Моноклональное антитело или его фрагмент, связывающиеся с полипептидом il-22ra, гуманизированное антитело, полученное из указанного антитела, гибридомы, продуцирующие антитело, и применение указанного антитела

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые экспрессируются гибридомой, выбранной из группы, состоящей из:

a) гибридомного клона 280.46.3.4 АТСС РТА - 6284;

b) гибридомного клона 281.73.49.1.1 АТСС РТА - 6285;

c) гибридомного клона 283.4.1.2 АТСС РТА - 6287;

d) гибридомного клона 283.52.5.4 АТСС РТА - 6311 и

e) гибридомного клона 283.108.2.3 АТСС РТА - 6286,

где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент связываются с IL-22RA полипептидом, в частности с SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3.

2. Гуманизированное антитело, полученное из антитела по п.1, где указанное гуманизированное антитело связывается с SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3.

3. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент пегилированы.

4. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержат радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентную метку, хемилюминесцентную метку, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4.

6. Иммуноконъюгат, включающий антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3.

7. Иммуноконъюгат по п.6, где иммуноконъюгат является пегилированным.

8. Иммуноконъюгат по п.6, где иммуноконъюгат дополнительно содержит радионуклид, фермент, субстрат, кофактор, флуоресцентную метку, хемилюминесцентную метку, пептидную метку, магнитную частицу, лекарственное средство или токсин.

9. Фармацевтическая композиция, содержащая иммуноконъюгат по любому из пп.6-8.

10. Гибридома, продуцирующая моноклональное антитело по п.1, выбранная из группы, состоящей из:

a) гибридомного клона 280.46.3.4 АТСС РТА - 6284;

b) гибридомного клона 281.73.49.1.1 АТСС РТА - 6285;

c) гибридомного клона 283.4.1.2 АТСС РТА - 6287;

d) гибридомного клона 283.52.5.4 АТСС РТА - 6311 и

e) гибридомного клона 283.108.2.3 АТСС РТА - 6286.

11. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1 или 2 для получения лекарственного средства для лечения млекопитающего, страдающего воспалительным заболеванием, связанным с IL-22RA, путем снижения воспаления.

12. Применение по п.11, где заболевание представляет собой хроническое воспалительное заболевание.

13. Применение по п.12, где заболевание представляет собой хроническое воспалительное заболевание, выбранное из группы, состоящей из воспалительного заболевания кишечника, язвенного колита, болезни Крона, артрита, артрита при псориазе, ревматоидного артрита и псориаза.

14. Применение по п.11, где заболевание представляет собой острое воспалительное заболевание.

15. Применение по п.14, где заболевание представляет собой острое воспалительное заболевание, выбранное из группы, состоящей из эндотоксемии, септицемии, септического шока и инфекционных заболеваний.

Текст

Смотреть все

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО ФРАГМЕНТ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С ПОЛИПЕПТИДОМ IL-22RA, ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО, ПОЛУЧЕННОЕ ИЗ УКАЗАННОГО АНТИТЕЛА, ГИБРИДОМЫ, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛО, И ПРИМЕНЕНИЕ УКАЗАННОГО АНТИТЕЛА Настоящее изобретение относится к антителам против IL-22RA и их антигенсвязывающим фрагментам, а также к способам антагонистического воздействия на IL-22 или IL-20 и IL-22 с использованием таких антител и их фрагментов. 015706 Перекресная ссылка на родственные заявки По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США 60/621553, поданной 22 октября 2004 г., которая включена в настоящее описание изобретения в качестве ссылки. Уровень техники Цитокины являются растворимыми низкомолекулярными белками, которые опосредуют различные биологические процессы, в том числе регуляцию роста и дифференцировку большого числа типов клеток(см., например, публикации Arai et al., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul and Seder, Cell 76:241 (1994. Белки, составляющие группу цитокинов, включают интерлейкины, интерфероны, колониестимулирующие факторы, факторы некроза опухолей и другие регуляторные молекулы. Например, интерлейкин-17 человека является цитокином, который стимулирует экспрессию интерлейкина-6, молекул внутриклеточной адгезии 1, интерлейкина-8, колониестимулирующего фактора гранулоцитарных макрофагов и экспрессию простагландина Е 2, а также участвует в селективном созревании гемопоэтических CD34+ клеток-предшественников в нейтрофилы (Yao et al., J.Immunol. 155:5483 (1995); Fosseiz et al., J. Exp. Med. 183:2593 (1996. Рецепторы, связывающие цитокины, обычно состоят из одного или нескольких интегральных белков мембраны, которые связывают цитокин с высоким сродством и передают сигнал связывания клетке через цитоплазматические части определенных субъединиц рецептора. Рецепторы цитокинов распределены в несколько классов на основании сходства их внеклеточных лигандсвязывающих доменов. Например, рецепторы, участвующие в связывании и/или передаче сигнала интерферонов, относятся к семейству рецепторов цитокинов класса II на основании характерного внеклеточного домена, состоящего из 200 остатков. Продемонстрированная in vivo активность цитокинов и их рецепторов указывает на возможность клинического применения указанных веществ и потребность в других цитокинах, рецепторах цитокинов,агонистах цитокинов и антагонистах цитокинов. Например, показанная in vivo активность семейства провоспалительных цитокинов свидетельствуют об их большом клиническом потенциале и необходимости в антагонистах провоспалительных молекул. Целью настоящего изобретения является удовлетворение потребности в антагонистах провоспалительных цитокинов IL-20 и IL-22. Антагонисты по настоящему изобретению, способные блокировать, ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать активность IL-22, IL-20 или IL-20 и IL-22 вместе, включают растворимые рецепторы IL-22RA и нейтрализующие антитела против IL-22RA. Настоящее изобретение также относится к применению указанных веществ при лечении воспалительных заболеваний, а также к композициям и способам их получения. Подробное описание изобретения 1. Краткий обзор. Наряду с другими изобретениями настоящее изобретение относится к новому применению растворимого рецептора, обозначенного "Zcytor11" или "IL-22RA", и нейтрализующих антител к рецепторам цитокинов IL-22RA. Настоящее изобретение относится также к фрагментам растворимого полипептидаIL-22RA и слитым белкам, к их применению при лечении воспалительных и аутоиммунных заболеваний человека. Антитела против IL-22RA и растворимые рецепторы IL-22RA по настоящему изобретению, в том числе нейтрализующие антитела против IL-22RA по настоящему изобретению, могут быть использованы для блокирования, ингибирования, ослабления, антагонистического воздействия или нейтрализации активности IL-22 или IL-20 либо одновременно IL-20 и IL-22 при лечении специфических заболеваний человека, таких как псориаз, псориатический артрит, артрит, эндотоксемия, воспалительное заболевание кишечника (IBD), колит и другие воспалительные состояния, раскрытые в настоящем описании изобретения. Иллюстративная нуклеотидная последовательность, кодирующая Zcytor11 (IL-22RA), показана вSEQ ID NO: 1; кодируемый полипептид показан в SEQ ID NO: 2. IL-22RA является субъединицей рецептора как IL-20, так и IL-22. Zcytor11 (IL-22RA) описан в патенте США 5965704, публикации WIPOWO 02/12345 и публикации WIPO WO 02/072607, находящихся в свободном доступе. Анализ клона кДНК человека, кодирующей IL-22RA (SEQ ID NO: 1), позволил выявить открытую рамку считывания,кодирующую 574 аминокислоты (SEQ ID NO: 2), которая содержит внеклеточный лигандсвязывающий домен, состоящий примерно из 211 аминокислотных остатков (остатки 18-228 SEQ ID NO: 2; SEQ IDNO: 3), трансмембранный домен, состоящий примерно из 23 аминокислотных остатков (остатки 229-251SEQ ID NO: 2), и внутриклеточный домен, состоящий примерно из 313 аминокислотных остатков (остатки 252-574 SEQ ID NO: 2). Таким образом, молекулы по настоящему изобретению включают полипептиды, содержащие цитокинсвязывающий домен с аминокислотными остатками 18-228 SEQ ID NO: 2; SEQID NO: 3. В одном из вариантов осуществления изобретения растворимый рецептор IL-22R по настоящему изобретению слит с константной областью тяжелой цепи (характерная последовательность представлена в SEQ ID NO: 4). Специалистам в данной области должно быть понятно, что границы указанных доменов являются приблизительными. Возможна делеция остатков у концов доменов. Как будет описано ниже, настоящее изобретение относится к выделенным полипептидам, содер-1 015706 жащим аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%,по крайней мере на 90% или более чем на 95%, в частности на 96, 97, 98, 99% или более идентична эталонной аминокислотной последовательности, состоящей из 18-228 остатков SEQ ID NO: 2, которая также показана как SEQ ID NO: 3, где выделенный полипептид специфически связывается с антителом, которое специфически связывается с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 3. Иллюстративными полипептидами являются полипептиды, содержащие аминокислотные остатки SEQ ID NO: 2 или аминокислотные остатки SEQ ID NO: 3. Кроме того, настоящее изобретение относится к вышеописанным выделенным полипептидам, которые связывают IL-22 (например, полипептидная последовательность IL-22 человека, показанная в SEQ ID NO: 6). Полинуклеотидная последовательность IL-22 человека представлена в SEQ ID NO: 5. Полинуклеотидная последовательность IL-22 мыши представлена в SEQ ID NO: 10, и соответствующий полипептид представлен в SEQ ID NO: 11. Настоящее изобретение относится также к вышеописанным выделенным полипептидам, связывающимIL-20 (например, полипептидная последовательность IL-20 человека, представленная в SEQ ID NO: 8; публикация WIPOWO 99/27103). Полинуклеотидная последовательность IL-20 человека представлена в SEQ ID NO: 7. Настоящее изобретение относится также к выделенным полипептидам и антигенным детерминантам, содержащим по крайней мере 15 последовательных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3. Иллюстративными полипептидами являются полипептиды, которые содержат SEQ ID NO: 3, ее антигенную детерминанту или функциональные фрагменты, связывающие IL20 или IL-22. Кроме того, настоящее изобретение относится к вышеописанным выделенным полипептидам, которые связывают, блокируют, ингибируют, ослабляют, оказывают антагонистическое действие или нейтрализуют активность IL-22 или IL-20. Настоящее изобретение относится также к вариантным полипептидам IL-22RA, в которых аминокислотная последовательность идентична аминокислотным остаткам SEQ ID NO: 3, выбранным из группы аминокислотных остатков, обладающих по крайней мере 70% идентичностью, по крайней мере 80% идентичностью, по крайней мере 90% идентичностью, по крайней мере 95% идентичностью или более чем 95% идентичностью, в частности, 96, 97, 98, 99% или более высокой идентичностью, при этом любое различие между аминокислотной последовательностью вариантного полипептида и соответствующей аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3 представляет собой одну или несколько замен консервативных аминокислот. Такие замены консервативных аминокислот рассмотрены в настоящем описании изобретения. Кроме того, настоящее изобретение относится к вышеописанным выделенным полипептидам, которые связывают, блокируют, ингибируют, ослабляют, оказывают антагонистическое действие или нейтрализуют активность IL-22 или IL-20. Настоящее изобретение также относится к антителам и фрагментам антител, которые специфически связываются с такими полипептидами. Характерные антитела включают нейтрализующие антитела, поликлональные антитела, моноклональные антитела мыши, гуманизированные антитела, выделенные из моноклональных антител мыши, и моноклональные антитела человека. Иллюстративные фрагменты антител включают F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv и минимальные распознающие единицы. Нейтрализующие антитела предпочтительно связывают IL-22RA и, таким образом, блокируют, ингибируют, ослабляют, антагонистически воздействуют или нейтрализуют взаимодействия IL-20 и IL-22 с IL-22RA; в объем настоящего изобретения входят также нейтрализующие антитела против IL-22RA, которые блокируют, ингибируют, ослабляют, оказывают антагонистическое действие или нейтрализуют связывание IL20 или IL-22 с IL-22RA. То есть нейтрализующие антитела против IL-22RA по настоящему изобретению могут связывать, блокировать, ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать IL-20 или IL-22, либо одновременно связывать, блокировать, ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать IL-20 и IL-22. Настоящее изобретение, кроме того, относится к композициям, содержащим носитель и пептид, полипептид или антитело, раскрытые в настоящем описании изобретения. Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и по крайней мере один экспрессирующий вектор или рекомбинантный вирус, содержащий такой экспрессирующий вектор. Настоящее изобретение далее относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и полипептид или антитело, раскрытые в настоящем описании изобретения. Настоящее изобретение также относится к антиидиотипическим антителам или фрагментам антиидиотипических антител, специфически связывающим антитело или фрагмент антитела, которые специфически связывают полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3 или ее фрагмент. Характерное антиидиотипическое антитело связывается с антителом, которое специфически связывает полипептид с последовательностью SEQ ID NO: 3. Настоящее изобретение относится также к слитым белкам, содержащим полипептид IL-22RA и часть молекулы иммуноглобулина. В таких слитых белках часть молекулы иммуноглобулина может быть константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина, такой как Fc-фрагмент человека. Настоящее изобретение, кроме того, относится к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим-2 015706 такие слитые белки. Настоящее изобретение также относится к поликлональным и моноклональным антителам, которые связываются с полипептидами, содержащими внеклеточный домен IL-22RA, такими как мономерные,гомодимерные, гетеродимерные и мультимерные рецепторы, включающие растворимые рецепторы. Кроме того, такие антитела можно использовать для антагонистического воздействия на связывание лигандов IL-22RA, IL-22 (SEQ ID NO: 6) и IL-20 (SEQ ID NO: 8) отдельно или вместе с рецептором IL22RA. Кроме того, в образцах кожи человека, пораженной псориазом и атопическим дерматитом, была выявлена сверхэкспрессия или повышенная активность IL-22 и IL-20, из чего следует, что IL-22, подобноIL-20, также вовлечен в патогенез псориаза, атопического дерматита и других воспалительных заболеваний кожи и эпителиальных тканей человека. Как описано в настоящем изобретении, сверхэкспрессия IL20 или IL-22 у трансгенных мышей вызывала утолщение эпидермиса и появление иммунокомпетентных клеток, характерных для псориатического фенотипа; и, кроме того, введение инъекции IL-22 здоровым мышам вызывало утолщение эпидермиса и появление иммунокомпетентных клеток, характерных для псориатического фенотипа, при этом указанные симптомы были устранены антагонистом растворимого рецептора IL-22RA2 (zcytor16; публикация WIPOWO 01/40467). Данные, полученные in vivo, позволяют предположить, что провоспалительный цитокин IL-22 участвует в развитии псориаза, атопического дерматита и других воспалительных заболеваний кожи и эпителиальных тканей. Таким образом, антагонисты активности IL-22 и IL-20, такие как растворимые рецепторы IL-22RA, и антитела к ним, в том числе моноклональные и нейтрализующие антитела против IL-22RA человека по настоящему изобретению, можно использовать для терапевтического лечения воспалительных заболеваний, в частности, в качестве антагонистов IL-22 и IL-20, отдельно или совместно, при лечении псориаза. Кроме того, антагонисты активности IL-22, такие как растворимые рецепторы IL-22RA, и антитела к ним, в том числе моноклональные и нейтрализующие антитела против IL-22RA человека по настоящему изобретению, можно использовать для терапевтического лечения других воспалительных заболеваний, например для связывания, блокирования, ингибирования, ослабления, антагонистического воздействия или нейтрализацииIL-22 и IL-20 (отдельно или вместе) при лечении атопического дерматита, IBD, колита, эндотоксемии,артрита, ревматоидного артрита и псориатического артрита, острого респираторного заболевания (ARD),септического шока, нарушения функции многих органов, воспалительного поражения легких, такого как астма или бронхит, бактериальной пневмонии, псориаза, экземы, атопического и контактного дерматитов, воспалительного заболевания кишечника, такого как неспецифический язвенный колит и болезнь Крона. Вышеуказанные и другие объекты настоящего изобретения станут очевидными из нижеследующего подробного описания изобретения. Кроме того, ниже приведены разные публикации, описание которых включены в настоящее описание изобретения в качестве ссылки в полном объеме. 2. Определения терминов. В нижеследующем описании изобретения широко использованы разные термины. Ниже приведены определения использованных терминов для лучшего понимания настоящего изобретения. В используемом здесь значении термин "нуклеиновая кислота" или "молекула нуклеиновой кислоты" означает полинуклеотиды, такие как дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота (РНК), олигонуклеотиды, фрагменты, полученные при помощи полимеразной цепной реакции(PCR), и фрагменты, полученные в результате лигирования, расщепления, воздействия эндонуклеазы и экзонуклеазы. Молекулы нуклеиновой кислоты могут состоять из мономеров, являющихся природными нуклеотидами (такими как ДНК и РНК), или аналогами природных нуклеотидов (например, энантиомерные формы природных нуклеотидов), или их комбинации. У модифицированных нуклеотидов может быть изменена сахаридная часть и/или пиримидиновые или пуриновые основания. Модификации сахара включают, например, замену одной или нескольких гидроксильных групп галогенами, алкильными группами, аминами и азидогруппами, или же сахара могут обладать функциональной активностью в виде простых или сложных эфиров. Кроме того, вся сахаридная часть может быть заменена структурами, подобными в стерическом и электронном отношении, такими как азасахара и карбоциклические аналоги сахара. Примеры модификации оснований включают алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины или другие хорошо известные гетероциклические заместители. Мономеры нуклеиновой кислоты могут быть связаны сложными фосфодиэфирными связями или аналогами таких связей. Аналоги сложных фосфодизфирных связей включают фосфортиоат, фосфордитиоат, фосфорселеноат, фосфордиселеноат, фосфоранилотиоат, фосфоранилидат, фосфорамидат и тому подобные. Под термином "молекула нуклеиновой кислоты" также понимают так называемые "пептидные нуклеиновые кислоты", которые включают природные или модифицированные основания нуклеиновой кислоты, присоединенные к полиамидному остову. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными. Термин "комплемент молекулы нуклеиновой кислоты" означает молекулу нуклеиновой кислоты,имеющую комплементарную нуклеотидную последовательность с обратной ориентацией по сравнению с эталонной нуклеотидной последовательностью. Например, последовательность 5' ATGCACGGG 3' ком-3 015706 плементарна последовательности 5' CCCGTGCAT 3'. Под термином "вырожденная нуклеотидная последовательность" понимают, что последовательность нуклеотидов включает один или несколько вырожденных кодонов по сравнению с молекулой эталонной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид. Вырожденные кодоны содержат разные триплеты нуклеотидов, но кодируют один и тот же аминокислотный остаток (то есть оба триплета GAU и GAC кодируют Asp). Термин "структурный ген" означает молекулу нуклеиновой кислоты, транскрибированную в матричной РНК (мРНК), которая затем транслируется в аминокислотную последовательность, характерную для определенного полипептида. Термин "выделенная молекула нуклеиновой кислоты" означает молекулу нуклеиновой кислоты, которая не является интегрированной в геномную ДНК организма. Например, молекула ДНК, кодирующая фактор роста, которая была выделена из геномной ДНК клетки, является выделенной молекулой ДНК. Другим примером выделенной молекулы нуклеиновой кислоты является химически синтезированная молекула нуклеиновой кислоты, не интегрированная в геном организма. Молекула нуклеиновой кислоты, выделенная из определенного вида, меньше полноразмерной молекулы ДНК хромосомы указанного вида. Термин "конструкция молекулы нуклеиновой кислоты" означает молекулу одноцепочечной или двухцепочечной нуклеиновой кислоты, которая была модифицирована в результате вмешательства человека и содержит сегменты нуклеиновой кислоты, объединенные и расположенные в порядке, не существующем в природе. Термин "линейная ДНК" означает молекулы некольцевой ДНК со свободными 5'- и 3'-концами. Линейная ДНК может быть получена из молекул замкнутой кольцевой ДНК, таких как плазмиды, путем ферментативного расщепления или физического разрыва. Термин "комплементарная ДНК (кДНК)" означает молекулу одноцепочечной ДНК, полученную из матрицы мРНК при помощи фермента обратной транскриптазы. Для инициации обратной транскрипции обычно используют праймер, комплементарный частям мРНК. Специалисты в данной области используют также термин "кДНК" для обозначения молекулы двухцепочечной ДНК, состоящей из такой молекулы одноцепочечной ДНК и цепи, комплементарной ДНК. Термин "кДНК" означает также клон молекулы кДНК, синтезированной из матрицы РНК. Термин "промотор" означает нуклеотидную последовательность, которая направляет транскрипцию структурного гена. Промотор обычно расположен в 5'-концевой некодирующей области гена, рядом с сайтом инициации транскрипции структурного гена. Элементы последовательности в промоторах, которые инициируют транскрипцию, часто имеют консенсусные нуклеотидные последовательности. Указанные элементы промотора включают сайты связывания РНК-полимеразы, последовательности ТАТА, последовательности СААТ, элементы, специфичные для дифференцировки (DSE; McGehee et al., Mol. Endocrinol. 7:551 (1993, элементы, чувствительные к циклическому AMP (CRE), элементы, чувствительные к сыворотке (SRE; Treisman. Seminars in Cancer Biol. 1:47 (1990, элементы, чувствительные к глюкокортикоидам (GRE), и сайты связывания других факторов транскрипции, таких как CRE/ATF (O'ReillyCompany, Inc. 1987) и Lemaigre and Rousseau, Biochem. J. 303:1 (1994. Если промотор является индуцибельным промотором, тогда скорость транскрипции увеличивается под воздействием индуцирующего агента. В отличие от этого скорость транскрипции не регулируется индуцирующим агентом, если промотор является конститутивным промотором. Кроме того, известны репрессируемые промоторы. Термин "основной промотор" означает незаменимые нуклеотидные последовательности, необходимые для функционирования промотора, включая блок ТАТА и сайт инициации транскрипции. В соответствии с данным определением основной промотор может обладать обнаруживаемой активностью в отсутствие специфических последовательностей, которые могут усиливать активность или сообщать тканеспецифическую активность, или может ею не обладать. Термин "регуляторный элемент" означает нуклеотидную последовательность, которая модулирует активность основного промотора. Например, регуляторный элемент может содержать нуклеотидную последовательность, которая связывается с факторами клетки, делая возможной транскрипцию исключительно или предпочтительно в определенных клетках, тканях или органеллах. Указанные типы регуляторных элементов обычно связаны с генами, экспрессируемыми "клеточно-специфическим", "тканеспецифическим" или "органелласпецифическим" образом. Термин "энхансер" означает определенный тип регуляторного элемента, способного увеличивать эффективность транскрипции независимо от расстояния или ориентации данного энхансера относительно сайта инициации транскрипции. Термин "гетерологичная ДНК" означает молекулу ДНК или популяцию молекул ДНК, которые в естественных условиях отсутствуют в данной клетке-хозяине. Молекулы ДНК, гетерологичные определенной клетке-хозяину, могут содержать ДНК, выделенную из вида, к которому относится данная клет-4 015706 ка-хозяин (т.е. эндогенная ДНК), а также ДНК хозяина может быть объединена с ДНК, отсутствующей у хозяина (т.е. экзогенная ДНК). Например, молекула ДНК, содержащая отсутствующий у хозяина сегмент ДНК, кодирующий полипептид, функционально связанный с сегментом ДНК хозяина, содержащим промотор транскрипции, считается молекулой гетерологичной ДНК. И наоборот, молекула гетерологичной ДНК может включать эндогенный ген, функционально связанный с экзогенным промотором. В качестве еще одного примера можно указать, что молекула ДНК, содержащая ген, выделенный из клетки дикого типа, считается гетерологичной ДНК, если данная молекула ДНК введена в мутантную клетку, в которой отсутствует ген дикого типа. Термин "полипептид" означает полимер аминокислотных остатков, соединенных пептидными связями, который может быть получен природным или синтетическим путем. Полипептиды, содержащие менее примерно 10 аминокислотных остатков, обычно называют "пептиды". Термин "белок" означает макромолекулу, содержащую одну или несколько полипептидных цепей. Белок также может содержать непептидные компоненты, такие как углеводные группы. Углеводы и другие непептидные заместители могут быть введены в белок клеткой, продуцирующей данный белок, и могут отличаться в зависимости от типа клетки. Белки определены в настоящем описании изобретения на основании структур аминокислотного остова; заместители, такие как углеводные группы, обычно не указаны, но тем не менее они могут присутствовать. Пептид или полипептид, кодируемый молекулой ДНК, отсутствующей у хозяина, является "гетерологичным" пептидом или полипептидом. Термин "клонирующий вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида, космида или бактериофаг, которая способна автономно реплицироваться в клетке-хозяине. Клонирующие векторы обычно содержат один или несколько сайтов узнавания рестрикцинной эндонуклеазы, которые позволяют вводить молекулы нуклеиновой кислоты с возможностью определения без утраты главной биологической функции вектора, а также нуклеотидные последовательности, кодирующие ген-маркер,используемый для идентификации и отбора клеток, трансформированных указанным клонирующим вектором. Гены-маркеры обычно включают гены, обеспечивающие устойчивость к тетрациклину или ампициллину. Термин "экспрессирующий вектор" означает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую ген,экспрессируемый в клетке-хозяине. Экспрессирующий вектор обычно включает промотор транскрипции,ген и терминатор транскрипции. Экспрессия гена обычно контролируется промотором, при этом считается, что такой ген "функционально связан с" промотором. Регуляторный элемент и основной промотор функционально связаны, если регуляторный элемент модулирует активность основного промотора. Термин "рекомбинантный хозяин" означает клетку, содержащую молекулу гетерологичной нуклеиновой кислоты, такую как клонирующий вектор или экспрессирующий вектор. В настоящем описании изобретения примером рекомбинантного хозяина является клетка, продуцирующая IL-22RA из экспрессирующего вектора. В отличие от этого, IL-22RA может продуцироваться клеткой, которая является"природным источником" IL-22RA и не содержит экспрессирующего вектора. Термин "интегрирующие трансформанты" означает рекомбинантные клетки-хозяева, в которых гетерологичная ДНК интегрирована в геномную ДНК клеток. Термин "слитый белок" означает гибридный белок, экспрессируемый молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидные последовательности по крайней мере двух генов. Например, слитый белок может содержать по крайней мере часть полипептида IL-22RA, слитую с полипептидом, связывающимся с аффинной матрицей. Такой слитый белок можно использовать для выделения больших количеств IL-22RA, используя аффинную хроматографию. Термин "рецептор" означает клеточный белок, который связывается с биоактивной молекулой,именуемой "лигандом". Указанное взаимодействие опосредует воздействие лиганда на клетку. Рецепторы могут быть мембраносвязанными, цитозольными или ядерными; мономерными (например, рецептор тиреостимулирующего гормона, -адренергический рецептор) или мультимерными (например, рецепторPDGF, рецептор гормона роста, рецептор IL-3, рецептор GM-CSF, рецептор G-CSF, рецептор эритропоэтина и рецептор IL-6). Мембраносвязанные рецепторы отличаются мультидоменной структурой, включающей внеклеточный лигандсвязывающий домен и внутриклеточный эффекторный домен, который обычно участвует в передаче сигналов. В некоторых мембраносвязанных рецепторах внеклеточный лигандсвязывающий домен и внутриклеточный эффекторный домен расположены в разных полипептидах,образующих полноразмерный функциональный рецептор. Связывание лиганда с рецептором обычно вызывает конформационное изменение рецептора, определяющее взаимодействие между эффекторным доменом и другой молекулой в клетке, что в свою очередь ведет к изменению метаболизма клетки. Метаболические явления, которые часто обусловлены взаимодействиями рецептора с лигандом, включают транскрипцию гена, фосфорилирование, дефосфорилирование, увеличение продукции циклического AMP, активацию клеточного кальция, активацию липидов мембраны, адгезию клеток, гидролиз липидов инозита и гидролиз фосфолипидов. Термин "растворимый рецептор" означает рецепторный полипептид, не связанный с клеточной мембраной. Растворимые рецепторы наиболее часто являются рецепторными полипептидами лигандсвя-5 015706 зывающего рецептора, в которых отсутствуют трансмембранные и цитоплазматические домены и другие связи с клеточной мембраной, например, через гликофосфоинозит (gpi). Растворимые рецепторы могут содержать дополнительные аминокислотные остатки, такие как аффинные метки, которые облегчают очистку полипептида или предоставляют сайты для присоединения полипептида к субстрату, или последовательности константной области иммуноглобулина. Многие рецепторы на поверхности клетки имеют природные растворимые аналоги, образованные в результате протеолиза или транслированные из альтернативно сплайсированных мРНК. Растворимые рецепторы могут быть мономерными, гомодимерными, гетеродимерными или мультимерными, причем мультимерные рецепторы обычно содержат не более 9 субъединиц, предпочтительно не более 6 субъединиц и, наиболее предпочтительно, не более 3 субъединиц. Считается, что полипептиды рецепторов, по существу, не содержат трансмембранных и внутриклеточных полипептидных сегментов, когда в них отсутствуют значительные части указанных сегментов, предназначенных соответственно для связывания с мембраной или передачи сигналов. Растворимые рецепторы рецепторов цитокинов класса I и класса II обычно содержат внеклеточный домен связывания цитокина, в котором отсутствует трансмембранный домен и внутриклеточный домен. Например, характерные растворимые рецепторы включают растворимый рецептор CRF2-4 (иначе называемый IL-10RB)(патент США 5965704), представленный в SEQ ID NO: 3. Специалисту в данной области известно,какие последовательности известного цитокина класса I или класса II содержат внеклеточный домен связывания цитокина в отсутствие трансмембранного домена и внутриклеточного домена. Кроме того, специалист в данной области, используя генетический код, может легко определить полинуклеотиды, кодирующие полипептиды таких растворимых рецепторов. Термин "секреторная сигнальная последовательность" означает последовательность ДНК, кодирующую пептид ("секреторный пептид"), который, являясь компонентом более крупного полипептида,направляет этот крупный полипептид по секреторному пути клетки, в которой он синтезирован. Крупный полипептид обычно расщепляется и теряет секреторный пептид во время движения по секреторному пути. Термин "выделенный полипептид" означает полипептид, который, по существу, свободен от клеточных компонентов, таких как углевод, липид или другие белковые примеси, связанных с этим полипептидом в естественных условиях. Препарат выделенного полипептида обычно содержит полипептид в высокоочищенной форме, т.е. чистота составляет по крайней мере примерно 80%, по крайней мере примерно 90%, по крайней мере примерно 95%, более чем 95%, в частности 96, 97, 98 или более чем 99%. Одним из способов определения того, что данный белковый препарат содержит выделенный полипептид,является наличие одной полосы при исследовании белкового препарата электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS) и окрашивании геля кумассии бриллиантовым голубым. Однако термин "выделенный" не исключает наличия того же полипептида в альтернативных физических формах, таких как димеры, или альтернативно в гликозилированных или производных формах. Термины "аминоконцевой" и "карбоксиконцевой" использованы в настоящем описании изобретения для обозначения положений в полипептидах. Там, где это возможно, указанные термины использованы со ссылкой на определенную последовательность или часть полипептида для обозначения близости или относительного положения. Например, определенная последовательность, находящаяся в карбоксиконцевом положении относительно эталонной последовательности в полипептиде, расположена вблизи карбоксильного конца эталонной последовательности, но не обязательно у карбоксильного конца всего полипептида. Термин "экспрессия" означает биосинтез генного продукта. Например, в случае структурного гена экспрессия включает транскрипцию структурного гена в мРНК и трансляцию мРНК в один или несколько полипептидов. Термин "сплайсированный вариант" означает в настоящем описании изобретения альтернативные формы РНК, транскрибированной из гена. Сплайсированные варианты возникают естественным путем в результате использования альтернативных сайтов сплайсинга в молекуле транскрибированной РНК или реже в молекулах отдельно транскрибированной РНК и могут вызывать образование нескольких мРНК,транскрибированных из одного и того же гена. Сплайсированные варианты могут кодировать полипептиды с измененной аминокислотной последовательностью. Термин "сплайсированный вариант" использован в настоящем описании изобретения также для обозначения полипептида, кодированного сплайсированным вариантом мРНК, транскрибированной из гена. В используемом здесь значении термин "иммуномодулятор" означает цитокины, факторы роста стволовых клеток, лимфотоксины, костимулирующие молекулы, гемопоэтические факторы и тому подобные, а также синтетические аналоги указанных молекул. Термин "пара комплемент-антикомплемент" означает неидентичные части молекулы, которые образуют нековалентно связанную устойчивую пару в соответствующих условиях. Например, биотин и-6 015706 авидин (или стрептавидин) являются прототипами пары комплемент-антикомплемент. Другие характерные пары комплемент-антикомплемент включают пары рецептор-лиганд, пары антитело-антиген (гаптен или антигенная детерминанта), пары смысловой-антисмысловой полинуклеотиды и тому подобные. Если желательна последующая диссоциация пары комплемент-антикомплемент, то сродство связывания такой пары комплемент-антикомплемент предпочтительно должно быть меньше 109 М-1. Термин "антиидиотипическое антитело" означает антитело, которое связывается с доменом вариабельной области иммуноглобулина. В настоящем описании изобретения антиидиотипическое антитело связывается с вариабельной областью антитела против IL-22RA, и, таким образом, антиидиотипическое антитело имитирует антигенную детерминанту IL-22RA. Термин "фрагмент антитела" означает такой фрагмент антитела, как F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab и тому подобные. Независимо от структуры фрагмент антитела связывается с антигеном, узнаваемым интактным антителом. Например, фрагмент моноклонального антитела против IL-22RA связывается с антигенной детерминантой IL-22RA. Термин "фрагмент антитела" означает также синтетический или генетически созданный полипептид, связывающийся со специфическим антигеном, в частности полипептиды, содержащие вариабельную область легкой цепи, Fv-фрагменты, состоящие из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, молекулы рекомбинантного одноцепочечного полипептида, в которых вариабельные области легкой и тяжелой цепей связаны пептидным линкером (белки scFv), и минимальные узнающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, имитирующих гипервариабельный участок. Термин "химерное антитело" означает рекомбинантный белок, содержащий вариабельные области и гипервариабельные участки, антитела грызуна, в то время как остальная часть молекулы антитела является частью антитела человека. Термин "гуманизированные антитела" означает рекомбинантные белки, в которых гипервариабельные участки моноклонального антитела мыши были перенесены из тяжелой и легкой цепей вариабельной области иммуноглобулина мыши в вариабельную область человека. Специалисту в данной области известны способы создания гуманизированных антител для терапевтического лечения человека, выделяемые из антител мыши, в частности антител, которые связываются или нейтрализуют белок человека. В используемом здесь значении термин "терапевтический агент" означает молекулу или атом,конъюгированный с антителом и образующий конъюгат, который можно использовать в терапии. Примеры терапевтических агентов включают лекарственные средства, токсины, иммуномодуляторы, хелаторы, соединения бора, фотоактивные агенты или красители и радиоизотопы. Термин "визуализируемая метка" означает молекулу или атом, который может быть конъюгирован с антителом с образованием молекулы, подходящей для диагностики. Примеры визуализируемых меток включают хелаторы, фотоактивные агенты, радиоизотопы, флуоресцентные вещества, парамагнитные ионы и другие маркеры. Термин "аффинная метка" в используемом здесь значении означает сегмент полипептида, который может быть присоединен ко второму полипептиду для очистки или обнаружения второго полипептида или для создания сайтов присоединения второго полипептида к субстрату. В частности, любой пептид или белок, для которого существует антитело или другой специфический связывающий агент, может быть использован в качестве аффинной метки. Аффинные метки включают полигистидин, белок A (Nilsson et al., EMBO J. 4:1075 (1985); Nilsson et al., Methods Enzymol. 198:3 (1991), глутатион-S-трансферазуUSA 82:7952 (1985, вещество Р, пептид FLAG (Hopp et al., Biotechnology 6:1204 (1988, стрептавидинсвязывающий пептид, другую антигенную детерминанту или связывающую область. См. публикациюFord et al., Protein Expression and Purification 2:95 (1991). Молекулы ДНК, кодирующие аффинные метки,можно приобрести у коммерческих поставщиков (например, в компании Pharmacia Biotech, Piscataway,NJ). Термин "голое антитело" означает полноразмерное антитело, в отличие от фрагмента антитела, которое не конъюгировано с терапевтическим агентом. Голые антитела включают как поликлональные, так и моноклональные антитела, а также определенные рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные антитела. В используемом здесь значении термин "компонент антитела" означает как полноразмерное антитело, так и фрагмент антитела. Термин "иммуноконъюгат" означает конъюгат компонента антитела с терапевтическим агентом или визуализируемой меткой. В используемом здесь значении термин "антитело-слитый белок" означает рекомбинантную молекулу, которая содержит компонент антитела и компонент полипептида IL-22RA. Примером антителослитого белка является белок, содержащий внеклеточный домен IL-22RA и Fc-область или антигенсвязывающую область. Термин "полипептид-мишень" или "пептид-мишень" означает аминокислотную последовательность, которая содержит по крайней мере одну антигенную детерминанту и экспрессирована на клеткемишени, такой как опухолевая клетка или клетка, содержащая антиген инфекционного агента. Т-клетки-7 015706 распознают пептидные детерминанты, презентируемые молекулой главного комплекса гистосовместимости полипептиду-мишени, или пептиду-мишени, и обычно лизируют клетку-мишень или рекрутируют другие иммунокомпетентные клетки к месту локализации клетки-мишени, уничтожая, таким образом,эту клетку-мишень. Термин "антигенный пептид" означает пептид, который связывается с молекулой главного комплекса гистосовместимости с образованием комплекса МНС-пептид, распознаваемого Т-клеткой, индуцируя реакцию цитотоксического лимфоцита в ответ на презентацию Т-клетке. Таким образом, антигенные пептиды способны связываться с соответствующей молекулой главного комплекса гистосовместимости и индуцировать цитотоксический Т-клеточный ответ, такой как лизис клетки или высвобождение специфических цитокинов против клетки-мишени, которая связывает или экспрессирует данный антиген. Антигенный пептид может быть связан с молекулой главного комплекса гистосовместимости классаI или класса II на антиген-презентирующей клетке или на клетке-мишени. В эукариотических клетках РНК-полимераза II катализирует транскрипцию структурного гена с образованием мРНК. Может быть создана молекула нуклеиновой кислоты, содержащая матрицу РНКполимеразы II, в которой транскрипт РНК имеет последовательность, комплементарную последовательности специфической мРНК. Транскрипт РНК именуется "антисмысловой РНК", и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антисмысловую РНК, именуется "антисмысловым геном". Молекулы антисмысловой РНК способны связываться с молекулами мРНК, ингибируя трансляцию мРНК. Термин "антисмысловой олигонуклеотид, специфичный к IL-22RA" или "антисмысловой олигонуклеотид IL-22RA" означает олигонуклеотид, имеющий последовательность, (а) способную образовывать устойчивый триплекс с частью гена IL-22RA, или (b) способную образовывать устойчивый дуплекс с частью транскрипта мРНК гена IL-22RA. Термин "рибозим" означает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую каталитический центр. Определение данного термина охватывает ферменты РНК, самосплайсирующиеся РНК, саморасщепляющиеся РНК и молекулы нуклеиновой кислоты, выполняющие указанные каталитические функции. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рибозим, именуется "геном рибозима". Термин "внешняя направляющая последовательность" означает молекулу нуклеиновой кислоты,которая направляет эндогенный рибозим, РНКазу Р, к определенной внутриклеточной мРНК, в результате чего РНКаза Р расщепляет данную мРНК. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая внешнюю направляющую последовательность, именуется "геном внешней направляющей последовательности". Термин "вариантный ген IL-22RA" означает молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептид, в котором аминокислотная последовательность является модификацией SEQ ID NO: 3. Такие варианты включают природные полиморфизмы генов IL-22RA, а также синтетические гены, содержащие замены консервативных аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3. Дополнительные вариантные формы генов IL-22RA представляют собой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие инсерции или делеции нуклеотидных последовательностей, раскрытых в настоящем описании изобретения. Вариантный ген IL-22RA можно идентифицировать, например, путем определения способности указанного гена гибридизироваться с молекулой нуклеиновой кислоты с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 или с ее комплементом в жестких условиях. Альтернативно вариантные гены IL-22RA можно идентифицировать путем сравнения последовательностей. Две аминокислотные последовательности имеют "100% идентичность аминокислотных последовательностей", если аминокислотные остатки двух аминокислотных последовательностей являются одинаковыми при выравнивании для поиска максимального соответствия. Аналогичным образом две нуклеотидные последовательности имеют "100% идентичность нуклеотидных последовательностей",если нуклеотидные остатки двух нуклеотидных последовательностей являются одинаковыми при выравнивании для поиска на максимальное соответствие. Сравнение последовательностей можно произвести при помощи стандартного программного обеспечения, например компьютерных программ по биоинформатике LASERGENE, созданного DNASTAR (Madison, Wisconsin). Специалистам в данной области хорошо известны другие методы сравнения двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей путем определения оптимального соответствия (см., например, публикации Peruski and Peruski, The Internet and the New Biology: Tools for Genomic and Molecular Research (ASM Press, Inc. 1997), Wu et al. (eds.),"Information Superhighway and Computer Databases of Nucleic Acids and Proteins," in Methods in Gene Biotechnology, pages 123-151 (CRC Press, Inc. 1997), and Bishop (ed.), Guide to Human Genome Computing, 2ndEdition (Academic Press, Inc. 1998. Ниже описаны конкретные методы определения идентичности последовательностей. Независимо от конкретного метода, используемого для идентификации вариантного гена IL-22RA или вариантного полипептида IL-22RA, вариантный ген или полипептид, кодированный вариантным геном, может характеризоваться в функциональном отношении способностью специфически связываться с антителом против IL-22RA. Вариантный ген IL-22RA или вариантный полипептид IL-22RA может также характеризоваться в функциональном отношении способностью связываться с его лигандом, IL-22,определяемой в результате выполнения биологического или биохимического анализа, раскрытого в настоящем описании изобретения.-8 015706 Термин "аллельный вариант" использован в настоящем описании изобретения для обозначения любых двух или более альтернативных форм гена, занимающих один и тот же хромосомный локус. Аллельные варианты возникают естественным путем в результате мутации и могут вызвать фенотипический полиморфизм в популяциях. Генные мутации могут быть молчащими (без изменения кодированного полипептида) или могут кодировать полипептиды с измененной аминокислотной последовательностью. Термин "аллельный вариант" использован также в настоящем описании изобретения для обозначения белка, кодированного аллельным вариантом гена. Термин "ортолог" означает полипептид или белок, полученный из одного вида, который является функциональным аналогом полипептида или белка из другого вида. Различия последовательностей в ортологах являются результатом видообразования. Термин "паралоги" означает отличающиеся, но структурно родственные белки, создаваемые организмом. Считается, что паралоги возникают в результате дупликации генов. Например, -глобин, глобин и миоглобин являются паралогами. В объем настоящего изобретения входят функциональные фрагменты генов IL-22RA. В соответствии с настоящим изобретением термин "функциональный фрагмент" гена IL-22RA означает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую часть полипептида IL-22RA, которая представляет собой домен по настоящему изобретению или по крайней мере специфически связывается с антителом против IL-22RA. Из-за неточности стандартных аналитических методов молекулярные массы и длины полимеров имеют приблизительные значения. Когда такое значение определено как "около" X или "примерно" X,должно быть понятно, что указанное значение X представлено с точностью до 10%. 3. Получение полинуклеотидов или генов IL-22RA. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие ген IL-22RA человека, можно получить путем скрининга библиотеки кДНК или геномной библиотеки человека при помощи полинуклеотидных зондов на основе SEQ ID NO: 1. Эти методы являются стандартными и хорошо известными и могут быть осуществлены с использованием наборов для клонирования, предоставляемых коммерческими поставщиками. См., например, публикации Ausubel et al. (eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 3rd Edition, Johnpages 47-52. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие ген IL-22RA человека, можно также получить при помощи полимеразной цепной реакции (PCR) с использованием олигонуклеотидных праймеров, в которых нуклеотидные последовательности созданы на основе нуклеотидной последовательности гена или кДНК IL-22RA. Общие методы скрининга библиотек при помощи PCR описаны, например, в публикацииYu et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction to Screen Phage Libraries", in Methods in Molecular Biology,Vol. 15: PCR Protocols: Current Methods and Applications, White (ed.), Humana Press, Inc., 1993. Кроме того,методы применения PCR для выделения родственных генов описаны, например, в публикации Preston,"Use of Degenerate Oligonucleotide Primers and the Polymerase Chain Reaction to Clone Gene Family Members", in Methods in Molecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Methods and Applications, White(ed.), Humana Press, Inc., 1993. В качестве альтернативы ген IL-22RA можно получить, синтезируя молекулы нуклеиновой кислоты с использованием взаимостимулирующих длинноцепочечных олигонуклеотидов и нуклеотидных последовательностей, раскрытых в настоящем описании изобретения (см., например, Ausubel (1995. Существующие методы на основе полимеразной цепной реакции позволяют синтезировать молекулы ДНК длиной по крайней мере две тысячи пар оснований. (Adang et al., Plant Molec.of Recombinant DNA "(ASM Press 1994), Itakura et al., Annu. Rev. Biochem. 53:323 (1984) и Climie et al.,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:633 (1990). 4. Получение вариантов гена IL-22RA. Настоящее изобретение относится к целому ряду молекул нуклеиновых кислот, включая молекулы ДНК и РНК, кодирующие полипептиды IL-22RA, раскрытые в настоящем описании изобретения. Специалистам в данной области известно, что с учетом вырожденности генетического кода возможно значительное изменение последовательностей в указанных полинуклеотидных молекулах. Кроме того, настоящее изобретение также относится к выделенным полипептидам растворимых мономерных, гомодимерных, гетеродимерных и мультимерных рецепторов, содержащих по крайней мере одну субъединицу рецептора IL-22RA, которая, по существу, гомологична полипептиду рецептора с последовательностьюSEQ ID NO: 3. Таким образом, настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим полипептид IL-22RA, которые содержат вырожденные нуклеотиды SEQ ID NO: 1 и их экви-9 015706 валенты РНК. В табл. 1 приведены однобуквенные коды, служащие для обозначения положений вырожденных нуклеотидов. В графе "Обозначение" указаны нуклеотиды, обозначенные буквой кода. В графе "Комплемент" указан код для комплементарных нуклеотидов. Например, код Y означает С или Т, и его комплемент R означает А или G, при этом А комплементарен Т, и G комплементарен С. Таблица 1 В табл. 2 приведены вырожденные кодоны, включающие все возможные кодоны для данной аминокислоты. Таблица 2- 10015706 Специалисту в данной области понятно, что определение вырожденного кодона содержит некоторую неопределенность, характерную для всех возможных кодонов, кодирующих аминокислоту. Например, вырожденный кодон для серина (WSN) в некоторых случаях может кодировать аргинин (AGR), и вырожденный кодон для аргинина (MGN) в некоторых случаях может кодировать серии (AGY). Аналогичная взаимосвязь существует между кодонами, кодирующими фенилаланин и лейцин. Таким образом,некоторые полинуклеотиды, определяемые вырожденной последовательностью, могут кодировать вариантные аминокислотные последовательности, но специалист в данной области легко идентифицирует такие вариантные последовательности, обратившись к аминокислотным последовательностям, представленным SEQ ID NO: 3. Вариантные последовательности можно легко проанализировать в отношении функциональности описанными ниже методами. Различные виды могут отличаться "использованием предпочтительных кодонов". В частности, см. публикации Grantham et al., Nucl Acids Res. 5:1893 (1980), Haas et al. Curr. Biol. 6:315 (1996), Wain-HobsonOpin. Biotechnol 6:494 (1995), and Makrides, Microbiol. Rev. 60:512 (1996). В значении, принятом в настоящем описании изобретения, термин "использование предпочтительных кодонов" или "предпочтительные кодоны" означает кодоны трансляции белка, которые наиболее часто используются в клетках определенного вида, которые оказывают предпочтение одному или нескольким кодонам из всех возможных кодонов, кодирующих каждую аминокислоту. (см. табл. 2). Например, аминокислота треонин (Thr) может быть кодирована кодонами АСА, АСС, ACG или ACT, но в клетках млекопитающих АСС является наиболее часто используемым кодоном; в других видах, например в клетках насекомых, дрожжах,вирусах или бактериях, предпочтительными могут быть другие кодоны Thr. Предпочтительные кодоны для определенного вида могут быть введены в полинуклеотиды по настоящему изобретению разными методами, известными в данной области. Введение последовательностей предпочтительных кодонов в рекомбинантную ДНК может, например, усиливать продукцию белка, делая трансляцию белка более эффективной в определенном типе клеток или виде. Поэтому последовательности вырожденных кодонов,раскрытые в настоящем описании изобретения, служат в качестве матрицы для оптимизации экспрессии полинуклеотидов в разных типах клеток и видах, обычно используемых в данной области и раскрытых в настоящем описании изобретения. Последовательности, содержащие предпочтительные кодоны, можно исследовать и оптимизировать для экспрессии в разных видах, а также испытать в отношении функциональности методами, раскрытыми в настоящем описании изобретения. кДНК, кодирующую IL-22RA, можно выделить различными методами, такими как зондирование непроцессированной или процессированной кДНК человека, либо с помощью одного или нескольких наборов вырожденных зондов на основе рассмотренных последовательностей. кДНК можно также клонировать при помощи полимеразной цепной реакции с использованием праймеров, созданных на основании характерных последовательностей IL-22RA человека, раскрытых в настоящем описании изобретения. Кроме того, для трансформации или трансфекции клеток-хозяев можно использовать библиотеку кДНК, и экспрессию представляющей интерес кДНК можно определить с помощью антитела к полипептиду IL-22RA. Специалистам в данной области должно быть известно, что последовательность, показанная в SEQID NO: 1, представляет одну аллель IL-22RA человека, при этом возможна аллельная вариация и альтернативный сплайсинг. Аллельные варианты указанной последовательности могут быть клонированы путем зондирования библиотек кДНК или геномных библиотек разных субъектов стандартными методами. В объем настоящего изобретения входят аллельные варианты нуклеотидных последовательностей, раскрытые в настоящем описании изобретения, в том числе аллельные варианты, содержащие молчащие мутации, и аллельные варианты, в которых мутации вызывают изменения аминокислотной последовательности, а также белки, которые являются аллельными вариантами аминокислотных последовательностей, раскрытых в настоящем описании изобретения. В объем настоящего изобретения входят также молекулы кДНК, образованные из альтернативно сплайсированных мРНК, которые сохраняют свойства полипептида IL-22RA, а также полипептиды, кодированные такими кДНК и мРНК. Аллельные варианты и сплайсированные варианты указанных последовательностей могут быть клонированы путем зондирования библиотек кДНК или геномных библиотек разных субъектов или тканей стандартными методами,известными в данной области. При помощи вышеописанных методов специалист в данной области может получить разные полипептиды, включающие субъединицу растворимого рецептора IL-22RA, которая, по существу, гомологична SEQ ID NO: 1, или кодирует аминокислоты SEQ ID NO: 3, или ее аллельные варианты, и сохраняющие лигандсвязывающие свойства рецептора IL-22RA дикого типа. Такие полипептиды могут также включать дополнительные полипептидные сегменты, раскрытые в настоящем описании изобретения. В определенных вариантах осуществления изобретения выделенные молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизироваться в жестких условиях с молекулами нуклеиновой кислоты, содержащими нуклеотидные последовательности, раскрытые в настоящем описании изобретения. Например, такие молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизироваться в жестких условиях с молекулами нуклеиновой- 11015706 кислоты, содержащими нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, или с молекулами нуклеиновой кислоты, содержащими нуклеотидную последовательность, комплементарную SEQ ID NO: 1 или ее фрагментам. Как правило, жесткие условия выбраны из температуры, которая примерно на 5 С ниже точки плавления (Tm) конкретной последовательности при определенной ионной силе и значении рН. Tm означает температуру (при определенной ионной силе и значении рН), при которой 50% последовательностимишени гибридизируется с максимально совмещенным зондом. После гибридизации молекулы нуклеиновой кислоты могут быть промыты для удаления молекул нуклеиновой кислоты, которые не гибридизировали в жестких условиях или в очень жестких условиях. См., например, публикации Sambrook et al.,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (Cold Spring Harbor Press 1989); Ausubel et al.,(eds.), Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Inc. 1987); Berger and Kimmel (eds.),Guide to Molecular Cloning Techniques, (Academic Press, Inc. 1987); and Wetmur, Crit. Rev. Biochem. Mol.Biol. 26:227 (1990. Анализ последовательности и вычисление Tm на основании определяемых пользователем критериев можно произвести при помощи программного обеспечения для анализа последовательностей, такого как OLIGO 6.0 (LSR; Long Lake, MN) и Primer Premier 4.0 (Premier Eiosoft International;Palo Alto, CA), а также на сайтах в Интернете. Специалист в данной области может адаптировать условия гибридизации и промывки для определенного полинуклеотидного гибрида. Настоящее изобретение также относится к выделенным полипептидам IL-22RA, в которых подобные последовательности, по существу, идентичны полипептидам SEQ ID NO: 3 или их ортологам. Термин "идентичность, по существу, подобных последовательностей" в значении, использованном в настоящем описании изобретения, означает полипептиды, которые по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, в частности на 96,97, 98%, или более идентичны последовательностям, показанным в SEQ ID NO: 3, или их ортологам. Например, варианты и ортологи рецепторов IL-22RA можно использовать для индукции иммунной реакции и создания перекрестно реактивных антител к IL-22RA человека. Такие антитела могут быть гуманизированы и модифицированы в соответствии с настоящим описанием изобретения, и использованы для лечения псориаза, псориатического артрита, IBD, колита, эндотоксемии и в других терапевтических применениях, раскрытых в настоящем описании изобретения. Настоящее изобретение также относится к молекулам вариантной нуклеиновой кислоты IL-22RA,которые могут быть идентифицированы на основании двух критериев: определение сходства кодированного полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3 и выполнение анализа методом гибридизации. Такие варианты IL-22RA включают молекулы нуклеиновой кислоты, которые (1) остаются гибридизированными с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 (или ее комплемент) в жестких условиях промывки, в которых жесткость промывки эквивалентна 0,5-2-кратному объему SSC с 0,1% SDS при 55-65 С, и (2) кодируют полипептид, который по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, в частности на 96, 97, 98 или 99% идентичен аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 3. Альтернативно варианты IL-22RA можно охарактеризовать как молекулы нуклеиновой кислоты, которые (1) остаются гибридизированными с молекулой нуклеиновой кислоты с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (или комплементарной ей последовательностью) в очень жестких условиях промывки, в которых жесткость промывки эквивалентна 0,1-02-кратному объему SSC с 0,1%SDS при 50-65 С, и (2) кодируют полипептид, который по крайней мере на 70%, по крайней мере на 80%, по крайней мере на 90%, по крайней мере на 95% или более чем на 95%, в частности на 96, 97, 98,99% или более идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3. Процентную идентичность последовательностей определяют стандартными методами. См., например, публикации Altschul et al., Bull. Math. Bio. 48:603 (1986) и Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad.Sci. USA 89:10915 (1992). Две аминокислотные последовательности подвергают сравнительному анализу для оптимизации оценок соответствия с использованием штрафа за пропуск, равному 10, штрафа за удлинение пропуска, равному 1, и матрицы для подсчета баллов "BLOSUM62", описанной в публикацииHenikoff and Henikoff (см. выше), в соответствии с табл. 3 (аминокислоты обозначены стандартными однобуквенными кодами). Процентную идентичность затем высчитывают следующим образом:([общее число идентичных пар]/[длина более длинной последовательности + число пробелов, введенных в более длинную последовательность для совмещения двух последовательностей])(100). Специалистам в данной области известно, что существует много алгоритмов для осуществления сравнительного анализа двух аминокислотных последовательностей. Алгоритм поиска сходства"FASTA" Пирсона и Липмана является приемлемым методом сравнения белков для исследования степени идентичности аминокислотной последовательности по настоящему изобретению и аминокислотной последовательности предполагаемого варианта IL-22RA. Алгоритм FASTA описан в публикациях Pearson and Lipman, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) и Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990). С помощью алгоритма FASTA сначала исследуют сходство последовательностей путем идентификации общих областей для запрашиваемой последовательности (например, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3) и испытуемой последовательности, которые могут характеризоваться наибольшей плотностью идентичных пар (если переменная ktup равна 1) или несколькими идентичными парами (если ktup=2) без учета замен,инсерций или делеций консервативных аминокислот. Затем производят повторную оценку десяти областей с наибольшей плотностью идентичных пар, сравнивая сходство всех парных аминокислот при помощи матрицы замещения аминокислот, и отсекают концы указанных областей так, чтобы они включали только те остатки, которые способствуют получению наивысшей оценки. Если имеется несколько областей, оценки которых выше значения "отсечения" (вычисленного по заранее выведенной формуле на основании длины последовательности и значения ktup), тогда исследуют отсеченные исходные области для определения возможности соединения указанных областей с образованием приблизительно совмещенных последовательностей с пробелами. И наконец, области двух аминокислотных последовательностей,получивших наивысшую оценку, совмещают при помощи модифицированного алгоритма НидлманаВанша-Селлерса (Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:444 (1970); Sellers, SIAM J. Appl. Math. 26:787(1974, который позволяет учитывать инсерций и делеций аминокислот. Иллюстративные параметры для выполнения анализа с помощью алгоритма FASTA включают: ktup=1, штраф за пропуск=10, штраф за удлинение пропуска=1 и матрица замещения=BLOSUM62. Указанные параметры могут быть введены в программу FASTA путем внесения изменений в файл с матрицей оценки ("SMATRIX") в соответствии с описанием, приведенным в приложении 2 публикации Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990). С помощью программы FASTA можно также определить идентичность последовательностей в молекулах нуклеиновых кислот, используя вышеуказанное соотношение. Для сравнения нуклеотидных последовательностей значение ktup может находиться в пределах от одного до шести, предпочтительно от трех до шести, наиболее предпочтительно указанное соотношение равно трем, при этом другие значения задают в соответствии с приведенным выше описанием. Настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим полипептид,содержащий замену консервативных аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью по настоящему изобретению. Например, могут быть получены варианты, содержащие одну или несколько замен аминокислот SEQ ID NO: 3, в которых алкиламинокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой алкиламинокислотой, ароматическая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой ароматической аминокислотой, серосодержащая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой серосодержащей аминокислотой, гидроксисодержащая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой гидроксисодержащей аминокислотой, кислая аминокислота в аминокислотной последовательно- 13015706 сти IL-22RA заменена другой кислой аминокислотой, основная аминокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой основной аминокислотой, или двухосновная монокарбоновая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-22RA заменена другой двухосновной монокарбоновой аминокислотой. Например, "замену консервативной аминокислоты" можно проиллюстрировать заменой аминокислот, выбранных из нижеследующих групп: (1) глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин, (2) фенилаланин, тирозин и триптофан, (3) серин и треонин, (4) аспартат и глутамат, (5) глутамин и аспарагин и (6) лизин, аргинин и гистидин. В табл. BLOSUM62 приведена матрица замещения аминокислот, созданная на основе примерно 2000 локальных множественных выравниваний сегментов белковых последовательностей, представляющих высококонсервативные области для более 500 групп родственных белков (Henikoff and Henikoff, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:10915 (1992. Частоту замещений в матрице BLOSUM62 можно использовать для определения замен консервативных аминокислот,которые могут быть введены в аминокислотные последовательности по настоящему изобретению. Хотя замены аминокислот можно определить, основываясь только на химических свойствах (описанных выше), термин "замена консервативных аминокислот" предпочтительно означает замену, выраженную значением BLOSUM62 выше -1. Например, заменяемая аминокислота является консервативной, если указанная замена характеризуется значением BLOSUM62, равным 0, 1, 2 или 3. В соответствии с данной системой предпочтительные замены консервативных аминокислот характеризуются значениемBLOSUM62, равным по крайней мере 1 (например 1, 2 или 3), в то время как более предпочтительные замены консервативных аминокислот характеризуются значением BLOSUM62, равным по крайней мере 2 (например, 2 или 3). Конкретные варианты IL-22RA характеризуются по крайней мере 70%, по крайней мере 80%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95% или более чем 95%, в частности 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью последовательности с соответствующей аминокислотной последовательностью (например, SEQ ID NO: 3), причем изменение аминокислотной последовательности вызвано одной или несколькими заменами консервативных аминокислот. Замены консервативных аминокислот в гене IL-22RA могут быть произведены, например, путем замены нуклеотидов, указанных в SEQ ID NO: 1, другими нуклеотидами. Такие варианты "консервативных аминокислот" могут быть получены в результате сайтнаправленного мутагенеза с использованием олигонуклеотидов, мутагенеза со сканированием линкера, мутагенеза при помощи полимеразной цепной реакции и тому подобных (см. публикации Ausubel (1995); и McPherson (ed.), Directed Metagenesis: APractical Approach (IRL Press 1991. Вариантный полипептид IL-22RA можно идентифицировать по способности специфически связывать антитела против IL-22RA. Белки по настоящему изобретению могут также включать синтезированные неприродные аминокислотные остатки. Такие аминокислоты включают, не ограничиваясь ими, транс-3-метилпролин, 2,4 метанопролин, цис-4-гидроксипролин, транс-4-гидроксипролин, N-метилглицин, аллотреонин, метилтреонин, гидроксиэтилцистеин, гидроксиэтилгомоцистеин, нитроглутамин, гомоглутамин, пипеколиновую кислоту, тиазолидинкарбоновую кислоту, дегидропролин, 3- и 4-метилпролин, 3,3-диметилпролин,трет-лейцин, норвалин, 2-азафенилаланин, 3-азафенилаланин, 4-азафенилаланин и 4-фторфенилаланин. В данной области известно несколько методов введения в белки неприродных аминокислотных остатков. Например, можно использовать систему in vitro, в которой нонсенс-мутации подавляются при помощи химически аминоацилированных супрессорных кРНК. В данной области известны методы синтеза аминокислот и аминоацилирования тРНК. Транскрипцию и трансляцию плазмид, содержащих нонсенсмутации, обычно выполняют в бесклеточной системе, включающей экстракт S30 E.coli, коммерчески доступные ферменты и другие реагенты. Белки очищают хроматографией. См., например, публикацииet al., Science 259:806 (1993) и Chung et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:10145 (1993). В соответствии со вторым методом трансляцию выполняют в ооцитах Xenopus путем микроинъекции мутированной мРНК и химически аминоацилированных супрессорных тРНК (Turcatti et al., J. Biol.Chem. 271:19991 (1996. В соответствии с третьим методом клетки E.coli культивируют в отсутствие природной аминокислоты, подлежащей замене (например, фенилаланин), и в присутствии требуемой,неприродной аминокислоты (например, 2-азафенилаланин, 3-азафенилаланин, 4-азафенилаланин или 4 фторфенилаланин). Неприродную аминокислоту вводят в белок вместо природного аналога. См. публикацию Koide et al., Biochem. 33:7470 (1994). Природные аминокислотные остатки можно превратить в неприродные аналоги путем химической модификации in vitro. Химическая модификация может быть объединена с сайтнаправленным мутагенезом для дальнейшего расширения диапазона замещений (Wynnand Richards, Protein Sci. 2:395 (1993. Аминокислотные остатки IL-22RA могут быть заменены ограниченным числом неконсервативных аминокислот, аминокислот, не кодированных данным генетическим кодом, неприродных аминокислот и синтезированных аминокислот. Незаменимые аминокислоты в полипептидах по настоящему изобретению могут быть идентифицированы методами, известными в данной области, такими как сайтнаправленный мутагенез или мутагенез со сканированием аланина (Cunningham and Wells, Science 244:1081 (1989), Bass et al., Proc. Nat'l Acad.teins: Analysis and Design, Angeletti (ed.), pages 259-311 (Academic Press, Inc. 1998. В соответствии с последним методом единичные мутации аланина вводят в положении каждого остатка в молекуле и полученные мутантные молекулы анализируют в отношении биологической активности для идентификации аминокислотных остатков, влияющих на активность молекулы. См. также публикации Hilton et al., J.Biol. Chem. 271:4699 (1996). Несмотря на возможность использования анализа последовательности для дальнейшего определения лигандсвязывающей области IL-22RA, аминокислоты, определяющие активность связывания IL22RA (такую как связывание IL-22RA с лигандом IL-22 или антителом против IL-22RA), можно также определить путем физического анализа структуры, выполняемого такими методами как спектроскопия ядерного магнитного резонанса, кристаллография, дифракция электронов или фотоаффинное мечение в сочетании с мутацией аминокислот предполагаемого сайта контактирования. См., например, публикацииde Vos et al., Science 255:306 (1992), Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899 (1992) и Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59 (1992). Несколько аминокислот можно заменить и исследовать указанные замены при помощи известных методов мутагенеза и скрининга, аналогичных описанным в публикациях Reidhaar-Olson and Sauer (Science 241:53 (1988 или Bowie and Sauer (Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:2152 (1989. Вышеуказанные авторы описывают методы одновременной рандомизации двух или более положений в полипептиде, выбора функционального полипептида и последующего секвенирования подвергнутых мутагенезу полипептидов для определения спектра допустимых замен в каждом положении. Другие приемлемые методы включают фаговый дисплей (см., например, публикацию Lowman et al., Biochem. 30:108 32 (1991), патент США 5223409 (Ladner et al.), международную публикациюWO 92/06204 (Huse и областьнаправленный мутагенез (Derbyshire et al., Gene 46:145 (1986) и Ner et al., DNA 7:127 (1988. Кроме того, для клонирования с целью экспрессии лигандов IL-22RA можно использовать IL-22RA, меченный биотином или FITC. Варианты раскрытых нуклеотидных и полипептидных последовательностей IL-22RA могут быть также созданы методом перестановки ДНК, описанным в публикациях Stemmer, Nature 370:389 (1994),Stemmer, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91:10747 (1994) и в международной публикацииWO 97/20078. Вариантные молекулы ДНК получают методом гомологичной рекомбинации in vitro путем произвольной фрагментации родительской ДНК с последующим выполнением вторичной сборки при помощи PCR, что позволяет ввести произвольные точечные мутации. Указанный метод может быть модифицирован в результате использования семейства молекул родительской ДНК, таких как аллельные варианты или молекулы ДНК из разных видов, для введения дополнительной изменчивости в данный процесс. Отбор или скрининг требуемой активности с последующим выполнением дополнительных итераций мутагенеза и анализа обеспечивает быструю "эволюцию" последовательностей в результате отбора требуемых мутаций при одновременном выявлении вредных изменений. Методы мутагенеза, раскрытые в настоящем описании изобретения, могут быть объединены с высокопроизводительными, автоматизированными методами скрининга для обнаружения активности клонированных, подвергнутых мутагенезу полипептидов в клетках-хозяевах. Молекулы подвергнутой мутагенезу ДНК, кодирующие биологически активные полипептиды или полипептиды, связывающиеся с антителами против IL-22RA, могут быть выделены из клеток-хозяев и быстро секвенированы при помощи современного оборудования. Указанные методы делают возможным быстрое определение значения отдельных аминокислотных остатков в представляющем интерес полипептиде и могут быть применены для исследования полипептидов с неизвестной структурой. Настоящее изобретение относится также к "функциональным фрагментам" полипептидов IL-22RA и молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим такие функциональные фрагменты. Обычные анализы делеций в молекулах нуклеиновых кислот могут быть выполнены для получения функциональных фрагментов молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид IL-22RA. В качестве иллюстрации можно отметить, что молекулы ДНК, имеющие нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, могут быть расщеплены нуклеазой Bal31 для получения ряда вложенных делеций. Полученные фрагменты затем вводят в соответствующую рамку считывания экспрессирующих векторов, и экспрессированные полипептиды выделяют и испытывают в отношении способности связывать антитела против IL-22RA. Альтернативой расщеплению экзонуклеазой является сайтнаправленный мутагенез с использованием олигонуклеотидов для введения делеций или терминирующих кодонов для специфического продуцирования требуемого фрагмента. Альтернативно можно синтезировать определенные фрагменты гена IL-22RA при помощи полимеразной цепной реакции. Раскрытый выше общий подход, подтвержденный исследованиями по усечению одного или обоих концов интерферонов, суммирован в публикации Horisberger and Di Marco, Pharmac. Ther. 66:507 (1995). Кроме того, стандартные методы функционального анализа белков описаны, например, в публикацияхYamaguchi et al., Biochem. Pharmacol. 50:1295 (1995), and Meisel et al., Plant Molec. Biol. 30:1 (1996). Анализ конкретных последовательностей, раскрытых в настоящем описании изобретения, позволяет получить ряд иллюстративных функциональных фрагментов, представленных в табл. 4. Нуклеотиды,кодирующие дополнительные функциональные вариантные домены IL-22RA человека, раскрытые в настоящем описании изобретения, но не показанные в табл. 4, можно определить, обратившись к SEQ IDNO: 1. Такие функциональные фрагменты включают, например, нижеследующие нуклеотидные последовательности SEQ ID NO: 1: нуклеотиды 85-381, 206-717 и 85-717 SEQ ID NO: 1 и кодированные ими соответствующие аминокислотные последовательности, показанные соответственно в SEQ ID NO: 2 и SEQ Настоящее изобретение относится также к функциональным фрагментам гена IL-22RA, содержащим замены аминокислот, по сравнению с аминокислотной последовательностью, раскрытой в настоящем описании изобретения. Вариантный ген IL-22RA может быть идентифицирован по структуре путем определения степени идентичности с рассмотренными выше нуклеотидными и аминокислотными последовательностями. Альтернативным методом идентификации вариантного гена по структуре является определение способности молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей потенциальный вариантный генIL-22RA, гибридизировать с молекулой нуклеиновой кислоты, включающей такую нуклеотидную последовательность как SEQ ID NO: 1. Настоящее изобретение также относится к применению функциональных фрагментов полипептидов IL-22RA, антигенных детерминант, несущих антигенную детерминанту сегментов полипептидов IL22RA и молекул нуклеиновых кислот, кодирующих такие функциональные фрагменты, антигенные детерминанты, несущие антигенную детерминанту сегменты полипептидов IL-22RA. Такие фрагменты используют для создания полипептидов, применяемых для получения антител и связывающих партнеров, которые связывают, блокируют, ингибируют, ослабляют, оказывают антагонистическое действие или нейтрализуют активность IL-22 или IL-20 и IL-22 вместе. "Функциональный" полипептид IL-22RA или его фрагмент по настоящему изобретению характеризуется способностью блокировать, ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать воспалительную, пролиферативную или дифференцирующую активность IL-20 или IL-22 благодаря способности индуцировать или ингибировать функции специализированных клеток или благодаря способности специфически связываться с антителом против IL-22RA, клеткой, IL-20 или IL-22. Как было описано выше, IL-22RA имеет структуру рецептора цитокина класса II и домены, раскрытые в настоящем описании изобретения. Таким образом, настоящее изобретение, кроме того, относится к применению слитых белков, включающих: (а) молекулы полипептида, содержащие один или несколько вышеописанных доменов, и (b) функциональные фрагменты, содержащие один или несколько указанных доменов. Другая полипептидная часть слитого белка может быть образована другим рецептором цитокина класса II, таким как IL-10R, IL-13R, IL20RA, IL-20RB, IL-10RB (CRF2-4), IL-22RA2 или ненативным и/или неродственным секреторным сигнальным пептидом, который облегчает секрецию слитого белка. Настоящее изобретение также относится к фрагментам полипептидов или пептидам, содержащим сегмент полипептида IL-22RA, несущий антигенную детерминанту, раскрытую в настоящем описании изобретения. Такие фрагменты или пептиды могут содержать "иммуногенную антигенную детерминанту", которая является частью белка, вызывающей образование антител, при использовании в качестве иммуногена полноразмерного белка. Иммуногенные пептиды, несущие антигенную детерминанту, могут быть идентифицированы стандартными методами (см., например, публикацию Geysen et al., Proc. Nat'lAcad. Sci USA 81:3998 (1983. В отличие от этого фрагменты полипептидов или пептиды могут содержать "антигенную детерминанту", являющуюся областью молекулы белка, с которой может специфически связываться антитело. Определенные антигенные детерминанты состоят из линейного или смежного фрагмента аминокислот, и антигенность такой антигенной детерминанты не может быть уничтожена денатурирующими агентами. В данной области известно, что относительно короткие синтетические пептиды, способные имитировать антигенные детерминанты белка, можно использовать для стимуляции продукции антител против данного белка (см., например, публикацию Sutcliffe et al., Science 219:660 (1983. Соответственно пептиды,несущие антигенную детерминанту, антигенные пептиды, антигенные детерминанты и полипептиды по- 16015706 настоящему изобретению можно использовать для получения антител, связывающихся с полипептидами по настоящему изобретению, а также для идентификации и скрининга моноклональных антител противIL-22RA, которые обладают нейтрализующими свойствами и могут связывать, блокировать, ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать активность IL-22 и IL-20 (отдельно или вместе). Такие нейтрализующие моноклональные антитела по настоящему изобретению могут связываться с антигенной детерминантой IL-22RA. Для определения областей, обладающих наибольшим антигенным потенциалом в SEQ ID NO: 3, можно использовать профили гидрофильности Хоппа-Вудса (Норр et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 78:3824-3828, 1981; Hopp, J. Immun. Meth. 88:1-18, 1986 andTriquier et al., Protein Engineering 11:153-169, 1998). Указанный профиль создан на основе скользящего окна из шести остатков. Скрытые остатки G, S и Т и открытые остатки Н, Y и W во внимание не принимались. Специалист в данной области может определить указанные области в IL-22RA. Кроме того, антигенные детерминанты IL-22RA в SEQ ID NO: 3, прогнозируемые на основании графика ДжеймсонаВульфа, например, при помощи программы Protean DNASTAR (DNASTAR, Inc., Madison, WI), служат в качестве предпочтительных антигенных детерминант и могут быть определены специалистом в данной области. Такие антигенные детерминанты включают (1) аминокислотные остатки 1 (Pro) - 6 (Asp) SEQ IDSEQ ID NO: 3; (12) аминокислотные остатки 203 (Lys) - 209 (Thr) SEQ ID NO: 3. Дополнительные антигенные детерминанты включают нижеследующие пептиды, потенциально получаемые из невосстановленного непроцессированного IL-22RA человека, расщепленного CnBr: пептид 6 (SEQ ID NO: 56), пептид 7 (SEQ ID NO: 57), пептид 8 (SEQ ID NO: 58), пептид 9 (SEQ ID NO: 59), пептид 10 (SEQ ID NO: 60) и пептид 11 (SEQ ID NO: 61). Цистеины связаны дисульфидными связями с образованием возможной связи между пептидами 7 (SEQ ID NO: 57) и 10 (SEQ ID NO: 60). В частности, SEQ ID NO: 56 соответствует аминокислотным остаткам 1 (Pro) - 92 (Met) SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 57 соответствует аминокислотным остаткам 93 (Thr) - 120 (Met) SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 58 соответствует аминокислотным остаткам 121 (Ile) - 160 (Met) SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 59 соответствует аминокислотным остаткам 161(His) - 185 (Met) SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 60 соответствует аминокислотным остаткам 186 (Ile) - 199(Met) SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 61 соответствует аминокислотным остаткам 200 (Cys) - 211 (Thr) SEQID NO: 3. Кроме того, остатки SEQ ID NO: 2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3), имеющие важное значение для связывания лиганда с рецептором, включают Tyr-60 и Phe-164, Tyr-93, Arg-112, Lys-210 и Glu-211 SEQ ID NO: 2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3). Первичные остатки SEQ ID NO: 2(и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3), имеющие важное значение для направления связывания лиганда с рецептором, включают Tyr-60 и Phe-164 SEQ ID NO: 2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3), и вторичные остатки включают остатки Tyr-93, Arg-112, Lys-210 и Glu-211 SEQ ID NO: 2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3). В предпочтительных вариантах осуществления изобретения антигенные детерминанты, с которыми связываются нейтрализующие антитела по настоящему изобретению,содержат остатки SEQ ID NO: 2 (и соответствующие остатки SEQ ID NO: 3), которые имеют важное значение для связывания лиганда с рецептором, например с IL-22RA и IL-20 или IL-22 (отдельно или вместе). Несущие антигенную детерминанту пептиды и полипептиды могут содержать по крайней мере 4-10 аминокислот, по крайней мере 10-15 аминокислот или примерно 15-30 аминокислот в аминокислотной последовательности по настоящему изобретению. Такие несущие антигенную детерминанту пептиды и полипептиды могут быть получены путем фрагментации полипептида IL-22RA или химического синтеза пептидов, раскрытого в настоящем описании изобретения. Кроме того, антигенные детерминанты могут быть отобраны с помощью фагового дисплея неспецифических пептидных библиотек (см., например,публикации Lane and Stephen, Curr. Opin. Immunol. 5:268 (1993) и Cortese et al., Curr. Opin. Biotechnol. 7:616 (1996. Стандартные методы идентификации антигенных детерминант и получения антител из низкомолекулярных пептидов, несущих антигенную детерминанту, описаны, например, в публикацияхMonoclonal Antibodies: Production, Engineering, and Clinical Application, Ritter and Ladyman (eds.), pages 60-84 (Cambridge University Press 1995), and Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, pages 9.3.1-9.3.5 and pages 9.4.1-9.4.11 (John WileySons 1997). Для любого полипептида IL-22RA, включая варианты и слитые белки, специалист в данной области может легко создать полностью вырожденную полинуклеотидную последовательность, кодирующую данный вариант, используя информацию, приведенную выше в табл. 1 и 2. Кроме того, специалисты в данной области могут использовать стандартное программное обеспечение для создания вариантов IL22RA на основе нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, раскрытых в настоящем описа- 17015706 нии изобретения. 5. Получение полипептидов IL-22RA. Полипептиды по настоящему изобретению, включая полноразмерные полипептиды; растворимые мономерные, гомодимерные, гетеродимерные и мультимерные рецепторы; полноразмерные рецепторы; фрагменты рецепторов (например, лигандсвязывающие фрагменты и антигенные детерминанты), функциональные фрагменты и слитые белки, могут быть получены в рекомбинантных клетках-хозяевах стандартными методами. Для экспрессии гена IL-22RA молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая данный полипептид, должна быть функционально связана с регуляторными последовательностями, контролирующими транскрипцию в экспрессирующем векторе, и затем введена в клетку-хозяина. Помимо последовательностей, регулирующих транскрипцию, таких как промоторы и энхансеры, экспрессирующие векторы могут содержать последовательности, регулирующие трансляцию, и ген-маркер, подходящий для селекции клеток, содержащих экспрессирующий вектор. Экспрессирующие векторы, которые подходят для получения чужеродного белка в эукариотических клетках, обычно содержат (1) элементы прокариотической ДНК, кодирующие бактериальный ориджин репликации и маркер устойчивости к антибиотикам, обеспечивающие рост и отбор экспрессирущего вектора в бактериальном хозяине; (2) элементы эукариотической ДНК, контролирующие инициацию транскрипции, такие как промотор; и (3) элементы ДНК, контролирующие процессинг транскриптов, такие как последовательность терминации транскрипции/полиаденилирования. Как было указано выше, экспрессирующие векторы могут также включать нуклеотидные последовательности, кодирующие секреторную последовательность, которая направляет гетерологичный полипептид в секреторный путь клетки-хозяина. Например, экспрессирующий вектор IL-22RA может включать ген IL-22RA и секреторную последовательность, выделенную из любого секретированного гена. Белки IL-22RA по настоящему изобретению могут быть экспрессированы в клетках млекопитающих. Примеры приемлемых клеток-хозяев млекопитающих включают клетки почки африканской зеленой мартышки (Vero; ATCC CRL 1587), эмбриональные клетки почки человека (293-HEK; ATCC CRL 1573), клетки почки детеныша хомячка (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314), клетки почки собаки (MDCK, ATCC CCL34), клетки яичника китайского хомячка (СНО-K1; ATCC CCL61; СНОDG44 (Chasin et al., Som. Cell. Molec. Genet. 12:555, 1986), гипофизарные клетки крысы (GH1; ATCCCCL82), клетки HeLa S3 (ATCC CCL22), клетки гематомы крысы (H-4-II-E; ATCC CRL 1548), SV40 трансформированные клетки почки обезьяны (COS-1; ATCC CRL 1650) и эмбриональные клетки мыши(NIH-3T3; ATCC CRL 1658). Сигнальные последовательности, регулирующие транскрипцию и трансляцию, в случае млекопитающего хозяина могут быть выделены из вирусов млекопитающих, таких как, например, аденовирус,вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус обезьян или тому подобные, в которых регуляторные сигнальные последовательности связаны с определенным геном, характеризующимся высоким уровнем экспрессии. Приемлемые последовательности, регулирующие транскрипцию и трансляцию, могут быть также получены из генов млекопитающих, таких как, например, гены актина, коллагена, миозина и металлотионеина. Последовательности, регулирующие транскрипцию, включают промоторную область, достаточную для инициации синтеза РНК. Приемлемые эукариотические промоторы включают промотор гена металлотионеина I мыши (Hamer et al., J. Molec. Appl. Genet. 1:273 (1982, промотор TK вируса герпеса(McKnight, Cell 31:355 (1982, ранний промотор SV40 (Benoist et al., Nature 290:304 (1981), промотор вируса саркомы Рауса (Gorman et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 79:6777 (1982, промотор цитомегаловируса (Foecking et al., Gene 45:101 (1980 и промотор вируса опухоли молочной железы мыши (см. публикацию Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in Mammalian Cell Culture", in Protein Engineering:Principles and Practice, Cleland et al. (eds.), pages 163-181 (John WileySons, Inc. 1996. Альтернативно для контроля экспрессии гена IL-22RA в клетках млекопитающего может быть использован прокариотический промотор, такой как промотор РНК-полимеразы бактериофага Т 3, если прокариотический промотор регулируется эукариотическим промотором (Zhou et al., Mol. Cell. Biol. 10:4529 (1990), and Kaufman et al., Nucl. Acids Res. 19:4485 (1991. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность ДНК, кодирующая полипептид растворимого рецептора IL-22RA или фрагмент полипептида IL-22RA, функционально связана с другими генетическими элементами в экспрессирующем векторе, необходимыми для его экспрессии,включая промотор и терминатор транскрипции. Указанный вектор также обычно содержит один или несколько селектируемых маркеров и один или несколько точек начала репликации, хотя специалистам в данной области должно быть известно, что в некоторых системах селектируемые маркеры могут находиться в отдельных векторах и репликация экзогенной ДНК может быть обеспечена встраиванием в геном клетки-хозяина. Выбор промоторов, терминаторов, селектируемых маркеров, векторов и других элементов является обычной процедурой, известной специалисту в данной области. Многие такие элементы описаны в научной литературе и могут быть приобретены у коммерческих поставщиков. Многие компоненты комплекса растворимого рецептора могут быть одновременно трансфецированы в отдельные экспрессирующие векторы или могут находиться в одном экспрессирующем векторе. Такие методы- 18015706 экспрессии нескольких компонентов белковых комплексов хорошо известны в данной области. Экспрессирующий вектор может быть введен в клетки-хозяева различными стандартными методами, включая трансфекцию с использованием фосфата кальция, трансфекцию, опосредуемую липосомами, доставку микровпрыскиванием, электропорацию и тому подобные. Трансфецированные клетки могут быть отобраны и увеличены в количестве с образованием рекомбинантных клеток-хозяев, содержащих экспрессирующий вектор, стабильно интегрированный в геном клетки-хозяина. Методы введения векторов в эукариотические клетки и методы отбора таких устойчивых трансформантов при помощи доминантного селектируемого маркера описаны, например, в публикациях Ausubel (1995) и Murray (ed.),Gene Transfer and Expression Protocols (Humana Press 1991). Например, одним из приемлемых селектируемых маркеров является ген, придающий устойчивость к антибиотику неомицину. В данном случае отбор производят в присутствии лекарственного средства типа неомицина, такого как G-418 или тому подобного. Системы отбора могут быть также использованы для увеличения уровня экспрессии представляющего интерес гена, определяемого как "амплификация". В процессе амплификации трансфектанты культивируют в присутствии небольшого количества селектирующего агента и затем увеличивают количество селектирующего агента для отбора клеток, продуцирующих продукты введенных генов на высоких уровнях. Приемлемым амплифицируемым селектируемым маркером является дигидрофолат-редуктаза (DHFR), придающая устойчивость к метотрексату. Могут быть также использованы гены, придающие устойчивость к другим лекарственным средствам (например, устойчивость к гигромицину, множественную лекарственную устойчивость, устойчивость к пуромицин-ацетилтранферазе). Альтернативно маркеры, определяющие измененный фенотип, такие как зеленый флуоресцентный белок или поверхностные белки, такие как CD4, CD8, МНС класса I, плацентарная щелочная фосфатаза, могут быть использованы для отделения трансфецированных клеток от нетрансфецированных клеток такими методами как сортировка при помощи FACS или разделение магнитными шариками. Полипептиды IL-22RA также могут быть продуцированы культивируемыми клетками млекопитающих с использованием вирусной системы доставки. Характерные вирусы, подходящие для указанной цели, включают аденовирус, ретровирусы, вирус герпеса, вирус коровьей оспы и аденоассоциированный вирус (AAV). Аденовирус, вирус двухцепочечной ДНК, является в настоящее время наиболее изученным вектором переноса гена, используемым для доставки гетерологичной нуклеиновой кислоты (для ознакомления в данным вопросом см. публикации Becker et al., Meth. Cell Biol. 43:161 (1994) и Dougas andCuriel, ScienceMedicine 4:44 (1997. Преимуществом аденовирусной системы является введение относительно больших ДНК-вставок, способность роста до высокого титра, способность инфицировать целый ряд клеток млекопитающих и гибкость, позволяющая использовать данную систему с большим числом существующих векторов, содержащих разные промоторы. Удаляя части генома аденовируса, можно создавать более длинные вставки (до 7 т.п.о.) гетерологичной ДНК. Указанные вставки могут быть введены в вирусную ДНК путем прямого лигирования или гомологичной рекомбинации котрансфецированной плазмидой. Одним вариантом является удаление незаменимого гена Е 1 из вирусного вектора, что делает невозможной репликацию, если ген Е 1 не будет предоставлен клеткой-хозяином. Клетки 293 человека, инфицированные аденовирусным вектором(АТССCRL-1573, 45504, 45505), например, можно выращивать в виде клеток, прикрепленных к субстрату или в суспензионной культуре с относительно высокой плотностью клеток для продуцирования белка в значительных количествах (см. публикацию Gamier et al., Cytotechnol. 15:145 (1994.IL-22RA можно также экспрессировать в других высших эукариотических клетках, таких как клетки птиц, грибов, насекомых, дрожжей или растений. Бакуловирусная система является эффективным средством введения клонированных генов IL-22RA в клетки насекомых. Приемлемые экспрессирующие векторы созданы на основе вируса множественного ядерного полиэдроза Autographa californica(AcMNPV) и содержат хорошо известные промоторы, такие как промотор 70 белка теплового шока дрозофилы (hsp), промотор предраннего гена вируса ядерного полиэдроза Autographa californica (ie-1) и замедленный ранний промотор 39 К, промотор бакуловируса p10 и промотор Drosophila metallothionein. Во втором методе создания рекомбинантного бакуловируса использована система на основе транспозона,описанная в публикации Luckow, et al., J. Virol. 67:4566 (1993). Указанная система, в которой использованы переносящие векторы, продается в наборе BAC-to-BAC (Life Technologies, Rockville, MD). В указанной системе использован переносящий вектор, PFASTBAC (Life Technologies), содержащий транспозон Tn7, служащий для переноса ДНК, кодирующей полипептид IL-22RA, в геном бакуловируса, находящегося в E.coli в виде большой плазмиды, именуемой "бакмид". См. публикации Hill-Perkins andBiol. Chem. 270:1543 (1995). Кроме того, переносящие векторы могут содержать внутрирамочное слияние с ДНК, кодирующей метку антигенной детерминанты у С- и N-конца экспрессированного полипептида IL-22RA, например, метку антигенной детерминанты Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Nat'l Acad.Sci. 82: 7952 (1985. Переносящий вектор, содержащий ген IL-22RA, вводят в E.coli методом, известным в данной области, и отбирают бакмиды, содержащие поврежденный ген lacZ, свидетельствующий о наличии рекомбинантного бакуловируса. ДНК бакмида, содержащую геном рекомбинантного бакуловиру- 19015706 са, затем выделяют стандартными методами. Иллюстративный вектор PFASTBAC может быть модифицирован в значительной степени. Например, промотор полигедрина может быть удален и заменен промотором основного белка бакуловируса(известного так же, как промотор Pcor, р 6.9 или МР), который предварительно экспрессируют, инфицируя бакуловирус, при этом было установлено его преимущество для экспрессии секретируемых белков(см., например, публикации Hill-Perkins and Possee, J. Gen. Virol. 71:971 (1990), Bonning, et al., J. Gen. Virol. 75:1551 (1994) и Chazenbalk and Rapoport, J. Biol. Chem. 270:1543 (1995). В таких переносящих векторах может быть использован короткий или длинный вариант промотора основного белка. Кроме того,могут быть созданы переносящие векторы, заменяющие секреторные сигнальные последовательности нативного IL-22RA секреторными сигнальными последовательностями, выделенными из белков насекомых. Например, секреторная сигнальная последовательность, выделенная из экдистероидной глюкозилтрансферазы (EGT), мелиттина медоносной пчелы (Invitrogen Corporation; Carlsbad, СА) или бакуловируса gp67 (PharMingen; San Diego, CA), может быть использована в конструкциях для замены секреторной сигнальной последовательности нативного IL-22RA. Для трансфекции клеток-хозяев используют рекомбинантный вирус или бакмид. Приемлемые клетки-хозяева насекомых включают линии клеток, выделенных из IPLB-Sf-21, линию клеток яичника куколки Spodoptera frugiperda, такую как Sf9 (ATCC CRL 1711), St21AE и Sf21 (Invitrogen Corporation; SanDiego, CA), а также клетки Шнейдера-2 дрозофилы и линию клеток HIGH FIDEO (Invitrogen), выделенных из Trichoplusia ni (патент США 5300435). Для выращивания и сохранения клеток можно использовать коммерчески доступную бессывороточную среду. Приемлемыми средами являются среды Sf900II (Life Technologies) или ESF 921 (Expression Systems) для клеток Sf9; и Ex-cell0405 (JRH Biosciences, Lenexa, KS) или Express FiveO (Life Technologies) для клеток Т. ni. При использовании рекомбинантного вируса клетки обычно выращивают при плотности инокуляции, равной примерно 2-5105 клеток, до плотности, равной 1-2106 клеток, после достижении которой добавляют рекомбинантные вирусы при множественности инфицирования (MOI) от 0,1 до 10, обычно около 3. Существующие методы получения рекомбинантных белков в бакуловирусных системах описаны в пуликациях Bailey et al., "Manipulation of Baculovirus Vectors", in Methods in Molecular Biology, Volume 7:WileySons, Inc. 1996). Клетки грибов, включая дрожжевые клетки, также можно использовать для экспрессии генов по настоящему изобретению. Виды дрожжей, представляющие особый интерес в данной связи, включают Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris и Pichia methanolica. Приемлемые промоторы для экспрессии в дрожжах включают промоторы из GAL1 (галактозы), PGK (фосфоглицерат-киназы), ADH (алькогольдегидрогеназы), АОХ 1 (алкогольоксидазы), HIS4 (гистидинолдегидрогеназы) и тому подобные. Создано множество векторов для клонирования в дрожжах, которые можно легко приобрести. Указанные векторы включают векторы на основе YIp, такие как YIp5, векторы YRp, такие как YRp17, векторы YEp, такие как YEp13, и векторы YCp, такие как YCp19. Методы трансформации клеток S. cerevisiae экзогенной ДНК и продуцирования ими рекомбинантных полипептидов описаны, например, в патенте США 4599311 (Kawasaki), патенте США 4931373 (Kawasaki et al.), патенте США 4870008 (Brake), патенте США 5037743 (Welch et al.) и патенте США 4845075 (Murray et al.). Трансформированные клетки отбирают на основании фенотипа, определяемого селектируемым маркером, устойчивости к лекарственным средствам или способности расти при отсутствии определенного питательного вещества (например,лейцина). Приемлемой векторной системой для использования в Saccharomyces cerevisiae является векторная система РОТ 1, описанная в патенте США 4931373 (Kawasaki et al.), которая позволяет отбирать трансформированные клетки с учетом роста в средах, содержащих глюкозу. Дополнительные приемлемые промоторы и терминаторы, предназначенные для использования в дрожжах, включают указанные элементы, выделяемые из генов гликолитических ферментов (см., например, патент США 4599311 (Kawasaki), патент США 4615974 (Kingsman et al.) и патент США 4977092 (Bitter и генов алкогольдегидрогеназы. См. также патенты США 4990446, 5063154, 5139936 и 4661454. В данной области известны трансформирующие системы для других дрожжей, включающих Hansenula polymorpha, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces fragilis, Ustilago maydis, Pichia pastoris, Pichia methanolica, Pichia guillermondii и Candida maltosa. См., например, публикациюGleeson et al., J. Gen. Microbiol. 132:3459 (1986) и патент США 4882279 (Cregg). Клетки Aspergillus могут быть использованы в соответствии с методами, описанными в патенте США 4935349 (McKnightal.). Методы трансформации Neurospora описаны в патенте США 4486533 (Lambowitz). Например, использование Pichia methanolica в качестве хозяина для продуцирования рекомбинант- 20015706 ных белков описано в патенте США 5716808 (Raymond), патенте США 5736383 (Raymond), в публикации Raymond et al., Yeast 14:11-23 (1998) и в международных публикацияхWO 97/17450, WO 97/17451, WO 98/02536 и WO 98/02565. Молекулы ДНК, используемые для трансформации P. methanolica, могут быть получены в виде двухцепочечных кольцевых плазмид, которые предпочтительно линеаризуют до трансформации. Промотор и терминатор, используемые в плазмиде для продуцирования полипептида в Р. methanolica, могут быть выделены из гена P. methanolica, такого как ген утилизации спирта P. methanolica (AUG1 или AUG2). Другими приемлемыми промоторами являются промоторы, выделенные из генов дигидроксиацетонсинтазы (DNAS), формиатдегидрогеназы (FMD) и каталазы (CAT). Для облегчения введения ДНК в хромосому хозяина желательно иметь полный экспрессирующий сегмент плазмиды, фланкированный с обоих концов последовательностями ДНК хозяина. Приемлемым селектирующим маркером для использования в Pichia methanolica является ген ADE2 Р. methanolica, который кодирует фосфорибозил-5-аминоимидазолкарбоксилазу (AIRC; ЕС 4.1.1.21) и позволяет клеткамхозяевам ade2 расти при отсутствии аденина. Для крупномасштабного промышленного производства, где желательно свести к минимуму использование метанола, можно использовать клетки-хозяева, в которых отсутствуют оба гена утилизации метанола (AUG1 и AUG2). Для продукции секретируемых белков в клетках-хозяевах могут отсутствовать гены вакуолярной протеазы (РЕР 4 и PRB1). Для облегчения введения плазмиды, содержащей ДНК, кодирующую представляющий интерес полипептид, в клетки Р.methanolica используют электропорацию. Клетки P. methanolica могут быть трансформированы электропорацией с использованием экспоненциально затухающего импульсного электрического поля силой 2,54,5 кВ/см, предпочтительно около 3,75 кВ/см, и постоянной времени (t), равной 1-40 мс, наиболее предпочтительно примерно 20 мс. Экспрессирующие векторы могут быть также введены в протопласты растений, интактные растительные ткани или выделенные растительные клетки. Методы введения экспрессирующих векторов в растительную ткань включают прямое инфицирование или одновременное культивирование растительной ткани с Agrobacterium tumefaciens, доставку микровпрыскиванием, инъекцию ДНК, электропорацию и т.п. См., например, публикации Horsch et al., Science 227:1229 (1985), Klein et al., Biotechnology 10:268(1992) и Miki et al., "Procedures for Introducing Foreign DNA into Plants", in Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick et al. (eds.), pages 67-88 (CRC Press, 1993). Альтернативно гены IL-22RA могут быть экспрессированы в прокариотических клетках-хозяевах. Приемлемые промоторы, которые могут быть использованы для экспрессии полипептидов IL-22RA в прокариотических хозяевах, хорошо известны специалистам в данной области и включают промоторы,способные узнавать полимеразы Т 4, Т 3, Sp6 и Т 7, промоторы PR и PL -бактериофага, промоторы trp,recA, lacUV5, tac, lpp-lacSpr, phoA, lacZ и промоторы белков теплового шока E.coli, промоторы В. subtilis,промоторы бактериофагов Bacillus, промоторы Streptomyces, промотор int -бактериофага, промотор blapBR322 и промотор CAT гена хлорамфениколацетилтрансферазы. Прокариотические промоторы рассмотрены в публикациях Glick, J. Ind. Microbiol. 1:277 (1987), Watson et al., Molecular Biology of the Gene,4th Ed. (Benjamin Cummins, 1987) и Ausubel et al. (1995). Приемлемые прокариотические хозяева включают E.coli и Bacillus subtilus. Приемлемые штаммы(Academic Press 1991. Приемлемые штаммы Bacillus subtilus включают BR151, YB886, MI119, MI120 и В 170 (см., например, публикацию Hardy, "Bacillus Cloning Methods", in DNA Cloning: A Practical Approach, Glover (ed.) (IRL Press 1985. При экспрессии полипептида IL-22RA в бактериях, таких как E.coli, полипептид может оставаться в цитоплазме, обычно в виде нерастворимых гранул, или может быть направлен секреторной последовательностью бактерии в периплазматическое пространство. В первом случае клетки лизируют, гранулы выделяют и денатурируют, используя, например, гуанидинизотиоцианат или мочевину. Денатурированный полипептид затем может быть подвергнут вторичной укладке цепи и димеризован путем разведения в денатурате, например, при помощи диализа против раствора мочевины и комбинации восстановленного и окисленного глутатиона с последующим диализом против забуференного физиологического раствора. Во втором случае полипептид может быть выделен из периплазматического пространства в растворимой и функциональной форме в результате разрушения клеток (например, методом ультразвуковой обработки или осмотического шока) для высвобождения содержимого периплазматического пространства и выделения белка, при этом устраняется необходимость в денатурации и вторичной укладке цепи. Специалистам в данной области хорошо известны методы экспрессии белков в прокариотических хозяевах (см., например, публикации Williams et al., "Expression of foreign proteins in E. coli using plasmid(eds.), page 101 (John WileySons, Inc. 1996. Стандартные методы введения экспрессирующих векторов в бактериальные, дрожжевые, растительные клетки и клетки насекомых описаны, например, в публикации Ausubel (1995). Общие методы экспрессии и выделения чужеродного белка, продуцированного в системе клеток млекопитающего, описаны, например, в публикации Etcheverry, "Expession of Engineered Proteins in(Wiley-Liss, Inc. 1996). Стандартные методы выделения белка, продуцируемого бактериальной системой,описаны, например, в публикации Grisshammer et al., "Purificabion of over-produced proteins from E.coliPress 1995). Существующие методы выделения рекомбинантных белков из бакуловирусной системы описаны в публикации Richardson (ed.), Baculovirus Expression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995). В качестве альтернативы полипептиды по настоящему изобретению могут быть синтезированы методами полного твердофазного синтеза, неполного твердофазного синтеза, конденсации фрагментов или классического синтеза в жидкой фазе. Указанные методы синтеза хорошо известны специалистам в данной области (см., например, публикации Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 55:2149 (1963), Stewart et al., "SolidLloyd-Williams et al, Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins (CRC Press, Inc. 1997. Изменения, вносимые в общие методы химического синтеза, такие как "химическое лигирование нативного белка" и "лигирование экспрессированного белка", также являются стандартными (см., например,публикации Dawson et al., Science 266:776 (1994), Hackeng et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 94:7845 (1997),Dawson, Methods Enzymol. 287:34 (1997), Muir et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:6705 (1998) и Severinovand Muir, J. Biol. Chem. 273:16205 (1998. Пептиды и полипептиды по настоящему изобретению включают по крайней мере 6, по крайней мере 9 или по крайней мере 15 последовательных аминокислотных остатков SEQ ID NO: 3. В качестве иллюстрации можно отметить, что полипептиды могут включать по крайней мере 6, по крайней мере 9 или по крайней мере 15 последовательных аминокислотных остатков SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды содержат 20, 30, 40, 50, 100 или более последовательных остатков указанных аминокислотных последовательностей. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие пептиды и полипептиды, могут использоваться в качестве праймеров и зондов при осуществлении полимеразной цепной реакции. Кроме того, полипептиды IL-22RA и их фрагменты могут быть экспрессированы в высших эукариотических клетках в виде мономеров, гомодимеров, гетеродимеров или многомеров. Такие клетки могут быть использованы для продукции полипептидов мономерных, гомодимерных, гетеродимерных и мультимерных рецепторов IL-22RA, включающих по крайней мере один полипептид IL-22RA ("рецепторы, содержащие IL-22RA" или "полипептиды рецепторов, содержащих IL-22RA"), или могут быть использованы в качестве анализируемых клеток в системах скрининга. В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения полипептид по настоящему изобретению, содержащий внеклеточный домен IL22RA, получают в культивируемой клетке и указанную клетку используют для скрининга лигандов для данного рецептора, включая природный лиганд, IL-22, а также агонисты и антагонисты природного лиганда. В кратком изложении этот способ предусматривает объединение кДНК или гена, кодирующего рецептор, с другими генетическими элементами, необходимыми для экспрессии (например, с промотором транскрипции), и введение полученного экспрессирующего вектора в клетку-хозяина. Клетки, экспрессирующие ДНК и продуцирующие функциональный рецептор, отбирают и используют в различных системах скрининга. Каждый компонент комплекса мономерного, гомодимерного, гетеродимерного и мультимерного рецептора может быть экспрессирован в одной и той же клетке. Кроме того, компоненты комплекса мономерного, гомодимерного, гетеродимерного и мультимерного рецептора могут быть также слиты с трансмембранным доменом или другой мембраносвязанной частью для сборки комплекса и скрининга трансфектантов в соответствии с приведенным выше описанием. Для анализа полипептидов, являющихся антагонистами IL-20 и IL-22, и антител по настоящему изобретению используют клетки млекопитающих, подходящие для экспрессии рецепторов, включая IL22RA, или другие рецепторы, связывающие, как известно, IL-20 или IL-22 (например, клетки, экспрессирующие IL-22RA/CRF2-4 и IL-20RA, IL-20RB, IL22RA/IL-20RB или IL-20RA/IL-20RB), и трансдукции опосредуемого рецептором сигнала, которые включают клетки, экспрессирующие субъединицы других рецепторов, способные образовывать функциональный комплекс с IL-22RA (или IL-20RA). Указанные субъединицы могут относиться к семейству рецепторов интерферона или других рецепторам цитокина класса II или класса I, например CRF2-4 (номер доступа в банке генов Genbank Z17227), IL-10R (номера доступа в банке генов Genbank U00672 и NM001558), IL-22RA (совместный патент США 5965704),zcytor7 (IL-20RA) (совместный патент США 5945511), IL-20RA/IL-20RB (публикация WIPOWO 01/46232) и IL-9R. Кроме того, желательно использовать клетку того же вида, что и экспрессируемый рецептор. В предпочтительном варианте осуществления изобретения рост клетки зависит от экзогенно- 22015706 подаваемого гемопоэтического фактора роста, необходимого для ее пролиферации. Предпочтительными линиями клеток указанного типа являются линия клеток TF-1 человека (номер АТСС CRL-2003) и линия клеток AML-193 (номер АТСС CRL-9589), которые представляют собой GM-CSF-зависимые линии лейкозных клеток человека, и клетки BaF3 (Palacios and Steinmetz, Cell 41:727-734, (1985, которые представляют собой IL-3-зависимую линию пре-В-клеток мыши. Другие линии клеток включают клетки ВНК, COS-1 и СНО. Приемлемые клетки-хозяева могут быть созданы для продукции необходимых субъединиц рецепторов или других клеточных компонентов, необходимых для требуемой реакции клетки. Преимуществом данного способа является возможность создания линий клеток, экспрессирующих субъединицы рецепторов из любого вида, что позволяет преодолеть возможные ограничения, возникающие в связи со специфичностью видов. Ортологи кДНК рецептора человека могут быть клонированы и использованы в линиях клеток того же вида, например, кДНК мыши в линии клеток BaF3. Таким образом, могут быть созданы линии клеток, ранее зависящие от гемопоэтического фактора роста, такого как GMCSF или IL-3, которые теперь будут зависеть от другого цитокина, воздействующего через рецептор IL22RA, такого как IL-22. Клетки, экспрессирующие функциональный рецептор, используют при осуществлении анализов методом скрининга. В данной области известны разные подходящие анализы. Указанные анализы основаны на обнаружении биологической реакции в клетке-мишени. Одним из таких анализов является анализ пролиферации клеток. Клетки культивируют в присутствии или отсутствии испытуемого соединения и обнаруживают пролиферацию клеток, измеряя, например, внедрение меченного тритием тимидина,или выполняют колориметрический анализ, основанный на метаболическом разрушении бромида 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) (Mosman, J. Immunol. Meth. 65:55-63, (1983. В альтернативном анализе используют клетки, созданные для экспрессии гена-репортера. Ген-репортер связывают с промоторным элементом, реагирующим на путь, связанный с рецептором, и визуализируют активацию транскрипции гена-репортера. Предпочтительным промоторным элементом в данной связи является элемент, реагирующий на сыворотку, или SRE. См., например, публикацию Shaw et al., Cell 56:563572 (1989). Предпочтительным геном-репортером является ген люциферазы (de Wet et al., Mol. Cell. Biol. 7:725, (1987. Экспрессию гена люциферазы обнаруживают люминесцентными методами, известными в данной области (см., например, публикации Baumgartner et al., J. Biol. Chem. 269:29094-29101, (1994);Schenborn and Goiffin, Promega Notes 41:11, 1993). Наборы для анализа активности люциферазы можно приобрести коммерческим путем, например, от компании Promega Corp Madison, WI. Линии клетокмишеней данного типа можно использовать для скрининга библиотек химических веществ, кондиционированных культуральных сред, грибных бульонов, образцов почвы, проб воды и тому подобных. Например, банк образцов кондиционированных сред можно подвергнуть анализу с использованием клеткимишени для идентификации клеток, продуцирующих лиганд. Положительные клетки затем используют для создания библиотеки кДНК в экспрессирующем векторе млекопитающего, который делят на пулы,трансфецируют в клетки-хозяева и экспрессируют. Образцы сред от трансфецированных клеток затем анализируют, выполняя последующее деление пулов, повторную трансфекцию, субкультивирование и повторный анализ положительных клеток для выделения клонированной кДНК, кодирующей данный лиганд. В данной области известно несколько линий клеток, чувствительных к IL-20, или такие линии клеток могут быть созданы, как, например, линия клеток Baf3/DIRS1/cytoR11 (публикация WIPOWO 02/072607). Кроме того, известно несколько линий клеток, чувствительных к IL-22 (Dumontier et al., J.al., J. Biol Chem. 275:31335-31339, 2000; Kotenko S.V. et al., J. Biol. Chem. 276:2725-2532, 2001), и линий клеток, экспрессирующих субъединицу IL-22RA рецептора IL-22. Например, нижеследующие клетки реагируют на IL-22: TK-10 (Xie M.H. et al., см. выше) (карцинома почки человека); SW480 (АТССCCL-228) (аденокарцинома ободочной кишки человека); HepG2 (АТССНВ-8065 (гепатома человека); РС 12 (АТССCRL-1721 (модель нейронов мыши; феохромоцитома крыс) и MES13 (АТССCRL1927) (линия клеток мезангия). Некоторые линии клеток, экспрессирующих IL-22RA (рецептор IL-22),также являются предполагаемыми линиями клеток, чувствительными к IL-22: A549 (АТССCCL-185)(карцинома легкого человека); G-361 (АТССCRL-1424) (меланома человека) и Caki-1 (АТССНТВ 46) (карцинома почки человека). Кроме того, могут быть созданы линии клеток, чувствительных к IL-22,например, линия клеток Baf3/cytoR11/CRF2-4, раскрытая в настоящем описании изобретения (публикация WIPOWO 02/12345). Указанные клетки могут быть использованы при выполнении анализов по оценке функциональной активности IL-22RA в качестве антагониста IL-20 или IL-22 или противовоспалительного фактора. Дополнительный способ скрининга по настоящему изобретению включает использование гибридных полипептидов рецепторов. Указанные гибридные полипептиды образуют два общих класса. В первом классе гибридных полипептидов внутриклеточный домен IL-22RA присоединен к лигандсвязывающему домену второго рецептора. Второй класс гибридных полипептидов включает внеклеточный (лигандсвязывающий) домен IL-22RA (SEQ ID NO: 3) с внутриклеточным доменом второго рецептора,предпочтительно рецептора гемопоэтического цитокина, и трансмембранный домен. Гибридные моно- 23015706 меры, гомодимеры, гетеродимеры и многомеры IL-22RA рецепторов по настоящему изобретению второго класса экспрессированы в клетках, которые, как известно, способны реагировать на сигналы, передаваемые вторым рецептором. Два указанных класса гибридных рецепторов, вместе взятые, позволяют идентифицировать тип реагирующей клетки при выполнении анализа по обнаружению IL-22 или IL-20. Кроме того, такие клетки можно использовать в присутствии IL-22 или IL-20 для анализа антагонистов растворимых рецепторов по настоящему изобретению при выполнении анализа конкурентного связывания. При выполнении такого анализа уменьшение пролиферации или ослабление передачи сигнала IL-22 или IL-20 в присутствии растворимого рецептора по настоящему изобретению свидетельствует о наличии антагонистической активности. Кроме того, клеточные анализы связывания растворимого рецептораIL-22RA можно использовать для оценки способности растворимого рецептора связывать, блокировать,ингибировать, ослаблять, оказывать антагонистическое действие или нейтрализовать активность IL-22 или IL-20. 6. Получение слитых белков и конъюгатов IL-22RA. Одним общим классом аналогов IL-22RA являются варианты, в которых аминокислотная последовательность представляет собой мутацию аминокислотной последовательности, раскрытой в настоящем описании изобретения. Другой общий класс аналогов IL-22RA образуют антиидиотипические антитела и их фрагменты, описанные ниже. Кроме того, в качестве аналогов могут быть использованы рекомбинантные антитела, включающие вариабельные области антиидиотипических антител (см., например,публикацию Monfardini et al., Proc. Assoc. Am. Physicians 108:420 (1996. Так как вариабельные области антиидиотипических антител IL-22RA имитируют IL-22RA, то указанные домены обеспечивают связывающую активность IL-22RA. Специалистам в данной области известны методы получения антиидиотипических каталитических антител (см., например, публикации Joron et al., Ann. N Y Acad. Sci 672:216(1998. Другим методом идентификации аналогов IL-22RA является использование комбинаторных библиотек. Методы создания и скрининга библиотек фагового дисплея и других комбинаторных библиотек описаны, например, в публикации Kay et al., Phage Display of Peptides and Proteins (Academic Press 1996),в патенте США 5783384 (Verdine), патенте США 5747334 (Kay et al.) и в патенте США 5723323(Kauffman et al.). Полипептиды IL-22RA находят применение как in vivo, так и in vitro. В качестве иллюстрации можно отметить, что растворимую форму IL-22RA можно добавлять в среду для культивирования клеток для ингибирования действия лиганда IL-22RA, продуцируемого культивируемыми клетками. Слитые белки IL-22RA могут быть использованы для экспрессии IL-22RA в рекомбинантном хозяине и для выделения продуцированного IL-22RA. Как описано ниже, определенные слитые белки IL22RA находят также применение в диагностике и терапии. Один тип слитого белка включает пептид,который направляет полипептид IL-22RA из рекомбинантной клетки-хозяина. Для введения полипептидаIL-22RA в секреторный путь эукариотической клетки-хозяина в экспрессирующем векторе IL-22RA предусмотрена секреторная сигнальная последовательность (известная также как сигнальный пептид, лидерная последовательность, препропоследовательность или препоследовательность). Секреторная сигнальная последовательность может быть выделена из IL-22RA, к тому же приемлемая сигнальная последовательность может быть также выделена из другого секретированного белка или синтезирована de novo. Секреторная сигнальная последовательность функционально связана с последовательностью, кодирующей IL-22RA, так, что две последовательности соединены в правильной рамке считывания и расположены с возможностью направления вновь синтезированного полипептида в секреторный путь клетки-хозяина. Секреторные сигнальные последовательности обычно располагаются у 5'конца нуклеотидной последовательности, кодирующей представляющий интерес полипептид, хотя определенные секреторные сигнальные последовательности могут быть расположены в другом месте представляющей интерес нуклеотидной последовательности (см., например, патент США 5037743 (Welchet al.), патент США 5143830 (Holland et al.). Несмотря на то, что секреторная сигнальная последовательность IL-22RA или другого белка, продуцированного клетками млекопитающего (например, сигнальная последовательность активатора тканевого плазминогена, описанная в патенте США 5641655), можно использовать для экспрессии IL-22RA в рекомбинантных клетках-хозяевах млекопитающего, для экспрессии в дрожжевых клетках предпочтительна сигнальная последовательность дрожжей. Примерами приемлемых сигнальных последовательностей дрожжей являются последовательности, выделенные из -фактора конъюгационного феромона дрожжей (кодированного геном MF1), инвертазы (кодированной геном SUC2) или кислой фосфатазыUniversity Press 1995). Полипептиды растворимого рецептора IL-22RA могут быть получены в результате экспрессии процессированной ДНК, кодирующей внеклеточный домен, например, полипептида, содержащего SEQ IDNO: 3, или соответствующую область рецептора отличного от человеческого. Полипептиды внеклеточного домена предпочтительно получают в форме, в которой отсутствуют трансмембранные и внутриклеточные полипептидные сегменты. Для того чтобы направить экспорт домена рецептора из клеткихозяина, ДНК рецептора связывают с сегментом второй ДНК, кодирующим секреторный пептид, такой как секреторный пептид t-PA. Для облегчения очистки домена секретированного рецептора С-концевой удлиняющий сегмент, такой как полигистидиновая метка, вещество Р, пептид Flag (Hopp et al., Biotechnology 6:1204-1210, (1988), может быть приобретен в компании Eastman Kodak Co., New Haven, CT),другой полипептид или белок, для которого существует антитело или другой специфически связывающий агент, может быть слит с полипептидом рецептора. Кроме того, в соответствии с приведенным выше описанием могут быть получены антигенные детерминанты IL-22RA из внеклеточных цитокинсвязывающих доменов. В соответствии с альтернативным способом внеклеточный домен рецептора IL-22RA или другой рецептор цитокина класса I или II может быть экспрессирован в виде слитого белка с константными областями тяжелой цепи иммуноглобулина, обычно Fc-фрагмента, содержащего два домена константной области и шарнирную область, но не имеющего вариабельной области (см. патенты США 6018026 и 5750375 (Sledziewski A.Z. et al Полипептиды растворимого рецептора IL-22RA по настоящему изобретению включают такие слитые конструкции. Один такой слитый белок показан в SEQ ID NO: 4. Такие слитые молекулы обычно секретируются в виде мультимерных молекул, в которых Fc-фрагменты связаны друг с другом дисульфидными связями и два полипептида рецептора расположены в непосредственной близости друг от друга. Слитые белки подобного типа могут быть использованы для аффинной очистки родственного лиганда от раствора в качестве инструмента при выполнении анализа in vitro, для блокирования, ингибирования или ослабления сигналов in vitro путем специфического титрования лиганда и в качестве антагонистов in vivo при парентеральном введении для связывания циркулирующего в крови лиганда и выведения его из кровотока. Для очистки лиганда в образец, содержащий указанный лиганд,добавляют химеру IL-22RA-Ig (например, в кондиционированную культуральную среду или экстракты ткани) в условиях, облегчающих связывание рецептора с лигандом (обычно при значениях температуры,рН и ионной силы, близких к физиологическим показателям). Комплекс химера-лиганд затем разделяют при помощи смеси, содержащей белок А, которую иммобилизуют на твердом носителе (например, на нерастворимых полимерных шариках). Затем лиганд элюируют стандартными химическими методами,например, в градиенте соли или рН. В альтернативном способе сама химера может быть связана с твердым носителем, при этом связывание и элюирование выполняют в соответствии с приведенным выше описанием. Химеры могут быть использованы in vivo для регулирования воспалительных реакций,включая острые реакции, такие как реакции на сывороточный амилоидный белок A (SAA), Среактивный белок (CRP) и т.п. Химеры с высоким сродством связывания вводят парентерально (например, в виде внутримышечной, подкожной или внутривенной инъекции). Циркулирующие в крови молекулы связывают лиганд и выводят из кровотока в результате обычных физиологических процессов. Химеры, используемые при выполнении анализов, связывают с носителем при помощи Fc-области и используют в формате анализа методом ELISA. Для выделения антитела против IL-22RA и связывающих партнеров по настоящему изобретению можно использовать систему, в которой использован лигандсвязывающий рецептор (или антитело, один член пары комплемент/антикомплемент), или его связывающий фрагмент и коммерчески доступный биосенсорный прибор (BIAcore, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Такой рецептор, антитело, член пары комплемент/антикомплемент или фрагмент иммобилизуют на поверхности рецепторного чипа. Применение вышеуказанного устройства описано в публикациях Karlsson, J. Immunol. Methods 145:22940, 1991 и Cunningham and Wells, J. Mol. Biol. 234:554-63, 1993. Рецептор, антитело, член пары или фрагмент ковалентно связывают, используя амин или сульфогидрил, с декстрановыми волокнами, прикрепленными к золотой пленке в проточной ячейке. Испытуемый образец пропускают через указанную ячейку. При наличии в образце лиганда, антигенной детерминанты или противоположного члена пары комплемент/антикомплемент указанный образец будет связываться с иммобилизованным рецептором, антителом или членом пары, вызывая изменение показателя преломления среды, который визуализируется в виде изменения резонанса поверхностного плазмона золотой пленки. Данная система позволяет определить частоту появления и исчезновения изменений, на основании которых можно вычислить сродство связывания и оценить стехиометрию связывания. Альтернативно для анализа связывания лиганда с рецептором можно использовать технологию SELDI(TM) (Ciphergen, Inc., Palo Alto, CA). Кроме того, вышеописанную технологию BIACORE можно использовать в экспериментах по конкурентному связыванию для определения способности разных моноклональных антител связываться с одинаковыми или разными антигенными детерминантами в полипептиде IL-22RA и для картирования антигенных детерминант нейтрализующих антител по настоящему изобретению, которые связывают, блокируют, ингибируют, ослабляют, оказывают антагонистическое действие или нейтрализуют IL-22 или как IL-20, так иIL-22. Полипептиды лигандсвязывающего рецептора можно также использовать в других системах анализа, известных в данной области. Такие системы включают анализ Скатчарда для определения сродства(Cunningham et al., Science 253:545-48, 1991; Cunningham et al., Science 245:821-25, 1991). Настоящее изобретение также относится к целому ряду других полипептидных слитых молекул и родственных мультимерных белков, включающих один или несколько полипептидных слитых молекул. Например, растворимый рецептор IL-22RA может быть получен в виде слитого белка с димеризующим белком, описанным в патентах США 5155027 и 5567584. Предпочтительные димеризующие белки включают домены константной области иммуноглобулина, например IgC1, и легкую -цепь человека. Слитые белки иммуноглобулина и растворимого IL-22RA могут быть экспрессированы в генетически созданных клетках для продуцирования целого ряда мультимерных аналогов рецептора IL-22RA. Вспомогательные домены могут быть слиты с растворимым рецептором IL-22RA для направленной доставки в определенные клетки, ткани или макромолекулы (например, коллаген или клетки, экспрессирующие лиганды IL-22RA, IL-22 или IL-20). Полипептид IL-22RA может быть слит с двумя или более частями молекулы, такими как аффинная метка для очистки и домен, обеспечивающий направленную доставку. Полипептидные слитые молекулы могут также включать один или несколько сайтов расщепления, в частности, между доменами. См. публикацию Tuan et al., Connective Tissue Research 34:1-9, 1996. В бактериальных клетках зачастую желательно экспрессировать гетерологичный белок в виде слитого белка для уменьшения токсичности, повышения устойчивости и увеличения выхода экспрессированного белка. Например, IL-22RA можно экспрессировать в виде слитого белка, содержащего полипептид глутатион-S-трансферазы. Белки, слитые с глутатион-S-трансферазой, обычно являются растворимыми и могут быть легко очищены от лизатов E. coli на колонках с иммобилизованным глутатионом. В соответствии с аналогичными методами слитый белок IL-22RA, содержащий полипептид мальтозасвязывающего белка, может быть выделен при помощи колонки с амилозной смолой, в то время как слитый белок, содержащий С-конец процессированного гена белка А, может быть очищен при помощи IgGсефарозы. Существующие методы экспрессии гетерологичного полипептида в качестве слитого белка в бактериальной клетке описаны, например, в публикациях Williams et al. "Expression of Foreign Proteins inE.coli Using Plasmid Vectors and Purification of Specific Polyclonal Antibodies", in DNA Cloning 2: A Practical Approach, 2nd Edition, Glover and Hames (Eds.), pages 15-58 (Oxford University Press 1995). Кроме того,существуют коммерчески доступные экспрессирующие системы. Например, система очистки белка PINPOINT Xa (Promega Corporation; Madison, WI) позволяет выделить слитый белок, содержащий полипептид, биотинилируемый во время экспрессии со смолой, содержащей авидин. Пептидные метки, которые можно использовать для выделения гетерологичных полипептидов, экспрессируемых прокариотическими или эукариотическими клетками, включают полигистидиновые метки(обладающие сродством к смоле, образующей хелат с никелем), метки с-myc, кальмодулинсвязывающий белок (выделяемый при помощи аффинной хроматографии с использованием кальмодулина), вещество Р, метку RYIRS (которая связывается с антителами против RYIRS), метку Glu-Glu и меткуBiochem. Biophys. 329:215 (1996), Morganti et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 23:67 (1996) и Zheng et al.,Gene 186:55 (1997). Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие пептидные метки, можно приобрести, например, в корпорации Sigma-Aldrich (St. Louis, МО). Другая форма слитого белка включает полипептид IL-22RA и константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, обычно Fc-фрагмент, содержащий два или три домена константной области и шарнирную область, но не имеющий вариабельной области. В качестве примера можно привести патент США 5723125 (Chang et al.), в котором описан слитый белок, содержащий интерферон человека и Fcфрагмент иммуноглобулина человека. С-конец интерферона связан с N-концом Fc-фрагмента пептидным линкером. Примером пептидного линкера является пептид, включающий, главным образом, последовательность, инертную к Т-клеткам, которая является иммунологически инертной. Характерный пептидный линкер имеет аминокислотную последовательность GGSGG SGGGG SGGGG S (SEQ ID NO:9). В данном слитом белке иллюстративный Fc-фрагмент является 4-цепью человека, которая устойчива в растворе и обладает небольшой или вообще не обладает комплемент-активирующей активностью. Таким образом, в объем настоящего изобретения входит слитый белок IL-22RA, который содержит часть IL22RA и Fc-фрагмент человека, при этом С-конец части IL-22RA присоединен к N-концу Fc-фрагмента при помощи пептидного линкера, такого как пептид, включающий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 4. Часть IL-22RA может представлять собой молекулу IL-22RA или ее фрагмент. Например,слитый белок может включать аминокислоту SEQ ID NO: 3 и Fc-фрагмент (например, Fc-фрагмент человека) (SEQ ID NO: 4). В другом варианте слитый белок IL-22RA включает последовательность IgG, часть IL-22RA, ковалентно связанную с аминоконцом последовательности IgG, и сигнальный пептид, ковалентно связанный с аминоконцом части IL-22RA, при этом последовательность IgG состоит из нижеследующих элементов,расположенных в следующем порядке: шарнирная область, СН 2-домен и СН 3-домен. Таким образом, в последовательности IgG отсутствует CH1-домен. Часть IL-22RA обладает активностью IL-22RA, такой как способность связываться с лигандом IL-22RA. Общий способ получения слитых белков, включаю- 26015706 щих как антитело, так и часть, не являющуюся антителом, описан в европейском патенте 742830 (LaRochelle et al.) (WO 95/21258). Слитые белки, содержащие часть IL-22RA и Fc-фрагмент, могут быть использованы, например, в качестве инструмента для осуществления анализов in vitro. Например, наличие лиганда IL-22RA в биологическом образце может быть обнаружено при помощи слитого белка IL-22RA-иммуноглобулин, в котором часть IL-22RA служит для связывания лиганда, и макромолекула, такая как белок А или антитело против Fc-фрагмента, служит для связывания слитого белка с твердым носителем. Такие системы могут быть использованы для идентификации агонистов и антагонистов, препятствующих связыванию лигандов IL-22RA, например IL-22 или IL-20 и IL-22, с их рецептором. Другими примерами белков, слитых с антителом, являются полипептиды, содержащие антигенсвязывающий домен и фрагмент IL-22RA, содержащий внеклеточный домен IL-22RA. Такие молекулы могут быть использованы для направленной доставки к определенным тканям благодаря связывающей активности IL-22RA. Настоящее изобретение дополнительно относится к целому ряду других полипептидных гибридов. Например, часть доменов или все домены, определяющие биологическую функцию, могут быть заменены в IL-22RA по настоящему изобретению функционально эквивалентными доменами другого члена семейства рецепторов цитокинов. Полипептидные гибриды могут быть экспрессированы в рекомбинантных клетках-хозяевах для продукции целого ряд слитых аналогов IL-22RA. Полипептид IL-22RA может быть слит с двумя или более частями или доменами, такими как аффинная метка, для очистки и направленного воздействия на домен. Полипептидные слитые молекулы могут также содержать один или несколько сайтов расщепления, в частности, между доменами. См., например, публикацию Tuan et al., Connective Tissue Research 34:1 (1996). Слитые белки могут быть созданы методами, известными специалистам в данной области, получая каждый компонент слитого белка и химически конъюгируя указанные компоненты. Альтернативно полинуклеотид, кодирующий оба компонента слитого белка в соответствующей рамке считывания, может быть создан известными методами и экспрессирован методами, описанными в настоящем описании изобретения. Общие методы ферментативного и химического расщепления слитых белков описаны, например, в публикации Ausubel (1995) стр. от 16-19 до 16-25. Связывающие домены IL-22RA могут быть затем исследованы путем физического анализа структуры, осуществляемого такими методами, как спектроскопия ядерного магнитного резонанса, кристаллография, дифракция электронов или фотоаффинное мечение, в сочетании с мутацией аминокислот предполагаемого сайта контактирования агонистов лиганда IL-22RA. См., например, публикации de Vos et al.,Science 255:306 (1992), Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899 (1992) и Wlodaver et al., FEBS Lett. 309:59 (1992). Настоящее изобретение также относится к химически модифицированным композициям IL-22RA, в которых полипептид IL-22RA связан с полимером. Иллюстративные полипептиды IL-22RA являются растворимыми полипептидами, в которых отсутствует функциональный трансмембранный домен, такой как полипептид, включающий аминокислотные остатки SEQ ID NO: 3. Указанный полимер обычно является водорастворимым, поэтому конъюгат IL-22RA не осаждается в водной среде, такой как физиологическая среда. Примером приемлемого полимера является полимер, модифицированный с образованием одной реакционноспособной группы, такой как активный сложный эфир, используемой для ацилирования, или альдегид, используемый для алкилирования. Подобным образом можно контролировать степень полимеризации. Примером реакционноспособного альдегида является пропиональдегид полиэтиленгликоля или его моно(С 1-С 10)алкоксильные или арилоксипроизводные (см., например, патент США 5252714 (Harris et al Полимер может иметь разветвленную или неразветвленную цепь. Кроме того, для получения конъюгатов IL-22RA может быть использована смесь полимеров. Конъюгаты IL-22RA, используемые в лечебных целях, могут включать фармацевтически приемлемые водорастворимые полимерные части молекулы. Приемлемые водорастворимые полимеры включают полиэтиленгликоль (PEG), монометокси-PEG, моно(С 1-С 10)алкокси-PEG, арилокси-PEG, поли(Nвинилпирролидон)-PEG, трезилмонометокси-PEG, пропиональдегид PEG, бис-сукцинимидилкарбонатPEG, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры полипропиленоксида и этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт, декстран, целлюлозу или другие углеводородные полимеры. Приемлемый PEG может иметь молекулярную массу от около 600 до около 60000, в том числе, например, 5000, 12000, 20000 и 25000. Конъюгат IL-22RA может также включать смесь таких водорастворимых полимеров. Один пример конъюгата IL-22RA включает часть IL-22RA и полиалкилоксидную часть, присоединенную к N-концу части IL-22RA. PEG является одним приемлемым полиалкилоксидом. В качестве иллюстрации можно отметить, что IL-22RA может быть модифицирован PEG, причем указанный процесс известен как "полиэтиленгликолирование". Полиэтиленгликолирование IL-22RA можно осуществлять,выполняя любые реакции полиэтиленгликолирования, известные в данной области (см., например, европейский патент 0154316, публикации Delgado et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9:249 (1992), Duncan and Spreafico, Clin. Pharmacokinet. 27:290 (1994) и Francis et al., Int. J. Hematol. 68:1- 27015706 или реакцию алкилирования с использованием реакционноспособной молекулы полиэтиленгликоля. В соответствии с альтернативным методом конъюгаты IL-22RA получают путем конденсации активированного PEG, в котором концевая гидроксильная или аминогруппа заменена активированным линкером(см., например, патент США 5382657 (Karasiewicz et al Полиэтиленгликолирование путем ацилирования обычно требует взаимодействия активного сложноэфирного производного PEG с полипептидом IL-22RA. Примером активированного сложного эфираPEG является PEG, этерифицированный с образованием N-гидроксисукцинимида. В используемом здесь значении термин "ацилирование" означает нижеследующие типы связей между IL-22RA и водорастворимым полимером: амидные, карбаматные, уретановые и т.п. Методы получения полиэтиленгликолированного IL-22RA путем ацилирования обычно включают стадии: (а) взаимодействия полипептида IL22RA с PEG (таким как реакционноспособный сложный эфир альдегидного производного PEG) в условиях, обеспечивающих присоединение одной или нескольких групп PEG к IL-22RA, и (b) получения продуктов реакции. Оптимальные условия реакции для ацилирования должны быть определены на основании известных параметров и требуемых результатов. Например, чем больше соотношение PEG:IL22RA, тем выше процентный выход продукта полиэтиленгликолированного IL-22RA. Продукт полиэтиленгликолирования, полученный путем ацилирования, обычно является продуктом полиэтиленгликолированного IL-22RA, в котором -аминогруппы лизина соединены с полиэтиленгликолем при помощи ацильной связующей группы. Примером связующей группы является амид. Полученный IL-22RA обычно моно-, ди- или триполиэтиленгликолирован по крайней мере на 95%, хотя в зависимости от условий реакции могут быть получены некоторые продукты с более высокими степенями полиэтиленгликолирования. Полиэтиленгликолированные продукты могут быть отделены от неконъюгированных полипептидов IL-22RA при помощи стандартных методов очистки, таких как диализ, ультрафильтрация, ионообменная хроматография, аффинная хроматография и т.п. Полиэтиленгликолирование путем алкилирования обычно включает осуществление взаимодействия конечного альдегидного производного PEG с IL-22RA в присутствии восстановителя. Группы PEG могут быть присоединены к полипептиду при помощи группы -СН 2-NH. Кроме того, антитела против IL-22RA или фрагменты антител по настоящему изобретению могут быть полиэтиленгликолированы методами, известными в данной области и раскрытыми в настоящем описании изобретения. Преимуществом получения производного путем восстановительного алкилирования с образованием монополиэтиленгликолированного продукта является возможность использования дифференциальной реакционной способности первичных аминогрупп разных типов, подходящих для получения производного. Указанное взаимодействие обычно осуществляют при значении рН, позволяющем использовать разность рКа между -аминогруппами остатков лизина и -аминогруппами N-концевого остатка белка. Благодаря такому избирательному получению производного можно контролировать присоединение к белку водорастворимого полимера, содержащего такую реакционноспособную группу как альдегид. Конъюгирование с полимером происходит главным образом у N-конца белка без существенной модификации других реакционноспособных групп, таких как аминогруппы боковой цепи лизина. Настоящее изобретение относится к получению, по существу, гомогенной популяции конъюгатов IL-22RA с монополимером. Восстановительное алкилирование с целью получения, по существу, гомогенной популяции конъюгатов IL-22RA с монополимером может включать стадии: (а) взаимодействия полипептида IL-22RA с реакционноспособным PEG в условиях восстановительного алкилирования при значении рН, пригодном для избирательной модификации -аминогруппы у аминоконца IL-22RA, и (b) получения одного или нескольких продуктов реакции. Восстановитель, используемый для осуществления восстановительного алкилирования, должен быть устойчивым в водном растворе и способным восстанавливать только основание Шиффа, образовавшееся на начальной стадии восстановительного алкилирования. Примеры восстановителей включают борогидрид натрия, цианоборогидрид натрия, диметиламиноборан, триметиламиноборан и пиридинборан. Для получения, по существу, гомогенной популяции конъюгатов IL-22RA с монополимером условия реакции восстановительного алкилирования должны обеспечивать избирательное присоединение водорастворимого полимера к N-концу IL-22RA. Такие условия реакции обычно создают разность рКА между аминогруппами лизина и -аминогруппой у N-конца. Значение рН также влияет на используемое отношение полимера к белку. Как правило, при более низком значении рН желательно использовать больший избыток полимера по отношению к белку, так как чем менее реакционноспособной является Nконцевая -группа, тем большее количество полимера необходимо для достижения оптимальных условий. При более высоком значении рН отношение полимер:IL-22RA не должно быть таким высоким благодаря наличию большего числа реакционноспособных групп. Значение рН обычно находится в пределах 3-9 или 3-6. Указанный метод может быть использован для получения конъюгатов IL-22RAсодержащих гомодимерных, гетеродимерных или мультимерных растворимых рецепторов. Другим учитываемым фактором является молекулярная масса водорастворимого полимера. Как- 28015706 правило, чем выше молекулярная масса полимера, тем меньше число молекул полимера, которые могут быть присоединены к белку. Для осуществления реакций полиэтиленгликолирования характерная молекулярная масса составляет от около 2 до около 100 кДа, от около 5 до около 50 кДа или от около 12 до около 25 кДа. Молярное отношение водорастворимого полимера к IL-22RA обычно находится в пределах от 1:1 до 100:1. Молярное отношение водорастворимого полимера к IL-22RA обычно составляет от 1:1 до 20:1 для полиэтиленгликолирования или от 1:1 до 5:1 для монополиэтиленгликолирования. В данной области хорошо известны стандартные методы получения конъюгатов, включающих полипептид и водорастворимый полимер. См., например, патент США 5382657 (Karasiewicz et al.), патент США 5738846 (Greenwald et al.) и публикации Nieforth et al., Clin. Pharmacol. Ther. 59:636 (1996),Monkarsh et al., Anal. Biochem. 247:434 (1997. Указанный метод может быть использован для получения конъюгатов IL-22RA-содержащих гомодимерных, гетеродимерных или мультимерных растворимых рецепторов. Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим пептид или полипептид, такой как растворимый рецептор или антитело, раскрытые в настоящем описании изобретения. Такие композиции могут далее содержать носитель. Носитель может быть обычным органическим или неорганическим носителем. Примеры носителей включают воду, буферный раствор, спирт, пропиленгликоль, макроголь,кунжутное масло, кукурузное масло и т.п. 7. Выделение полипептидов IL-22RA. Полипептиды по настоящему изобретению могут быть очищены по крайней мере до 80% чистоты,по крайней мере до 90% чистоты, по крайней мере до 95% чистоты или более чем до 95% чистоты, в частности до 96, 97, 98 и более чем до 99% чистоты в отношении загрязняющих макромолекул, особенно других белков и нуклеиновых кислот, и инфекционных и пирогенных агентов. Полипептиды по настоящему изобретению могут быть также очищены до фармацевтически чистого состояния, которое предполагает степень чистоты более 99,9%. В некоторых препаратах очищенный полипептид, по существу, не содержит других полипептидов, в частности других полипептидов животного происхождения. Для получения препаратов IL-22RA, очищенных от природных примесей (таких как ткани человека), синтетических полипептидов IL-22RA, рекомбинантных полипептидов IL-22RA и слитых полипептидов IL-22RA, очищенных от рекомбинантных клеток-хозяев, могут быть использованы методы фракционирования и/или стандартные методы очистки. Для фракционирования образцов можно использовать осаждение сульфатом аммония и хаотропную экстракцию. Характерные стадии очистки могут включать использование гидроксиапатита, вытеснительную хроматографию, FPLC и высокоэффективную жидкостную хроматографию с обращенной фазой. Приемлемые хроматографические среды включают производные декстраны, арагозу, целлюлозу, полиакриламид, специальные кремнеземы и т.п. ПроизводныеPEI, DEAE, QAE и Q также являются приемлемыми средами. Характерные хроматографические среды включают среды, являющиеся производными фенильных, бутильных или октильных групп, такие как фенилсефароза FF (Pharmacia), бутил 650 Toyopearl (Toso Haas, Montgomeryville, PA), октилсефароза(Pharmacia) и т.п., или полиакриловые смолы, такие как амберхром CG 71 (Toso Haas) и т.п. Приемлемые твердые носители включают стеклянные бусы, смолы на основе кремнезема, целлюлозные смолы, агарозные гранулы, перекрестносшитые агарозные гранулы, полистирольные гранулы, перекрестносшитые полиакриламидные смолы и тому подобные, которые не растворяются в условиях предполагаемого применения. Указанные носители могут быть модифицированы реакционноспособными группами, позволяющими присоединять белки при помощи аминогрупп, карбоксильных групп, сульфгидрильных групп,гидроксильных групп и/или углеводородных частей. Примеры химических методов связывания включают активацию цианированным бромидом, активацию N-гидроксисукцинимидом, активацию эпоксидом, активацию сульфогидрилом, активацию гидразидом и использование карбоксильных и аминопроизводных для связывания карбодиимидом. Вышеуказанные и другие твердые среды хорошо известны, широко используются в данной области и могут быть приобретены у коммерческих поставщиков. Выбор конкретного метода выделения и очистки полипептида является обычной практикой и частично определяется свойствами выбранного носителя. См., например, публикации Affinity Chromatography: PrinciplesMethods (Pharmacia LKB Biotechnology 1988) иDoonan, Protein Purification Protocols (The Humana Press 1996). Специалисты в данной области могут внести дополнительные изменения в методы выделения и очистки IL-22RA. Например, для выделения больших количеств белка методом иммуноаффинной очистки могут быть использованы антитела против IL-22RA, полученные в соответствии с приведенным ниже описанием. Полипептиды по настоящему изобретению также могут быть выделены благодаря определенным свойствам. Например, адсорбционная хроматография на иммобилизованных ионах металлов (IMAC) может быть использована для очистки белков с высоким содержанием гистидина, в том числе белков,содержащих полигистидиновые метки. Для осуществления вышеуказанной очистки в гель сначала вводят ионы двухвалентного металла с образованием хелата (Sulkowski, Trends in Biochem. 3:1 (1985. Белки с высоким содержанием гистидина адсорбируются указанной матрицей с разным сродством связывания в зависимости от использованных ионов металла и могут быть элюированы методом конкурентного

МПК / Метки

МПК: A61K 39/395, C07K 14/715, C07K 16/28

Метки: моноклональное, полученное, il-22ra, гибридомы, фрагмент, указанного, антитело, полипептидом, гуманизированное, связывающиеся, продуцирующие, антитела, применение

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/30-15706-monoklonalnoe-antitelo-ili-ego-fragment-svyazyvayushhiesya-s-polipeptidom-il-22ra-gumanizirovannoe-antitelo-poluchennoe-iz-ukazannogo-antitela-gibridomy-produciruyushhie-antitelo-i.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Моноклональное антитело или его фрагмент, связывающиеся с полипептидом il-22ra, гуманизированное антитело, полученное из указанного антитела, гибридомы, продуцирующие антитело, и применение указанного антитела</a>

Похожие патенты