Пищевой продукт, содержащий флавоноиды черного чая, и его применение

Есть еще 3 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Пищевой продукт, имеющий массу менее 500 г и содержащий флавоноиды черного чая в массе, превышающей 0,2 г, где флавоноиды черного чая включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая.

2. Пищевой продукт по п.1, где масса флавоноидов черного чая превышает 0,4 г.

3. Пищевой продукт по п.1 или 2, где масса продукта составляет менее 450 г.

4. Пищевой продукт по любому из пп.1-3, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая.

5. Пищевой продукт по п.4, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 10% от массы флавоноидов чая, предпочтительно менее 8%, более предпочтительно от 0,1 до 6%.

6. Пищевой продукт по любому из пп.1-5, где концентрация флавоноидов черного чая составляет от 0,15 до 10% от массы продукта, предпочтительно от 0,2 до 4%.

7. Продукт листового чая, имеющий массу от 0,5 до 5 г, содержащий флавоноиды черного чая в массе, превышающей 0,2 г, и где флавоноиды черного чая включают в себя теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая.

8. Продукт листового чая по п.7, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая.

9. Продукт листового чая по п.7 или 8, где продукт помещен в упаковки, приспособленные для получения настоя.

10. Применение пищевого продукта по п.1 в качестве пребиотика, причем пищевой продукт содержит флавоноиды черного чая, где флавоноиды включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая.

11. Применение по п.10, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая.

12. Применение по п.10 или 11, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 10% от массы флавоноидов чая, предпочтительно менее 8%, более предпочтительно от 0,01 до 6%.

Текст

Смотреть все

ПИЩЕВОЙ ПРОДУКТ, СОДЕРЖАЩИЙ ФЛАВОНОИДЫ ЧЕРНОГО ЧАЯ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей флавоноиды черного чая, в качестве пребиотика и/или для лечения или профилактики патологического состояния, связанного с неудовлетворительным состоянием кишечника или низким иммунитетом. Флавоноиды включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. Кроме того, представлен пищевой продукт, содержащий флавоноиды черного чая. Банерджи Гаутам (IN), Бингэм Максвелл Оливер (NL), Мхасаваде Дипак Рамачандра (IN) Нилова М.И. (RU) Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к пребиотической композиции. Конкретно, настоящее изобретение относится к пребиотической композиции, содержащей флавоноиды черного чая. Предпосылки создания изобретения Состояние желудочно-кишечного тракта является главным фактором, вызывающим озабоченность у жителей развитых и развивающихся стран с точки зрения положительных субъективных ощущений и устойчивости к острым и хроническим заболеваниям, таким как инфекционная диарея и воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, и их профилактики. Имеется спрос на ежедневно потребляемые продукты, которые могли бы быть благоприятными в этом отношении. Современные способы решения этих проблем включают применение пробиотических продуктов,когда для улучшения состояния пищеварительного тракта и/или усиления естественных защитных механизмов организма принимают жидкости (как правило, напитки на молочной основе), содержащие один или несколько штаммов доброкачественных бактерий. Этот подход является ограниченным, поскольку он требует глубокого охлаждения продуктов (для поддержания жизнеспособности полезных бактерий), и остается неуверенность в эффективности таких продуктов, поскольку бактерии должны преодолевать неблагоприятную кислую среду желудка и достигать толстого кишечника в количестве, достаточном для создания желаемых эффектов. Кроме того, следствием этих факторов обычно является высокая стоимость таких продуктов для потребителей, а для их эффективной доставки требуется создание сложной логистической цепи. Альтернативной стратегией является применение пребиотиков, когда с пищей потребляют такие компоненты, которые способствуют улучшению здоровья благодаря их избирательному метаболизму в кишечном тракте. Как правило, при таком подходе объектами воздействия являются считающиеся безопасными бифидобактерии и молочно-кислые бактерии (т.е. обычные пробиотические виды); их в большом числе находят у грудных младенцев; они изменяют внутреннюю среду кишечника, продуцируя короткие жирные кислоты, которые препятствуют колонизации патогенов; эти бактерии производят антимикробные компоненты, действующие на патогены, они способны улучшать иммунный статус хозяина и помогают уменьшить воспаление толстого кишечника, обусловленное неудовлетворительным современным характером питания. К доступным в настоящее время пребиотиками относятся фруктаны, такие как инулин и фруктоолигосахариды, которые, как было показано, значительно увеличивают численность бифидобактерий у человека. Вопрос о жизнеспособности, весьма болезненный для пробиотиков, не имеет значения для пребиотиков, которым можно придавать форму разнообразных продуктов без потери эффективности. Однако в некоторых случаях современные пребиотики затруднительно вводить в состав пищевых продуктов вследствие их влияния на вкус и структуру таких продуктов (например, фруктаны могут быть слегка сладкими и могут менять другие вкусовые ощущения). Кроме того, для составления продуктов часто требуется добавление пребиотика в количестве, превышающем его эффективную дозу, вследствие возможного разложения фруктанов при пастеризации, выпечке, стерилизации и других аналогичных процессах. Вследствие этого продукты питания, содержащие пребиотики, остаются дорогостоящими, и высокая цена ограничивает круг их потребителей лишь небольшим числом покупателей. Таким образом, существует потребительский спрос на доступный способ решения этой проблемы,который был бы полезным для улучшения состояния системы пищеварения, повышал устойчивость к инфекционным заболеваниям и/или способствовал предупреждению хронических желудочно-кишечных заболеваний. В той или иной форме чай потребляют уже более 4000 лет, он и сейчас остается популярным в развитых и развивающихся странах. Его популярность обусловлена рядом причин: его считают полезным для здоровья, он может быть безопасной заменой необработанной воде, с ним связывают приятные ощущения релаксации, бодрости сознания, в широких кругах хорошо принимают и его вкус. Невысокая цена чая также означает, что его могут потреблять во всех социально-экономических группах. Некоторые документы свидетельствуют, что потребление черного чая и/или его компонентов может положительно влиять на здоровье потребителя. Например, в патентах US 2008/119545 А и US 2008/075795 А (оба выданы на имя С. HENSLEYS. PYO) раскрыты способы и композиции для профилактики и лечения птичьего гриппа с применением эффективного количества ингредиента, композиция которого выбрана из группы, состоящей из теафлавина, теафлавин-3,3'-дигаллата, теафлавин-3 моногаллата, теафлавин-3-галлата, теафлавин-3'-галлата, теарубигина, галловой кислоты, дубильной кислоты, (-)-эпигаллокатехингаллата (EGCG), (-)-эпигаллокатехина (EGC), (+)-эпикатехина (ЕС), (-)галлокатехингаллата (GCG) и катехина. Высказывалось также предположение о том, что черный чай и/или его компоненты могут положительно влиять на функции и/или состояние кишечника. Например, K. Jafari et al. (Medical Hypotheses,2006, 67(2), p. 419) раскрывают, что экстракт черного чая и его главный полифенольный пигмент могут облегчать желудочно-кишечное расстройство при синдроме раздраженного кишечника; a L. Chaudhuri etal. (Life Sciences, 2000, 66(9), p. 847-854) раскрывают, что горячий водный экстракт черного чая значительно ускоряет транзит пищи по желудочно-кишечному тракту (GIT) in vivo у мышей. Известны также композиции, содержащие компоненты черного чая в комбинации с традиционными пребиотиками. Например, в WO 2007/056432 A (PERQUE INC) раскрыты композиции, содержащие один или более пребиотиков (например, одно или более из пищевых волокон) в комбинации с соединениями селена, флавоноидами и/или флавонолами и фосфатидами; а в US 2008/085349 A (Z.Y. CHEN) раскрыт некий напиток, содержащий компоненты чая и неперевариваемый, неопасный для здоровья заменитель сахара (VitaSugar IMO). Также признают, что черный чай и/или его компоненты могут положительно влиять на микрофлору кишечника. В US 5071653 (ITOEN LTD) раскрыты, по существу, лишенные запаха экстракты из листьев С.sinensis, которые способствуют росту бифидобактерий. Композиции предоставляют, экстрагируя твердые вещества, растворимые в воде или этаноле, из листьев С. sinensis полярным органическим растворителем, несмешивающимся с водой. В патенте US 5071653 нет данных о том, что экстракты, раскрытые в нем, обладают истинным пребиотическим эффектом (т.е. эффектом, при котором стимуляция роста бифидобактерий выражена в большей степени, чем стимуляция роста патогенных бактерий, таких как Clostridia). Кроме того, экстракты, раскрытые в этом патенте, существенно лишены запаха, что предполагает отсутствие флавоноидов (таких как теарубигин), которые придают черному чаю его характерный вкус. В WO 2004/056205 A (UNILEVER) раскрыт готовый продукт питания, содержащий листья черного чая, экстракт черного чая или их смесь, предназначенные для поддержания или улучшения баланса микрофлоры и/или для лечения или профилактики диареи у субъекта, потребляющего данную композицию,где листья черного чая или экстракт черного чая присутствуют в несвязанном состоянии. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что флавоноидные компоненты черного чая обладают значительным пребиотическим эффектом. Кроме того, авторы настоящего изобретения установили,что флавоноиды черного чая, имеющие некоторый конкретный состав, являются особенно эффективными пребиотиками, и поэтому можно ожидать, что они особенно эффективны для оказания благоприятного влияния на здоровье, обусловленного приемом пребиотиков, такого как лечение или профилактика патологического состояния желудочно-кишечного тракта и/или лечение или профилактика патологического состояния, связанного с субоптимальным иммунитетом. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что эти флавоноиды черного чая обладают улучшенной иммуномодуляторной способностью по сравнению с цельными экстрактами чая. Тесты и определения Пребиотик. Термин "пребиотик", используемый в настоящем изобретении, относится к веществу, потребляемому индивидом перорально для воздействия на этого индивида посредством избирательного стимулирования роста и/или активности одного или более из ограниченного числа видов бактерий в толстой кишке индивида. Предпочтительными пребиотиками являются пребиотики, селективно стимулирующие рост и/или активность бифидобактерий и/или молочно-кислых бактерий. Еще более предпочтительны пребиотики, стимулирующие рост и/или активность бифидобактерий и/или молочно-кислых бактерий в большей степени, чем рост и/или активность патогенных бактерий, таких как Clostridia. Черный чай. Термин "чай", используемый в настоящем изобретении, относится к материалу из листьев и/или стебля Camellia sinensis var. sinensis и/или Camellia sinensis var. assamica. Термин "черный чай" относится к чаю, в котором листья и/или стебель были подвергнуты стадии так называемой "ферментации", при которой они окисляются определенными эндогенными ферментами. Это окисление может также сопровождаться действием экзогенных ферментов, таких как оксидазы, лакказы и пероксидазы. Флавоноиды, теарубигин и катехины. Определения и аналитические методики определения флавоноидов и теарубигина можно найти в публикации Christiane Lakenbrink, Svenja Lapczynski, Beate Maiwald, and Ulrich H. Engelhardt. J. Agric.Food Chem., 2000, 48(7), 2848-2852. В краткой форме можно указать, что общие флавоноиды и теарубигин в композиции можно рассчитывать по следующим соотношениям (1) и (2): где ТР представляет собой процент общих фенольных соединений в массе композиции;GA представляет собой процент галловой кислоты в массе композиции;TG представляет собой процент теогаллина в массе композиции;CQA представляет собой процент хлорогеновых кислот в массе композиции; С представляет собой процент катехинов в массе композиции;TF представляет собой процент теафлавинов в массе композиции;FOG представляет собой процент гликозидов флавонолов (выраженных в виде агликонов) в массе композиции;FAG представляет собой процент гликозидов флавонов (выраженных в виде агликонов) в массе композиции. Содержащий. Термин "содержащий" означает не ограничение до любых последовательно установленных элементов, а охват конкретно не указанных элементов с большим или меньшим функциональным значением. Другими словами, перечисленные стадии, элементы или варианты не являются исчерпывающими. Во всех случаях употребления слов "включающий" или "имеющий" эти термины эквивалентны термину"содержащий", как определено выше. Более того, термин "содержит" охватывает смысл терминов "состоящий по существу из" и "состоящий из". Сущность изобретения В первом аспекте настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей флавоноиды черного чая в качестве пребиотика, где указанные флавоноиды включают в себя теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что композиции, в которых количество теарубигина в флавоноидах черного чая составляет по меньшей мере 82% от массы флавоноидов, являются особенно эффективными в качестве пребиотиков. Поэтому можно указать, что настоящее изобретение относится также и к способу создания пребиотического эффекта у индивида, причем данный способ включает введение индивиду композиции, содержащей эффективное количество флавоноидов черного чая, в которой флавоноиды включают в себя теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к применению флавоноидов черного чая для борьбы с заболеваниями, обусловленными неудовлетворительным состоянием иммунной системы и/или неудовлетворительным состоянием кишечника. Таким образом, настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащий флавоноиды черного чая, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, связанного с субоптимальным состоянием иммунитета,и/или заболевания желудочно-кишечного тракта, где флавоноиды включают теарубигин в количестве,составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к съедобному продукту, который приспособлен для потребления согласно способам и областям применения настоящего изобретения. Таким образом, настоящее изобретение относится к съедобному продукту, имеющему массу менее 500 г и содержащему флавоноиды черного чая в массе более 0,2 г, где флавоноиды включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. Подробное описание Пребиотические и иммуномодуляторные применения и способы. В одном аспекте настоящего изобретения композицию, содержащую флавоноиды черного чая, вводят индивиду для создания пребиотического эффекта у этого индивида. Пребиотический эффект, создаваемый в результате этого, т.е. селективная стимуляция роста и/или активности одного или более из ограниченного числа видов бактерий, может благоприятно влиять на здоровье данного индивида одним или более способами. Например, введение композиции можно использовать для лечения или профилактики заболевания,связанного с субоптимальным состоянием иммунитета. Заболевание, связанное с субоптимальным состоянием иммунитета, предпочтительно выбрано из простуды, гриппа, хронического воспаления, аллергии или их комбинации. В дополнение к этому или в качестве альтернативы, введение композиции может оказывать терапевтическое или профилактическое действие в отношении желудочно-кишечного заболевания. Предпочтительно желудочно-кишечное заболевание выбрано из воспалительного заболевания кишечника, синдрома раздраженной толстой кишки, инфекционной диареи, энтеропатии, обусловленной неблагоприятным состоянием окружающей среды, или их комбинации. В дополнение к этому или в качестве альтернативы, композицию можно вводить для устранения или облегчения болей в животе. Композицию вводят перорально. Композиция содержит эффективное количество флавоноидов. Композиция содержит эффективное количество флавоноидов черного чая. Конкретно, количество флавоноидов черного чая, вводимых индивиду на ежедневной основе, должно быть достаточным для создания заметного селективного (пребиотического) эффекта в микрофлоре кишечника указанного индивида. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что введение 2,4 г твердых веществ черного чая может создавать пребиотический эффект, подобный эффекту от введения 5 г инулина цикория. Твердые вещества черного чая содержат примерно 20-40% флавоноидов по массе. Поэтому композицию следует вводить индивиду в количестве, предоставляющем предпочтительно по меньшей мере 0,2 г флавоноидов черного чая в день, более предпочтительно по меньшей мере 0,4 г флавоноидов черного чая в день и наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,6 г флавоноидов черного чая в день. Кроме того, эти результаты свидетельствуют о том, что для достижения пребиотического эффекта не требуется введение больших количеств флавоноидов черного чая. Поэтому композицию следует вводить индивиду в количестве, предоставляющем предпочтительно не более 5 г флавоноидов черного чая в день, более предпочтительно не более 3 г флавоноидов черного чая в день и наиболее предпочтительно не более 1,5 г флавоноидов черного чая в день. Флавоноиды черного чая. Флавоноиды черного чая для использования в композициях, применениях, продуктах питания, продуктах, полученных из чайного листа, и способах согласно настоящему изобретению являются обогащенными теарубигином. Конкретно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что особенно выраженный пребиотический или иммуномодуляторный эффект достижим тогда, когда флавоноиды черного чая содержат по меньшей мере 82% теарубигина по массе. Поэтому флавоноиды черного чая содержат теарубигин в количестве по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая, предпочтительно в количестве по меньшей мере 84% от массы флавоноидов чая. Обычно флавоноиды черного чая содержат компоненты, отличные от теарубигина, такие как теафлавины и/или катехины. Поэтому количество теарубигина во флавоноидах черного чая может быть менее чем 99,99% от массы флавоноидов черного чая или даже менее чем 98% от массы флавоноидов черного чая. Особенно предпочтительно, когда количество катехинов во флавоноидах черного чая является ограниченным, поскольку катехины, по-видимому, уменьшают пребиотический эффект теарубигинов. Поэтому предпочтительна ситуация, когда флавоноиды содержат катехины в количестве, меньшем 12% от массы флавоноидов, более предпочтительно в количестве, меньшем 10% от массы флавоноидов, более предпочтительно еще меньшем чем 8% и наиболее предпочтительно от 0,01 до 6%. В дополнение к этому или в качестве альтернативы, флавоноиды черного чая могут содержать менее 3% теафлавинов от массы флавоноидов чая, поскольку авторы настоящего изобретения обнаружили, что теафлавины обладают лишь небольшим пребиотическим эффектом или не имеют его совсем. Более предпочтительна ситуация, когда флавоноиды черного чая содержат менее 1,5% теафлавинов от массы флавоноидов черного чая, более предпочтительно менее 0,5% и наиболее предпочтительно от 0,0001 до 0,1%. Пищевой продукт. В предпочтительном аспекте настоящего изобретения композицию вводят индивиду в форме пищевого продукта. Пищевой продукт может быть продуктом питания. Например, продукт может представлять собой маргарин, бутербродную пасту ("спред") с низким содержание жира, кондитерский продукт (такой как шоколад), мороженое, йогурт, заправку для салата, майонез, соус, хлебобулочное изделие, кулинарный жир, суп или сыр. Однако особо предпочтительным является вариант, когда пищевой продукт представляет собой некоторый напиток, и наиболее предпочтительным является напиток на основе чая. Пищевой продукт содержит достаточно флавоноидов черного чая для того, чтобы пребиотической эффективной дозы флавоноидов можно было достигнуть, не потребляя большое количество продуктов в один день. Поэтому продукт содержит флавоноиды черного чая в массе, большей 0,2 г, предпочтительно большей 0,4 г и наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,6 г. Однако продукт не должен содержать большие количества флавоноидов черного чая. В частности, предпочтительная масса флавоноидов черного чая в продукте составляет не более 10 г, более предпочтительная не более 3 г, наиболее предпочтительная не более 1,5 г. Масса продукта не должна быть такой большой, чтобы количество, требуемое для потребления на ежедневной основе, не было избыточным. Поэтому пищевой продукт имеет массу, меньшую 500 г, предпочтительно меньшую 450 г, более предпочтительно от 50 до 350 г. Поскольку флавоноиды черного чая могут влиять на цвет и/или вкус пищевого продукта, предпочтительно применять флавоноиды в ограниченном диапазоне концентраций. В частности, предпочтительная концентрация флавоноидов черного чая составляет от 0,15 до 10% по массе продукта, более предпочтительная от 0,2 до 4%. Пищевой продукт можно получать любым подходящим образом; однако в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения пищевой продукт получают с использованием способа,включающего:(b) комбинирование съедобной основы с веществом, содержащим флавоноиды черного чая, где съедобную основу и вещество комбинируют в массовом отношении, составляющем по меньшей мере две части съедобной основы на одну часть флавоноидов черного чая. Этот способ дает возможность раздельно регулировать свойства съедобной основы и флавоноидов черного чая перед комбинированием. Кроме того, более высокое содержание съедобной основы по сравнению с содержанием флавоноидов черного чая дает возможность свести к минимуму влияние флавоноидов черного чая на вкус и/или цвет съедобной основы. Указанное вещество предпочтительно представляет собой водорастворимый экстракт черного чая или его фракцию. Указанные экстракт или фракция могут быть в форме твердого вещества (например,порошка) или жидкости. Предпочтительно вещество содержит по меньшей мере 20% теарубигина от сухой массы вещества, более предпочтительно от 25 до 100%. Съедобная основа может представлять собой любой продукт питания или ингредиент пищи или их комбинацию. В частности, основа может быть употребимой в пищу жидкостью, твердым веществом или гелем. Основа может представлять собой водную композицию, т.е. в массе основы может содержаться более 50% воды. В качестве альтернативы, основа может быть существенно неводной. Основа, необязательно, может быть в форме эмульсии типа "масло в воде" или "вода в масле". Предпочтительно основу и вещество комбинируют на стадии (b) в массовом отношении, составляющем по меньшей мере 10 частей съедобной основы на 1 часть флавоноидов черного чая, более предпочтительно в диапазоне от 20:1 до 500:1. Листовой чай. Другой аспект настоящего изобретения относится к листовому чаю, подходящему для приготовления напитков, имеющих эффективное количество флавоноидов черного чая, как описано в настоящем документе. В частности, изобретение относится к продукту, полученному из листового чая, содержащему флавоноиды черного чая, масса которых составляет более 0,2 г, где флавоноиды черного чая содержат теарубигин в количестве, превосходящем 82% от массы флавоноидов чая. Продукт, полученный из листового чая, содержит достаточно флавоноидов черного чая для обеспечения того, чтобы эффективной пребиотической дозы флавоноидов можно было достигать без необходимости в большом числе приготовленных порций напитков в один день. Поэтому продукт, полученный из листового чая, содержит флавоноиды черного чая, масса которых составляет более 0,2 г, предпочтительно более 0,4 г и наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,6 г. Однако продукт, полученный из листового чая, не должен содержать большие количества флавоноидов черного чая. В частности, предпочтительно в продукте, полученном из листового чая, масса флавоноидов черного чая составляет не более 5 г, более предпочтительно не более 1,5 г и наиболее предпочтительно не более 0,8 г. Предпочтительно масса продукта, полученного из листового чая, достаточна для приготовления одной порции напитка. Например, количество листового чая может составлять от 0,5 до 5 г, более предпочтительно от 1 до 4 г и наиболее предпочтительно от 1,5 до 3,5 г. Особенно предпочтительно помещать необходимое количество чайного листа в упаковку, применимую для приготовления настоя, такую как чайный пакетик. Примеры Настоящее изобретение будет далее проиллюстрировано со ссылкой на нижеследующие неограничивающие примеры. Пример 1. Этот пример демонстрирует пребиотический эффект экстракта черного чая в сравнении с экстрактом зеленого чая и нефлавоноидными компонентами чая (чайным экстрактом, свободным от полифенолов). Материалы. Экстракт черного чая: высушенные в пульверизованном состоянии твердые вещества из водного экстракта коммерческого черного листового чая (Lipton Yellow Label от Unilever UK Ltd). Экстракт зеленого чая: коммерческий порошок зеленого чая (Ceytea от Premium Exports CeylonLtd). Чайный экстракт, свободный от полифенолов: порошок зеленого чая Ceytea (14 г) растворяли в 500 мл свежекипяченой деионизированной воды, используя гомогенизатор Ultra Turrax. Раствор, полученный в результате этого, выливали в пластиковый сосуд емкостью 5 л, содержавший 3,5 л деионизированной воды, и перемешивали опущенной сверху лопастной мешалкой. К раствору добавляли 54 г порошка поливинилполипирролидона (Polyclar 10) и смесь интенсивно перемешивали в течение 10 мин. Суспензию, полученную в результате этого, центрифугировали при 8000 об/мин в течение 30 мин в четырех равных порциях, используя ротор Beckman JLA 9100. Супернатанты объединяли и анализировали на присутствие остаточных полифенолов с реагентом Фолина. Поскольку было обнаружено некоторое количество остаточных полифенолов, раствор опять обрабатывали порошком Polyclar 10 (54 г) и центрифугировали. Супернатанты опять объединяли и фильтровали под вакуумом через фильтр Whatman 541. Проанализировали раствор, полученный в результате этого, и обнаружили, что он содержал 60 мг/л полифенолов при содержании твердых веществ, равном 0,17%. Раствор выпаривали в роторном испарителе и затем высушивали из замороженного состояния. Для получения достаточного количества твердого вещества весь процесс повторяли три раза. Переваривание чайных экстрактов. Экстракт черного чая, экстракт зеленого чая и чайный экстракт, свободный от полифенолов, переваривали, как описано в публикации Miller et al. (American Journal of Clinical Nutrition, 1981, 34, p. 22482256). Переваривание проводили анаэробно (10% Н 2, 10% СО 2, 80% N2) для минимизирования окисления полифенолов. После переваривания образцы высушивали из замороженного состояния. Модель кишечника. Эксперименты проводили в трехстадийной модели кишечника in vitro по методике, описанной в публикации Macfarlane et al. (Microb. Ecol., 1998, 35(2), p. 180-187), оценивая изменение состояния микрофлоры по методикам, описанным в публикациях Tzounis et al. (Br. J. Nutr., 2007, doi: 10,1017/S0007114507853384, p. 1-11) или Matsuki et al. (Appl. Environ. Microbiol., 2004, 70(12), p. 7220-7228). Количество переваренного чайного экстракта, добавленного в каждую модель кишечника, было эквивалентно количеству, получаемому в результате потребления 6 чашек чая в день (предполагая наличие 0,4 г непереваренных твердых веществ чая в каждой чашке). Эти количества даны в табл. 1. Таблица 1 Рассчитано исходя из предположения, что 1/3 общего количества твердых веществ чая потеряна при удалении полифенолов. В качестве положительного контроля в исследование также включали инулин, добавляемый в дозе 5 г в день. Ферментацию сначала проводили в условиях стационарного состояния (SS1) без добавления испытуемого субстрата. В этот момент проводили мониторинг бактериальных популяций. После этого ежедневно добавляли испытуемый субстрат и ферментирование продолжали до следующего стационарного состояния (SS2), когда проводили такие же анализы. Все численные значения представляют собой десятичные логарифмы числа клеток в миллилитре культуральной жидкости. Результаты. Табл. 2 представляет детальную картину бактериальных популяций в сосудах при SS1 и SS2. Таблица 2 Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что единственным чайным экстрактом, увеличивавшим популяцию бифидобактерий в большей степени, чем популяции других бактерий (ср. значенияSS1 и SS2 для одного и того же сосуда), был экстракт черного чая. Этого пребиотического эффекта достигали, добавляя 1,33 г переваренных твердых веществ чая в день (эквивалентно потреблению 6 чашек в день), тогда как с инулином цикория такого же эффекта достигали лишь при 5 г/день. При добавлении к модели чайного экстракта, свободного от полифенолов, эффекта не достигали. Фактически, данные,представленные в табл. 2, иллюстрируют, что нефенольные компоненты чая в действительности уменьшают популяцию бифидобактерий в кишечнике. Это указывает на то, что флавоноиды чая и, в частности,флавоноиды черного чая, действуют как пребиотики. Пример 2. Этот пример демонстрирует пребиотический эффект различных экстрактов черного чая и компонентов черного чая. Получение ВТЕ и фракции F. 900 кг листьев черного чая Lipton Yellow Label подвергали противоточной экстракции при соотношении масс листа и воды, составлявшем 1:20, и при температуре воды, равной 95 С. Жидкость, полученную в результате этого, центрифугировали для удаления суспендированных твердых веществ, фильтровали через керамическую мембрану и концентрировали, применяя комбинацию ультрафильтрации и обратноосмотической конденсации. Концентрированный экстракт подвергали ультравысокотемпературной стерилизации и пульверизационной сушке, получая 180 кг порошка экстракта черного чая (ВТЕ). 150 г ВТЕ смешивали и растворяли в 2 л 70%-ного водного ацетона. В результате этого после выпаривания ацетона получали 112 г материала, растворимого в 70%-ном водном ацетоне. 100 г этого материала растворяли в 2 л деионизированной воды и подвергали экстракции метилизобутилкетоном (MiBK)(41 л). В результате этого получали материал, растворимый в MiBK, и водный слой. Этот водный слой дополнительно подвергали экстракции этилацетатом (41 л), в результате чего получали материал, растворимый в этилацетате, и еще один водный слой. Этот последний водный слой затем экстрагировали нбутанолом (20,5 л). Отделяли н-бутанольный слой и после выпаривания н-бутанола получали 10,5 г материала, растворимого в н-бутаноле (фракция F). Для устранения или минимизирования окислительного повреждения фенольного материала все процедуры экстракции и выпаривания растворителей проводили в вакууме. Получение фракций SI, SII и ТВ. Порошок быстрорастворимого черного чая Kenyan получали от DAMIN Foodstuff (Zhangzhou) CoLtd; этанол, этилацетат, бутанол, NaHCO3 и полиамид получали от Sinopharm Chemical Reagent Co,Shanghai, Ltd; XAD1600 (макропористую смолу) получали от Rohm and Haas. Порошок черного чая (216 г) растворяли в 2500 мл деионизированной воды и нагревали при 80 С в течение 30 мин. Раствор охлаждали на ледяной бане в течение 10 мин и фильтровали через хлопчатобумажную ткань, получая прозрачный раствор. Для удаления кофеина и других возможных загрязнений раствор загружали на предварительно подготовленную полиамидную колонку (объем 4 л, диаметр 20 см,длина 130 см) и элюировали деионизированной водой (8 л, скорость потока - 4 л/ч) для удаления кофеина, после чего элюировали 95%-ным этанолом для удаления другого материала, остающегося на колонке. После выпаривания этанола получали 70 г порошкообразного продукта. Чтобы разделить этот продукт,60 г продукта растворяли в 600 мл деионизированной воды при 80 С в течение 30 мин и экстрагировали этилацетатом (2600 мл), получая две фракции: фракцию ЕА и водную фракцию (W1). Для получения фракции SI фракцию ЕА (1200 мл) экстрагировали 2,5%-ным водным NaHCO3(21200 мл), получая две дополнительные фракции: фракцию ЕА и фракцию 2,5%-ного NaHCO3. Фракцию 2,5%-ного NaHCO3 доводили до рН 7, используя уксусную кислоту, и затем загружали на предварительно подготовленную колонку с XAD1600 (1 л, диаметр 20 см, длина 35 см). Первую элюцию проводили с деионизованной водой для удаления солей, а вторую элюцию проводили с 95%-ным этанолом,получая раствор SI. После выпаривания этанола получали 13 г фракции, обозначенной SI. Для получения фракций SII и ТВ водную фракцию W1 экстрагировали бутанолом (2600 мл), получая две следующие фракции: бутанольную фракцию (которая после выпаривания бутанола давала 22,5 г фракции, обозначенной SII) и водную фракцию (которая после выпаривания давала фракцию, обозначенную ТВ, 9,2 г). Анализ состава. Общие фенольные соединения (ТР) определяли по методике, данной в международном стандартеpolyphenols in tea Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent"). Катехины (С), теогаллин (TG), галловую кислоту (GA) и алкалоиды определяли по методике, данной в международном стандарте ISO 14502-2:2005 ("Determination of substances characteristic of green andTF определяли посредством ВЭЖХ (изократически с 23% ацетонитрила в 2%-ной водной уксусной кислоте) с детектированием при 375 нм и калибровкой по аутентичным стандартам с известной чистотой;FOG определяли посредством ВЭЖХ после предварительной очистки с использованием колоночной хроматографии при калибровке по каждому из членов группы, состоящей из мирицетина (мирицитрина), кверцетина (рутина) и гликозида кемпферола;CQA определяли посредством ВЭЖХ после предварительной очистки с использованием SPE на RP18 и при калибровке по стандартам 5-CQA и п-кумаровой кислоты. Количество гликозидов флавона С (FAG) не измеряли, поскольку предполагали, что его количество было очень малым по сравнению с другими флавоноидами. Периодические ферментации культур. Для исследования пребиотического потенциала фракций чая применяли несколько серий анаэробных, перемешиваемых при контролируемом рН периодических ферментации культур in vitro, засеянных фекальной микрофлорой. Применявшуюся общую методику можно найти в публикации Tzounis et al.(Br. J. Nutr., 2007, doi: 10,1017/S0007114507853384, p. 1-11). Модельные условия выбирали такими, чтобы имитировать условия среды, находящейся в дистальном отделе толстой кишки человека. Сравнение фракций было основано на подсчете во времени (24 ч) отобранных целевых групп бактерий (бифидобактерий, Clostridium coccoides-Eubacterium rectale, Clostridium leptum и бактероидов), измеряя RT-Q-PCR(согласно Matsuki et al. (Appl. Environ. Microbiol., 2004, 70(12), p. 7220-7228. Для использования в экспериментах были приобретены следующие материалы: инулин цикория(Beneo-Orafti), пептонная вода, соли желчных кислот ( 3), дрожжевой экстракт, PBS (Dulbecco А рН 7,3) (Oxoid Ltd, Basingstoke, Hampshire, UK), L-цистеин-HCl, гемин, витамин K1, KH2PO4, NaCl (SigmaAldrich, Germany), CaCl26H2O, NaHCO3 (Fluka Chemie, GmbH), K2HPO4, MgSO47H2O (Merck, Germany),Tween 80 (VWR), резазурин (Brocades StheemanPharmaica, Netherlands). Все ферментации проводили в ферментерах периодического действия емкостью 300 мл с водяными рубашками. Каждый ферментер заполняли 180 мл основной питательной среды. Среда содержала следующие ингредиенты: пептонную воду (2 г/л), дрожжевой экстракт (2 г/л), NaCl (0,1 г/л), K2HPO4 (0,04 г/л), KH2PO4 (0,04 г/л), MgSO47H2O (0,01 г/л), CaCl26 Н 2 О (0,01 г/л), NaHCO3 (2 г/л), Tween 80 (2 мл/л),гемин (0,5 г/л), витамин K1 (10 мкл/л), L-цистеин (0,5 г/л), соли желчных кислот (гликохолат натрия и таурохолат натрия) (0,5 г/л) и резазурин (0,25 г/л). Среды доводили до рН 7,0, разливали на аликвоты по соответствующим сосудам и автоклавировали при 121 С в течение 15 мин. Периодические ферментации в течение ночи продували азотом, освобожденным от кислорода (15 мл/ч). Перед посевом среды повторно доводили до рН 7,0. Непосредственно перед добавлением фекальной суспензии в каждый ферментер добавляли отобранный субстрат. Следующие субстраты оценивали, добавляя их в количестве 1% (масса к объему): инулин цикория (действующий в качестве положительного контроля),0% добавленного углевода (бланк, действующий в качестве отрицательного контроля),чайные фракции SI, SII, ТВ, F и BTE. Температуру каждой периодической ферментации поддерживали циркулирующей водой при 37 С,а рН среды поддерживали при 6,8 с помощью рН-контроллера (Electrolab, UK). Периодические ферментации засевали 20 мл свежей фекальной суспензии (1/10, масса к объему), соответственно, и непрерывно продували N2, свободным от О 2, при скорости потока 15 мл/мин. Периодические культуры поддерживали в течение 72-часового периода, получая образцы при t0, t18, t24, t48 и t72 ч из каждого сосуда для отобранной группы бактерий, определяемых посредством Q-PCR реального времени. Каждый образец центрифугировали (36220 г) в течение 3 мин, получая осадок, используемый для экстракции ДНК. Анализировали следующие функциональные группы бактерий: Bifidobacterium spp., группа Bacteroides fragilis,группа Clostridium coccoides, группа Clostridium leptum и Lactobacillus spp. Анализ данных. В попытке классифицировать субстраты по селективности в отношении бифидобактерий был разработан параметр, обозначенный PR. Тем самым попытались количественно определить ту степень, до которой исследуемый субстрат селективен в отношении бифидобактерий, с учетом изменений, индуцированных одной лишь средой, и исходных уровней каждой бактериальной группы (например, тех, оценку которых проводили посредством RT-Q-PCR) в сравнении с эффектами, индуцированными во всем сообществе (инокуляте) положительным контролем (инулином). Таким образом можно сравнивать ферментации, засеянные разными фекальными инокулятами, и тем самым выделять эффекты субстрата на селективность в отношении бифидобактерий. PR рассчитывают по уравнению (3) где Xs представляет собой параметр, показывающий селективное увеличение бифидобактерий в периодической культуре, к которой добавляли субстрат s;X0 представляет собой параметр, показывающий селективное увеличение бифидобактерий в периодической культуре, к которой углеводы не добавляли (отрицательный контроль);XI представляет собой параметр, показывающий селективное увеличение бифидобактерий в периодической культуре, к которой добавляли инулин (положительный контроль). Для каждой культуры параметр X рассчитывают по формуле (4) где NBif представляет собой относительное увеличение Bifidobacterium spp.;NCcoc представляет собой относительное увеличение группы Clostridium coccoides-Eubacterium rectale;NClep представляет собой относительное увеличение группы Clostridium leptum;NLac представляет собой относительное увеличение Lactobacillus spp.;NBac представляет собой относительное увеличение группы Bacteroides fragilis. Относительное увеличение данной бактериальной группы в данной культуре (N) рассчитывают по формуле (5) где N24 представляет собой число клеток бактериальной группы в миллилитре культуральной жидкости после 24 ч ферментации;N0 представляет собой число клеток бактериальной группы в миллилитре культуральной жидкости в начале ферментации;Tot24 представляет собой общее число бактериальных клеток после 24 ч ферментации;Tot0 представляет собой общее число бактериальных клеток в начале ферментации. Таким образом, положительные значения PR указывают на наличие селективности в отношении бифидобактерий. Более высокие значения указывают на большую селективность. Значение 10 указывает на селективность, эквивалентную положительному контролю. Значения, меньшие нуля, указывают на отсутствие селективности в отношении бифидобактерий. Результаты. Состав фракций чая ВТЕ, ТВ, SI, SII и F представлен в табл. 3 (% от массы порошка). Таблица 3 Пребиотический эффект этих фракций чая и корреляция этого эффекта с флавоноидным составом показаны данными, представленными в табл. 4. Таблица 4 Данные в табл. 4 показывают, что наибольший пребиотический эффект наблюдали с теми фракциями чая, где теарубигин присутствует в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов (фракции SII, ТВ и F). Кроме того, можно видеть, что те фракции черного чая, где флавоноиды содержат наибольшие количества катехинов, обладают самым низким пребиотическим эффектом. Пример 3. Этот пример демонстрирует благоприятные иммунологические качества различных экстрактов черного чая и компонентов черного чая. Клетки T являются одним из важных членов иммунной сети. Активация клеток этого типа имеет значение для улучшения иммунной реакции. Анализ одного из белков клеточной поверхности (белкаV22) показал связь с активацией клеток Т. Поэтому индукция большего количества клеток v22 некоторым индуктором указывает, что он является более сильным иммуномодулятором. Протокол. Цельную кровь от 3 людей-добровольцев (V-1, V-2 и V-3) инкубировали с фракциями чая в течение 12 дней, каждый третий день добавляя IL-12. После 12 дней инкубации оценивали уровень клетокv22/CD3 (маркер для клеток Т) посредством проточной цитометрии, используя стандартный протокол. Данные выражали в виде % клеток v22/CD3 в цельной крови. Результаты сравнивали с данными,полученными с необработанным контролем (обработанным только носителем), а также с результатами,полученными с нефракционированным экстрактом чая. Повышенный уровень клеток v22/CD3 по сравнению с их уровнем, наблюдавшимся после обработки цельным чаем, указывает на более высокую иммуномодуляторную способность, чем у цельного чая. Эксперименты проводили, используя кровь трех разных доноров. Результаты. Чай представлял собой фракции, которые применяли, как описано в примере 2, за исключением того, что не проводили испытаний фракции SII. Результаты, полученные для различных фракций, приведены в табл. 5. Данные, представленные в табл. 5, показывают, что наиболее благоприятные иммунологические эффекты наблюдали с теми фракциями черного чая, в которых теарубигин присутствует в количестве,составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов (фракции F и ТВ). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Пищевой продукт, имеющий массу менее 500 г и содержащий флавоноиды черного чая в массе,превышающей 0,2 г, где флавоноиды черного чая включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. 2. Пищевой продукт по п.1, где масса флавоноидов черного чая превышает 0,4 г. 3. Пищевой продукт по п.1 или 2, где масса продукта составляет менее 450 г. 4. Пищевой продукт по любому из пп.1-3, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая. 5. Пищевой продукт по п.4, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 10% от массы флавоноидов чая, предпочтительно менее 8%, более предпочтительно от 0,1 до 6%. 6. Пищевой продукт по любому из пп.1-5, где концентрация флавоноидов черного чая составляет от 0,15 до 10% от массы продукта, предпочтительно от 0,2 до 4%. 7. Продукт листового чая, имеющий массу от 0,5 до 5 г, содержащий флавоноиды черного чая в массе, превышающей 0,2 г, и где флавоноиды черного чая включают в себя теарубигин в количестве,составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. 8. Продукт листового чая по п.7, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая. 9. Продукт листового чая по п.7 или 8, где продукт помещен в упаковки, приспособленные для получения настоя. 10. Применение пищевого продукта по п.1 в качестве пребиотика, причем пищевой продукт содержит флавоноиды черного чая, где флавоноиды включают теарубигин в количестве, составляющем по меньшей мере 82% от массы флавоноидов чая. 11. Применение по п.10, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 12% от массы флавоноидов чая. 12. Применение по п.10 или 11, где флавоноиды включают катехины в количестве менее 10% от массы флавоноидов чая, предпочтительно менее 8%, более предпочтительно от 0,01 до 6%.

МПК / Метки

МПК: A23L 1/30, A61K 36/82, A61P 29/00, A61P 1/00

Метки: чая, применение, пищевой, содержащий, черного, флавоноиды, продукт

Код ссылки

<a href="http://easpatents.com/11-21514-pishhevojj-produkt-soderzhashhijj-flavonoidy-chernogo-chaya-i-ego-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Пищевой продукт, содержащий флавоноиды черного чая, и его применение</a>

Похожие патенты