникновение в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), увеличивающие пероральную доступность, увеличивающие растворимость для обеспечения возможности введения с помощью инъекции, изменяющие метаболизм и изменяющие скорость выведения. Синтезированные соединения могут быть выделены из реакционной смеси и дополнительно очищены с помощью таких методов, как колоночная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография или перекристаллизация. Стоит отметить, что дополнительные методы синтеза соединений рассматриваемой формулы станут понятны специалистам в данной области техники. В дополнение к этому, разные стадии синтеза могут осуществляться в альтернативной последовательности или порядке с получением желательных соединений. Методы преобразований синтетической химии и использования защитных групп (использование защиты и снятие защиты), подходящие для синтеза описанных здесь соединений, известны в данной области техники и включают, например, описанные в R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene и P.G.M. Wuts, Protective Groups inOrganic Synthesis. 2d. Ed., John Wiley и Sons (1991); L. Fieser и М. Fieser, Fieser и Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley и Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley и Sons (1995), и последующие их редакции. Фармацевтические композиции Фармацевтические композиции по настоящему изобретению содержат терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, заключенное в один состав с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами. Предпочтительно, фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент представляет собой нетоксичный, инертный твердый, полутвердый или жидкий наполнитель, разбавитель, материал для инкапсулирования или композицию вспомогательного вещества любого типа. Некоторыми примерами материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, являются сахара,- 16022434 такие как лактоза, глюкоза и сахароза; циклодекстрины, такие как альфа- , бета-и гамма-циклодекстрины; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошкообразная трагакантовая камедь; солод; желатин; тальк; такие эксципиенты для суппозиториев, как масло какао и воски; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; сложные эфиры,такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатно-буферные растворы, а также другие нетоксичные совместимые смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красящие вещества, разделительные средства, покровные вещества, подсластители, вкусовые и ароматизирующие вещества, консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в композиции, по усмотрению разработчика рецептуры. Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить перорально, парентерально, с помощью спрея для ингаляции, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или через имплантированный резервуар, предпочтительно путем перорального введения или введения с помощью инъекции. Фармацевтические композиции этого изобретения могут содержать любые общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адьюванты (вспомогательные средства) или разбавители. В некоторых случаях значение рН композиции может быть отрегулировано с помощью фармацевтически приемлемых кислот, оснований или буферов с целью увеличения стабильности созданного соединения или формы его доставки. Использованный в описании термин парентеральное введение включает подкожную, внутрикожную, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, внутрисуставную,внутригрудинную, подоболочечную, внутриочаговую и внутричерепную инъекцию или инфузию (вливание). Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области техники, такие как, например, вода или другие растворители, солюблизирующие вещества и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропил енгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, масло пшеничных зародышей, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. Помимо инертных разбавителей композиции для перорального применения также могут включать такие адьюванты как увлажняющие вещества, эмульгирующие и суспендирующие вещества, подсластители, вкусовые вещества и ароматизирующие добавки. Инъекционные формы, например, стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии, могут быть созданы в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих или увлажняющих веществ и суспендирующих веществ. Стерильный препарат для инъекций также может представлять собой стерильный инъецируемый раствор, суспензию или эмульсию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3 бутандиоле. К числу приемлемых основ и растворителей, которые могут использоваться, относятся вода,раствор Рингера, U.S.P. и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используются стерильные, жирные масла. Для этой цели может использоваться любая смесь жирных масел, содержащая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, используются при приготовлении инъецируемых препаратов. Составы для инъекций могут быть простерилизованы, например, с помощью фильтрации через фильтр, удерживающий бактерии, или путем введения стерилизующих средств в форме стерильных твердых составов, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъецируемой среде перед применением. Для продления эффекта лекарственного средства часто желательно замедлить абсорбцию лекарственного средства из места подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно осуществить с помощью жидкой суспензии кристаллического или аморфного материала с плохой растворимостью в воде. При этом скорость абсорбции лекарственного средства зависит от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристалла и формы кристалла. Альтернативно, замедленная абсорбция введенной парентерально лекарственной формы осуществляется в результате растворения или суспендирования лекарственного средства в масляном разбавителе. Инъецируемые депоформы получают путем получения матрицы микроинкапсулированного лекарственного средства в биодеградируемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного средства и полимера, а также природы отдельного использованного полимера, можно контролировать скорость высвобождения лекарственного средства. Примеры других биодеградируемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Депо инъецируемых композиций также получают путем включения лекарственного средства в липосомы и микроэмульсии, совместимые с тканями организма. Композиции для ректального или вагинального введения предпочтительно представляют собой суппозитории, которые можно приготовить путем смешивания соединения по изобретению с подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или воски, которые являются твердыми при комнатной температуре, и жидкими при температуре тела, и следовательно плавятся в прямой кишке и вагинальной полости и высвобождают активное соединение. Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли,порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешивается по меньшей мере с одним инертным, фармацевтически приемлемым эксципиентом и носителем, таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат и/или: а) наполнителями или разбавителями, такими как крахмалы,лактоза, сахароза, глюкоза, маннитол и кремниевая кислота; b) связывающими веществами, такими как,например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и гуммиарабик; с) увлажняющими веществами, такими как глицерин; d) дезинтегрирующими средствами, такими как агар-агар, карбонат кальция картофельный крахмал или маниоковый крахмал, альгиновая кислота,некоторые силикаты и карбонат натрия; е) веществами, замедляющими растворение, такими как парафин; f) веществами, ускоряющими всасывание, такими как соединения четвертичного аммония; g) увлажняющими веществами, такими как, например, цетиловый спирт и глицерин моностеарат; h) адсорбирующими веществами, такими как каолин и бентонитовая глина; и i) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма также может содержать буферные вещества. Твердые композиции подобного типа также могут применяться в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах, с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар,а также полиэтиленгликолей с высоким молекулярным весом и тому подобного. Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут изготавливаться с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области разработки фармацевтических препаратов. Они необязательно могут содержать опалесцирующие вещества, а также могут представлять собой композиции, которыевысвобождают активный ингредиент(ы) только, или преимущественно, в определенном участке пищеварительного тракта,необязательно замедленным образом. Примеры заливочных композиций, которые могут использоваться,включают полимерные вещества и воски. Лекарственные формы для местного и чрескожного введения соединения по изобретению включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, средства для ингаляции или пластыри. При необходимости активный компонент в стерильных условиях смешивают с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервирующими веществами или буферами. В рамках данного изобретения также предусматриваются офтальмологические составы, глазные капли, глазные мази, порошки и растворы. Мази, пасты, кремы и гели могут содержать в дополнение к активному соединению по настоящему изобретению, такие эксципиенты, как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал,трагакантовую камедь, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевую кислоту, тальк, окись цинка или их смеси. Порошки и спреи могут содержать, в дополнение к соединениям по изобретению, эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикат кальция и полиамидный порошок или смеси этих веществ. Спреи могут дополнительно содержать традиционные распыляющие вещества (пропелленты), такие как хлорфторуглеводороды. Чрескожные пластыри обладают дополнительным преимуществом, обеспечивая контролируемую доставку соединения в организм. Такие лекарственные формы можно изготовить путем растворения или распределения соединения в подходящей среде. Усиливающие абсорбцию вещества могут использоваться для увеличения "потока" соединения через кожу. Скорость может контролироваться или с помощью контролирующей скорость мембраны, или путем распределения соединения в полимерной матрице или геле. Для ингаляционной доставки используется терапевтическая композиция по изобретению в твердой или жидкой аэрозольной форме, которая непосредственно вводится пациенту (например, путем вдыхания в дыхательную систему). Твердые или жидкие аэрозольные формы активного соединения, приготовленные для осуществления настоящего изобретения на практике, содержат частицы пригодного для вдыхания размера, то есть частицы достаточно небольшого размера, чтобы проходить через рот и дыхательное горло после вдыхания, а также в бронхи и альвеолы легких. Доставка аэрозольных терапевтических средств, в частности антибиотиков в виде аэрозоля, известна в данной области техники (смотри, например, патент США 5,767,068 VanDevanter et al, патент США 5,508,269 Smith et al., и WO 98/43650Montgomery, которые включены в описание посредством ссылки). Обсуждение ингаляционной доставки антибиотиков также встречается в патенте США 6,014,969, включенном в описание посредством ссылки. Под "терапевтически эффективным количеством" соединения по изобретению подразумевается ко- 18022434 личество соединения, оказывающее терапевтическое действие на субъекта, подвергающегося лечению,при приемлемом отношении польза/риск, применимом к любому медицинскому лечению. Терапевтический эффект может быть объективным (т.е., может быть измерен с помощью какого-либо теста или маркера) или субъективным (т.е., у субъекта наблюдается показатель улучшения или субъект чувствует эффект). Эффективное количество описанного здесь соединения может находиться в пределах от примерно 0,1 мг/кг до примерно 500 мг/кг, предпочтительно от примерно 1 до примерно 50 мг/кг. Эффективные дозировки также будут варьироваться в зависимости от способа введения, а также возможности совместного использования с другими средствами. Однако понятно, что решение об общем ежедневном употреблении соединения и композиций по настоящему изобретению будет приниматься лечащим врачом в рамках его медицинской суждения. Конкретный терапевтически эффективный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от целого ряда факторов, включая заболевание, требующее лечения, и тяжесть заболевания; активность определенного используемого соединения; конкретную используемую композицию; возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету пациента; время введения,способ введения и скорость выведения определенного используемого соединения; продолжительность лечения; используемые в комбинации или одновременно с конкретным применяемым соединением лекарственные средства; и подобные факторы, хорошо известные в медицине. Общая ежедневная доза соединения по изобретению, которая вводится человеку или другому животному, в однократной дозе или дробных дозах, может составлять, например, от 0,01 до 50 мг/кг веса тела или более обычно от 0,1 до 25 мг/кг веса тела. Композиции с однократной дозировкой могут содержать указанное количество или доли от него, чтобы в сумме давать суточную дозу. В целом, режимы лечения по настоящему изобретению включают введение нуждающемуся в этом пациенту от примерно 10 мг до примерно 1000 мг соединения(й) по изобретению в день в однократной дозе или в нескольких дозах. Соединения описанной здесь формулы могут быть введены, например, с помощью инъекции, внутривенно, внутриартериально, подкожно, внутрибрюшинно, внутримышечно или подкожно; или перорально, буккально, назально, через слизистую, местно, в виде офтальмологического состава, или с помощью ингаляции, в пределах дозировки от примерно 0,1 до примерно 500 мг/кг веса тела, в альтернативном варианте от 1 мг до 1000 мг/дозу, каждые 4-120 ч, или в соответствии с требованиями определенного лекарственного средства. Способы по изобретению предполагают введение эффективного количества соединения или композиции соединения с целью достижения желательного или заданного эффекта. В большинстве случаев фармацевтические композиции по изобретению будут вводиться от примерно 1 до примерно 6 раз в день или, альтернативно, в виде непрерывного вливания. Такое введение может использоваться в качестве хронической или острой терапии. Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с фармацевтическими эксципиентами или носителями для получения стандартной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от пациента, подвергающегося лечению, и выбранного способа введения. Типичный препарат будет содержать от примерно 5% до примерно 95% активного соединения (вес/вес). Альтернативно, такие препараты могут содержать от примерно 20% до примерно 80% активного соединения. В некоторых случаях могут потребоваться более низкие или более высокие дозы, чем описанные выше. Определенная дозировка и режим лечения для любого конкретного пациента будут зависеть от целого ряда факторов, включая активность конкретного используемого соединения, возраст, вес тела,общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, скорость выведения, комбинацию лекарственных средств, тяжесть и течение заболевания, состояние или симптомы, предрасположение пациента к заболеванию, состоянию или симптомам, и решения лечащего врача. После улучшения состояния пациента может при необходимости вводиться поддерживающая доза соединения, композиции или комбинации по изобретению. В дальнейшем дозировка или частота введения, или и то, и другое, могут быть уменьшены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором улучшенное состояние сохраняется, в тех случаях, когда симптомы ослаблены до желательного уровня. Однако пациенты могут нуждаться в периодическом лечении на долгосрочной основе после возвращения симптомов заболевания. Примеры Соединения и способы по настоящему изобретению будут более понятны со ссылкой на следующие примеры, предназначенные только для иллюстрации, но не для ограничения объема настоящего изобретения. Различные изменения и модификации раскрытых вариантов осуществления будут очевидны специалистам в данной области техники, причем такие изменения и модификации, включая те, которые имеют отношение к химическим структурам, заместителям, производным, композициям и/или способам по изобретению, но не ограничиваясь только ими, могут быть осуществлены без отступления от сути настоящего изобретения и объема прилагаемых к настоящему описанию пунктов формулы изобретения. Синтез соединения 1 и его метансульфонатной, натриевой, калиевой и холиновой солей показан на схемах ниже. Промежуточные соединения 107-1 или 107-2 могут быть получены при взаимодействии 106 с R-2-1 или R-2-2, соответственно. Схемы синтеза R-2-1 и R-2-2 показаны ниже. Промежуточные соединения 108-1 и 108-2 могут быть получены с помощью реакции конденсации 107-1 или 107-2 с R-3-1 или R-3-2, где R-3-1 и R-3-2 можно получить в соответствии со следующей схемой: Пример 1. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d] пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамида (соединение 1). Стадия а. (2)-Этил-2-(этоксиметил)-3-метоксиакрилат (соединение 202). К этанолу (750 мл) осторожно по частям добавили натрий (40,9 г; 1,78 моль) и концентрировали раствор с получением NaOEt порошка после исчезновения всего металлического натрия. При перемешивании добавили гексан (1,0 л) и смесь охладили на ледяной бане. Добавили по каплям смесь 201 (130 г; 0,89 моль) и этилформиата (131 г; 1,78 моль) при 0-5 С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавили по каплям диметилсульфат (224 г; 1,78 моль) при охлаждении на ледяной бане. Полученную смесь нагревали при 50 С в течение 2 ч. К смеси добавили триэтилхлоридаммония (122 г) и гидроксид натрия (20 г). Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и профильтровали. Фильтрат промыли водой и высушили над Na2SO4. Концентрировали с получением титульного соединения (140 г; 37%) в виде бесцветного масла, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Стадия b. Этил-2-оксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбоксилат (соединение 203). Смесь соединения 202 (140 г; 0,745 моль), мочевины (40,0 г; 0,697 моль) и концентрированной соляной кислоты (34 мл) в этаноле (500 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. После выпаривания 50% объема реакции, полученную суспензию профильтровали, промыли небольшим количеством этанола и высушили с получением соединения 203 (47 г; 37%) в виде белого твердого вещества. LCMS: 171 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CDCl3):1.19 (t, J=7.2 Hz, 3 Н), 3.92 (s, 2H), 4.08 (q, J=7.2 Hz,2H), 7.0 (s, 1H), 7.08 (d, J= 6.0 Hz , 1H), 8.83 (d, br, J= 4.8 Hz, 1H). Стадия с. Этил 2-оксо-1,2-дигидропиримидин-5-карбоксилат (соединение 204). К раствору соединения 203 (47 г; 280 ммоль) в уксусной кислоте (500 мл) добавили бром (49,0 г; 307 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч, охладили до комнатной температуры, дополнительно охладили до 0-5 С и фильтровали с получением титульного соединения 204 в виде желтого твердого вещества (38 г; 54%). LCMS: 169 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, D2O):1.28 (t, J=7.2 Hz,3 Н), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 9.00 (br, s, 2H). Стадия d. Этил 2-хлорпиримидин-5-карбоксилат (соединение R-2-1). Смесь соединения 204 (38,0 г; 153 ммоль), фосфорил трихлорида (300 мл) и N,N-диметиланилина (3 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч, охладили до комнатной температуры и концентрировали. Остаток осторожно погасили ледяной водой, отрегулировали значение рН до 7-8 с помощью карбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические вещества промыли ледяной водой и рассолом, высушили над Na2SO4, выпарили и очистили с помощью колоночной хроматографии(элюируя EtOAc/Hexanes, 10%) с получением соединения R-2-1 (15 г; 52%) в виде белого твердого вещества. LCMS: 187 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CDCl3):1.36 (t, J = 7.5 Hz, 3 Н), 4.39 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 9.08(s, 2H). Стадия е. Натрий (7)-2-(диметоксиметил)-3-метокси-3-оксопроп-1-ен-1-олат (соединение 206). Смесь NaH (27 г; 60% в минеральном масле, 0,675 моль) в безводном 1,2-диметоксиэтане (300 мл) нагрели до 40-50 С и по каплям добавили метил 3,3-диметоксипропионат (205) (100 г; 0,675 моль). Полученную смесь перемешивали в течение 0,5 ч, затем по каплям добавили безводный метилформиат (81 г; 1,35 моль) при 40-50 С. Полученную смесь перемешивали при 40-50 С (внутренняя температура) в течение 2 ч до того, как ее охладили до 0 С. Дали возможность реакционной смеси медленно нагреться до 25 С и перемешивали в течение ночи. Добавили Et2O (150 мл) и помешивали в течение 30 мин. Полученную суспензию профильтровали. Твердое вещество промыли Et2O (100 мл), собрали и высушили с получением титульного соединения 206 (82 г; 61%) в виде беловатого твердого вещества. LCMS (m/z): 130.8 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CD3OD):3.36 (s, 6 Н), 3.60 (s, 3 Н), 5.34 (s, 1H), 8.92 (s, 1H). Стадия f. 2-Аминопиримидин-5-карбоновой кислоты метиловый эфир (соединение 207). К смеси гуанидин гидрохлорида (42,2 г; 0,44 моль) в DMF (300 мл) добавили соединение 206 (80 г; 0,40 моль). Полученную смесь нагревали при 100 С в течение 1 ч. Реакционную смесь профильтровали перед охлаждением. Фильтрат промыли 50 мл DMF и объединенный фильтрат концентрировали с получением остатка, который суспендировали в холодном EtOH и промыли холодным EtOH (50 мл) с получением соединения 207 (38 г; 61,5%) в виде твердого желтого вещества. LCMS (m/z): 154.2 [М+1]+,195.1[М+42]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CD3OD):3.88 (s, 3 Н), 8.77 (s, 2H). Стадия g. Метил-2-хлорпиримидин-5-карбоксилат (соединение R-2-2). Соединение 207 (7 г; 0,046 моль) добавили к смеси концентрированной соляной кислоты (15.2 мл) иCH2Cl2 (60 мл). После охлаждения добавили ZnCl2 (18,6 г; 0,138 моль) при 15-20 С. Смесь перемешивали при 15-20 С в течение 0,5 ч и охладили до 5-10 С. Добавили частями NaNO2 (9,5 г; 0,138 моль), сохраняя при этом внутреннюю температуру 5-10 С. Реакция продолжалась около 2 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду (50 мл). Органический слой отделили и экстрагировали водную фазу CH2Cl2 (30 мл 2). Объединенные органические экстракты концентрировали с получение сырого продукта (4,2 г). Сырое соединение суспендировали в гексане (20 мл), нагревали при 60 С в течение 30 мин и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением титульного соединения R-2-2 (3,5 г; 44,4%) в виде серовато-белого вещества. LCMS (m/z): 214.1[М+42]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CDCl3):4.00 (s, 3 Н), 9.15 (s, 2H). Стадия h. 5-Бром-2-метоксипиридин (соединение 303). Раствор 2-метоксипиридина (100 г; 0,92 моль), NBS (180 г; 1,0 моль) в ацетонитриле (1,0 л) помешивали с обратным холодильником в течение 21 ч. TLC показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и концентрировали. Было собрано 900 мл растворителя. Полученную суспензию профильтровали и промыли н-гексаном (400 мл). Фильтрат вновь концентрировали до получения сырого продукта. Сырой продукт дистиллировали при пониженном давлении(30 С/0,3 мм рт.ст.) с получением титульного соединения в виде прозрачного масла (146 г; 84%). LCMS(m/z): 190.0 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, CDCl3):3.90 (s, 3 Н), 6.65 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 8.8 Hz,2.4Hz, 1H), 8.19 (s, 1H). Стадия i. 6-Метоксипиридин-3-ил-борная кислота (R-3-1). К раствору соединения 303 (20 г; 0,11 моль) в безводном THF (180 мл) по каплям добавили н-BuLi(59 мл, 2 М в THF) при -78 С, полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавили триизопропилборат (37 мл) при -78 С, реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и продолжали перемешивать в течение ночи. TLC (гексаны/этилацетат =5:1) показала завершение реакции. Отрегулировали значение рН смеси до 3-4 с помощью 4N HCl (90 мл). Осадок собрали фильтрованием с получением сырого соединения R-3-1 (21 г; 128%). Сырое соединение R-3-1 (21 г) растворили в воде (200 мл) и отрегулировали значение рН раствора до 8-9 с помощью концентрированного раствора аммония, осадок собрали фильтрованием с получением чистого титульного соединения R-3-1 в виде твердого белого вещества.(11 г; 67%). LCMS (m/z): 154.1 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-J6):3.86 (s, 3 Н), 6.76 (d, J= 8.4 Hz,1H), 7.99 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 8.05 (br, 2H), 8.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H). Стадия j. 2-Метокси-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин (соединение R-3-2). Смесь соединения 303 (55 г; 0,29 моль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (90 г; 0,35 моль), ацетата калия (57 г; 0,58 моль) и бис(трифенилфосфин)палладия(II) хлорида (2,2 г; 3 ммоль) в безводном диоксане (500 мл) нагревали при 108 С в атмосфере N2 в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и очистили с помощью колоночной хроматографии, элюируя гексан/этилацетатом, с получением титульного соединения R-3-2 (58 г; 84%). 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d2):1.30 (s,12 Н), 3.88 (s, 3 Н), 6.81 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J= 8.0 Hz, 2.0Hz, 1H), 8.41 (d, J = 2.0Hz, 1H). Стадия k. Тиено[3,2-d]пиримидин-2,4(1 Н,3 Н)-дион (соединение 102). Метод с использованием мочевины. Смесь метил-3-аминотиофен-2-карбоксилата (101) (90,0 г; 573 ммоль; 1,0 экв.) и мочевины (277,6 г; 4,6 моль; 8,0 экв.) нагревали при 190 С в течение 3-4 ч и охладили до комнатной температуры. К реакционной смеси добавили водный NaOH (10%, 800 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч твердое вещество удалили фильтрованием. Фильтрат подкислили HCl до значения рН 3-4, осажденное твердое вещество собрали фильтрованием, промыли водой и высушили под вакуумом с получением искомого продукта - соединения 102 - в виде сероватобелого твердого вещества (87 г; 89%), т.пл.: 280-285 С. LCMS (m/z): 169.0 [М+1]+. 1H ЯМР (400 MHz,DMSO-d6):6.92 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 11.0-11.5 (br,2H).KOCN метод. К смеси 3-аминотиофен-2-карбоксилата (101) (100,0 г; 636,9 ммоль; 1,0 экв.), уксусной кислоты (705 мл) и воды (600 мл) медленно добавили раствор цианата калия (154,8 г; 1,91 моль; 3,0 экв.) в воде (326 мл) в течение 1 ч. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, профильтровали и промыли водой (500 мл). Осадок загрузили в подходящий по размеру реактор и добавили 2 М водный раствор гидроксида натрия (1,65 л), кашицу перемешивали в течение 2 ч, после чего LCMS подтвердила образование искомого продукта. Смесь охладили до 10 С и добавили 3 М водную соляную кислоту (1,29 л) до значения рН 5.06.0. Кашицу профильтровали, промыли водой(700 мл) и высушили в вакуумном сушильном шкафу при 50 С в течение 24 ч до получения соединения 102 (100 г; 94%) в виде серовато-белого твердого вещества. LCMS (m/z): 169.1 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 Стадия 1. 2,4-Дихлортиено[3,2-d]пиримидин (соединение 103). Хлорокись фосфора (152 мл; 1,67 моль; 7,0 экв.) медленно добавили к охлажденному раствору соединения 102 (40 г; 238 ммоль; 1,0 экв.) и N,N-диметиланилина (22,5 мл; 179 ммоль; 0,75 экв.) в ацетонитриле (250 мл) при сохранении температуры ниже 20 С. Затем смесь нагрели до 85 С и перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь охладили до 15 С, и затем медленно вылили в смесь льда и холодной воды (360 мл). Полученную кашицу профильтровали, промыли холодной водой (200 мл). Осадок высушили в вакуумном сушильном шкафу при 40 С в течение 24 ч с получением соединения 103 (40,5 г; 83%) в виде серовато-белого твердого вещества. Т.пл.:245-250 С. LCMS (m/z): 205.0 [М+1]+. 1 Н ЯМР(34,2 г; 167 ммоль; 1,0 экв.) и метанола (500 мл) медленно добавили морфолин (31,2 мл; 367 ммоль; 2,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Осадок собрали фильтрованием, промыли метанолом и высушили в вакууме с получением искомого продукта - соединения 104 - в виде светло-желтого твердого вещества (39 г; 91%). Т.пл.: 250-255 С. LCMS (m/z): 256.0[М+1]+. 1H ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.76 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.92 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 7.42 (d, J= 5.2 Hz,1H), 8.32 (d, J= 5.2 Hz, 1H). Стадия n. 2-Хлор-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-карбальдегид (Соединение 105). К суспензии соединения 104 (20 г; 78,4 ммоль; 1,0 экв.) в THF (безводный, 320 мл) при -78 С медленно добавили н-BuLi (в гексанах, 2,4 М; 40,8 мл; 102 ммоль; 1,3 экв.) в атмосфере азота. Полученной кашице позволили нагреться до -60 С с превращением в прозрачный бурый раствор. Затем реакционную смесь вновь охладили до -78 С и медленно добавили DMF (безводный, 9,1 мл; 118 ммоль; 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали при -78 С в течение 0,5 ч, нагрели до 0 С в течение 1 ч и медленно вылили в смесь водной HCl (0,25 М; 660 мл) и ледяной воды (320 мл). Полученную кашицу перемешивали при 0-10 С в течение 0,5 ч, профильтровали, промыли холодной водой и высушили в вакууме до получения соединения 105 в виде желтого твердого вещества (22 г; 98%). Т.пл.:260-265 С. LCMS (m/z): 284.0[М+1]+ 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.77 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.96 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 8.30 (s, 1H), 10.21 (s,1H). Стадия о. (2-Хлор-4-морфолин-4-ил-тиено[3,2-d]пиримидин-6-илметил)метиламин (соединение 106). К раствору соединения 105 (20,0 г; 70,4 ммоль; 1,0 экв.) в метаноле (125 мл) добавили раствор метиламина в метаноле (27% об./об.; 75 мл; 563,2 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, растворитель удалили под вакуумом с получением сырого твердого продукта, который растворили в метаноле (550 мл) и THF (220 мл) в атмосфере азота. По частям добавили борогидрид натрия (8 г; 211,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выпарили в вакууме и добавили воду (300 мл). Водную смесь экстрагировали метиленхлоридом, а объединенные экстракты высушили над Na2SO4 и концентрировали. Осадок растворили в 6 М HCl (230 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Водный раствор промыли метиленхлоридом в течение нескольких минут и довели значение рН до 9-10 с помощьюNaOH (4N). Осажденное твердое вещество собрали фильтрованием и высушили (60 С, 6 ч) с получением светло-желтого твердого вещества (18 г; 85%). Т.пл.: 240-245 С. LCMS (m/z): 299 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400MHz, DMSO-d6):2.32 (s, 3 Н), 3.74 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.88 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.96 (s,2H), 7.24 (s, 1H). Стадия р(а). 2-[(2-Хлор-4-морфолин-4-ил-тиено[3,2-d]пиримидин-6-илметил)метиламино]пиримидин-5-карбоновой кислоты этиловый эфир (соединение 107-1). К смеси соединений 106 (10 г; 33,6 ммоль) и R-2-1 (6,8 г; 36,4 ммоль) в CH3CN (400 мл) при комнатной температуре добавили диизопропилэтиламин (220 мл; 1,26 моль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь выпарили и добавили метиленхлорид (300 мл). Органическую фазу промыли водой, высушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме до получения осадка. К осадку добавили этилацетат и полученную смесь перемешивали при температуре бани с ледяной водой в течение 50 мин. Полученное твердое вещество собрали фильтрованием с получением титульного продукта 107-1 в виде твердого белого вещества (10,6 г; 70%). LCMS: 449 [М+1]+. 1 Н ЯМР(400 MHz, DMSO-d6):1.30 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.71 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.83 (t, J= 4.8 Hz, 4H),4.29 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 8.87 (s, 2H). Стадия p(b). 2-[(2-Хлор-4-морфолин-4-ил-тиено[3,2-d]пиримидин-6-илметил)метиламино]пиримидин-5-карбоновой кислоты метиловый эфир (соединение 107-2). Смесь соединения 106 (25 г; 84 ммоль), CH3CN (500 мл) и R-2-2 (16 г; 92 ммоль) перемешивали при комнатной температуре. Добавили диизопропилэтиламин (DIPEA) (500 мл; 2,9 моль). Раствор перемешивали в течение ночи и выпарили. После добавления метиленхлорида (500 мл) органическую фазу промыли водой, высушили с помощью Na2SO4 и концентрировали в вакууме. К осадку добавили этилацетат (200 мл) и смесь перемешивали при температуре бани с ледяной водой в течение 50 мин. Титульный продукт собрали в виде белого твердого вещества (29,4 г; 81%). LCMS (m/z): 435.2 [М+1]+. 1 Н ЯМР(метил)амино)пиримидин-5-карбоксилат (соединение 108-1). Метод А. Смесь соединения 107-1 (12 г; 26,7 ммоль), R-3-1 (4,9 г; 32 ммоль), NaHCO3 (6,7 г; 80,1 ммоль) и бис(трифенилфосфин)палладия(II) хлорида (188 мг; 0,267 ммоль) в смешанных растворителях толуоле (80 мл), этаноле (50 мл) и воде (10 мл)-нагревали при 108 С в течение 4,5 ч в атмосфере N2. TLC показала завершение реакции. Затем реакционную смесь охладили до комнатной температуры и добавили воду (20 мл). Полученное твердое вещество собрали фильтрованием и затем суспендировали в этаноле (100 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и профильтровали. Собранное твердое вещество промыли этанолом и высушили в вакууме с получением титульного соединения 108-1 в виде белого твердого вещества (10 г; 72%). Метод В. Смесь соединения 107-1 (1,5 г; 3,34 ммоль), R-3-2 (1,6 г; 6,68 ммоль), NaHCO3 (0,84 г; 10,0 ммоль) и бис(трифенилфосфин) палладия(II) хлорида (118 мг; 0,167 ммоль) в смешанных растворителях толуоле (24 мл), этаноле (15 мл) и воде (3 мл) нагревали при 108 С в атмосфере N2. Реакционную смесь разделили между дихлорметаном и водой. Органический слой отделили, промыли рассолом, высушили над Na2SO4, профильтровали и выпарили в вакууме с получением осадка, который очистили с помощью колоночной хроматографии, элюируя гексаном/этилацетатом, с получением соединения 108-1 в виде белого твердого вещества (1,7 г; 98 %). Т.пл.198-202 С. LCMS: 522.30 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSOd6):1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.76 (t, J= 4.4 Hz, 4H), 3.93 (t, J= 4.4 Hz, 4H), 3.94 (s, 3H), 4.30 (q,J= 7.2 Hz, 2H), 5.24 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd, J= 8.8 Hz, 2.0Hz, 1H), 8.88 (s, 2H),9.15 (d, J= 2.0 Hz, 1H). Стадия q(b). Метил-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксилат (соединение 108-2). К смеси соединения 107-2 (20 г; 46,0 ммоль), В-3-1 (9,2 г; 60,2 ммоль; 1,3 экв.) в диоксане (540 мл) при комнатной температуре добавили твердый NaHCO3 (11,6 г; 138,1 ммоль, 3 экв.), а затем добавили воду (40 мл). Полученную смесь дегазировали, пропуская N2 через поверхность раствора. Затем добавили бис(трифенилфосфин)палладия(П) хлорид (323 мг; 0,46 ммоль; 0,01 экв.) и полученную смесь нагревали при 108 С в течение 15 ч. TLC и LCMS показали завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали через целит, пока она была еще горячая (90 С), и промыли диоксаном (70 мл). Фильтрат постепенно охладили до комнатной температуры, при этом во время периода охлаждения образовались белые мелкие кристаллы. Суспензию профильтровали и промыли диоксаном (80 мл) с получением титульного соединения 108-2 в виде белого твердого вещества (18 г; 78%). LCMS (m/z): 508.3 [М+1]+. 1H ЯМР (400MHz, DMSO-d6):3.28 (s, 3 Н), 3.76 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.82 (s, 3H); 3.92 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 5.20 (s, 2H),6.91 (d, J= 8.8Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd, J= 8.8Hz, 2.4Hz, 1H), 8.88 (s, 2H), 9.15 (d, J= 2.0Hz, 1H). Стадия r. N-Гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено [3,2-d]пиримидин-6-ил) метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамид (соединение 1). Получение раствора гидроксиламин метанола. Смесь NH2OH.HCl (80 г; 1,12 моль) в МеОН (400 мл) нагревали при 60-65 С в течение 1 ч до образования прозрачного раствора. Затем его охладили в бане с ледяной водой. К охлажденной смеси по каплям добавили раствор KOH (96 г; 1,68 моль) в МеОН (240 мл) при поддержании температуры реакции 010 С. Полученную смесь перемешивали при 0 С в течение 30 мин и затем профильтровали через воронку, наполненную безводным Na2SO4 (700 г), при постоянном давлении. Фильтрат собрали под действием ледяной бани и хранили в холодильнике для будущего использования. Получение соединения 1 из соединения 108-1. Соединение 108-1 (10 г; 19 ммоль) суспендировали в вышеупомянутом свежеприготовленном растворе гидроксиламин метанола (1,79 М; 350 мл). К этой смеси добавили дихлорметан (100 мл). Реакционную колбу запечатали, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 5 ч до того, как она превратилась в прозрачный раствор. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 9 ч и профильтровали, чтобы удалить все нерастворимые твердые вещества. рН фильтрата отрегулировали до значения 6-7, добавляя уксусную кислоту, до образования твердого осадка. Твердое вещество собрали фильтрованием, промыли водой и минимальным количеством метанола, высушили в вакууме при 60 С в течение 5 ч с получением соединения 1 в виде белого твердого вещества (9,2 г; 96%). т.пл. 177-180 С.LCMS: 509.3 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.24 (s, 3 Н), 3.76 (t, J= 5 Hz, 4H), 3.92 (t, J= 5 Hz,4H), 3.92 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 8.57 (dd, J = 8.8 Hz, 2.4Hz, 1H), 8.75 (s,2H), 9.01 (s, 1H), 9.14 (d, J=2.0Hz, 1H), 11.08 (s,lH). Получение соединения 1 из соединения 108-2. К суспензии соединения 108-2 (31 г; 61,1 ммоль) в дихлорметане (310 мл) при комнатной температуре добавили вышеупомянутый свежеприготовленный раствор гидроксиламин метанола (1,79 М; 744 мл). Реакционную колбу запечатали, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционная смесь превратилась в прозрачный раствор. Реакционный раствор профильтро- 24022434 вали, чтобы удалить любое нерастворимое твердое вещество. Затем к фильтрату добавили воду (310 мл) и во время добавления твердое вещество не образовалось. Добавили уксусную кислоту (18,5 мл) чтобы отрегулировать значение рН до 10,20 (под непрерывным контролем рН-метра) при перемешивании. Внутренняя температура не изменялась во время добавления уксусной кислоты. Полученную реакционную смесь продолжали перемешивать в течение следующих 4 ч. Постепенно образовывался белый твердый осадок. Суспензию профильтровали и промыли минимальным количеством метанола (100 мл 3). Собранное белое твердое вещество ресуспендировали в метаноле (620 мл) и воде (124 мл) до получения суспензии. К вышеуказанной суспензии дополнительно добавили уксусную кислоту (11 г) до получения значения рН 5-6. Наблюдалось изменение твердой формы. Суспензию продолжали перемешивать в течение следующих 2 часов, профильтровали через бумажный фильтр и промыли минимальным количеством метанола (100 мл 3). Собранное белое твердое вещество высушили в сушильном шкафу (50 С) в течение 12 час до получения титульного соединения 1 в виде белого твердого вещества (23,6 г; 76,0%). m. p.: 255-259C. LCMS (m/z): 509.3 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6): 5 3.24 (s, 3 Н), 3.76 (t, J= 5.2 Hz, 4H),3.92 (t, J= 5.2Hz, 4H), 3.92 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.91 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 8.57 (dd, J= 8.4Hz, 2.4Hz, 1H), 8.75 (s, 2H), 9.07 (s, 1H), 9.14 (d, J=2.4 Hz, 1H), 11.14 (s, 1H). Пример 2. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамид метансульфоната (соединение 2). Метод А. К смеси соединения 1 (300 мг; 0,59 ммоль) и MeOH/Et2O (3/1, 40 мл) добавили раствор метансульфоновой кислоты (114 мг; 1,18 ммоль) в МеОН (3 мл) при 0 С. Полученную смесь перемешивали при 0 С в течение 3 ч. Осадок собрали фильтрованием и промыли Et2O с получением соединения 2 в виде белого твердого вещества (260 мг; 73%). Метод В. К суспензии соединения 1 (1,5 г; 2,95 ммоль) в дихлорметане/ МеОН (40 мл/ 10 мл) добавили метансульфоновую кислоту (341 мг; 3,55 ммоль) в 2 мл МеОН при комнатной температуре (15 С) до образования прозрачного раствора. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционная смесь по-прежнему оставалась прозрачной. К смеси добавили этилацетат (40 мл) и продолжали перемешивать в течение 3 ч при комнатной температуре. Полученный осадок собрали фильтрованием с получением соединения 2 в виде белого твердого вещества (1,45 г; 83%). Т.пл.: 179-185 С. LCMS: 509.3 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):2.35 (s, 3 Н), 3.26 (s, 3 Н), 3.78(dd, J= 8.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 8.76 (s, 2H), 9.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 11.11 (br, 1H). Пример 3. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамида натриевой соли (соединение 3). К суспензии соединения 1 (300 мг; 0,59 ммоль) в метаноле (30 мл) при 0 С медленно добавили третBuONa (85 мг; 0,88 ммоль). Полученную смесь нагрели до комнатной температуры и продолжали перемешивать в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали, осадок измельчили и промыли этанолом,а затем профильтровали с получением соединения 3 в виде белого твердого вещества (230 мг; 73%). Т.пл.: 178-183 С. LCMS: 509.3 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.17 (s, 3 Н), 3.75 (s, 4H), 3.92 (s,7 Н), 5.16 (s, 2 Н), 6.90 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 8.57 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.65 (s, 2H), 9.14 (s, 1H). Пример 4. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамида калиевой соли (соединение 4). К смеси соединения 1 (400 мг; 0,78 ммоль) в метаноле (50 мл) добавили трет-BuOK (132 мг; 1,17 ммоль) при 0 С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 0 С в течение 1 ч и продолжали перемешивать при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Нерастворимое твердое вещество удалили фильтрованием, а фильтрат охладили до -20 С. Добавили к фильтрату Et2O (100 мл). Реакционную смесь перемешивали при -20 С в течение 1 ч. Добавили гексан (70 мл) и продолжали перемешивать смесь при -20 С в течение 2 часов. Твердое вещество собрали фильтрованием и высушили в вакууме с получением соединения 4 в виде белого твердого вещества (150 мг; 35%). Т.пл.: 174-179 С. LCMS: 509.3[М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz,DMSO-d6):3.16 (s, 3 Н), 3.74-3.76 (m, 4H), 3.90-3.93 (m, 7 Н), 5.15 (s, 2 Н), 6.90 (d, J= 8.4Hz, 1H), 7.43 (s,1H), 8.39 (br, 1H), 8.58 (d, J = 8.8Hz, 1H), 8.62 (s, 2H), 9.15 (s, 1H). Пример 5. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамида холиновой соли (соединение 5). К раствору соединения 1 (200 мг; 0,39 ммоль) в DCM/MeOH (60 мл/12 мл) добавили гидроксид холина (106 мг; 0,39 ммоль, 45% в МеОН). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч,а затем концентрировали, чтобы удалить 30 мл растворителя. Добавили этилацетат (60 мл) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. После появления небольшого количества осадка смесь концентрировали, чтобы удалить 40 мл растворителя, и дополнительно добавили этилацетат (60 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и профильтровали с получением соединения 5 в виде белого твердого вещества (180 мг; 76%). Т.пл.: 181-185 С. LCMS: 509.3[М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.11 (s, 9 Н), 3.17 (s, 3 Н), 3.40 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.75 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.84 Пример 6. Получение N-гидрокси-2-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-4-морфолинотиено[3,2-d]пиримидин-6-ил)метил)(метил)амино)пиримидин-5-карбоксамид сульфата (соединение 6). К суспензии соединения 1 (200 мг; 0,39 ммоль) в DCM/MeOH (30 мл/7,5 мл) добавили серную кислоту (77 мг; 0,79 ммоль, в 1 мл МеОН) с образованием прозрачного раствора. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Появлялся осадок, затем добавили третбутилметиловый эфир (60 мл). Полученную смесь продолжали перемешивать в течение 1 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собрали фильтрованием с получением соединения 6 в виде белого твердого вещества (180 мг; 76%). Т.пл.: 243-246 С. LCMS: 509.3 [М+1]+. 1 Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6):3.26 (s, 3H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.96 (s, 3H), 4.03 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 5.24 (s, 3H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.50 (s , 1H), 8.54 (dd, J = 8.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 8.76 (s, 2H), 9.12 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 11.06 (br.1H). Пример 7. Исследование активности PI3 киназы. Для определения способности соединения 1 ингибировать различные изоформы и мутанты PI3K были использованы следующие методы анализа.PI3K Активность PI3K была измерена с помощью люминесцентного метода анализа активности киназыADP-Glo. PI3K, комплекс из N-концевого GST-меченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 110 и немеченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 85 а был коэкспрессирован в инфицированной бакуловирусом Sf9 системе клеточной экспрессии (GenBank, инвентарный номер для p110 - U79143; для р 85 - ХМ 043865). Белки были очищены с помощью одностадийной аффинной хроматографии с использованием глутатион-агарозы. Был проведен конкурентный анализ, чтобы измерить количество АДФ, произведенного из АТФ, в присутствии очищенной рекомбинантной PI3K (p110/р 85) и PIP2. PI3K инкубировали с 20 мкМ PIP2 субстрата в рабочем буферном растворе (50 мМ HEPES, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 5 мМ MgCl2, 3 мкМ ортованадата Na, 1 мМ DTT, 10 мкМ высокой очистки АТФ и 0,5% DMSO) в течение 30 мин при 30 С. Затем количество полученного при реакции АДФ измеряли с помощью метода анализа ADP-Glo. Исследование проводили в два этапа; сначала добавили равный объем реактива ADP-GLO (Promega) для завершения киназной реакции и истощения оставшейся АТФ. На второй стадии добавили реагент для обнаружения киназы, который одновременно превращает АДФ в АТФ. Вновь синтезированную АТФ измерили с использованием совместной реакции люцифераза/люциферин. Значение IC50, определенное для соединения 1 в этом анализе, составляло менее 100 нМ. С помощью описанного выше общего метода также была определена способность соединения 1 ингибировать мутанты PI3K - H1047R и Е 545K. Значение IC50, определенное для обоих мутантов, оказалось 100 нм.PI3K Активность PI3K была измерена с помощью метода резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) с использованием флуоресцентной технологии (HTRF) с временным разрешением. PI3K, комплекс из N-концевого гистидин-меченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 110 и немеченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 85 был коэкспрессирован в инфицированной бакуловирусом Sf21 системе клеточной экспрессии (GenBank, инвентарный номер для р 110 - NM006219; для р 85 - ХМ 043865). Белки были очищены с помощью одностадийной аффинной хроматографии с использованием глутатион-агарозы. Был проведен конкурентный анализ, чтобы измерить количество АДФ, получаемой из АТФ, в присутствии очищенной рекомбинантной PI3Kбета (p110/p85). PI3K инкубировали с 10 мкМ PIP2 субстрата в рабочем буферном растворе (20 мМ HEPES, рН 7; 10 мМ NaCl, 4 мМ MgCl2, 2 мМ DTT, 10 мкМ АТР и 1% DMSO) в течение 30 мин при 30 С. Затем продукт реакции смешали с PIP3 детекторным белком, меченым европием антителом, биотин-меченым PIP3-образцом и аллофикоцианин-меченым стрептавидином. Образуется сенсорный комплекс, генерирующий стабильный TR-FRET сигнал в реакционной смеси. Интенсивность этого сигнала уменьшается, так как PIP3, который вырабатывается при ферментативной активности, заменяет связывание биотин-меченого образца с PIP3-детектором, и количество несвязанного биотинмеченого PIP3 образца в смеси увеличивается. Сигнал TR-FRET определяли с помощью ридера для микропланшетов (фоновое значение вычитали). Значение IC50, определенное для соединения 1 в этом исследовании, составляло от 100 до 1000 нМ.PI3K Активность PI3K была измерена с помощью метода флуоресцентной поляризации. PI3K, комплекс из N-концевого гистидин-меченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 110 и немеченого рекомбинантного полноразмерного человеческого р 85 был коэкспрессирован в инфицированной бакуловирусом Sf9 системе клеточной экспрессии. (GenBank, инвентарный номер для p110 NM005026). Белки очищали с помощью одностадийной аффинной хроматографии с использованием глутатион-агарозы. Был проведен конкурентный анализ, чтобы измерить количество PIP3, произведенного из PIP2, в присутствии очищенной рекомбинантной PI3K (р 110/р 85). PI3K инкубировали с 10 мкМ PIP2 субстрата в рабочем буферном растворе (20 мМ HEPES (рН 7,5), 10 мМ NaCl, 4 мМ MgCl2, 2 мМ DTT, 10 мкМ АТР и 1% DMSO) в течение 1 ч при 30 С. Затем продукт реакции смешали с PIP3 детекторным белком и флуоресцентным PIP3 образцом. Величина поляризации (mP) уменьшается, так как связывание флуоресцентного образца с PIP3 -детектором заменяется PIP3, который вырабатывается при ферментативной активности, и количество несвязанного флуоресцентного образца в смеси увеличивается. Величину поляризации (mP) определяли с помощью ридера для микропланшетов (фоновое значение вычитали). Значение IC50, определенное для соединения 1 в этом исследовании, составляло меньше чем 100 нМ.PBK Активность PI3K была измерена с помощью метода резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) с использованием флуоресцентной технологии (HTRF) с временным разрешением. N-концевая гистидин-меченая человеческая PI3K была экспрессирована в инфицированной бакуловирусом Sf9 системе клеточной экспрессии (GenBank, инвентарный номер AF327656). Белки были очищены с помощью одностадийной аффинной хроматографии с использованием глутатионагарозы. Был проведен конкурентный анализ, чтобы измерить количество PIP3, произведенное из PIP2 в присутствии очищенной рекомбинантной PI3K (р 120). PI3K (2 нМ) инкубировали с 10 мкМ PIP2 субстрата в рабочем буферном растворе (20 мМ HEPES, рН 7,5; 10 мМ NaCl, 4 мМ MgCl2, 2 мМ DTT, 10 мкМ АТР и 1% DMSO) в течение 30 мин при 30 С. Затем продукт реакции смешали с PIP3 детекторным белком, меченым европием антителом, биотин-меченым PIP3-образцом и аллофикоцианин-меченым стрептавидином. Образуется сенсорный комплекс, генерирующий стабильный TR-FRET сигнал в реакционной смеси. Интенсивность этого сигнала уменьшается, так как PIP3, который вырабатывается при ферментативной активности, заменяет связывание биотин-меченого образца с PIP3-детектором, и количество несвязанного биотин-меченого PIP3 образца в смеси увеличивается. Сигнал TR-FRET определяли с помощью ридера для микропланшетов (фоновое значение вычитали). Значение IC50, определенное для соединения 1 в этом исследовании, составляло от 100 до 1000 нМ. Пример 8. Исследование активности HDAC.HDAC-ингибирующая активность была оценена с помощью системы Biomol Color de Lys system(AK-500, Biomol, Plymouth Meeting, PA). Вкратце, ядерные экстракты клеток HeLa использовали в качестве источника HDAC. Разные концентрации исследуемых соединений получали путем серийного разведения в диметилсульфоксиде (DMSO) и добавляли к ядерным экстрактам клеток HeLa в присутствии колориметрического искусственного субстрата. Конечный образец для анализа содержал 50 мМ Трис/Cl,рН 8,0; 137 мМ NaCl, 2.7 мМ KCl и 1 мМ MgCl2. Реакции проводили при комнатной температуре (25 С) в течение 1 ч до добавления проявителя для завершения. Относительная активность ферментов была измерена с помощью микропланшетного ридера WALLAC Victor II 1420 в виде интенсивности флуоресценции (возбуждение: 350-380 нм; излучение: 440-460 нм). Данные были проанализированы с помощьюGraphPad Prism (v4.0a) с использованием сигмоидальной кривой доза-эффект, подходящей для вычисления IC50. Значение IC50, определенное для соединения 1 в этом исследовании, было меньше чем 100 нМ. Также была определена активность соединения 1 в отношении изотипов HDAC. Исследования специфичности HDAC проводили с помощью прибора BPS Bioscience (San Diego, CA), следуя стандартной методике работы. Вкратце, очищенные flag- (человеческая HDAC-1), NCOR2- (человеческая HDAC3),GST- (человеческие HDAC4, 6, 7, 10 и 11) или His- (человеческие HDAC 2, 5, 8 и 9) меченые ферменты были экспрессированы в клетках Sf9 насекомого и очищены перед использованием. Используемым субстратом для HDAC1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 и 11 служил HDAC субстрат 3, разработанный компанией BPS Bioscience. Для других HDAC ферментов использовали субстрат HDAC Класс 2 а. Все ферментативные реакции проводили в двух повторах при 37 С в течение 30 мин, за исключением ферментного анализаHDAC11, который проводили при комнатной температуре в течение 3 ч. Таблица ниже показывает результаты для каждой из HDAC 1-11, с указанными далее значениями Пример 9. Исследование клеточной пролиферации. Линии клеток рака человека получали из Американской коллекции типовых культур (Манасса,Вирджиния) и высевали в количестве от 5000 до 10000 на лунку в 96-луночные плоскодонные планшеты с культуральной средой, согласно рекомендации поставщика. Затем клетки инкубировали с соединениями в различных концентрациях в течение 72 ч в культуральной среде с добавлением 0,5% (об./об.) эмбриональной бычьей сыворотки (FBS). Ингибирование роста оценивали с помощью метода анализа содержания аденозинтрифосфата (АТР), используя набор Promega CellTiter-Glo. Набор Promega CellTiterGlo представляет собой систему регистрации АТФ с использованием люциферазы светлячков. Вкратце,чтобы лизировать клетки и стабилизировать АТФ, в лунку с 84 мкл культуральной среды добавили 16 мкл лизированных клеток (cell lisis) млекопитающего и субстратного раствора. Смесь встряхивали и ин- 27022434 кубировали в течение 30 минут, после этого была измерена люминесценция. Значения IC50 вычисляли с помощью программного обеспечения PRISM (GraphPad Software) с использованием сигмоидальной кривой доза-эффект. Таблица 1 показывает антипролиферативную активность в этих анализах с использованием клеток соединения 1 и контрольных соединений SAHA, GDC-0941 и комбинации SAHA и GDC-0941. В этих анализах использовали следующее обозначение: I10,000 нМ, 10,000 нМII1000 нМ, 1000 нМIII100 нМ, 100 нМIV10 нМ и V10 нт для IC50. Таблица 1a. Соединение 1 в 30% каптисоле (10 мг/мл). Во флакон, содержащий соединение 1 (10 мг), добавили 30% каптисол (0,937 мл). Смесь обрабатывали ультразвуком в течение 2 мин. К смеси добавили гидроксид натрия (1 N; 39,3 мкл; 2 экв.) и обрабатывали ультразвуком, перемешивая на вортексе, до получения прозрачного раствора (рН 12). Затем регулировали значение рН раствора до 10 с помощью соляной кислоты (1N; 23,6 мкл; 1,2 экв.).b. Соединение 1 в 30% каптисоле (7,5 мг/мл). Во флакон, содержащий соединение 1 (7,5 мг), добавили 30% каптисол (0,941 мл). Смесь обрабатывали ультразвуком в течение 2 мин. К смеси добавили гидроксид натрия (1 N; 29,5 мкл; 2 экв.) и обрабатывали ультразвуком, перемешивая на вортексе, до получения прозрачного раствора (рН 12). Затем регу- 28022434 лировали значение рН раствора до 5 с помощью соляной кислоты (1N; 29,5 мкл; 2 экв.).(40 мг) добавили Н 2 О (0,88 мл) и NaOH (1 N, 24,6 мкл; 2,5 экв.). Смесь обрабатывали ультразвуком и перемешивали на вортексе до получения прозрачного раствора, затем регулировали значение рН раствора до 10 с помощью HCl (1N; 7,4 мкл; 0,75 экв.). Пример 11. Исследование фармакокинетики и фармакодинамики на мышах-опухоленосителях. Бестимусные мыши с опухолью Н 2122. Для фармакокинетических исследований использовали бестимусных мышей с ксенотрансплантатом опухоли Н 2122 (линия клеток немелкоклеточного рака легкого человека). Составляли смесь соединения 1 в воде с деканоатом натрия и PEG400 (5 мг/мл) и вводили перорально (РО) через зонд каждому животному в дозе 50 мг/кг. В разные моменты времени после введения соединения подвергали эвтаназии с использованием СО 2 трех мышей (на временную точку) и брали для анализа кровь и опухолевые ткани. Кровь собирали в пробирки, содержащие гепарин натрий. Плазму отделяли центифугированием. Плазму и ткани хранили при -80 С для последующих анализов. Для анализа концентраций соединения в плазме и опухолевых тканях использовали систему РЕ Sciex API-3000 LC-MS/MS (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Результаты этого исследования суммированы на фиг. 1 и в табл. 2, ниже. Фиг. 1 - график концентрации соединения 1 в плазме и опухолевой ткани в зависимости от времени после перорального введения. Результаты показывают, что соединение 1 преимущественно накапливается в опухолевой ткани. Это подтверждается результатами, представленными в табл. 3, которые показывают значительно более длительный период полужизни соединения 1 в опухолевой ткани, чем в плазме, а также значительно большее время воздействия (экспозицию) соединения 1 (AUC) на опухолевую ткань. Таблица 2 Мыши SCID с опухолями Дауди. Клетки Дауди (линия клеток неходжкинской лимфомы) прививали самкам мышей Scid (мыши с тяжелым комбинированным иммунодефицитом). После образования опухолей животным вводили перорально с помощью зонда 25, 50 или 100 мг/кг соединения 1, в 30% каптисоле, рН 10, при концентрации 1,875; 3,75 или 7,5 мг/мл, соответственно. В разные моменты времени после введения соединения подвергали эвтаназии с использованием СО 2 трех мышей на каждую временную точку и брали для анализа кровь и опухолевые ткани. Кровь собирали в пробирки, содержащие гепарин натрий. Плазму отделяли центифугированием. Плазму и ткани хранили при -80 С для последующих анализов. Для анализа концентраций соединения в плазме использовали систему РЕ Sciex API-3000 LC-MS/MS (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Результаты этого исследования суммированы на фиг. 2 А, 2 В и 2 С и в табл. 3, ниже. Фиг. 2 А представляет собой график концентрации соединения 1 в плазме в зависимости от времени после перорального введения и показывает, что воздействие соединения зависит от дозы. Фиг. 2 В представляет собой график концентрации соединения 1 в опухолевой ткани в зависимости от времени после перорального введения. Результаты показывают, что соединение 1 преимущественно накапливается в опухолевой ткани дозо-зависимым образом. Концентрации в плазме и опухоли после введения дозы 100 мг/кг сравниваются на фиг. 2 С, которая показывает, что опухолевая ткань преимущественно поглощает соединение 1. Это подтверждается результатами, представленными в табл. 3, которые показывают значительно более длительный период полужизни соединения 1 в опухолевой ткани, чем в плазме, а также значительно большее время воздействия (экспозицию) соединения 1 (AUC) на опухолевую ткань. Таблица 3

МПК / Метки

МПК: A61K 31/535

Метки: цинксвязывающий, фрагмент, фосфоинозитид-3-киназы, содержащий, ингибитор

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/30-22434-ingibitor-fosfoinozitid-3-kinazy-soderzhashhijj-cinksvyazyvayushhijj-fragment.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Ингибитор фосфоинозитид-3-киназы, содержащий цинксвязывающий фрагмент</a>

Похожие патенты