Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (ahas) (варианты), растение, не встречающееся в природе, и его семена, способ борьбы с сорняками, способ получения трансгенного растения, толерантного к соединениям, ингибирующим ahas, способ идентификации или отбора клетки растения, ткани растения или растения или части растения, способ предотвращения нежелательного вегетативного роста и способ идентификации растения

Номер патента: 21541

Опубликовано: 30.07.2015

Авторы: Мэкэлвер Джон А., Зинг Биджай

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), кодирующий полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL) с аминокислотными замещениями, выбранный из:

a) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

b) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

c) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2;

d) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту-, изолейцин-, лейцин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2;

e) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2;

f) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и гистидин-замещение в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2;

g) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и метионин-замещение в положении, соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2;

h) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2;

i) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и валин-замещение в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398 SEQ ID NO: 2;

j) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2;

k) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин- или замещение аспарагиновой кислотой в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413 SEQ ID NO: 2;

l) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и замещение глутаминовой кислотой в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2;

m) полипептида, имеющего глутаминовую кислоту-, изолейцин-, лейцин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

n) полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

о) полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 375 SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2;

р) полипептида, имеющего аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

q) полипептида, имеющего аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

r) полипептида, имеющего валин-, цистеин-, аспарагиновую кислоту-, глутаминовую кислоту-, аргинин-, треонин-, триптофан- или тирозин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

s) полипептида, имеющего любое аминокислотное замещение в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и

t) полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2,

причем указанный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид растения, которое выбрано из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства зерновых.

2. Полинуклеотид по п.1, кодирующий полипептид AHASL, выбранный из:

а) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

b) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2;

c) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

d) полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

e) полипептида, имеющего валин-, цистеин-, аспарагиновую кислоту-, глутаминовую кислоту-, аргинин-, треонин-, триптофан- или тирозин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

f) полипептида, имеющего любое аминокислотное замещение в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

3. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ IDNO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

4. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

5. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2.

6. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2.

7. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2.

8. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2.

9. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

10. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий валин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

11. Полинуклеотид по п.2, кодирующий полипептид AHASL, имеющий лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

12. Полинуклеотид по любому из пп.1-11, в котором указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб, и растение, выбранное из членов семейства зерновых, представляет собой кукурузу.

13. Растение, не встречающееся в природе, толерантное к гербицидам, ингибирующим AHAS, и содержащее полинуклеотид по любому из пп.1-12, являющийся трансгенным или мутантным, где растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства зерновых.

14. Растение по п.13, где растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб, и растение, выбранное из членов семейства зерновых, представляет собой кукурузу.

15. Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), кодирующий полипептид AHASL с аминокислотными замещениями, выбранный из группы, включающей:

а) полипептид, имеющий валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

b) полипептид, имеющий валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

c) полипептид, имеющий валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

d) полипептид, имеющий глутаминовую кислоту-, изолейцин-, лейцин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

e) полипептид, имеющий лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 95 SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, замещение глутаминовой кислотой в положении, соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и

f) полипептид, имеющий серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и замещение любой аминокислотой в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2,

причем указанный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид растения, которое выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства зерновых.

16. Полинуклеотид по п.15, где указанный полинуклеотид кодирует полипептид AHASL, выбранный из:

a) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

b) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин-, аспарагин-, треонин-, глицин-, валин-, изолейцин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2;

c) полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2;

d) полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-, глутаминовую кислоту-, серин-, фенилаланин-, треонин-, аспарагиновую кислоту-, цистеин- или аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и замещение любой аминокислотой в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2.

17. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

18. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

19. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

20. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.

21. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2.

22. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2.

23. Полинуклеотид по п.16, где указанный полинуклеотид кодирует AHASL полипептид, имеющий лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин-замещение в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и лейцин-замещение в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2.

24. Полинуклеотид по любому из пп.15-23, в котором растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб, и указанное растение, выбранное из членов семейства зерновых, представляет собой кукурузу.

25. Полипептид AHASL, кодируемый полинуклеотидом по одному из пп.1-12 и 15-24.

26. Растение, не встречающееся в природе, толерантное к гербицидам, ингибирующим AHAS, и содержащее полинуклеотид по любому из пп.15-24, являющийся трансгенным или мутантным, где указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства зерновых.

27. Растение по п.26, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб, и растение, выбранное из членов семейства зерновых, представляет собой кукурузу.

28. Семена, полученные от растения по любому из пп.13, 14, 26 и 27, где семена содержат полинуклеотид, кодирующий AHASL, по любому из пп.1-12 и 15-24.

29. Семена по п.28, где указанные семена обработаны гербицидом, ингибирующим AHAS.

30. Семена по п.29, где гербицид, ингибирующий AHAS, представляет собой один или более из следующих гербицидов: имидазолиноновый гербицид, сульфонилмочевинный гербицид, триазолпиримидиновый гербицид и пиримидинилоксибензоатный гербицид.

31. Семена по п.30, где гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолиноновый гербицид.

32. Семена по п.30, где имидазолиноновый гербицид представляет собой один или более из следующих гербицидов: имазетапир, имазапик, имазамокс и имазапир.

33. Способ борьбы с сорняками в районе произрастания сельскохозяйственных культур, включающий:

i) посев в поле семян по п.28 и выращивание из них сельскохозяйственных культур;

ii) внесение эффективного количества гербицидной композиции, содержащей имидазолиноновый гербицид, сульфонилмочевинный гербицид или их смеси, под сорняки и сельскохозяйственные культуры в поле для борьбы с сорняками.

34. Способ получения трансгенного растения, толерантного к соединениям, ингибирующим AHAS, включающий следующие стадии:

i) трансформация растительных клеток экспрессионным вектором, включающим полинуклеотид по любому из пп.1-12 и 15-24; и

ii) регенерация из растительной клетки трансгенного растения, экспрессирующего AHASL мутантный полипептид.

35. Способ идентификации или отбора клетки растения, ткани растения или растения или части растения, содержащих полинуклеотид по любому из пп.1-12, 15-24, включающий:

i) получение клетки растения, ткани растения или растения или его части;

ii) приведение полученной клетки растения, ткани растения или растения или его части в контакт по меньшей мере с одним гербицидом, ингибирующим AHAS;

iii) определение того, повреждены ли клетка растения, ткань растения или растение или его часть указанным гербицидом, причем, если клетка растения, ткань растения или растение или его часть не повреждены указанным гербицидом или повреждены в меньшей степени, чем соответствующие клетки растения, ткань растения или растение или его часть дикого типа, которые приводили в контакт с гербицидом, ингибирующим AHAS, делается вывод, что клетки растения, ткани растения или растения или его часть содержат полинуклеотид по любому из пп.1-12 и 15-24.

36. Способ получения толерантного к гербициду, ингибирующему AHAS, растения, включающий скрещивание первого растения, которое толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, со вторым растением, которое не толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, отличающийся тем, что первое растение является растением по любому из пп.13, 14, 26 и 27, и отбор растения-потомка, которое устойчиво к указанному гербициду.

37. Способ предотвращения нежелательного вегетативного роста, включающий обработку семян растений по любому из пп.13, 14, 26 и 27 перед посевом и/или после предварительного проращивания гербицидом, ингибирующим AHAS.

38. Способ по любому из пп.33-37, в котором гербицид, ингибирующий AHAS, представляет собой один или более из следующих гербицидов: имидазолиноновый гербицид, сульфонилмочевинный гербицид, триазолпиримидиновый гербицид, пиримидинилоксибензоатный гербицид.

39. Способ по п.37, в котором гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолиноновый гербицид.

40. Способ идентификации растения по любому из пп. 13, 14, 26 и 27, включающий:

(A) получение биологического материала из растения;

(B) проведение PCR исследования или исследования ингибирования генов большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL) в указанном биологическом материале для определения того, содержит ли биологический материал полинуклеотид по любому из пп.1-12 и 15-24; и

(C) определение на основании результатов на стадии (В), является ли растение со стадии (А) растением, содержащим полинуклеотид по любому из пп.13, 14, 26 и 27.

41. Способ по п.40, где указанный биологический материал представляет собой семена растения.

Текст

Смотреть все

Изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим мутанты большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы, содержащей две мутации, например двойной или тройной мутанты, которые пригодны для получения трансгенного или нетрансгенного растения с повышенным уровнем устойчивости к AHAS-ингибирующим гербицидам. Изобретение также относится к экспрессионным векторам, клеткам, растениям, содержащим полинуклеотиды,кодирующие двойной или тройной мутанты большой субъединицы AHAS, к растениям,содержащим два или более единичных мутантов полипептида большой субъединицы AHAS, а также к способу их получения и применения.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: БАСФ ПЛАНТ САЙЕНС ГМБХ (DE) РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИЛИ МУТАНТНЫЙ ПОЛИНУКЛЕОТИД ДЛЯ ПРИДАНИЯ РАСТЕНИЯМ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ГЕРБИЦИДАМ, ИНГИБИРУЮЩИМ АЦЕТОГИДРОКСИКИСЛОТНУЮ СИНТАЗУ (AHAS) (ВАРИАНТЫ), РАСТЕНИЕ,НЕ ВСТРЕЧАЮЩЕЕСЯ В ПРИРОДЕ, И ЕГО СЕМЕНА, СПОСОБ БОРЬБЫ С СОРНЯКАМИ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННОГО РАСТЕНИЯ,ТОЛЕРАНТНОГО К СОЕДИНЕНИЯМ, ИНГИБИРУЮЩИМ AHAS, СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИЛИ ОТБОРА КЛЕТКИ РАСТЕНИЯ, ТКАНИ РАСТЕНИЯ ИЛИ РАСТЕНИЯ ИЛИ ЧАСТИ РАСТЕНИЯ, СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ НЕЖЕЛАТЕЛЬНОГО ВЕГЕТАТИВНОГО РОСТА И СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ РАСТЕНИЯ Область изобретения Настоящее изобретение относится в целом к композициям и способам повышения устойчивости растений к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу. Предпосылки к созданию изобретения Ацетогидроксикислотная синтаза (AHAS; ЕС 4.1.3.18, также известная как ацетолактатная синтаза или ALS), является первым ферментом, который катализирует биохимический синтез разветвленных цепей аминокислот валина, лейцина и изолейцина (Singh (1999), "Biosynthesis of valine, leucine and isoleucine", in Plant Amino Acids, Singh, B.K., ed., Marcel Dekker Inc. New York, New York, p. 227-247). AHAS является местом приложения действия четырех структурно различных семейств гербицидов, включающих сульфонилмочевины (Tan et al. (2005), Pest Manag. Sci. 61:246-57; Mallory-Smith and Retzinger (2003),Weed Technology, 17:620-626; LaRossa and Falco (1984), Trends Biotechnol. 2:158-161), имидазолиноны(Shaner et al. (1984), Plant Physiol. 76:545-546), триазолпиримидины (Subramanian and Gerwick (1989),"Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines", в Biocatalysis in Agricultural Biotechnology,Whitaker, J.R. and Sonnet, P.E. eds., ACS Symposium Series, American Chemical Society, Washington, D.C.,p. 277-288) и пиримидинилоксибензоаты (Subramanian et al. (1990), Plant Physiol. 94:239-244). Имидазолиноновые и сульфонилмочевинные гербициды широко используются в современном сельском хозяйстве благодаря их эффективности при очень низкой дозе внесения и относительной нетоксичности для животных. Ингибируя активность AHAS, эти семейства гербицидов предотвращают дальнейший рост и развитие восприимчивых растений, включая многие виды сорняков. Примерами коммерчески доступных имидазолиноновых гербицидов являются PURSUIT (имазетапир), SCEPTER (имазахин) иARSENAL (имазапир). Примерами сульфонилмочевинных гербицидов являются хлорсульфурон, метсульфурон метил, сульфометурон метил, хлоримурон этил, тиофенсульфурон метил, трибенурон метил,бенсульфурон метил, никосульфурон, этаметилсульфурон метил, римсульфурон, трифлусульфуронметил, триасульфурон, примисульфурон метил, циносульфурон, амидосульфурон, флузасульфурон, имазосульфурон, пиразосульфурон этил и галосульфурон. Благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности имидазолиноновые гербициды благоприятны для применения путем опрыскивания наземной части растений в широкий период вегетации. Возможность опрыскивания гербицидом наземной части растений в широкий период вегетации снижает расходы, связанные с приживаемостью и сохранением растений, и уменьшает необходимость предварительной подготовки перед использованием таких химикатов. Опрыскивание наземной части растений желаемых толерантных видов в результате также позволяет достичь максимального потенциального выхода желаемых видов растений вследствие отсутствия конкурентных видов. Однако возможность использования таких методик распыления зависит от наличия устойчивых к имидазолинону видов желаемых растений в области распыления. Среди большого разнообразия сельскохозяйственных зерновых культур некоторые виды бобовых,такие как соя, являются природно устойчивыми к имидазолиноновым гербицидам вследствие их способности к быстрому метаболизму гербицидных соединений (Shaner and Robinson (1985), Weed Sci. 33:469471). Другие зерновые, такие как кукуруза (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886) и рис(Barrett et al. (1989), Crop Safeners for Herbicides, Academic Press, New York, p. 195-220), являются до некоторой степени чувствительными к имидазолиноновым гербицидам. Различная чувствительность к имидазолиноновым гербицидам зависит от химической природы отдельного гербицида и различного метаболизма соединения из токсичной в нетоксичную форму в каждом растении (Shaner et al. (1984),Plant Physiol. 76:545-546; Brown et al. (1987), Pestic. Biochem. Physiol. 27:24-29). Другие физиологические различия растений, такие как поглощение и передвижение веществ в растении, также играют важную роль в чувствительности (Shaner and Robinson (1985), Weed Sci. 33:469-471). Устойчивость растений к имдазолинонам, сульфонилмочевинам, триазолопиримидинам и пиримидинилоксибензоатам можно с успехом создать, используя мутагенез семян, микроспор, пыльцы и каллюса в Zea mays, Arabidopsis thaliana, Brassica napus (например, канола) Glycine max, Nicotiana tabacum, сахарной свеклы (Beta vulgaris) и Oryza sativa (Sebastian et al. (1989), Crop Sci. 29:1403-1408; Swanson et al.,1989, Theor. Appl. Genet. 78:525-530; Newhouse et al. (1991), Theor. Appl. Genet. 83:65-70; Sathasivan et al.Theor. Appl. Genet. 96:612-620; патент США 5545822). Во всех случаях единственный частично доминантный ядерный ген обеспечивает устойчивость. Четыре устойчивых к имидазолинону растения пшеницы были предварительно выделены с последующим мутагенезом семян из Triticum aestivum L. cv.Fidel (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886). Исследование наследственности подтверждает,что единственный частично доминантный ген обеспечивает устойчивость. На основании изучения аллелей авторы делают вывод, что мутации в четырех идентифицированных линиях были расположены в одном и том же локусе. Один из резистентных генов культурного сорта растения Fidel был обозначенFS-4 (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886). Компьютерное моделирование трехмерных конформаций комплекса AHAS-ингибитор предсказало различные аминокислоты в предполагаемых местах связывания ингибитора, как в местах, где индуциро-1 021541 ванные мутации будут, вероятно, обеспечивать селективную устойчивость к имидазолинонам (Ott et al.(1996), J. Mol. Biol. 263:359-368). Растения табака, полученные с некоторыми из этих рационально обозначенных мутаций в предполагаемых местах связывания фермента AHAS, фактически имели выраженную специфическую устойчивость к единственному классу гербицидов (Ott et al. (1996), Mol. Biol. 263:359-368). Растения, устойчивые к имидазолиноновым гербицидам, также описаны в ряде патентов США 4761373, 5331107, 5304732, 6211438, 6211439 и 6222100, особенно описывается использование измененного гена AHAS для вызывания устойчивости к гербицидам в растениях и особенно описываются некоторые устойчивые к имидазолинону линии кукурузы. В патенте США 5013659 раскрыты растения, проявляющие устойчивость к гербицидам вследствие мутации по меньшей мере одной аминокислоты в одной или более консервативной области. Описанные мутации кодируют либо перекрестную устойчивость к имидазолинонам и сульфонилмочевинам, либо специфическую устойчивость к сульфонилмочевине, но специфическая устойчивость к имидазолинону не описана. В патентах США 5731180 и 5767361 обсуждается выделенный ген, имеющий единичное аминокислотное замещение в аминокислотной последовательности AHAS односемядольного растения дикого типа, которое дает в результате специфическую устойчивость к имидазолинону. Кроме того, растения риса, устойчивые к гербицидам, которые препятствуют AHAS, были получены путем воспроизведения мутации и также выбора культур клеток тканей. См. патенты США 5545822, 5736629, 5773703, 5773704, 5952553 и 6274796. В растениях, как и во всех других исследованных организмах, фермент AHAS содержит две субъединицы: большую субъединицу (каталитическая роль) и малую субъединицу (регуляторная роль)(Duggleby and Pang (2000), J. Biochem. Mol. Biol. 33:1-36). Большая субъединица AHAS (также обозначенная здесь как AHASL) может быть кодирована с помощью единичного гена, как в случае Arabidopsis,и сахарной свеклы или с помощью множества членов семейства генов, как в маисе, каноле и хлопке. Специфические единичные нуклеотидные замещения в большой субъединице обеспечивают ферменту степень устойчивости к одному или более классам гербицидов (Chang and Duggleby (1998), Biochem. J. 333:765-777). Например, хлебная пшеница, Triticum aestivum L., содержит три гомологичных гена большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы. Каждый из генов проявляет значительную экспрессию, основанную на ответе гербицида и биохимических данных из мутантов в каждом из трех генов (Ascenzi et al.(2003), International Society of Plant Molecular Biologists Congress, Barcelona, Spain, Ref. No. S10-17). Кодирующие последовательности всех трех генов разделяют обширную гомологию на нуклеотидном уровне (WO 03/014357). Секвенированием генов AHASL из различных сортов Triticum aestivum было найдено, что молекулярной основой толерантности к гербицидам в большинстве IMI-толерантных (имидазолинон-толерантных) линий является мутация S653(At)N, характеризующаяся замещением аспарагина на серин в положении, эквивалентном аминокислоте 653 в Arabidopsis thaliana (WO 03/01436;WO 03/014357). Эта мутация обусловлена единичным нуклеотидным полиморфизмом (SNP) в последовательности ДНК, кодирующей белок AHASL. Также известно, что множество генов AHASL встречается в двудольных видах растений. Ранее,Kolkman et al. 2004), Theor. Appl. Genet. 109:1147-1159) описали идентификацию, клонирование и секвенирование трех генов AHASL (AHASL1, AHASL2 и AHASL3) из устойчивых к гербицидам и дикого типа генотипов подсолнечника (Helianthus annuus L.). Kolkman et al. сообщали, что устойчивость к гербицидам была обусловлена либо Pro197Leu (использованы номенклатурные положения аминокислотAHASL Arabidopsis) замещением или Ala205Val замещением в белке AHASL1 и что каждое из этих замещений обеспечивает устойчивость и к имидазолиноновым, и к сульфонилмочевинным гербицидам. Известно, что единичные мутации в большой субъединице AHAS приводят к толерантности или устойчивости к гербицидам (Duggleby et al. (2000), Journal of Biochem and Mol. Bio. 33:1-36; Jander etal.(2003), Plant Physiology, 131:139-146). Например, замещение аланина на валин в положении 122AHASL Arabidopsis (или аланина на треонин в положении, соответствующем положению 100 AHASL дурнишника) определяет устойчивость к имидазолинону и сульфомочевинам. Замещение метионина на глутаминовую кислоту или изолейцин в положении 124 AHASL Arabidopsis определяет устойчивость к имидазолинону и сульфомочевинам. Замещение пролина на серин в положении 197 AHASL Arabidopsis(или пролина на аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 192 AHASL дрожжей) определяет устойчивость к имидазолинонам, сульфомочевинам и триазолопиримидину. Замещение аргинина на аланин или глутаминовую кислоту в положении 199 AHASL Arabidopsis определяет устойчивость к имидазолинону. Замещение аланина на валин в положении 205 AHASL Arabidopsis (или аланина на цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин, треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 200 AHASL дрожжей) определяет устойчивость к имидазолинонам и сульфомочевинам. Замещение почти любой аминокислоты на тиртофан в положении 574 AHASL Arabidopsis, соответствующем положению 586 AHASL дрожжей, определяет устойчивость к имидазолинонам, сульфомочевинам,триазолопиримидину и пиримидилоксибензоатам. Замещение серина на фенилаланин, аспарагин или тронин в положении 653 AHASL Arabidopsis определяет устойчивость к имидазолинонам и пиримиди-2 021541 локсибензоатам. В патентах США 5853973, 5928937 и 6576455 раскрыты основанные на структурном моделировании способы получения вариантов AHAS, которые включают аминокислотные замещения в особых положениях, отличающихся от положений, описанных выше. В Mourad et al. (1992), Planta, 188; 491-497 показано, что мутантные линии, устойчивые к сульфомочевинам, являются перекрестно устойчивыми к триазолопиримидину, а мутантные линии, устойчивые к имидазолинонам, являются перекрестно устойчивыми к пиримидилоксибензоатам. В патенте США 5859348 описан двойной мутант большой субъединицы AHAS сахарной свеклы,имеющий замещение аланина на треонин в положении 113 и замещение пролина на серин в положении 188 аминокислотной последовательности. Растения сахарной свеклы, содержащие двойной мутант белкаAHAS, описаны как устойчивые и к имидазолинону, и к сульфомочевине. В Mourad et al. (1994), Mol. Gen. Genet. 242:178-184 описан двойной мутант AHAS Arabidopsis, обозначенный как csr1-4. Мутант AHAS csr1-4 содержит замещение С на Т в положении 589 нуклеотидной последовательности (соответствующее замещению пролина на серин в положении 197 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis) и замещение G на А в положении 589 нуклеотидной последовательности (соответствующее замещению серина на треонин в положении 653 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis). В Lee et a (1988), EMBO Journal, 7:1241-1248 описан двойной мутант AHAS табака, обозначенный как S4-Hra, который содержит замещение Pro-Ala в положении 196 аминокислотной последовательностиArabidopsis) и замещение Trp-Leu в положении 573 аминокислотной последовательности (соответствующее замещению в положении 574 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis). Трансгенные линии, содержащие двойные генетические мутации, демонстрируют устойчивость к сульфомочевинному гербициду. В патенте США 7119256 описаны двойные мутанты большой субъединицы AHAS риса, имеющие замещение триптофана на лейцин в положении 548 аминокислотной последовательности и замещение серина на изолейцин в положении 627 аминокислотной последовательности. Трансгенные растения риса, экспрессирующие полинуклеотид, кодирующий эти двойные мутанты белка AHAS, демонстрировали повышенную устойчивость к пиримидинкарбоксигербицидам, биспирибак-натрию. Благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности имидазолиноновые гербициды благоприятны для сельскохозяйственного использования. Однако возможность использования имидазолиноновых гербицидов в определенных системах производства зерновых зависит от наличия устойчивых к имидазолинону сортов интересующих зерновых культур. Для получения таких устойчивых к имидазолинону сортов остается потребность в зерновых культурах, содержащих мутант полипептида AHAS, которые демонстрируют улучшенную устойчивость к имидазолинонам и/или другим AHAS-ингибирующим гербицидам по сравнению с зерновыми культурами с существующими AHAS мутантами. Несмотря на то что некоторые AHAS мутанты были охарактеризованы, остается потребность в мутантах полипептида AHAS, которые при экспрессии в интересующих зерновых культурах определяют продемонстрированную улучшенную устойчивость к одному или более классам AHAS-ингибирующих гербицидов по сравнению с существующими AHAS мутантами в зерновых культурах. Сущность изобретения Изобретение относится к новым мутантам AHAS полипептида, которые проявляют устойчивость к гербициду, в частности к имидазолиноновому гербициду или сульфомочевинному гербициду или их смеси. В предпочтительных вариантах осуществления устойчивость к гербицидам, определенная мутантами согласно изобретению, улучшается и/или увеличивается относительно полученной с использованием уже известных AHAS мутантов. Мутанты согласно изобретению содержат по меньшей мере два замещения в аминокислотной последовательности большой субъединицы полипептида AHAS. В одном варианте осуществления изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему двойной мутант большой субъединицы AHAS полипептида, выбранному из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положениию 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2;-3 021541 полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту,изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и гистидин в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и метионин в положении,соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и валин в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин в положении, соответствующем положению 375SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий валин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин,треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2. В другом варианте осуществления изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему тройной мутант большой субъединицы AHAS полипептида, выбранному из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аргинин в положении, соответствующем положению 57 SEQ ID NO: 1, и лейцин в положении, соответствующем положению 398SEQ ID NO: 1 или положению 366 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении,соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 95 SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 416SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и любую аминокислоту в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2. Изобретение также относится к полипептидам AHASL, содержащим двойной и тройной мутанты,описанные выше, экспрессионным векторам, содержащим полинуклеотиды, кодирующие двойной и тройной мутанты AHASL, описанные выше, клеткам, содержащим полинуклеотиды, кодирующие двойной и тройной мутанты, описанные выше, трансгенным растениям, содержащим полинуклеотиды и полипептиды, описанные выше, и способам получения и использования трансгенных растений, содержащих полинуклеотиды, кодирующие двойной и тройной мутанты, описанные выше. Далее изобретение относится к трансгенным и нетрансгенным растениям, содержащим один или более полинуклеотидов, содержащих две или более мутаций. В одном варианте осуществления растения согласно изобретению содержат первый полинуклеотид, кодирующий первый единичный мутант полипептида AHASL, и второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL,или полинуклеотид, кодирующий AHASL, содержащий две мутации, которые соответствуют аминокислотным мутациям в указанных первом и втором мутантах полипептида, где первый и второй единичные мутанты полипептида AHASL выбраны из группы, включающей первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,-5 021541 соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий гистидин в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий метионин в положении, соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий валин в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий изолейцин или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении,соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий аспарагин в положении, соответствующем положению 375 SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту,серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и первый полипептид, содержащий валин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту,аргинин, треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин,глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2.-6 021541 В еще одном варианте осуществления изобретение касается трансгенных и нетрансгенных растений, содержащих первый полинуклеотид, кодирующий первый единичный мутант полипептида AHASL,второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL, и третий полинуклеотид, кодирующий третий единичный мутант полипептида AHASL, или полинуклеотид, кодирующийAHASL, содержащий три мутации, где эти три нуклеотидные мутации приводят к аминокислотным мутациям, соответствующим мутациям в указанных первом, втором и третьем единичных мутантах полипептида AHASL; или кодирующий AHASL полинуклеотид, содержащий единичную мутацию, или кодирующий AHASL полинуклеотид, содержащий двойные мутации, где нуклеотидные мутации приводят к аминокислотным мутациям, соответствующим аминокислотным мутациям указанного первого, второго и третьего единичных мутантов полипептида AHASL, где первый, второй и третий единичные мутанты полипептида AHASL выбраны из группы, включающей первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, второй полипептид,содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, второй полипептид,содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, второй полипептид,содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин,треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, второй полипептид,содержащий аргинин в положении, соответствующем положению 57 SEQ ID NO: 1, и третий полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 398 SEQ ID NO: 1 или положению 366 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, второй полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 95SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, второй полипептид, содержащий глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или трептофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и первый полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, второй полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и третий полипептид, содержащий любую аминокислоту в положении, соответствующем положению 574SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2. Настоящее изобретение относится к способу контролирования роста сорняков в районах произрастания трансгенных и нетрансгенных растений согласно настоящему изобретению. Такие растения имеют повышенную устойчивость к гербицидам по сравнению с растениями дикого типа. Способ включает внесение эффективного количества AHAS-ингибирующего гербицида под сорняки и растения согласно настоящему изобретению. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлена полная последовательность большой субъединицы белка AHAS Arabidopsis(аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 1 и нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 31) с предполагаемой трансляцией, показывающей положения мутаций, обозначенные жирным и подчеркнутым шрифтом. Нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот находится справа. На фиг. 2 представлена последовательность большой субъединицы белка AHAS кукурузы (аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 2 и нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 32) с аминокислотами в положениях заявленных мутаций, обозначенными жирным и подчеркнутым шрифтом. Нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот находится справа. На фиг. 3 представлена линейная последовательность положений соответствия большой субъединицы белка AHAS (AtAHASL, SEQ ID NO: 1) большой субъединице белка AHAS целого ряда видов, в которых могут быть получены двойные и тройные мутации согласно изобретению, с указанием положений замещения, которые соответствуют положениям замещения в SEQ ID NO: 1: Amaranthus spp. (AsAHASL SEQ ID NO: 9), Brassica napus (BnAHASL1A SEQ ID NO: 3, BnAHASL1C SEQ ID NO: 10, BnAHASL2A SEQ ID NO: 11), Camelina microcarpa (CmAHASL1 SEQ ID NO: 12, CmAHASL2SEQ ID NO: 8, ZmAHASL2 SEQ ID NO: 2), Gossypium hirsutum (GhAHASA5 SEQ ID NO: 24,GhAHASA19 SEQ ID NO: 25) и E.coli (ilvB SEQ ID NO: 26, ilvG SEQ ID NO: 27, ilvI SEQ ID NO: 28). На фиг. 4 представлена карта вектора на основе АЕ, используемого для конструирования АЕ 2-АЕ 8 мутантов AHASL Arabidopsis в Е.coli с указанием соответствующих положений мутаций в AHASLArabidopsis. На фиг. 5 представлена карта вектора основного вектора АР для трансформации растений, используемого для конструирования векторов АР 2-АР 5, который отличается только мутациями, указанными в табл. 1. На фиг. 6 представлена карта основного вектора ZE, используемого для изучения AHASL мутантов кукурузы - ZE2, ZE5, ZE6 и ZE7 в Е.coli с указанием соответствующих положений мутаций. На фиг. 7 представлена карта вектора ZP для трансформации растений, используемого в качестве основного вектора для конструкции векторов ZP2-ZP10. На фиг. 8 представлена таблица, показывающая соответствия положений аминокислот геновAHASL из разных видов. На фиг. 9 представлена таблица, показывающая процентное соотношение белков генов AHASL из разных видов. Анализ был проведен с использованием пакета программ Vector NTI (штраф на внесение делеции = 10, штраф на продолжение делеции = 0,05, штраф на разделение делеции = 8, матрица сравнения аминокислот blosum 62MT2). На фиг. 10 представлены результаты вертикального роста в чашках семян из нескольких линий изArabidopsis, выращенных на среде, содержащей 37,5 мкмоль имазетапира. Были исследованы: 1) дикий вид экотип Columbia 2; 2) csr1-2 мутант (гомозиготная AtAHASL S653N мутация в генетической копии гена большой субъединицы AHASL); 3) Columbia 2 трансформированный AP1; 4) Columbia 2 трансформированный АР 7 и 5) Columbia 2 трансформированный АР 2. На фиг. 11 представлена карта вектора для трансформации растений основного вектора AUP, используемого для конструирования векторов AUP2 и AUP, которые отличаются только мутациями, указанными в табл. 3. На фиг. 12 представлена карта вектора ВАР 1 для трансформации растений, который содержит кодирующую последовательность AtAHASL с S653N мутацией. Подробное описание изобретения Изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим AHASL, имеющим по меньшей мере две мутации, например двойной и тройной мутанты, которые проявляют толерантность к гербицидам, в частности к имидазолиноновым гербицидам и, необязательно, к сульфомочевине, триазолопиримидинсульфоанилидным и/или пиримидилоксибензоатным гербицидам. AHASL мутанты согласно изобретению могут быть использованы для получения трансгенных растений, демонстрирующих уровень устойчивости к гербицидам, достаточный для сравнения с коммерческими уровнями толерантности к гербицидам, которая присутствует только у одного родителя при гибридном скрещивании или в одном геноме полиплоидного растения. Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут быть также использованы в качестве селектируемых маркеров для трансформации сцепленных генов, кодирующих другие признаки, как описано в патенте США 6025541. Несмотря на то что белки AHASL различных видов отличаются несколькими аминокислотными остатками в последовательности аминокислот, взаимное расположение остатков для модификации в соответствии с настоящим изобретением показано на фиг. 8. Таким образом, представленные здесь мутации экспрессируются в условиях положений, соответствующих аминокислотным остаткам полипептидаAHASL Arabidopsis (SEQ ID NO: 1, фиг. 1, 8), если не указано другое или явствует из контекста. Например, остаток 122 AHASL Arabidopsis соответствует остатку 90 AHASL кукурузы, остатку 104 AHASL 1AAHASL3 Helianthus annuus, остатку 59 Triticum aestivum и остатку 100 Xanthium spp. Это соответствие хорошо известно специалисту в данной области знаний. Основываясь на этом, соответствующие положения в последовательности большой субъединицы AHAS, не раскрытые здесь детально, могут быть легко определены специалистом в данной области знаний. Особые примеры областей соответствия, относящиеся к настоящему изобретению, представлены на фиг. 3. В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к выделенным полинуклеотидам, кодирующим двойной мутант AHASL Arabidopsis, выбранным из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту,изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и гистидин в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и метионин в положении,соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и валин в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответ-9 021541 ствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин в положении, соответствующем положению 375SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновая кислота, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий валин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин,треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2. В другом варианте осуществления изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему тройной мутант полипептида большой субъединицы AHAS Arabidopsis, выбранному из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении,соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аргинин в положении, соответствующем положению 57 SEQ ID NO: 1, и лейцин в положении, соответствующем положению 398SEQ ID NO: 1 или положению 366 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении,- 10021541 соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 95 SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 416SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и любую аминокислоту в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2. Еще один вариант осуществления изобретения включает двойной и тройной мутанты AHASL у других видов, где двойные и тройные мутации происходят в положениях, соответствующих таковым у мутантных видов Arabidopsis и кукурузы, описанных выше и представленных в таблице на фиг. 8. Например, соответствующие двойные и тройные мутанты AHASL у микроорганизмов, таких как Е.coli,S.cerevisiae, Salmonella, Synichocystis; и у растений, таких как пшеница, рожь, овес, тритикале, рис, ячмень, сорго, просо, сахарная свекла, сахарный тростник, соевый боб, земляной орех, хлопок, рапс, канола, Brassica species, маниока, арбуз, тыква, перец, подсолнечник, бархатцы, растения из семейства пасленовых, картофель, топинамбур, табак, баклажан, томат, Vicia species, горох, люцерна, кофе, какао, также входят в объем настоящего изобретения. Такие двойные и тройные мутанты могут быть получены с использованием известных методов, например сайт-специфичный мутагенез in vitro, или направленный мутагенез in vivo, или похожие технологии, описанные в патентах США 5565350, 5731181, 5756325,5760012, 5795972 и 5871984. Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению представлены в виде экспрессионных векторов для экспрессии в желаемых растениях. Векторы включают регуляторную последовательность, оперативно связанную с последовательностью полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению. Используемый здесь термин "регуляторный элемент" относится к полинуклеотиду, способному регулировать транскрипцию оперативно связанного полинуклеотида. Он включает, но не ограничивается, промоторы, энхансеры, нитроны 5'-UTRs и 3'-UTRs. "Оперативно связанный" обозначает функциональную связь между промотором и второй последовательностью, где последовательность промотора инициирует и определяет транскрипцию последовательности ДНК соответствующей второй последовательности. В общем "оперативно связанный" означает, что связываемые последовательности нуклеиновой кислоты являются последовательными и, если необходимо соединить две кодирующие белок области, расположены в одной рамке считывания. Вектор может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген для совместной трансформации в организм. Альтернативно, дополнительный ген или гены могут быть представлены во множестве экспрессионных векторов. Такой экспрессионный вектор может быть получен множественной рестрикцией сайтов для инсерции последовательности полинуклеотида AHASL в область, находящуюся под контролем области, регулирующей транскрипцию. Экспрессионный вектор может дополнительно содержать селективные маркерные гены. Экспрессионный вектор будет иметь 5'-3' направленную транскрипцию, транскрипционную область и область инициации трансляции (т.е. промотор), последовательность полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению и область, терминирущую транскрипцию и трансляцию (т.е. терминаторную область), которые функционируют в растениях. Промотор может быть естественным, аналогичным, чужеродным или гетерологичным для растения хозяина и/или для последовательности полинуклеотидаAHASL согласно настоящему изобретению. Также промотор может быть представлен натуральной последовательностью или, альтернативно, синтетической последовательностью. Промотор является "чужим" или "гетерологичным" для растительной клетки, если естественный промотор для этого растения не был найден, и поэтому он интродуцируется. Промотор является "чужим" или "гетерологичным" для последовательности полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению, если не существует естественного или встречающегося в природе промотора, способного оперативно связываться с последовательностью полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению. Использованный в настоящем описании термин "химерный ген" включает кодирующую последовательность, оперативно связанную с областью инициации транскрипции, которая является гетерологичной по отношению к кодирующей последовательности. Таким образом, для экспрессии полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению можно использовать гетерологичные промоторы и естественные промоторы. Такая конструкция позволяет менять уровень экспрессии AHASL белка в растениях и растительных клетках. Таким образом, фенотип растения или растительной клетки может быть изменен.- 11021541 Терминаторная область и область инициации траскрипции могут быть естественными, могут быть оперативно связаны с AHASL последовательностью и могут происходить из растения или из другого источника (т.е. может быть чужой или гетерологичный промотор, интересующая AHASL последовательность, растение хозяин или любая их комбинация). Подходящими терминаторными областями могут являться доступные области из Ti-плазмид у А.tumefaciens, такие как терминаторные области октопин синтазы и нопалин синтазы, Guerineau et al. (1991), Mol. Gen. Genet. 262:141-144; Proudfoot (1991), Cell,64:671-674; Sanfacon et al. (1991), Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al. (1990), Plant Cell, 2:1261-1272;(1987), Nucleic Acid Res. 15:9627-9639. Это дает возможность оптимизировать гены для повышенной экспрессии в трансформированных растениях. Так, для улучшенной экспрессии гены могут быть синтезированы, используя подходящие растительные кодоны. Например, Campbell и Gowri (1990), Plant Physiol. 92:1-11 описывают такие хозяин-предпочтительные кодоны, которые широко используются. Методы синтезирования предпочтительных для растений генов хорошо известны в данной области знаний. См. патенты US5380831 и 5436391 и Murray et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17:477-498, которые приведены в описании в качестве ссылок. Известно, что дополнительная модификация последовательности может повысить экспрессию гена в клетке-хозяине. Модификация может включать элиминацию последовательности, кодирующей сигнал псевдополиаденилирования, сигнальные сайты экзон-интрон сплайсинга, транспозон, похожие повторы и другие хорошо известные последовательности, которые могут быть вредны для экспрессии генов. Контент последовательности G-C может быть приведен к среднему уровню экспрессии для данной клеткихозяина, как посчитано в ссылках для экспрессии известных генов в клетке-хозяине. Если возможно, последовательность может быть модифицирована для предотвращения образования РНК шпилек. Нуклеотидные последовательности для усиления экспрессии генов также могут быть использованы в экспрессионных векторах для растений. Такие векторы включают интроны кукурузного гена AdhI, интрон 1 гена (Callis et al. Genes and Development, 1:1183-1200, 1987) и лидирующие последовательности(W-последовательность) из вируса табачной мозаики (TMV), из вируса пятнистого хлороза кукурузы и вируса мозаики люцерны (Gallie et al. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987 и Skuzeski et al. Plant Mol.Biol. 15:65-79, 1990). Было показано, что первый интрон из локуса морщинистости кукурузы повышал экспрессию генов в конструкциях с химерными генами. Патенты США 5424412 и 5593874 описывают использование специфических интронов в конструкциях, экспрессирующих гены. Gallie et al. (Plant Physiol. 106:929-939, 1994) также показали тканеспецифичные интроны, полезные для регулирования экспрессии. Для усиления или оптимизации уровня экспрессии гена большой субъединицы AHAS экспрессионные векторы для растений согласно настоящему изобретению также могут содержать ДНК последовательность, включающую участок прикрепления к матриксу (MARs). Растительные клетки, трансформированные такой модифицированной экспрессионной системой, могут иметь сверхэкспрессию или конститутивную экспрессию нуклеотидных последовательностей согласно настоящему изобретению. Экспрессионные векторы могут дополнительно содержать 5' лидирующие последовательности в своей структуре. Такие последовательности могут действовать как энхансер трансляции. Лидирующие последовательности хорошо известны в данной области знаний и включают последовательности пикорновирусов, например лидирующая последовательность EMCV(5'-некодирующая область вируса энцефалокардита) (Elroy-Stein et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA,86:6126-6130); лидирующие последовательности поливирусов, например лидирующая последовательность TEVMDMV (вируса карликовости кукузузы) (Virology, 154:9-20) и лидирующая последовательность человеческого белка, связывающего тяжелые цепи иммуноглобулина (BiP) (Macejak et al. (1991), Nature, 353:9094); нетранслируемая последовательность mRNA поверхностного белка вируса мозаики люцерны(AMV RNA 4) (Jobling et al. (1987), Nature, 325:622-625); лидирующая последовательность вируса табачной мозаики (TMV) (Gallie et al. (1989) in MolecularBiology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), p. 237-256); лидирующая последовательность вируса пятнистого хлороза кукурузы (MCMV) (Lommel et al.(1991), Virology, 81:382-385). Также см. Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84:965-968. Также могут быть использованы другие известные методы для усиления трансляции, например включение интронов и др. В получении экспрессионного вектора могут быть использованы манипуляции с различными ДНК фрагментами для обеспечения правильной ориентации ДНК последовательности и соответственно в подходящих рамках считывания. Таким образом, адаптеры или линкеры могут быть присоединены к ДНК последовательностям или другие манипуляции могут быть использованы для обеспечения удобных сайтов рестрикции, удаление лишних ДНК, удаление рестрикционных сайтов и т.п. Для этих целей могут быть использованы in vitro мутагенез, повтор праймеров, рестрикция, отжиг, установка повторов, напри- 12021541 мер транзиция и транспозиция. Несколько промоторов могут быть использованы для реализации изобретения. Промоторы могут быть выбраны исходя из желаемого результата. Нуклеиновая кислота может быть соединена с конститутивным, тканеспецифичным или другим промотором для экспрессии в растениях. Так, в качестве конститутивных векторов могут быть использованы центральный промотор Rsyn7 промотора, описанный в WO 99/43838 и патенте США 6072050; центральный промотор CaMV 35S промотора (Odell et al. (1985), Nature, 313:810-812); промотор актина у риса (McElroy et al. (1990), Plant Cell, 2:163-171); промотор убиквитина (Christensen et al. (1989), Plant Mol. Biol. 12:619-632 и Christensen et al. (1992),Plant Mol. Biol. 18:675-689);ALS промотор (патент США 5659026) и др. Другие конститутивные промоторы также описаны, например, в патентах США 5608149,5608144, 5604121, 5569597, 5466785, 5399680, 5268463, 5608142 и 6177611. Тканеспецифичные промоторы могут быть использованы для усиления экспрессии AHASL в определенных тканях растений. Список таких тканеспецифичных промоторов включает, но не исчерпывается, лист-специфичные промоторы, корень-специфичные промоторы, семя-специфичные промоторы и стебель-специфичные промоторы. Тканеспецифичные промоторы описаны Yamamoto et al. (1997), PlantNatl. Acad. Sci. USA, 90(20):9586-9590 и Guevara-Garcia et al. (1993), Plant J. 4(3):495-505. Эти промоторы могут быть модифицированы, если необходимо, для слабой экспрессии. В одном из вариантов осуществления нуклеиновая кислота может быть нацелена для экспрессии в хлоропласты. Для этой цели нуклеиновая кислота не вводится напрямую, а вводится в составе экспрессионного вектора, который дополнительно содержит нацеленную на хлоропласт последовательность,содержащую нуклеиновую последовательность, кодирующую хлоропластный транзитный пептид для направления интересующего генного продукта в хлоропласт. Такие транзитные пептиды хорошо известны в данной области знаний. В отношении хлоропласт-нацеленной последовательности оперативно связанный означает, что последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей транзитный пептид (т.е. хлоропласт-нацеленная последовательность), соединен с полинуклеотидом AHASL согласно настоящему изобретению, так что две последовательности соединены смежно и находятся в одной рамке считывания. См., например, Von Heijne et al. (1991), Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989), J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993), Biochem.Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421 и Shah et al. (1986), Science, 233:478-481. В то время как AHASL белки согласно настоящему изобретению включают естественные хлоропласт-транзитные пептиды, любой другой хлоропласт-транзитный пептид, известный в данной области знаний, может быть соединен с последовательностью аминокислот зрелого AHASL белка согласно настоящему изобретению оперативной связью с хлоропласт-нацеленной последовательностью с 5'-концом нуклеиновой последовательности, кодирующей зрелый AHASL белок согласно настоящему изобретению. Хлоропласт-нацеленные последовательности хорошо известны в данной области знаний и включают малую субъединицу рибосомальной 1,5-дифосфаткарбоксилазы хлоропластов (Rubisco) (de Castroal. (1997), J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); хоризмат синтаза (Schmidt et al. (1993), J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457) и соединяющий белок образующегося на свету а/b хлорофилла (LHBP) (Lamppa etRomer et al. (1993), Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421 и Shah et al. (1986), Science, 233:478481. Методы трансформации хлоропластов хорошо известны в данной области знаний, см., например,Svab et al. (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993), Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 90:913-917; Svab and Maliga (1993), EMBO J. 12:601-606. Этот метод основан на использовании генной пушки для передачи ДНК, содержащей селективные маркеры и нацеливания ДНК в геном пластид через гомологичную рекомбинацию. Также трансформация пластид может быть выполнена с помощью трансактивации молчащего пластидного трансгена путем тканеспецифичной экспрессии, действующей в пластидах ядерно-кодируемой РНК полимеразы. Такая система описана в источнике McBride- 13021541 Нуклеиновая кислота, которую необходимо ввести в хлоропласт, может быть оптимизирована для экспрессии в хлоропластах подсчетом различий в частоте использования кодонов между ядром растения и его органеллами. Для этой цели интересуемые нуклеиновые кислоты могут быть синтезированы с использованием хлоропласт-специфичных кодонов. См., например, патент США 5380831, приведенный в описании в качестве ссылки. В частности, настоящее изобретение описывает использование полинуклеотида, кодирующего мутант полипептида AHASL, содержащего хотя бы две мутации для получения устойчивого к гербицидам растения. Эта стратегия продемонстрирована с использованием мутантов AHASL Arabidopsis у Arabidopsis thaliana и кукурузные AHASL2 мутанты у зерновых, но эти примеры не ограничиваются этими генами или этими растениями. В предпочтительном варианте осуществления гербицидами являются имидазолинон и/или сульфонилмочевина. В других предпочтительных вариантах осуществления устойчивость к гербицидам улучшается и/или возрастает по сравнению с растениями дикого типа и известными AHASL мутантами. Изобретение также относится к способу получения трансгенных растений зерновых культур, содержащих AHASL мутанты, кодируемые нуклеиновой кислотой, содержащей по меньшей мере две мутации, где экспрессия этой нуклеиновой кислоты в растении приводит к возникновению устойчивости к гербицидам по сравнению с растениями дикого типа или известными растениями мутантами AHASL,включающему:(а) введение в растительную клетку экспрессионного вектора, содержащего нуклеиновую кислоту,кодирующую AHASL мутант, содержащий по меньшей мере две мутации;(b) регенерацию из растительной клетки растения, проявляющего устойчивости к гербицидам. Растительные клетки представляют собой, но не исчерпываются, протопласты, репродуктивные клетки, вегетативные клетки. Используемый здесь термин "трансгенный" относится к любому растению,растительной клетке, каллюсу, растительной ткани или части растения, которое содержит весь или часть по меньшей мере одного рекомбинантного полинуклеотида. Во многих случаях весь или часть рекомбинантного полинуклеотида стабильно интегрируется в хромосому или стабильные экстрахромосомные элементы, что позволяет успешно передаваться из поколения в поколение. В другом варианте осуществления изобретение относится к использованию мутантных полипептидов AHASL согласно настоящему изобретению в качестве селективных маркеров. Изобретение относится к способу идентификации или селекции трансформированных растительных клеток, растительных тканей, растения или его части, который включает:(а) предусмотрение (предоставление) того, что трансформированная растительная клетка, растительная ткань, растения или его части содержат изолированную нуклеиновую кислоту, кодирующую двойной мутант полипептида большой субъединицы AHASL согласно изобретению, как описано выше,где полипептид используется как селективный маркер и где трансформированные растительная клетка,растительная ткань, растение или его часть необязательно содержат выделенную в дальнейшем интересуемую нуклеиновую кислоту;b) приведение в контакт трансформированной растительной клетки, растительной ткани, растения или его части по меньшей мере с одним AHASL ингибитором или соединением, содержащим AHASL ингибитор; с) определение, подверглись ли действию ингибитора или соединению, содержащему AHASL ингибитор, растительная клетка, растительная ткань, растение или его часть;d) идентификацию или селекцию трансформированной растительной клетки, растительной ткани,растения или его части. Изобретение также относится к очищенным белкам AHASL, которые содержат двойную или тройную мутации, описанные выше, которые полезны для исследования молекулярного моделирования для дальнейшего улучшения устойчивости к гербицидам. Методы очистки белков хорошо известны и могут быть легко выполнены с использованием коммерчески доступных препаратов или специально разработанных методов, как представлено, например, в Protein Biotechnology, Walsh and Headon (Wiley, 1994). Изобретение также относится к нетрансгенным и трансгенным устойчивым к гербицидам растениям, содержащим один полинуклеотид, кодирующий двойной мутант полипептида AHASL, или два полинуклеотида, кодирующих одинарные мутанты полипептида AHASL. Нетрансгенные растения могут быть получены при перекрестном опылении первого растения со вторым растением, при этом предусматривается, что одно из растениий выступает в качестве акцептора пыльцы (может быть как первое, так и второе растение), после перекрестного опыления происходит получение семян. Семена и потомки растений,полученные таким образом, могут иметь двойные мутации, затрагивающие одну или две аллели. Первое растение содержит первый полинуклеотид, кодирующий первый единичный мутант полипептидаAHASL. Второе растение содержит второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL. Первый и второй единичные мутанты полипептида AHASL содержат различные единичные замены аминокислот относительно полипептидов дикого типа. Могут быть выбраны семена или происходящие из них потомки растений, содержащие один полинуклеотид, кодирующий двойной мутант полипептида AHASL, или два полинуклеотида, кодирующих два единичных мутанта полипепти- 14021541 да AHASL. Выбранные потомки растений демонстрируют неожиданно высокий уровень устойчивости кAHASL-ингибирующим гербицидам, например к имидазолиноновым или сульфомочевинным гербицидам, это произошло предположительно из-за комбинации двух единичных мутантов полипептидаAHASL в одном растении. Потомки растений демонстрируют синергетический эффект в отношении устойчивости к гербицидам, по сравнению с которым уровень устойчивости у потомков растений, содержащих первый и второй мутанты от родительских растений, больше, чем устойчивость растений, содержащих две копии первого полинуклеотида или две копии второго полинуклеотида. Если первое и второе растения являются гомозиготными по первому и второму полинуклеотидам,соответственно каждый из полученных потомков будет содержать одну копию каждого полинуклеотида первого и второго, и один из селекционных этапов может быть исключен. Если по меньшей мере одно первое или второе растение является гетерозиготным, может быть выбрано потомство растения, содержащее оба полинуклеотида, например анализируя ДНК у потомков растений для определения, содержат ли растения потомки оба, первый и второй, полинуклеотида, или тестируя потомки растений по повышению устойчивости к гербицидам. Потомки растений, которые содержат оба, первый и второй, полинуклеотида, проявляют больший уровень устойчивости к гербицидам, чем растения, содержащие две копии первого или две копии второго полинуклеотида. В одном из вариантов осуществления растения согласно настоящему изобретению содержат первый полинуклеотид, кодирующий первый единичный мутант полипептида AHASL, и второй полинуклеотид,кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL, или кодирующий AHASL полинуклеотид содержит две нуклеотидные мутации, которые привели к аминокислотным мутациям, соответствующим аминокислотным мутациям в указанных первом и втором единичных мутантах полипептида AHASL, где указанные первый и второй единичные мутанты полипептида AHASL выбраны из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий гистидин в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий метионин в положении, соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий валин в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,- 15021541 содержащий изолейцин в положении, соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий изолейцин или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении,соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид,содержащий глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении,соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий аспарагин в положении, соответствующем положению 375 SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту,серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; первый полипептид, содержащий валин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту,аргинин, треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и второй полипептид, содержащий фенилаланин, аспарагин, треонин,глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2. Нетрансгенные растения, содержащие двойные мутации полипептида AHASL, могут быть получены другими методами, нежели перекрестное опыление, описанное выше, такими как, например, но не ограничиваясь, направленный мутагенез in vivo, как он описан в Kochevenko et al. (Plant Phys. 132:174184, 2003). Двойные мутации могут затрагивать как одну аллель, так и две аллели в растении. Еще один вариант осуществления изобретения касается трансгенного растения, трансформированного экспрессионным вектором, содержащим выделенный полинуклеотид, где изолированный полинуклеотид кодирует большую субъединицу ацетогидроксикислотной синтазы двойного мутанта полипептида (AHASL), выбранного из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту,изолейцин, лейцин или аспарагин в положении, соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответ- 16021541 ствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 1 или положению 107 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и гистидин в положении, соответствующем положению 269 SEQ ID NO: 1 или положению 237 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и метионин в положении,соответствующем положению 416 SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 426 SEQ ID NO: 1 или положению 394 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и валин в положении, соответствующем положению 430 SEQ ID NO: 1 или положению 398 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин в положении,соответствующем положению 442 SEQ ID NO: 1 или положению 410 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и изолейцин или аспарагиновую кислоту в положении, соответствующем положению 445 SEQ ID NO: 1 или положению 413SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 580 SEQ ID NO: 1 или положению 548 SEQ ID NO: 2; полипептид содержащий, глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аспарагин в положении, соответствующем положению 375SEQ ID NO: 1 или положению 343 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновая кислота, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий валин, цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин,треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 последовательностиSEQ ID NO: 2. Изобретение также относится к нетрансгенным и трансгенным устойчивым к гербицидам растениям, содержащим полинуклеотид, кодирующий тройной мутант полипептида AHASL, или содержащим один или несколько кодирующих AHASL полинуклеотидов, содержащих три мутации. Для получения нетрансгенных растений с одним или несколькими полинуклеотидами, содержащими три мутации, потомство растения, содержащего один или два полинуклеотида, содержащего указанные первый и второй мутанты, описанные выше, перекрестно опыляют с третьим растением, которое содержит третий полинуклеотид, кодирующий третий единичный мутант AHASL полипептида. Третий единичный мутант полипептида AHASL содержит различные единичные замены аминокислот относительно полипептидаAHASL дикого типа и также первого или второго единичного мутанта полипептида AHASL. Семена или потомки растений, которые содержат один или несколько полинуклеотидов, содержащих три мутации,могут быть выбраны среди описанных выше. Выбранные потомки растений имеют уровень устойчивости к гербицидам более высокий, чем суммарный эффект комбинации трех единичных мутантов поли- 17021541 пептида AHASL в одном растении. Нетрансгенные растения, содержащие тройные или множественные мутации AHASL полинуклеотида, могут быть получены методами, отличными от перекрестного опыления, описанными выше, такими как, например, но не исчерпывающимися, направленный мутагенез invivo, как описан выше. Множественные мутации могут затрагивать один или множество аллелей генома растения. В одном варианте осуществления растения согласно изобретению содержат первый полинуклеотид,кодирующий первый единичный мутант полипептида AHASL, второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL, и третий полинуклеотид, кодирующий третий единичный мутант полипептида AHASL. Изобретение относится к растению, содержащему кодирующий AHASL полинуклеотид, содержащий три мутации, где три нуклеотидные мутации привели к аминокислотным мутациям, соответствующим мутациям указанных первого, второго и третьего единичных мутантов полипептида AHASL. Еще одним осуществлением изобретения являются растения, содержащие кодирующий AHASL полинуклеотид, содержащий единичную мутацию, и полинуклеотид, содержащий двойную мутацию, где нуклеотидные мутации привели к аминокислотным мутациям, соответствующим мутациям, описанным ранее, первым, вторым, третьим единичным мутантам полипептида AHASL, где первый,второй, третий единичные мутанты полипептида AHASL выбраны из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, цистеин, или метионин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аргинин в положении, соответствующем положению 57 SEQ ID NO: 1, и лейцин в положении, соответствующем положению 398SEQ ID NO: 1 или положению 366 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении,соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 95 SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 416SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2; и полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин,триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и любую аминокислоту в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2. Альтернативно, растения, содержащие один или несколько полинуклеотидов, кодирующих единичный мутант полипептида AHASL, могут быть получены трансформацией растений двумя или несколькими такими полинуклеотидами или трансформацией первого растения первым полинуклеотидом, кодирующим первый единичный мутант полипептида AHASL и перекрестное опыление первого растения со вторым растением, содержащим второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL. Второе растение содержит второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL, который является эндогенным или интродуцирован при трансформации. Пер- 18021541 вый и второй единичные мутанты полипептида AHASL содержат различные аминокислотные замены относительно (которые отличают их от) полипептидов AHASL дикого типа. Если необходимо, семена или потомство растений могут содержать оба, первый и второй, полинуклеотида, как они описаны выше. Еще один вариант осуществления изобретения относится к трансгенному растению, трансформированному экспрессионным вектором, содержащим выделенный полинуклеотид, где выделенный полинуклеотид кодирует тройной мутант большой субъединицы синтазы ацетогидроксикислоты AHASL полипептида, выбранного из группы, включающей полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин,треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении,соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий валин, треонин, глутамин, цистеин или метионин в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и аргинин в положении, соответствующем положению 57 SEQ ID NO: 1, и лейцин в положении, соответствующем положению 398SEQ ID NO: 1 или положению 366 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий глутаминовую кислоту, изолейцин, лейцин или аспарагин в положении,соответствующем положению 124 SEQ ID NO: 1 или положению 92 SEQ ID NO: 2, серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении,соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, и аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин, треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2; полипептид, содержащий лейцин в положении, соответствующем положению 95 SEQ ID NO: 1 или положению 63 SEQ ID NO: 2, глутаминовую кислоту в положении, соответствующем положению 416SEQ ID NO: 1 или положению 384 SEQ ID NO: 2, и фенилаланин, аспарагин, треонин, глицин, валин или триптофан в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621SEQ ID NO: 2, и полипептид, содержащий серин, аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан, тирозин или изолейцин в положении, соответствующем положению 197SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, аланин, глутаминовую кислоту, серин, фенилаланин,треонин, аспарагиновую кислоту, цистеин или аспарагин в положении, соответствующем положению 199 SEQ ID NO: 1 или положению 167 SEQ ID NO: 2, и любую аминокислоту в положении, соответствующем положению 574 SEQ ID NO: 1 или положению 542 SEQ ID NO: 2. Настоящее изобретение относится к толерантным или устойчивым к гербицидам растениям, содержащим гербицид-толерантный или гербицид-устойчивый AHASL белок, включающий, но не ограничиваясь, единичный мутант полипептида AHASL, двойной и тройной мутанты полипептида AHASL, которые кодируются полинуклеотидами согласно настоящему изобретению. К гербицид-толерантным или гербицид-устойчивым растениям, как определено здесь, относятся растения, которые толерантны или устойчивы хотя бы к одному гербициду, уровень которого в норме уничтожает растение или ингибирует рост у растения дикого типа. "Гербицид-толерантный" AHASL белок или "гербицид-устойчивый"AHASL белок означает такой белок, который имеет более высокую AHASL активность по сравнению с белком дикого типа, как представлено, по меньшей мере один гербицид, как известно, ингибирует активность AHASL и в концентрации или уровне гербицида, как известно, ингибирует активность белкаAHASL белка может быть упомянута здесь как "гербицид-толерантная" или "гербицид-устойчивая" активность AHASL. Согласно настоящему изобретению термины "гербицид-толерантный" или "гербицид-устойчивый" взаимозаменяемы и имеют одинаковое значение и одинаковую область определения. Таким же образом,термины "имидазолин-устойчивый" и "мидазолин-устойчивость" взаимозаменяемы и чтобы быть одинаковыми по значению и по области определения с терминами "гербицид-толерантный" и "гербицид- 19021541 толерантность" соответственно. Изобретение включает гербицид-устойчивые AHASL полинуклеотиды и гербицид-устойчивыеAHASL белки. "Гербицид-устойчивый AHASL полинуклеотид" означает полинуклеотид, который кодирует белок, имеющий гербицид-устойчивую AHASL активность. "Гербицид-устойчивый AHASL белок" означает белок или полипептид, который имеет гербицид-устойчивую активность. Далее, описывается что, гербицид-толерантный или гербицид-устойчивый AHASL белок может быть введен в растение с помощью трансформации растения или его предка нуклеотидной последовательностью, кодирующей гербицид-толерантный или гербицид-устойчивый AHASL белок. Такие гербицид-толерантные или гербицид-устойчивые AHASL белки кодируются гербицид-толерантными или гербицид-устойчивыми AHASL полинуклеотидами. Альтернативно, гербицид-толерантный или гербицидустойчивый AHASL белок может быть, например, единичным мутантом полипептида AHASL, как он здесь определен, может появиться в растении в результате естественного происхождения или индуцированной мутации в эндогенном гене AHASL в геноме растения или его предка. Настоящее изобретение относится к растениям, растительным тканям, растительным клеткам и клеткам-хозяевам, имеющим повышенный уровень устойчивости или толерантности хотя бы к одному гербициду, в частности к имидазолинону или сульфомочевине. Предпочтительное количество или концентрация гербицида означают "эффективное количество" или "эффективная концентрация". "Эффективное количество" и "эффективная концентрация" означают такое количество и концентрацию соответственно, которое необходимо для уничтожения или ингибирования роста растений подобного дикого типа, растительной ткани, растительной клетки или клетки-хозяина, но это количество не уничтожает и не ингибирует существенно рост гербицид-устойчивых растений, растительных тканей, клеток растений и клеток хозяев согласно настоящему изобретению. Типично, эффективное количество гербицида означает такое количество, которое обычно используется в сельском хозяйстве для уничтожения интересуемых сорняков. Такое количество хорошо известно из обычного опыта в данной области."Растение, подобное дикому типу, растительная ткань, растительная клетка или клетка-хозяин" означают растение, растительную ткань, растительную клетку или клетку-хозяин соответственно, которые не имеют признаков гербицид-устойчивости и/или особый (отдельный) полинуклеотид согласно изобретению, описанному здесь. Использование термина "дикий тип" (не) предназначено, чтобы подразумевать, что растение, растительная ткань, растительная клетка или клетка-хозяин или другая клетка-хозяин не имеют рекомбинантной ДНК в своем геноме и/или не обладают гербицид-устойчивыми признаками,которые отличаются от тех, которые описаны здесь. Как определено здесь, если понятно, что не определено иное, термин "растение" означает растение в любой стадии развития, так же как и любая часть или части растения, которые могут быть присоединены или отделены от целого неповрежденного растения. Такие части растения включают, но не ограничиваются, органами, тканями и клетками растений. Примеры определенных частей растения включают стебель, лист, корень, соцветие, цветок, отдельный цветок в соцветии, плод, плодоножку, цветоножку, тычинку, пыльник, рыльце, пестик, завязь, лепесток, чашелистик, плодолистик, кончик корня, корневой чехлик, волосок корня, волосок листа, волосок семени (бороздка зерна), пыльцевое зерно, микроспору,семядолю, гипокотель (подсемядольное колено), эпикотель (надсемядольное колено), ксилему, флоэму,паренхиму, эндосперм, клетку-спутник, замыкающую клетку и любые другие известные органы, ткани и клетки растения. Растения согласно настоящему изобретению включают как нетрансгенные, так и трансгенные растения. Под "нетрансгенным растением" подразумевают растения, не имеющие рекомбинантную ДНК в своем геноме. Под "трансгенным растением" подразумевают растение, содержащее рекомбинантную ДНК в своем геноме. Такие трансгенные растения могут быть получены введением рекомбинантной ДНК в геном растения. Если такая рекомбинантная ДНК встроена в геном трансгенного растения, то потомство растения также может содержать рекомбинантную ДНК. Потомство трансгенного растения, которое содержит по меньшей мере часть рекомбинантной ДНК хотя бы от одного трансгенного растенияпредка, тоже будет трансгенным растением. В отдельных вариантах осуществления настоящее изобретение касается гербицид-устойчивых растений, которые получены при мутационной селекции. Такие растения содержат полинуклеотид, кодирующий единичный мутант полипептида большой субъединицы AHASL, и являются толерантными к одному или нескольким AHASL-ингибирующим гербицидам. Такие методы могут включать, например,экспозицию растений или семян растений в присутствии мутагена, в частности химического мутагена такого как, например, этилметанезилфонат (EMS), и селекцию растений, которые имеют усиленную толерантность хотя бы к одному AHASL-ингибирующему гербициду, в частности к имидазолиноновому гербициду или сульфомочевине. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничивается гербицидтолерантными растениями, которые получены методом мутагенеза, включающего химический мутагенезEMS. Любой метод мутагенеза, известный в данной области знаний, может быть использован для получения гербицид-толерантных растений согласно настоящему изобретению. Такие методы мутагенеза могут включать, например, использование одного любого или более следующих мутагенов: радиационное излучение, такое как Х-лучи, гамма-лучи (кобальт 60 или цезий 137), нейтроны (продукты ядерного- 20021541 распада урана 235 в атомном реакторе), -излучение (испускаемое радиоизотопами фосфора 32 и углерода 14) и ультрафиолетовое излучение (в диапазоне 2500-2900 нм), и химические мутагены, такие как аналоги нуклеотидных оснований (5-бромурацил), похожие соединения (8-етоксикафеин), антибиотики(стептонигрин), алкилирующие агенты (сернистый иприт, нитроиприт, этиленамины, сульфаты, сульфонаты, сульфоны и лактоны), азиды, гидроксиламин, азотистая кислота или акридины. Гербицидустойчивые растения также могут быть получены с использованием методов тканевых культур для селекции растительных клеток, содержащих гербицид-устойчивые мутации, и затем из этих клеток регенерируют гербицид-устойчивые растения. См., например, патенты США 5773702 и 5859348, которые приведены в описании в качестве ссылок. Более детально стадии мутационного скрещивания можно найти в "Principals of Cultivar Development" Fehr, 1993 Macmillan Publishing Company, которые также приведены в описании в качестве ссылок. Настоящее изобретение предлагает способы усиления толерантности или устойчивости растений,растительных тканей, растительных клеток или других хозяйских клеток по меньшей мере к одному гербициду, который ингибирует активность фермента AHASL. Предпочтительно такими гербицидами являются пиримидинилоксибензоатные гербициды, сульфониламинокарбонилтриазолиновые гербициды или их смеси. Более предпочтительно такими гербицидами являются имидазолиноновые гербициды,сульфонилмочевина или их смеси. В настоящем изобретении имидазолиноновые гербициды включают,но не ограничиваются PURSUIT (имазетапир), CADRE (имазапик), RAPTOR (имазамокс), SCEPTER (имазакуин), ASSERT (имазетабенц), ARSENAL (имазапир), производные любого из вышеперечисленных гербицида и смеси двух или более вышеперечисленных гербицидов, например имазапиримазамокс (ODYSSEY). Более предпочтительно имидазолиноновые гербициды могут быть выбраны,но не ограничиваются, из:[2-(4-изопропил-4)-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил]никотиновая кислота,[2-(4-изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-3-куинолинокарбоксиловая]кислота,[5-этил-2-(4-изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)]никотиновая кислота,2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновая кислота,[2-(4-изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-5-метил]никотиновая кислота и смесь метил-6-(4-изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-т-толуата и метил-2-(4 изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-п-толуата. Использование 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)никотиновой кислоты и [2-(4-изопропил-4)-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)]-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты является предпочтительным. Использование [2-(4-изопропил-4)-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил]-5(метоксиметил)никотиновой кислоты является более предпочтительным. В целях настоящего изобретения, гербициды группы сульфонилмочевины включают, но не ограничиваются, хлорсульфурон, метсульфурон метил, сульфометурон метил, хлоримурон этил, трифенсилфурон метил, трибенурон метил, бензилфирон метил, никосульфурон, этаметсульфурон метил, римсульфурон, трифлусульфурон метил, триасульфурон, примисульфурон метил, циносульфурон, амидосульфурон,флузасульфурон, имазосульфурон, пиразольфурон этил, халосульфурон, азимсульфурон, циклосульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон метил, форамсульфурон, йодосульфурон, оксасульфурон, мезосульфурон, просульфурон, сульфосульфурон, трифлоксисульфурон, тритосульфурон,производное любого из вышеперечисленных гербицидов и смеси двух или более вышеперечисленных гербицидов. Триазолпиримидиновые гербициды включают, но не ограничиваются, хлорансулам, дихлосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам и пеноксисулам. Пиримидинилоксибензоатные (или карбоксипиримидиниловые) гербициды согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются, биспирибак, пиритиобак, пиримиобак, пирибензомикс и пирифталид. Сульфониламинокарбонилтриазолиновые гербициды включают, но не ограничиваются, флукарбазон и пропоксикарбазон. Является признанным, что пиримидинилоксибензоатные гербициды тесно связаны с пиримидинилтиобензоатными гербицидами и сгруппированы под общим последним названием Американским обществом по изучению сорняков (Weed Science Society of America). Соответственно, гербициды согласно настоящему изобретению далее включают пиримидинилтиобензоатные гебдициды, включая, но не ограничиваясь, пиримидинилоксибензоатные гербициды, описанные выше. Настоящее изобретение относится к способам усиления AHASL активности у растений, состоящим в трансформации растений полинуклеотидной конструкцией, содержащей промотор оперативно связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей AHASL. Способы предполагают введение полинуклеотидной конструкции согласно настоящему изобретению по меньшей мере в одну клетку растения и регенерацию трансформированного растения из этой клетки. Способ предполагает использование промотора, который способен управлять экспрессией генов в клетке растения. Предпочтительно такие промоторы являются конститутивными промоторами или тканеспецифичными промоторами. Способы могут быть использованы для усиления или повышения устойчивости растения хотя бы к одному гербициду, который ингибирует каталитическую активность фермента AHASL, в частности к имидазолиноновому гербициду.- 21021541 Настоящее изобретение относится к экспрессионному вектору для экспрессии полинуклеотида согласно изобретению в растении, растительной ткани, растительной клетке или другой клетке-хозяине. Экспрессирующий вектор содержит промотор, способный экспрессироваться в растении, растительной ткани, растительной клетке или другой интересующей клетке-хозяине, оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению, который содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую либо полноразмерный (т.е. включающий хлоропластный транзитный пептид), либо простой AHASL белок (т.е. не включающий хлоропластный транзитный пептид). Если экспрессия желательна в пластидах или хлоропластах растений или растительных клетках, то экспрессионный вектор может также содержать оперативно связанную хлоропласт-нацеленную последовательность, которая кодирует хлоропластный транзитный белок. Экспрессионный вектор согласно изобретению может быть использован в способах усиления толерантности к гербицидам у растений или у клетки-хозяина. Способ включает трансформацию растительной или клетки-хозяина экспрессионным вектором согласно изобретению, где экспрессионный вектор содержит промотор, который способен экспрессироваться в растительной или другой интересующей клетке-хозяине, и промотор, оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую имидазолинон-устойчивый белок AHASL согласно изобретению. Использованный здесь термин "полинуклеотидная конструкция" не предназначен, чтобы ограничивать настоящее изобретение до полинуклеотидной последовательности, содержащей ДНК. Так, для специалиста в данной области знаний будет очевидно, что полинуклеотидная конструкция, в частности полинуклеотиды или олигонуклеотиды, включает рибонуклеотиды и комбинации рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотиды, которые также могут быть использованы в описанных здесь способах. Таким образом, полинуклеотидные конструкции согласно изобретению включают все полинуклеотидные конструкции, которые могут быть использованы в способах согласно настоящему изобретению для трансформации растений, а также включают, но не ограничиваются теми, которые содержат дезоксирибонуклеотиды, рибонуклеотиды и их комбинации. Такие дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды включают как природные молекулы, так и синтетические аналоги. Полинуклеотидные конструкции согласно настоящему изобретению включают все формы полинуклеотидных конструкций, которые включают, но не ограничиваются, одноцепочечную форму, двуцепочечную форму, шпиличные структуры, петлевые и прямые структуры и подобные. Кроме того, для специалиста в данной области знаний понятно, что каждая описанная здесь нуклеотидная последовательность также включает комплементарную последовательность, являющуюся копией этой последовательности. Также является очевидным, что для экспрессии полинуклеотида согласно изобретению в клеткехозяине или другой интересующей клетке полинуклеотид обычно оперативно связан с промотором, который способен управлять экспрессией генов в этой интересующей клетке-хозяине. Способы согласно изобретению для экспрессии полинуклеотидов в клетке-хозяине не зависят от конкретного промотора. Способы охватывают использование любого промотора, известного в данной области знаний, который способен управлять экспрессией генов в интересующей клетке-хозяине. Настоящее изобретение включает AHASL полинуклеотидные молекулы, их фрагменты и варианты. Полинуклеотидные молекулы, которые являются фрагментами этих нуклеотидных последовательностей,также относятся к настоящему изобретению. Под термином "фрагмент" подразумевается часть полинуклеотидной последовательности, кодирующей AHASL белок согласно изобретению. Предпочтительно фрагмент AHASL полинуклеотидной последовательности согласно изобретению кодирует биологически активную часть AHASL белка. Биологически активная часть AHASL белка может быть получена изолированием этой части из одной из AHASL полинуклеотидной последовательности согласно изобретению и экспрессированием части кодирующей AHASL белок (например, методом рекомбинантной экспрессииin vitro) и определение активности кодирующей части AHASL белка. Полинуклеотидные молекулы, которые являются фрагментами нуклеотидной последовательности AHASL, кодирующей биологически активную часть AHASL, белка могут содержать по крайней мере 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1600, 1700,1800, 1900 или 2000 нуклеотидов или быть полноразмерными последовательностями (например, последовательность из 2013 нуклеотидов, в списке последовательностей SEQ ID NO: 30) в зависимости от целей их использования. Фрагмент AHASL нуклеотидной последовательности, который кодирует биологически активную часть AHASL белка, согласно изобретению будет кодировать по меньшей мере 200, 300, 400, 500, 550,650, или 650 смежных аминокислот или все аминокислоты, соответствующие полноразмерной последовательности AHASL белка согласно изобретению (например, последовательность из 670 аминокислот,SEQ ID NO: 1). Полинуклеотидные молекулы, содержащие нуклеотидные последовательности, которые являются вариантами раскрытых здесь нуклеотидных последовательностей, также входят в объем настоящего изобретения. " Варианты" AHASL нуклеотидных последовательностей согласно изобретению включают такие последовательности, которые кодируют мутанты AHASL полипептидов, описанных здесь, которые могут консервативно отличаться из-за вырожденности генетического кода. Такие встречающиеся в при- 22021541 роде аллельные варианты могут быть идентифицированы с использованием хорошо известных молекулярно-биологических технологий, таких как полимеразная цепная реакция (PCR) и методики гибридизации, как указано ниже. Вариант нуклеотидной последовательности также включает синтетические производные нуклеотидных последовательностей, которые могут быть получены, например, с использованием сайт-направленного мутагенеза, но которые по-прежнему сохраняют кодирующую последовательность AHASL белка, описанного в настоящем изобретении, как обсуждено ниже. Обычно вариант полинуклеотидной последовательности согласно изобретению имеет по крайней мере около 80, 85, 90, 91, 92,93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности с определенной нуклеотидной последовательностью, раскрытой здесь. Вариант AHASL полинуклеотидной последовательности кодирует мутант полипептидаAHASL, соответственно имеющий последовательность аминокислот, идентичную по крайней мере на 80,85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или на 99% аминокислотной последовательности AHASL полипептида, описанного здесь. Кроме того, специалисту в данной области знаний хорошо известно, что изменения могут быть получены благодаря мутациям в полинуклеотидной последовательности согласно изобретению, которые таким образом приведут к изменению в аминокислотной последовательности, кодирующей двойной или тройной мутант AHASL полипептида без потери биологической активности у этого двойного и тройного мутанта. Такие выделенные полинуклеотидные молекулы, кодирующие двойной и тройной мутантAHASL полипептида, имеющего последовательность, которая отличается от последовательности двойного и тройного мутанта, показанного на фиг. 1 и 2, могут быть получены индуцированием одной или более нуклеотидных замен, дополнения или делеции в соответствующей нуклеотидной последовательности, раскрытой здесь, такие как одна или более аминокислотных замен, дополнений или делеций, введенных в кодируемый белок. Мутации могут быть получены за счет стандартных методик, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Такие варианты нуклеотидных последовательностей также входят в объем настоящего изобретения. Например, предпочтительно консервативные замещения аминокислот могут быть выполнены в одном или более прогнозируемом положении, предпочтительно среди несущественных аминокислот. "Несущественная" аминокислота означает аминокислоту, которая может быть изменена в диком типе последовательности белка AHASL (например, последовательность SEQ ID NO: 1) без потери биологической активности, тогда как "существенная" аминокислота является необходимой для биологической активности. "Консервативные замещения аминокислот" являются теми замещениями, в которых остаток аминокислоты замещен остатком аминокислоты в похожем положении в цепи. Группы аминокислотных остатков, имеющих похожие положения в цепи, хорошо известны в данной области знаний. Эти группы включают аминокислоты основной стороны цепи (например, лизин, аргинин, гистидин), кислой стороны(например, аспартановая кислота, глутаминовая кислота), незаряженные полярные стороны цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярные стороны цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бетаразветвленные участки цепи (например, треинин, валин, изолейцин) и ароматические участки цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Такие замещения не были сделаны для консервативных аминокислотных остатков или для остатков, находящихся в пределах консервативных мотивов. Белки согласно изобретению могут быть изменены различными способами, включая аминокислотные замещения, делеции, транслокации и инсерции. Методики этих способов хорошо известны в данной области знаний. Например, варианты аминокислотных последовательностей AHASL белков могут быть мутацией ДНК. Методы получения мутаций и изменений нуклеотидной последовательности хорошо известны в данной области знаний. См., например, Kunkel (1985), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:488-492;(1983), Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York), данные здесь в качестве ссылок. Методика по получению аминокислотных замещений, которые на затрагивают биологическую активность интересующего белка, могут быть найдены в материалах Dayhoff et al. (1978), Atlas ofProtein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), включенных в описание в качестве ссылок. Консервативные замены, типа замены одной аминокислоты на другую, имеющую подобные свойства, могут быть предпочтительными. Признано, что молекулы полинуклеотидов и полипептидов согласно изобретению включают молекулы полинуклеотидов и полипептидов, имеющих нуклеотидную или аминокислотную последовательность, которая достаточно идентична двойной или тройной нуклеотидной последовательности, которая представлена на фиг. 1 и 2, или аминокислотной последовательности, представленной на фиг. 1 и 2. Термин "достаточно идентична" использован здесь для обозначения первой аминокислотной или нуклеотидной последовательности, которая содержит полное (достаточное) или минимальное число идентичных или эквивалентных (например, в похожей области цепи) аминокислот или нуклеотидов, и второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, такой, что первая и вторая аминокислотная или нуклеотидная последовательности имеют общую структурную область и/или общую выполняемую функцию. Например, аминокислотная или нуклеотидная последовательность, которая содержит общий структурный домен, имеющий по крайней мере 80% идентичности, предпочтительно 85% идентичности, бо- 23021541 лее предпочтительно 90, 95 или 98% идентичности, определена здесь как достаточно идентичная. Для определения процента идентичности между двумя аминокислотными или двумя нуклеотидными последовательностями последовательности выравнивают по длине для оптимизации условий сравнения. Процент идентичности между двумя последовательностями является функцией числа идентичных положений, разделенных между последовательностями (например, процент идентичности - число идентичных положений/общее число положений (например, перекрывание положений)100). В одном из вариантов осуществления две последовательности имеют одинаковую длину. Процентная идентичность между двумя последовательностями может быть определена при помощи методик, подобных описанным ниже, с промежутками или без них. В определении процента идентичности подсчитывается количество точных совпадений. Для определения процента идентичности между двумя последовательностями может быть использован математический алгоритм. Предпочтительным, но не ограничивающим, примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Karlin иNatl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877. Такой алгоритм введен в программы NBLAST и XBLAST ученымAltschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215:403. BLAST нуклеотидный поиск может быть осуществлен с помощью программы NBLAST, показание (сопоставление) - 100, размерность - 12, для получения нуклеотидной последовательности, гомологичной полинуклеотидной молекуле согласно изобретению. BLAST протеиновый поиск может быть выполнен с помощью программы XBLAST, показание - 50, размерность - 3,для получения аминокислотной последовательности, гомологичной молекуле белка согласно изобретению. Для получения последовательности, содержащей разрывы, для целей сравнения может быть использована программа Gapped BLAST, которая описана в Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389. Альтернативно, может быть использована программа PSI-Blast для выполнения повторного поиска, который обнаруживает отдаленные соотношения между молекулами. См., Altschul et al. (1997), как указано выше. При выполнении программ BLAST, Gapped BLAST и PSI-Blast параметры по умолчанию, соответствующие этим программам (XBLAST и NBLAST), могут быть использованы. См.http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Существуют другие предпочтительные, не ограничивающие, примеры математических программ, используемых для сравнительного анализа последовательностей от Myers и Miller(1988), CABIOS, 4:11-17. Такие алгоритмы включены в программу ALIGN (версия 2.0), которая является частью пакета программного обеспечения GCG выравнивания последовательностей. При использовании программы ALIGN для сравнения аминокислотной последовательности может использоваться таблица РАМ 120 массы остатков, штраф по длине 12, штраф на удлинение гена 4. Сравнение может быть выполнено и визуально. Если не заявлено иначе, значения идентичности последовательности относятся к значению, полученному с использованием полноразмерной последовательности изобретения и многократного сравнения с использованием программы Clustal W (Nucleic Acid Research, 22(22):4673-4680, 1994), используя программу AlignX пакета Vector NTI, адаптированную версию 9 (Invitrogen, 1600 Faraday Ave., Carlsbad, CA 92008), используя стандартные параметры или любую другую аналогичную программу. Под термином"аналогичная программа" понимается любая сравнительная программа для любых двух рассматриваемых последовательностей, которая производит выравнивание последовательностей, обеспечивающее сравнение последовательностей, имеющих идентичный нуклеотид или остатки аминокислоты, и определение процента идентичности в сравнении с соответствующим выравниванием, произведенным AlignX в векторе пакета программ, версия 9 набора NTI. Делеции, инсерции и замещения в последовательности белка, охваченных здесь, как ожидается, не повлекут радикальных перемен в активности белка. Однако, когда трудно предсказать точный результат замещения, делеции или инсерции, любой специалист в данной области сможет оценить этот результат обычным исследовательским испытанием. Таким образом, активность может быть оценена с помощью исследования AHAS активности, см., например, Singh et al. (1988), Anal. Biochem. 171:173-179, приведенного в качестве ссылки. Как раскрыто здесь, полинуклеотид согласно изобретению используется для повышения толерантности к гербицидам у растений, которые содержат в своем геноме ген, кодирующий гербицидустойчивый AHASL белок. Такой ген может быть эндогенным или трансгенным. Дополнительно, в определенном осуществлении, полинуклеотид согласно настоящему изобретению может быть соединен в любой комбинации с интересующими полинуклеотидными последовательностями для цели создания растения с желательным фенотипом. Например, полинуклеотид согласно настоящему изобретению может быть соединен с любым другим полинуклеотидом, кодирующим полипептид, имеющий пестицидную и/или инсектицидную активность, такой как, например, токсический белок Bacillus thuringiensis (описанный в патентах US 5366892; 5747450; 5737514; 5723756; 5593881 и Geiser et al. (1986), Gene, 48:109). Полученные комбинации могут также включать множественные копии любого интересующего полинуклеотида. В то же время полинуклеотид согласно настоящему изобретению может найти применение в качестве селективного маркера для трансформированных растений, экспрессионные векторы согласно на- 24021541 стоящему изобретению могут включать другие селективные маркеры генов для селекции трансформированных клеток. Селективные маркерные гены, включая таковые в настоящем изобретении, используются для селекции трансформированных клеток или тканей. Маркерные гены включают, но не ограничиваются, гены, кодирующие устойчивость к антибиотикам, такие как, кодирующие неомицин фосфонрансферазу II (NEO) и гидромицин фосфонрансферазу (НРТ), так же как гены, отвечающие за устойчивость к гербицидам, таким как глифосинат аммония, бромоксилин, имидазолиноны и 2,4-дихлорофеноксиацетатof Experimental Pharmacology, vol. 78 ( Springer-Verlag, Berlin); Gill et al. (1988), Nature, 334:721-724, приведенные здесь в качестве ссылок. Вышеупомянутый список выбираемых маркерных генов не предназначен, чтобы ограничить объем притязаний. Любой выбираемый маркерный ген может использоваться в настоящем изобретении. Выделенная молекула полинуклеотида, включающая нуклеотидную последовательность, которая кодирует AHASL белки согласно изобретению, может быть использована в векторах для трансформации растений, чтобы растение имело повышенную устойчивость к гербицидам, а именно к имидазолиноновым или к сульфонилмочевинным гербицидам. Выделенная молекула полинуклеотида, кодирующаяAHASL согласно изобретению, может быть использована в векторах одна или в комбинации с нуклеотидной последовательностью, кодирующей малую субъединицу AHAS (AHASS) фермента, определяющего устойчивость к гербицидам у растений. См. патент США 6348643, приведенный здесь в качестве ссылки. Изобретение также относится к растительным экспрессионным векторам, содержащим промотор,который управляет экспрессией генов в растении и оперативно связан с выделенной молекулой полинуклеотида согласно изобретению. Выделенная молекула полинуклеотида включает нуклеотидную последовательность, которая кодирует AHASL белки согласно изобретению, или функциональный фрагмент,или их варианты. Растительный экспрессионный вектор согласно изобретению не зависит от специфического промотора, лишь бы только этот промотор был способен к управлению экспрессии генов в клетке растения. Предпочтительными векторами являются конститутивные промоторы и тканеспецифичные промоторы. Трансформационные векторы согласно изобретению могут быть использованы для получения растений, трансформированных интересующими генами. Трансформационные векторы будут содержать селективные маркерные гены согласно изобретению и интересующие гены, которые будут введены и могут типично экспрессироваться в трансформированном растении. Такие селективные маркерные гены включают полинуклеотид согласно изобретению, кодирующий двойной или тройной мутант полипептида AHASL, где полинуклеотид оперативно связан с промотором, управляющим экспрессией генов в растительной клетке. Для использования в растении или растительной клетке трасформационный вектор содержит селективные маркерные гены, содержащие полинуклеотид согласно изобретению, который кодирует двойной или тройной мутант полипептида AHASL, оперативно связанный с промотором,управляющим экспрессией генов в растительной клетке. Интересующие гены согласно изобретению могут быть изменены в зависимости от желаемого результата. Например, различные изменения в фенотипе могут включать различные интересующие изменения, включая изменение состава жирных кислот в растении, изменение содержания аминокислоты в растении, изменение механизмов защиты от насекомых и/или патогенов растения и подобные. Эти результаты могут быть достигнуты, обеспечивая экспрессию гетерологичных продуктов или увеличивая экспрессию эндогенных продуктов растения. Альтернативно, результаты могут быть достигнуты, обеспечивая сокращение экспрессии одного или более эндогенных продуктов, особенно ферментов или кофакторов растения. Эти изменения приводят к изменению в фенотипе трансформированного растения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения интересующие гены включают гены устойчивости к насекомым, например, такие как, токсический белок Bacillus thuringiensis (патенты США 5366892; 5747450; 5736514; 5723756; 5593881 и Geiser et al. (1986), Gene, 48:109).AHASL белки или полипептиды согласно изобретению могут быть выделены, например, из растения подсолнечника и могут использоваться в комбинации. Также выделенная молекула полинуклеотида,кодирующего AHASL белок согласно изобретению, может быть использована для экспрессии AHASL- 25021541 белка согласно изобретению в микроорганизмах, таких как Е.coli или дрожжи. ЭкспрессированныйAHASL белок может быть выделен из экстрактов Е.coli или дрожжей с помощью методов, хорошо известных специалисту в данной области знаний. Полинуклеотид согласно изобретению может быть использован для увеличения устойчивости гербицид-толерантных растений. Одним из осуществлений настоящего изобретения являются гербицидтолерантные растения, содержащие полинуклеотид согласно изобретению, кодирующий двойной или тройной мутант AHASL полипептида. Изобретение далее относится к гербицид-толерантным растениям,которые содержат два или более полинуклеотида, кодирующего единичный мутант AHASL полипептида. Полинуклеотиды, кодирующие гербицид-толерантные AHASL белки и гербицид-толерантные растения, содержащие эндогенный ген, который кодирует гербицид-толерантный белок AHASL, относятся к настоящему изобретению и известны в данной области знаний. См., например, патенты США 5013659, 5731180, 5767361, 5545822, 5736629, 5773703, 5773704, 5952553 и 6274796; которые приведены в описании в качестве ссылок. Способы увеличения устойчивости гербицид-толерантных растений включают трансформацию гербицид-толерантного растения хотя бы одной полинуклеотидной конструкцией, содержащей промотор, управляющий экспрессией генов в растительных клетках, оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению. Многочисленные векторы трансформации растения и методы трансформации растения являются общеизвестными, см., например, G. et al. (1986), Plant Physiol., 81:301-305; Fry, J., et al. (1987), Plant Cellal. (1994), Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman, et al. (1994), Bio-Technology, 12: 919923; Ritala, et al. (1994),Plant. Mol. Biol. 24:317-325 и Wan, Y. С. и Lemaux, P. G. (1994), Plant Physiol. 104:3748. Способы согласно изобретению подразумевают введение полинуклеотидной конструкции в растение. Под "введением" подразумевается предоставление растению конструкции полинуклеотида в таком виде, что конструкция получает доступ к внутреннему пространству клетки растения. Способы согласно изобретению не зависят от конкретных методов введения полинуклеотидной конструкции в растение, они просто должны обеспечивать доступ полинуклеотидной конструкции к внутреннему пространству хотя бы одной клетки растения. Такие способы введения полинуклеотидной конструкции в растения хорошо известны в данной области знаний, но не ограничиваются методами стабильной трансформации, методами нестабильной трансформации и вирус-опосредованными методами."Стабильная трансформация" подразумевает, что полинуклеотидная конструкция вводится в растение и интегрируется в геном растения и способна передаваться из поколения в поколение. "Нестабильная трансформация" подразумевает, что полинуклеотидная конструкция вводится в растение и не интегрируется в геном растения. Для трансформации растения или растительной клетки нуклеотидные последовательности согласно изобретению вводятся с использованием стандартных методик в любой вектор, известный в данной области знаний, который подходит для экспрессии нуклеотидных последовательностей в растении или растительной клетке. Выбор вектора зависит от предпочитаемой методики трансформации и желаемого вида растения, которое должно быть трансформировано. В одном из осуществлений изобретение относится к нуклеотидной последовательности AHASL, оперативно связанной с растительным промотором, который вызывает увеличение экспрессии генов в растительной клетке, и к конструкции, которая затем вводится в растение, которое чувствительно к имидазолиноновым гербицидам или сульфомочевине и к регенерации трансформированного растения. Трансформированные растения устойчивы к такому уровню имидазолинонового гербицида и сульфомочевине, которые уничтожили бы или значительно повредили нетрансформированное растение. Этот метод может быть применен к любым видам растения, однако полезнее всего это будет для хлебных злаков. Методики конструирования растительных экспрессионных векторов и введения чужеродной нуклеиновой кислоты в растения являются общеизвестными в данной области знаний и были предварительно описаны. Например, чужеродная ДНК может быть введена в растение с использованием векторов на основе плазмид, индуцирующих опухоли (Ti-плазмиды). Методика трансформации с использованиемAgrobacterium также хорошо известна в данной области знаний. Штаммы Agrobacterium (например,- 26021541Agrobacterium tumefaciens или Agrobacterium rhizogenes) содержат (Ti- или Ri-плазмиды) и Т-ДНК элементы, которые перемещаются в растение после его инфицирования штаммом Agrobacterium. Т-ДНКRi- или Ti-плазмиде или отдельно входит в состав так называемого бинарного вектора. Методы Agrobacterium опосредованной трансформации описаны например в Horsch R.B. et al. (1985), Science, 225:1229f.Agrobacterium, опосредованная трансформацией, может быть использована как у двудольных, так и у однодольных растений. Трансформация растений с использованием Agrobacteria описана в White F.F.,Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; Vol. 1, Engineering and Utilization, edited by S.D. Kung andPotrykus (1991), Annu Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42:205-225. Другие методы, используемые для вставки чужеродной ДНК, включают PEG-опосредованную трансформацию протопластов, электропорацию, микроинъекции ДНК в клетку, баллистику или бомбардировку микрочастицами для прямого внедрения ДНК. Такие методы хорошо известны в данной области знаний (US 5405765 автора Vasil et al.; Bilang etPress, Inc. (1989). Метод трансформации зависит от вида растительной клетки, которая должна быть трансформирована, стабильности используемого вектора, уровня экспрессии генного продукта и других параметров. Другие методы введения нуклеотидной последовательности в растительную клетку и последующее встраивание в геном растения включают микроинъекции ДНК в клетку Crossway et al. (1986),Biotechniques 4:320-334, электропорацию, как описано у Riggs et al. (1986), Proc. Natl. Acad. Sci. USA,83:5602-5606, Agrobacterium-опосредованная трансформация описана у Townsend et al. US 5563055, Zhao(пыльца); Kaeppler et al. (1990), Plant Cell Reports 9:415-418 и Kaeppler et al. (1992), Theor. Appl. Genet. 84:560-566 (трансформация клеток посредством прокалывания при встряхивали их в суспензии микроигл); D'Halluin et al. (1992), Plant Cell, 4:1495-1505 (electroporation); Li et al. (1993), Plant Cell Reports 12:250-255 и Christou and Ford (1995), Annals of Botany 75:407-413 (rice); Osjoda et al. (1996), Nature,Biotechnology 14:745-750 (трансформация кукурузы с использованием Agrobacterium tumefaciens); которые здесь указаны в виде ссылок. Полинуклеотид согласно изобретению может быть введен в растение при контактировании с вирусом или вирусной нуклеиновой кислотой. В общих чертах эти методы включают соединение полинуклеотидной конструкции согласно изобретению с вирусной ДНК или РНК молекулой. Очевидно, что AHASL белок согласно изобретению может первоначально синтезироваться как часть вирусного полибелка, который затем процессируется при протеолизе in vivo или in vitro до получения желаемого рекомбинантного белка. Далее, очевидно, что промотор согласно изобретению также охватывает промоторы, используемые для транскрипции вирусной полимеразы. Методы введения полинуклеотидной конструкции в растение и экспрессирования белка, кодируемого ею, включает вирусные ДНК или РНК молекулы, хорошо известные в данной области знаний. См., например, патенты США 5889191, 5889190, 5866785, 5589367 и 5316931, приведенные здесь в качестве ссылок.- 27021541 Растения могут быть выращены из трансформированных клеток в соответствии с обычными методиками. См., например, McCormick et al. (1986), Plant Cell Reports, 5:81-84. Эти растения могут быть выращены и также опылены тем же трансформированным видом или другим видом, и полученный гибрид будет иметь конститутивную экспрессию желаемого признака в фенотипе. Два или больше поколения могут быть выращены, чтобы гарантировать, что экспрессия желательного признака фенотипично устойчиво поддерживается и унаследована, затем семена собираются, чтобы гарантировать, что экспрессия желательного фенотипичного признака была достигнута. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает трансформированное семя (так называемое "трансгенное семя"), имеющее полинуклеотидную конструкцию согласно изобретению, например экспрессионный вектор, стабильно встроенный в его геном. Настоящее изобретение может быть использовано для трансформации любого вида растения, включая, но не ограничиваясь, однодольные и двудольные растения. Например, растения интересующих видов включают, но не ограничиваются, кукурузу (Zea mays), виды семейства Brassica (такие как В.napus,В.rapa, В.juncea), особенно те виды Brassica, которые используют для получения масла из семян, люцерну (Medicago sativa), рис (Oryza sativa), рожь (Secale cereale), сорго (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare),просо (т.е. пеннисетум сизый (Pennisetum glaucum), просо обыкновенное (Panicum miliaceum), просо итальянское (Setaria italica), просо пальчатое (Eleusine coracana, подсолнечник (Helianthus annuus), сафлорamygdalus), сахарную свеклу (Beta vulgaris), сахарный тростник (Saccharum spp.), овес, ячмень, овощи,декоративные растения и хвойные. Предпочтительно растения настоящего изобретения относятся к сельскохозяйственным растениям (например, подсолнечник, Brassica spp., хлопок, сахарная свекла, соя, земляной орех, люцерна, сафлор, табак, зерновые, рис, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, сорго, просо и т.д.). Растения согласно изобретению являются гербицид-устойчивыми и, таким образом, могут найти свое применение в способах контролирования роста сорняков, которые включают внесение гербицидов. Далее настоящее изобретение относится к способу контролирования роста сорняков на территории выращивания устойчивого к гербициду растения. Способ включает внесение эффективного количества гербицида под сорняки и под устойчивое к гербициду растение, где растение имеет повышенную устойчивость хотя бы к одному гербициду, ингибирующему активность AHAS, в частности к имидазолиноновому гербициду или сульфомочевине, по сравнению с растением дикого типа. В таком способе контролирования роста сорняков гербицидустойчивым растением является растение согласно изобретению, предпочтительно зерновые растения,включая, но не ограничиваясь, подсолнечник, люцерну, Brassica spp., сою, хлопок, сафлор, земляной орех, табак, томат, картофель, пшеницу, рис, кукурузу, сорго, овес, ячмень и просо. Предоставляя растения с повышенной устойчивостью к гербицидам, особенно к имидазолиноновым гербицидам и сульфомочевине, широкое разнообразие осуществлений может использоваться для того,чтобы защитить растения от сорняков, увеличить рост растения и уменьшить конкуренцию среди питательных веществ. Гербицид может использоваться отдельно для довсходового, послевсходового, предпосевного и посевного контроля роста сорняков на территории роста описанных здесь растений или гербицид может содержать другие добавки. Гербицид также может быть использован при обработке семян. Добавки, которые используются в составе смесей имидазолиноновых или сульфонилмочевинных гербицидов, включают другие гербициды,поверхностно-активные вещества, адъюванты, лиофилизирующие агенты, адгезивные агенты, стабилизирующие агенты и подобные. Состав гербицида может быть выполнен в сухой или влажной форме, которая включает, но не ограничивается, сыпучий порошок, концентрат в виде эмульсии или жидкий концентрат. Гербицид и составы гербицида могут быть применены в соответствии с обычными методами,например распылением, орошением, ирригацией, опылением или подобными методами. Настоящее изобретение относится к нетрансгенным и трансгенным растениям и семенам с увеличенной устойчивостью по крайней мере к одному гербициду, особенно к гербициду, ингибирующемуAHAS, предпочтительно к имидазолиноновым и сульфонилмочевинным гербицидам, наиболее предпочтительно к имидазолиноновым гербицидам. В предпочтительном варианте осуществления изобретения растения и семена согласно изобретению демонстрируют более высокий уровень устойчивости к гербицидам по сравнению с подобными растениями, которые содержат только один единственный мутант полипептида AHASL.- 28021541 Такие растения и семена согласно изобретению могут найти использование в улучшенных методах контроля роста сорняков, которые предусматривают внесение гербицида под сорняки и под устойчивые к гербициду растения в эффективном количестве, которое включает более высокую концентрацию гербицида или уровень, который может применяться к подобным растениям, включающим только один единственный мутант полипептида AHASL. Соответственно, такие улучшенные способы осуществляют контроль за ростом сорняков, улучшенный по сравнению с существующими методами, включающих растения, имеющие только один единственный мутант полипептида AHASL, и применение более низкой концентрации или уровня гербицида. Настоящее изобретение относится к гербицид-устойчивым растениям, содержащим полинуклеотид,кодирующий двойной или тройной мутант полипептида AHASL, и гербицид-устойчивым растениям,содержащим два или более полинуклеотида, кодирующего единичный мутант полипептида AHASL. Эти устойчивые к гербицидам растения настоящего изобретения могут найти применение в способах получения устойчивых к гербицидам растений при обычном размножении растения, включая половое размножение. Способы включают перекрестное опыление первого растения, которое является устойчивым к гербициду растением согласно настоящему изобретению, со вторым растением, которое не является устойчивым к гербициду. Второе растение может быть любым растением, которое является способным к созданию жизнеспособного потомства растения (т.е. семян), когда оно скрещено с первым растением. Как правило, но необязательно, первые и вторые растения относятся к одному и тому же виду. Способы могут включать селекцию потомства растений, которые содержат полинуклеотид, кодирующий полипептид мутанта AHASL, либо два или более полинуклеотида, кодирующего единичный мутант полипептидаAHASL первого растения. Способы изобретения могут также включать одно или более поколений от перекрестного скрещивания потомства растения от первого скрещивания с растением той же линии или генотипа или с первым, или вторым растением. Альтернативно, потомство первого скрещивания или любого последующего скрещивания может быть скрещено с третьим растением, которое принадлежит к другой линии или имеет другой генотип, чем первое или второе растение. Устойчивые к гербициду растения согласно изобретению, которые включают полинуклеотид, кодирующий двойной или тройной мутант полипептида AHASL, и устойчивые к гербициду растения, включающие два или более полинуклеотида, кодирующих единственные мутанты полипептида AHASL, также могут найти использование в способах увеличения сопротивляемости растения к гербицидам посредством размножения растения, включающего половое размножение. Способы включают скрещивание первого растения, которое является устойчивым к гербициду растением согласно изобретению, со вторым растением, которое может не быть устойчивым к тому же самому гербициду или гербицидам как первое растение или может быть более устойчиво к другому гербициду или гербицидам, чем первое растение. Второе растение может быть любым растением, которое является способным к созданию жизнеспособного потомства растения (т.е. семян) при скрещивании с первым растением. Как правило, но необязательно, первое и второе растения принадлежат к одному и тому же виду. Способы могут дополнительно включать селекцию потомства растений, которые содержат полинуклеотид, кодирующий мутант полипептида AHASL, или два или более полинуклеотида, кодирующего единичные мутанты полипептидов AHASL от первого растения и признак устойчивости к гербициду от второго растения. Потомство растений, полученных способом согласно настоящему изобретению, имеют увеличенную устойчивость к гербициду по сравнению с первым или со вторым растением или обоими. Когда первые и вторые растения являются устойчивыми к различным гербицидам, то потомство растений будет иметь комбинированные признаки устойчивости от первого и второго растений. Способы согласно изобретению могут дополнительно включать одно или более поколений от обратного скрещивания потомства растения от первого скрещивания с растением той же самой линии или генотипа, как и первое или второе растение. Альтернативно, потомство от первого скрещивания или любого последующего скрещивания может быть скрещено с третьим растением, которое принадлежит к другой линии или имеет другой генотип, чем первое или второе растение. Настоящее изобретение также относится к растениям, органам растения, ткани растения, клетке растения, семенам и нечеловеческим клеткам-хозяина, которые трансформированы по крайней мере одной молекулой полинуклеотида экспрессионным вектором или вектором трансформации согласно изобретению. Такие трансформированные растения, органы растения, ткани растения, клетки растения, семена и нечеловеческие клетки-хозяина имеют увеличенную толерантность или устойчивость по крайней мере к одному гербициду, к такому уровню гербицида, который уничтожает или предотвращает рост нетрансформированного растения, ткани растения, клетки растения или нечеловеческой клетки-хозяина соответственно. Предпочтительно трансформированные растения, ткани растения, клетки растения и семена согласно изобретению являются Arabidopsis thaliana и зерновые культуры. Настоящее изобретение относится к способам, которые включают использование по крайней мере одного гербицида, ингибирующего активность AHAS, выбранного из группы, состоящей из имидазолиноновых гербицидов, сульфонилмочевины, триазолопиримидиновых гербицидов, пиримидинилоксибензоатных гербицидов, сульфониламинокарбонилтриазолиновых гербицидов и их смесей. В этих способах гербицид, ингибирующий AHAS, может быть применен любым методом, известным в данной области

МПК / Метки

МПК: C12N 15/82, C12N 9/88, A01H 5/10, A01H 5/00

Метки: клетки, ткани, ahas, рекомбинантный, части, полинуклеотид, отбора, растениям, мутантный, гербицидам, трансгенного, варианты, сорняками, синтазу, идентификации, растение, семена, роста, придания, встречающееся, борьбы, предотвращения, ацетогидроксикислотную, толерантного, вегетативного, толерантности, растения, ингибирующим, соединениям, природе, способ, нежелательного, получения

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/30-21541-rekombinantnyjj-ili-mutantnyjj-polinukleotid-dlya-pridaniya-rasteniyam-tolerantnosti-k-gerbicidam-ingibiruyushhim-acetogidroksikislotnuyu-sintazu-ahas-varianty-rastenie-ne-vstrecha.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (ahas) (варианты), растение, не встречающееся в природе, и его семена, способ борьбы с сорняками, способ получения трансгенного растения, толерантного к соединениям, ингибирующим ahas, способ идентификации или отбора клетки растения, ткани растения или растения или части растения, способ предотвращения нежелательного вегетативного роста и способ идентификации растения</a>

Похожие патенты