Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты или экстракт растения рода angelicae, содержащий его

Номер патента: 5565

Опубликовано: 28.04.2005

Авторы: Хух Сунг Ох, Ким Юнг Хи, Сух Хонг Вон, Сонг Донг Кеун

Есть еще 6 страниц.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты формулы I или его фармацевтически приемлемую соль

Рисунок 1

в которой

R1 представляет H или CH3,

R2 представляет -CH=CHCOOH или

Рисунок 2

2. Композиция по п.1, в которой производное гидроксикоричной кислоты формулы I представляет феруловую кислоту или изоферуловую кислоту.

3. Композиция по п.1, которая дополнительно включает декурсинол.

4. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая декурсинол или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая экстракт растения рода Angelicae, содержащий производное гидроксикоричной кислоты формулы I или декурсинол.

6. Композиция по п.5, в которой экстракт получают экстракцией корня растения рода Angelicae низшим спиртом.

7. Композиция по п.5 или 6, в которой растение рода Angelicae выбрано из группы, состоящей из Angelicae gigas Nakai, Angelica acutiloba Kitagawa и Angelica sinensis Diels.

8. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты формулы I или его фармацевтически приемлемую соль

Рисунок 3

в которой

R1 представляет H или CH3,

R2 представляет -CH=CHCOOH или

Рисунок 4

9. Пищевая композиция по п.8, в которой производное гидроксикоричной кислоты формулы I представляет феруловую кислоту или изоферуловую кислоту.

10. Пищевая композиция по п.8, которая дополнительно включает декурсинол.

11. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая декурсинол или его фармацевтически приемлемую соль.

12. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая экстракт растения рода Angelicae, содержащий производное гидроксикоричной кислоты формулы I или декурсинол.

13. Композиция по п.12, в которой экстракт получают экстракцией корня растения рода Angelicae низшим спиртом.

14. Композиция по пп.12 или 13, в которой растение рода Angelicae выбрано из группы, состоящей из Angelicae gigas Nakai, Angelica acutiloba Kitagawa и Angelica sinensis Diels.

 

Текст

Смотреть все

005565 Область изобретения Настоящее изобретение относится к композиции для профилактики или лечения слабоумия, включающей производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол, их фармацевтически приемлемую соль или экстракт растения рода Angelicae, содержащий их. Предпосылки изобретения В последние годы чрезвычайно возрастает число пожилых людей, пораженных старческим слабоумием, например болезнью Альцгеймера. Сообщалось, что накопление -амилоида (A1-42) в мозге вызывает нейротоксичность, которая является одной из причин болезни Альцгеймера (Selkoe, Annu.Rev.Neurosci., 17, 489-517 (1994. Следовательно, предпринимались многочисленные усилия для разработки лекарственного препарата для профилактики или лечения болезни Альцгеймера путем защиты клеток мозга от токсичности -амилоида. Однако эффективный лекарственный препарат не был разработан. Заявители стремились разработать лекарственный препарат для слабоумия и неожиданно установили, что экстракт Angelicae gigas Nakai, который применяется в Корее для лечения заболеваний сердца,печени и селезенки, обладает высокой активностью для профилактики или лечения слабоумия. Краткое описание изобретения Следовательно, целью настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения слабоумия. Дополнительной целью настоящего изобретения является пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия. В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения обеспечивается фармацевтическая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол, их фармацевтически приемлемую соль или экстракт растения рода Angelicae,содержащий их: Краткое описание фигур Вышеуказанные и другие объекты и признаки настоящего изобретения станут очевидными из последующего описания изобретения в сочетании с сопровождающими чертежами, которые соответственно показываютaиг. 1 А и 1 В - хроматограммы ВЭЖХ, подтверждающие наличие декурсинола и феруловой кислоты в экстракте Angelicae gigas Nakai; фиг. 2 - результаты тестов пассивного избегания, проведенных на мышах, которым вводили экстракт Angelicae gigas Nakai, изменяя количество экстракта (фиг. 2 А) и период введения (фиг. 2 В);-1 005565 фиг. 3 - результаты тестов пассивного избегания, проведенных на мышах, которым вводили феруловую кислоту, изменяя количество феруловой кислоты (фиг. 3 А) и период введения (фиг. 3 В); фиг. 4 А и 4 В - альтернативное поведение (%) и число вхождений в отсеки, соответственно наблюдаемые в тестах с Y-образным лабиринтом, у мышей, которым вводили феруловую кислоту, изменяя период введения; фиг. 5 - результаты тестов пассивного избегания, проведенных на мышах, которым вводили феруловую кислоту или изоферуловую кислоту; фиг. 6A-6C - результаты тестов пассивного избегания, альтернативного поведения (%) и числа вхождений в отсеки, наблюдаемые в тестах с Y-образным лабиринтом, у мышей, которым вводили соответственно различные количества декурсинола; фиг. 7A и 7B - синергизм феруловой кислоты и декурсинола, наблюдаемый в тестах пассивного избегания, проведенных на мышах, которым вводили феруловую кислоту и декурсинол; фиг. 8A-8F - микрофотографии иммуногистохимического окрашивания ОХ-42 в грушевидной коре и миндалевидном ядре у мыши, полученные через 1 день после введения -амилоида (1-42); фиг. 9A-9C - микрофотографии иммуногистохимического окрашивания холин-ацетилтрансферазы(ChAT) в септальном ядре мыши, полученные через 5 сут. после введения -амилоида (1-42); фиг. 10 - ингибирующее действие феруловой кислоты на индуцированное -амилоидом (1-42) вытекание лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из первичной культуры мышиных клеток коры мозга. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения слабоумия, включающей производное гидроксикоричной формулы I или его фармацевтически приемлемую соль Примеры производного гидроксикоричной кислоты формулы I включают феруловую кислоту, изоферуловую кислоту, хлорогеновую кислоту и кофейную кислоту. Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения слабоумия, включающей декурсинол или его фармацевтически приемлемую соль. Феруловую кислоту и декурсинол можно выделить из растения рода Angelicae способом, описанным в "Methods in New Drugs Development from Traditional Medicinal Materials" (опубликовано Seoul National University Natural Products Research Institute, Корея), или синтезировать способом, описанным вMerck Index. Кроме того, феруловая кислота является промышленно доступной, и другие производные гидроксикоричной кислоты можно получить из феруловой кислоты простым способом, известным в данной области. Кроме того, их можно превратить в различные типы фармацевтически приемлемых солей, например неорганические соли, такие как соли натрия, калия, магния и кальция, и органические соли, полученные с использованием ангеликовой кислоты, лизина, этаноламина, N,N'дибензилэтилендиамина или -токоферола, или эфиры ("оризанол"), полученные с использованием тритерпенового спирта или растительных стеролов, например циклоартенола, обычными способами, хорошо известными в данной области. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию для профилактики или лечения слабоумия, включающую экстракт растения рода Angelicae, содержащий производное гидроксикоричной кислоты формулы I или декурсинол. Примеры растения рода Angelicae, пригодные в настоящем изобретении включают Angelicae gigas Nakai, Angelica acutiloba Kitagawa и Angelicasinensis Diels. Экстракт по настоящему изобретению можно получить одним из обычных способов с использованием подходящих растворителей, таких как спирты. Например, низший спирт, такой как метанол и этанол, предпочтительно 80% метанол, добавляют к корню растения рода Angelicae и смесь выдерживают при температуре от 15 до 80 С, предпочтительно от 30 до 55 С, в течение периода времени от 15 мин до-2 005565 48 ч, предпочтительно от 30 мин до 12 ч, с получением экстракта. Полученный экстракт включает феруловую кислоту и декурсинол в количествах от 0,01 до 0,9 мас.% и от 0,1 до 10 мас.% соответственно, в расчете на общую массу экстракта. Кроме того, экстракт можно также приготовить с использованием органического растворителя, например ацетона, хлороформа и метиленхлорида, и можно превратить в порошок сушкой при пониженном давлении. Производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол или экстракт растения рода Angelicae,содержащий их, проявляют профилактическое или лечебное действие в отношении слабоумия на модели болезни Альцгеймера на мышах. Введение композиции по изобретению эффективно для профилактики или лечения нарушения памяти у мышей, вызванного инъекционным введением -амилоида (1-42) непосредственно в желудочек мозга мыши. Результаты иммуногистохимического окрашивания с целью исследования гистологических изменений, вызванных инъекционным введением -амилоида (1-42) в желудочек мозга контрольной мыши, показывают, что уровень ОХ-42, маркера микроглии, временно возрастает в коре мозга и затем возвращается к нормальному состоянию. Кроме того, также наблюдали, что уровень холинацетилтрансферазы(ChAT), фермента, синтезирующего ацетилхолин, уменьшается при введении -амилоида (1-42). В противоположность у мыши, которой предварительно вводили производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол или экстракт растения рода Angelicae перед введением -амилоида (142), уровень ОХ-42 был значительно ниже по сравнению с контролем. Кроме того, снижение концентрации ChAT, наблюдаемое в контроле, не отмечается у мыши, которой вводили композицию по изобретению. Таким образом, производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол или экстракт растения рода Angelicae предотвращают или лечат слабоумие посредством защиты тканей мозга, подавляя активность микроглии, которая играет важную роль в индуцировании нейротоксичности -амилоидом(1-42), и предупреждая снижение ChAT -амилоидом (1-42). Кроме того, несмотря на их высокую эффективность, производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол и экстракт растения рода Angelicae имеют низкую токсичность в токсикологических опытах на крысах и не оказывают вредного действия на функцию печени. Фармацевтическую композицию для профилактики или лечения слабоумия можно получить смешиванием производного гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинола или экстракта растения рода Angelicae с фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем или их разбавлением фармацевтически приемлемым разбавителем с использованием любого обычного способа. Примерами подходящих носителей, наполнителей и разбавителей являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит,ксилит, эритрит, мальтит, крахмалы, аравийская камедь, альгинаты, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлоза, метилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, вода,метилгидроксибензоаты, пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Композиции дополнительно могут включать наполнители, антисклеивающие агенты, смазывающие агенты,увлажняющие агенты, ароматизаторы, эмульгаторы, консерванты и тому подобное. Композиции по настоящему изобретению можно составлять таким образом, чтобы обеспечить быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после их введения млекопитающему с использованием способов, хорошо известных в данной области. Таким образом, композиции могут быть в виде таблетки, пилюли, порошка, саше, эликсира, суспензии, эмульсии, раствора, сиропа, аэрозоля, мягких и твердых желатиновых капсул, стерильного раствора для инъекций, стерильного расфасованного порошка и подобных. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить различными путями,включая пероральный, трансдермальный, подкожный, внутривенный и внутримышечный. Обычные суточные дозы производного гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинола и экстракта растения рода Angelicae могут находиться в интервале примерно от 0,5 до 50 мг/кг массы тела, от 0,3 до 30 мг/кг массы тела и от 5 до 500 мг/кг массы тела, соответственно, и их можно вводить в единичной дозе или в разделенных дозах. Однако должно быть понятно, что фактически вводимое количество активного ингредиента должно определяться с учетом различных имеющих отношение факторов, включая выбранный путь введения, возраст, пол и массу тела отдельного пациента и тяжесть симптомов у пациента, и, следовательно, вышеуказанные дозы никоим образом не предназначаются для ограничения объема изобретения. С другой стороны, производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол или экстракт растения рода Angelicae могут быть включены в продукты питания в качестве добавки или диетической добавки в целях профилактики или лечения слабоумия. Следовательно, настоящее изобретение также относится к пищевой композиции, эффективной для профилактики или лечения слабоумия, включающей эффективное количество производного гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинола или экстракта растения рода Angelicae, содержащего их. Продукты питания могут включать различные пищевые продукты: напитки, жвачки, чаи, витаминные комплексы и диетические пищевые продукты.-3 005565 Для того, чтобы приготовить продукты питания, имеющие профилактическую или лечебную активность в отношении слабоумия, производное гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинол или экстракт растения рода Angelicae можно смешивать с сырьем во время приготовления продуктов питания или добавлять к уже приготовленным продуктам питания. В данном случае содержание производного гидроксикоричной кислоты формулы I, декурсинола или экстракта растения рода Angelicae в продукте питания может находиться в интервале от 0,05 до 10 мас.%, от 0,05 до 10 мас.% и от 1 до 40 мас.%, соответственно. Следующие примеры предназначены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения без ограничения его объема. Кроме того, представленные ниже проценты для твердого вещества в твердой смеси, жидкости в жидкости и твердого вещества в жидкости являются маc./маc., об./об. и маc./об., соответственно, и все реакции проводят при комнатной температуре, если не указано иначе. Ссылочный пример 1. Инъекция в желудочек мозга Введение -амилоида (1-42) мыши проводили методом, описанным в LaursenBelknap(J.Pharmacol.Methods, 16, 355-357 (1986. Конкретно, 5 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора, содержащего 1,85 мкг -амилоида (1-42), набирали в шприц Гамильтона объемом 50 мкл,снабженный иглой 26 размера, кончик иглы вводили мыши в брегму и затем вводили раствор амилоида (1-42). Каждая мышь контрольной группы получала равное количество -амилоида (42-1) вместо -амилоида (1-42). Тест пассивного избегания проводили на 1-2 дни (1-й день: обучение; 2-й день: тест) и тест с Y-образным лабиринтом - на 3-4 дни (3-й день: обучение; 4-й день: тест) после введения. Ссылочный пример 2. Тест пассивного избегания Для того, чтобы исследовать способность к обучению и память у мыши, проводили тест пассивного избегания методом, описанным в Song et al., J.Neurochem., 71, 875-878 (1998), следующим образом. Готовили камеру для проведения теста пассивного избегания, снабженную освещенным отделением и темным отделением, пол в темном отделении был сконструирован для нанесения электрического удара опытному животному. Вначале мышь помещали в освещенное отделение и при входе в темное отделение ей наносили электрический удар силой 0,25 мА в течение 1 с. Через 24 ч после обучения мышь вновь помещали в освещенное отделение и определяли время, которое затрачивалось на проникновение в темное отделение в качестве времени пассивного избегания. Максимальное время устанавливали на 300 с,т.е. в случае, когда мыши требовалось более, чем 300 с для того, чтобы проникнуть в темное отделение,время пассивного избегания определялось как равное 300 с. Ссылочный пример 3. Тест с Y-образным лабиринтом Спонтанное альтернативное поведение мыши исследовали с помощью теста с Y-образным лабиринтом методом, описанным Starter et al., Psychopharmacology, 94, 491-495 (1988), следующим образом.Y-образный лабиринт состоял из трех отсеков в форме Y. Опытную мышь помещали в один из отсеков так, что она находилась лицом к концу отсека, и давали свободно передвигаться в трех отсеках в течение 8 ч. Число альтернатив определяли при подсчете числа случаев, когда мышь последовательно проходила три отсека. Спонтанное альтернативное поведение определяли в виде процента числа альтернатив, основываясь на общем количестве вхождений в отсеки. Пример 1. Получение экстракта растения рода Аngеliсае. 2 л 80% метанола добавляли к 1 кг измельченных корней Angelicae gigas Nakai и смесь нагревали при 40 С в течение 2 ч для получения экстракта. Экстракцию повторяли дважды. Экстракты объединяли и выпаривали метанол и воду при пониженном давлении с использованием обратного холодильника. Затем полученный экстракт тщательно высушивали при пониженном давлении с получением 290 г экстракта Angelicae gigas Nakai. Анализ ВЭЖХ показал, что экстракт содержал декурсинол и феруловую кислоту в количествах 0,5 мас.% и 0,07 мас.%, соответственно (фиг. 1 А и 1 В), анализ ВЭЖХ проводили в следующих условиях: Декурсинол: Колонка: Si60 (7 мкм, 250 мм 4 мм); растворитель: смесь н-гексан:ЕtoAс = 1:1; скорость потока: 1,0 мл/мин; детектор: УФ 340 нм. Феруловая кислота: Колонка: RP-18 (7 мкм, 250 мм 4 мм); растворитель: смесь МеОН:вода = 1:3,5; скорость потока: 1,0 мл/мин; детектор: УФ 258 нм. Вышеуказанную процедуру повторяли для получения экстрактов из Angelica acutiloba Kitagawa иAngelica sinensis Diels и с помощью анализа ВЭЖХ подтверждали, что полученные экстракты также содержали феруловую кислоту и декурсинол. Пример 2. Действие экстракта Angelicae gigas Nakai в отношении профилактики слабоумия Сорок мышей в возрасте 4-5 недель, каждая с массой тела 20-25 г, разделяли на четыре группы с равным количеством животных. Экстракт Angelicae gigas Nakai, приготовленный в примере 1, растворяли в воде до концентрации 0,08% (маc./об.) и 0,1% (маc./об.), соответственно, и мышей двух групп по или полученными растворами вместо воды в течение 4 недель с суточной дозой 8 мл раствора/мышь.-4 005565 Мышам других двух групп давали обычную питьевую воду в течение 4 недель. Затем мышам одной из двух групп, получавших обычную питьевую воду, вводили в желудочек мозга 1,85 мкг -амилоида (42-1)("контрольная группа") и мышам оставшихся трех групп вводили Р-амилоид (1-42) (A1-42), как в ссылочном примере 1. Затем с каждой группой мышей проводили тест пассивного избегания, как в ссылочном примере 2, и определяли средние значения для полученных данных по каждой группе. Как показано на фиг. 2 А, ответное время пассивного избегания было значительно ниже для группы мышей, которым вводили только -амилоид (1-42), по сравнению с контрольной группой. Однако наблюдали значительное улучшение ответного времени пассивного избегания в группах, которым вводили 0,08% (маc./об.) и 0,1% (маc./об.) экстракта Angelicae gigas Nakai, соответственно, по сравнению с группой мышей, которым вводили -амилоид (1-42). Ту же процедуру, как указано выше, повторяли, изменяя период введения 0,1% (маc./об.) экстрактаAngelicae gigas Nakai от 1 до 2 до 4 недель. Результат на фиг. 2 В показывает, что становится очевидным улучшение ответного времени пассивного избегания при введении экстракта Angelicae gigas Nakai в течение 2 недель или более. Пример 3. Действие феруловой кислоты в отношении профилактики слабоумия. Действие феруловой кислоты, компонента экстракта Angelicae gigas Nakai, в отношении профилактики слабоумия исследовали следующим образом. Пятьдесят мышей в возрасте 4-5 недель, каждая с массой тела 20-25 г, разделяли на пять групп с равным количеством животных. Феруловую кислоту растворяли в воде до концентрации 0,002%(маc./об.), 0,004% (маc./об.) и 0,006% (маc./об.), соответственно, и мышей трех групп поили полученными растворами вместо воды в течение 4 недель в суточной дозе 8 мл раствора/мышь. Мышам других двух групп давали обычную питьевую воду в течение 4 недель. После этого мышам одной из двух групп,получавших обычную питьевую воду, вводили в желудочек мозга 1,85 мкг -амилоида (42-1) ("контрольная группа") и мышам оставшихся четырех групп вводили -амилоид (1-42) (A1-42), как в ссылочном примере 1. Затем с каждой группой мышей проводили тест пассивного избегания, как в ссылочном примере 2, и определяли средние значения для полученных данных по каждой группе. Как показано на фиг. 3 А, ответное время пассивного избегания было значительно ниже для группы мышей, которым вводили только -амилоид (1-42), по сравнению с контрольной группой. Однако снижение ответного времени пассивного избегания у групп, которым предварительно вводили феруловую кислоту в течение 4 недель, было зависимым от дозы. Между тем, вышеуказанную процедуру повторяли при изменении периода введения 0,006%(маc./об.) феруловой кислоты в течение 1, 2, 3 и 4 недель. Результат на фиг. 3 В показывает, что ответное время пассивного избегания возрастало с увеличением периода введения. Кроме того, с использованием вышеуказанных мышей проводили тесты с Y-образным лабиринтом,как в ссылочном примере 3. Результат на фиг. 4 А показывает, что по сравнению с группой мышей, которым вводили только -амилоид (1-42), альтернативное поведение (%) в группах мышей, которым вводили феруловую кислоту, было выше и увеличивалось пропорционально периоду введения. Однако, как показано на фиг. 4 В, число вхождений в отсеки, которое представляет оценку спонтанного движения,было примерно одинаковым для всех групп. Этот результат показывает, что феруловая кислота оказывает лечебное действие на память в большей степени, чем на движение. Также проводили тесты пассивного избегания, как показано выше, на мышах, которым вводили 0,006% (маc./об.) феруловой кислоты или изоферуловой кислоты в течение 4 недель. Результат на фиг. 5 показывает, что ответное время пассивного избегания, наблюдаемое для группы мышей, которым вводили изоферуловую кислоту, было близким к таковому для группы с феруловой кислотой, что наглядно доказывает, что изоферуловая кислота является такой же эффективной, как и феруловая кислота, в отношении профилактики слабоумия. Пример 4. Действие декурсинола в отношении профилактики слабоумия. Действие декурсинола, компонента экстракта Angelicae gigas Nakai, в отношении профилактики слабоумия исследовали следующим образом. Сорок мышей в возрасте 4-5 недель, каждая с массой тела 20-25 г, разделяли на четыре группы с равным количеством животных. Декурсинол растворяли в кукурузном масле, смешивали с мышиным кормом и мышей двух групп кормили полученным кормом в течение 4 недель в суточной дозе 7,5 мг декурсинола/кг или 15 мг декурсинола/кг. Мышам других двух групп давали обычный мышиный корм, содержащий равное количество кукурузного масла, как указано выше, в течение 4 недель. После этого мышам одной из двух групп,получавших обычный корм, вводили в желудочек мозга 1,85 мкг -амилоида (42-1) ("контрольная группа") и мышам оставшихся трех групп вводили -амилоид (1-42) (A1-42), как в ссылочном примере 1. Затем с каждой группой мышей проводили тест пассивного избегания и тест с Y-образным лабиринтом, как в ссылочных примерах 2 и 3, соответственно, и определяли средние значения для полученных данных по каждой группе. Как показано на фиг. 6 А, снижение ответного времени пассивного избегания за счет введения амилоида (1-42) предупреждалось в группах, которым предварительно вводили декурсинол.-5 005565 Фиг. 6 В и 6 С показывают, что по сравнению с группой мышей, которым вводили только -амилоид(1-42), альтернативное поведение (%) в группах, которым вводили декурсинол, было выше и увеличивалось в зависимости от дозы. Однако число вхождений в отсеки, которое представляет оценку спонтанного движения, было примерно одинаковым для всех групп. Эти результаты показывают, что декурсинол оказывает лечебное действие на память в большей степени, чем на движение. Для того, чтобы подтвердить синергизм феруловой кислоты и декурсинола, проводили тест пассивного избегания, как в ссылочном примере 2, на мышах, которым вводили 0,002% (мас./об.) феруловой кислоты, 2 мг/кг декурсинола или их смесь, как указано выше. Кроме того, также проводили тест пассивного избегания на мышах, которым вводили 0,003% (мас./об.) феруловой кислоты, 3 мг/кг декурсинола или их смесь. В двух опытах группу мышей, которым вводили 0,006% (мас./об.) феруловой кислоты,использовали в качестве группы сравнения. Результаты на фиг. 7 А и 7 В показывают, что смесь феруловой кислоты и декурсинола, каждый из которых был в небольшом количестве, не оказывающем предупреждающего действия в отношении слабоумия, показала существенный профилактический эффект. Данный результат показывает синергизм действия феруловой кислоты и декурсинола. Пример 5. Исследование защитной активности феруловой кислоты в отношении клеток мозга.(1) Иммуногистохимическое окрашивание ОХ-42 через один день после введения -амилоида Мышей в возрасте 4-5 недель, каждая с массой тела 20-25 г, разделяли на три группы. Феруловую кислоту растворяли в воде до концентрации 0,006% (мас./об.) и мышей первой группы поили полученным раствором вместо воды в течение 4 недель. Мышам других двух групп давали обычную питьевую воду в течение 4 недель. После этого мышам одной из двух групп, получавших обычную питьевую воду,вводили в желудочек мозга 1,85 мкг -амилоида (42-1) ("контрольная группа") и мышам оставшихся двух групп вводили -амилоид (1-42) (A1-42), как в ссылочном примере 1. Через один день после введения -амилоида, мышей анестезировали пентобарбиталом натрия и рассекали брюшную полость. Мышь фиксировали пропусканием 4% параформальдегида через левый желудочек и с помощью скальпеля извлекали мозг. Методом, описанным в Cho et al., J.Comp.Neurol., 369: 264-276 (1996), из извлеченного мозга готовили срезы и проводили иммуногистохимическое окрашивание для того, чтобы окрасить ОХ-2 в грушевидной коре и миндалевидном ядре с использованием анти-ОХ-42 антител в разведении 1:500 (Halan(Sera-Lab Затем срезы исследовали под микроскопом с увеличением 200 и 400, соответственно. Результат представлен на фиг. 8A-8F, где фиг. 8A-8C получены при увеличении 200 и фиг. 8D-8F получены при увеличении 400. По сравнению с контрольной группой (фиг. 8A и 8D) в группе мышей,которым вводили только -амилоид (1-42) (фиг. 8B-8E), наблюдали повышенное содержание ОХ-42, в то время, как уровень ОХ-42 был значительно меньше в группе мышей, которым вводили феруловую кислоту с последующим введением -амилоида (1-42) (фиг. 8C и 8F).(2) Иммуногистохимическое окрашивание ChAT через 5 сут. после введения -амилоида Трем группам мышей вводили феруловую кислоту и/или -амилоид методом (1). Через 5 сут. после введения -амилоида проводили иммуногистохимическое окрашивание методом (1) за исключением того, что использовали антихолинацетилтрансферазные (ChAT) антитела (Chemicon) в разведении 1:750 для окрашивания ChAT, фермента, отвечающего за синтез ацетилхолина, в септальном ядре, где распределены ацетилхолиновые нейроны. Результат представлен на фиг. 9A-9C. По сравнению с контрольной группой (фиг. 9A) в группе мышей, которым вводили только -амилоид (1-42), наблюдали снижение ChAT (фиг. 9B), в то время как снижение подавлялось в группе мышей, которым вводили феруловую кислоту с последующим введением -амилоида (1-42) (фиг. 9C). Пример 6. Ингибирующее действие феруловой кислоты в отношении повреждения нейронов. Методом Wie et al. (Neurosci.Lett., 225: 93-96 (1997 из клеток коры мозга мыши культивировали глию и культивировали нейроны большого мозга с использованием глии в качестве субстрата. Культуру мышиных нейронов мозга разделяли на три группы. Нейроны первой группы были без обработки (контрольная группа). Нейроны других двух групп обрабатывали 25 мкМ -амилоида (1-42) и одну из этих групп обрабатывали 100 мкМ феруловой кислоты за 30 мин до обработки -амилоидом (142). Степень повреждения нейронов оценивали при определении концентрации лактатдегидрогеназы(ЛДГ), которая высвобождалась из поврежденных или разорванных нейронов в культуральную среду методом Wie et al. Пробы культуральной среды отбирали через 24 и 48 ч после обработки -амилоидом(1-42), соответственно, и концентрацию ЛДГ определяли на ридере для микропланшетов. Как показано на фиг. 10, по сравнению с контрольной группой концентрация ЛДГ была значительно выше в группе, обработанной -амилоидом (1-42), в то время как значительно более низкую концентрацию ЛДГ наблюдали в группе, обработанной феруловой кислотой с последующей обработкой -амилоидом (1-42).-6 005565 Данный результат показывает, что феруловая кислота подавляет повреждение нейронов, вызванное амилоидом (1-42). Пример 7. Токсичность экстракта Angelicae gigas Nakai. Сорок (20 самцов и 20 самок) крыс Спрегью-Даули в возрасте 4 недель содержали в течение недели при температуре 223 С, относительной влажности 5010% и интенсивности освещения 150-300 люкс. Крыс разделяли на четыре группы, каждая состоящая из 5 самцов и 5 самок. Экстракт Angelicae gigas Nakai, приготовленный в примере 1, растворяли в кукурузном масле и вводили перорально крысам четырех групп в дозах 300; 1000; 3000 и 10000 мг/кг, соответственно. Экстракт вводили один раз и в течение 7 сут. за крысами вели наблюдение в отношении проявления признаков побочного действия или смерти. Кроме того, на 7-й день крыс убивали и визуально исследовали внутренние органы. Каждый день регистрировали изменения веса тела у крыс с целью изучения влияния экстракта Angelicae gigas Nakai. Результаты показали, что LD50 экстракта Angelicae gigas Nakai составляет 3722 мг/кг для самцов и 2804 мг/кг для самок. Вскрытие показало, что у крыс отсутствовали патологические изменения при введении в дозе 1000 мг/кг или ниже. Кроме того, в течение 7 сут. в случае, когда крысам вводили экстракт в дозе 1000 мг/кг или ниже, не наблюдали потери веса тела. Пример композиции 100 мг экстракта Angelicae gigas Nakai, приготовленного в примере 1, 45 мг молочного кальция, 122 мг микрокристаллической целлюлозы, 15 мг изофлавона, 2,5 мг экстракта гинкго, 2 мг экстракта Zizyphus jujuba,0,25 мг витамина B1, 0,3 мг витамина В 2, 0,0025 мг витамина D3 и 2,5 мг стеарата магния тщательно смешивали и помещали в твердую желатиновую капсулу с получением композиции твердой желатиновой капсулы. Несмотря на то, что изобретение описано с помощью вышеуказанных конкретных воплощений,очевидно, что в отношении изобретения специалистами в данной области могут быть сделаны различные модификации и изменения, которые также находятся в объеме изобретения, определенного прилагаемой формулой изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты формулы I или его фармацевтически приемлемую соль 2. Композиция по п.1, в которой производное гидроксикоричной кислоты формулы I представляет феруловую кислоту или изоферуловую кислоту. 3. Композиция по п.1, которая дополнительно включает декурсинол. 4. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая декурсинол или его фармацевтически приемлемую соль. 5. Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая экстракт растения рода Angelicae, содержащий производное гидроксикоричной кислоты формулы I или декурсинол. 6. Композиция по п.5, в которой экстракт получают экстракцией корня растения рода Angelicae низшим спиртом. 7. Композиция по п.5 или 6, в которой растение рода Angelicae выбрано из группы, состоящей изAngelicae gigas Nakai, Angelica acutiloba Kitagawa и Angelica sinensis Diels. 8. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты формулы I или его фармацевтически приемлемую соль 9. Пищевая композиция по п.8, в которой производное гидроксикоричной кислоты формулы I представляет феруловую кислоту или изоферуловую кислоту. 10. Пищевая композиция по п.8, которая дополнительно включает декурсинол. 11. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая декурсинол или его фармацевтически приемлемую соль. 12. Пищевая композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая экстракт растения рода Angelicae, содержащий производное гидроксикоричной кислоты формулы I или декурсинол. 13. Композиция по п.12, в которой экстракт получают экстракцией корня растения рода Angelicae низшим спиртом. 14. Композиция по п.12 или 13, в которой растение рода Angelicae выбрано из группы, состоящей из Angelicae gigas Nakai, Angelica acutiloba Kitagawa и Angelica sinensis Diels.

МПК / Метки

МПК: A61K 31/085, A61P 25/28

Метки: лечения, angelicae, слабоумия, рода, композиция, включающая, гидроксикоричной, растения, содержащий, экстракт, профилактики, кислоты, производное

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/14-5565-kompoziciya-dlya-profilaktiki-ili-lecheniya-slaboumiya-vklyuchayushhaya-proizvodnoe-gidroksikorichnojj-kisloty-ili-ekstrakt-rasteniya-roda-angelicae-soderzhashhijj-ego.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Композиция для профилактики или лечения слабоумия, включающая производное гидроксикоричной кислоты или экстракт растения рода angelicae, содержащий его</a>

Похожие патенты